Licenciatura en Ingeniería Biológica Microbiología Dra. Sylvie Le Borgne

Esterilización de material, preparación e inoculación de medios de cultivos y curva de crecimiento microbiano

Introducción

Objetivos

El alumno conocerá de forma práctica como esterilizar el equipo, por vapor

de agua con presión en la autoclave.

El alumno obtendrá los conocimientos y técnicas adecuadas para la

preparación e inoculación de medios de cultivos, de igual forma aprenderá a

obtener la curva de crecimiento microbiano a travez de lo experimentado en

laboratorio.

Materiales

Métodos

Resultados y Discusion

La preparación del medio de cultivo fue apta para el desarrollo y crecimiento de las

bacterias que se cultivaron, gracias al medio en que estas fueron sembradas (Agar

EDMO) y sobre todo a la preparación y temperatura adecuada en las que estas

estuvieron.

Ariana González RíosEder Acevedo RodríguezUriel Vázquez Ortiz

Fig. 1 Uso del autoclave es primordial para la inoculación y cultivo de las

bacterias.

Fig. 2 colocando el medio de cultivo para el cultivo de las bacterias.

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Fig. 3 se logro apreciar que el cultivo fue un éxito en el que tanto la

Escherichia Coli, Citrobacter Freaundi y Klebsidia Pneunoniae.

Se logro apreciar como es que se formaron colonias en la caja Petri, al igual que se

vio el desplazamiento de estas para la formación de las colonias, el uso de la

autoclave fue de manera la mas adecuada a la temperatura necesaria para que estas

bacterias lograran desarrollarse en la temperatura que estas necesitan para un buen

desarrollo.

La preparación del medio de cultivo juega un papel muy importante para el cultivo

de las bacterias, ya que estas suelen ser el medio en el que estas van a desarrollarse

y lograr asi mostrar como es que estas suelen estar en familias, asi logrando

aprovechar cada uno de sus beneficios y utilidades que estas pueden tener para

nosotros, al igual que se llega a decir que los microrganismos al igual que otros

seres vivos son capaces de adaptarse a los cambios ambientales y a medida de que

se han adaptado a estos cambios, estas mismas se han distribuido en una gran

cantidad de hábitats, en condiciones tanto físicas como químicas, también cabe

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destacar que este tipo de metodología es de gran ayuda para lograr aislar de

microrganismos y sobre todo para estos microrganismos el estar libres logran

desplazarse en tanto que en los medios sólidos se multiplican localmente en el

punto de la inoculación y forman colonias cuya apariencia frecuentemente es

típica de cada especie determinada.

Conclusiones

Referencias

- Joanne M. Willey, Linda M., 2008, Microbiología de Prescott, Harley y Klein, séptima

edición, capitulo 5, 6 y 7 Pág. 99-200, María Álvarez y Cristina Sánchez, Ed. Mc Graw

Hill, Madrid España.

- Michael T., John M., Jack Parker, Brock Biología de los Microorganismos, 10a edición,

capitulo 5 y 6 Pág. 102-161, Ed. Pearson, Madrid

Respuestas al cuestionario

1) Define los siguientes términos: desinfección, desinfectante, esterilización, esterilizante,

saneamiento, antisepsia, antiséptico, quimioterapia, germicida, bactericida,

bacteriostático.

Desinfección: Proceso que destruye casi todos los microorganismos patógenos sobre objetos

inanimados.

Desinfectante: Agente, normalmente químico, que desinfecta: en general, se emplea con objetos

inanimados.

Esterilización: Proceso por el que todos los organismos vivos, esporas visibles, virus y viroides

son destruidos o eliminados de un objeto o hábitat.

Esterilizante: Son sustancias químicas que se utilizan en una cámara hermética (similar a una

autoclave).

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Saneamiento: Reducción de la población microbiana de un objeto inanimado hasta niveles

seguros según los estándar de salud pública.

Antisepsia: Prevención de una infección o sepsis.

Antiséptico: Sustancia química que se aplica a un tejido para evitar una infección al destruir o

inhibir los microorganismos patógenos.

Quimioterapia: Es un tratamiento sistemático del cáncer con fármacos citotóxicos.

Germicida: Compuesto que destruye agentes patógenos y muchos no patógenos, pero no

necesariamente las endosporas bacterianas.

Bactericida: Agente que destruye bacterias.

Bacteriostático: Que inhibe el crecimiento y la multiplicación de bacterias.

2) Explica brevemente los factores (tamaño y composición de la población, concentración o intensidad del agente, duración del tratamiento, temperatura y condiciones ambientales locales) que pueden alterar la eficacia de un agente antimicrobiano.

Tamaño de población: La destrucción de una población grande requiere más tiempo que la de una

población más pequeña, ya que en cada intervalo de tiempo se destruye una proporción de la

población microbiana.

Composición de la población: La eficacia de un agente varía conforme a la composición, ya que

los organismos presentan una grande susceptibilidad.

Concentración o capacidad de un agente microbiano: Cuanto más se encuentre el agente químico,

o más intenso es el agente físico, más rápida ser la destrucción de estos. Por lo que la eficacia de

un agente no es proporcional a la concentración o intensidad.

Duración del tratamiento: Cuanto más tiempo este expuesta una población a un agente

microbicida, más organismo serán destruidos.

Temperatura: El aumento de temperatura puede aumentar la actividad de un compuesto químico.

Condiciones ambientales locales: Las condiciones ambientales tienen factores que ofrece o

colabora a la destrucción de cierto agente.

3) Explica brevemente los métodos de control microbiano: agentes físicos. Agentes

químicos y métodos mecánicos.

Agentes físicos: Los agentes físicos empleados con más frecuencia para el control para el control

microbiano son el calor, las bajas temperatura, la filtración y radiación.

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a) Calor: Método más generalizado para el control de crecimiento microbiano. Se pude

aplicar la desnaturalización que es la aplicación de altas temperaturas y el tiempo que se

lleva para reducir 10 veces la densidad de la población a una cierta temperatura es

llamado tiempo de reducción decimal. También se usa el término de tiempo de muerte

térmica, que es tiempo mínimo que se necesita para destruir todos los microorganismos.

Se usan métodos como la pasteurización o la autoclave.

b) Bajas temperaturas: La congelación a temperaturas de -20°C, o inferiores detiene le

crecimiento microbiano, a las bajas temperatura y a la ausencia de agua líquida.

c) Filtración: Se usa para esterilizar líquidos sensibles o gases. Se usan tres tipos de filtro:

filtro de profundidad, el cual es utilizado para eliminar de un proceso final de

esterilización partículas de gran tamaño que influiría. Otro filtro utilizado es el filtro de

membrana, el cual retiene muchas de las partículas en la superficie del filtro. Y el tercer

filtro de uso común es el filtro de nucleación, el cual utiliza la radiación nuclear.

d) Radiación: Se utiliza radiación electromagnética, lo cual permite controlar potencialmente

el crecimiento microbiano. Se utilizan rayos X, radiación gamma, microondas y radiación

ultravioleta.

Agentes químico: Este tipo de agentes se utiliza para la desinfección y la antisepsia, se usa

también para impedir el crecimiento microbiano en los alimentos. Entre los grupos de

desinfectantes que se usan, se encuentran los compuesto fenólicos, alcoholes, halógenos, metales

pesados, compuestos de amoniaco cuaternario, aldehídos, gases esterilizantes y agentes

quimioterapéuticos.

Agentes mecánico:

4) Explica porqué el calor es el agente esterilizante más eficaz.

Utilizando el concepto de tiempo de muerte térmica, nos indica el tiempo mínimo necesario para

destruir todos los microorganismos a una temperatura especifica y a en condiciones factibles.

Con lo anterior concluimos que es más rápido el tipo de esterilización que se realiza con este

mecanismo.

5) Explica en qué consiste el método de pasteurización.

Es un proceso que reduce la población microbiana en leche y otros alimentos sensibles al calor,

por lo tanto hay una aplicación de calor. Este método también impide el crecimiento de

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organismos alterantes de los líquidos perecederos.

6) Define endospora bacteriana. ¿Cómo se eliminan las endosporas bacterianas de un

material contaminado?

Las endosporas bacterianas son las estructuras más resistentes al calor que se conocen: son

capaces de sobrevivirá a temperaturas que rápidamente matan a células vegetales de la misma

especia. Para eliminas ciertas endosporas de un material, se mete al autoclave, y este

habitualmente alcanza una temperatura de 121°C y tarda de 4 a 5 minutos para que haya una

reducción decima de endosporas.

7) Describe la cinética de muerte microbiana.

La muerte de una población se reduce a

noveles iguales a intervalos constantes, esto

quiere decir que la velocidad de destrucción

disminuye debido a la supervivencia más

resistente de los microorganismos

expuestos. En la gráfica exponencial se

muestra a los supervivientes al tiempo de

exposición, a 121°C. Y nos indica que el

tiempo de destrucción decimas (D) es igual

a 1 minuto.

Recomendaciones

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