Practica Nº14

AISLAMIENTO DE HONGOS

INTRODUCCION

a) OBSERVACIÓN DE LOS HONGOS

Frecuentemente pueden observarse crecimiento de hongos sobre los alimentos

y otros materiales. Se examinan estos sustratos con un lente simple pueden

distinguirse el cuerpo vegetativo formado por una masa de filamentos

ramificados e interlazados denominada Micelio. Cada filamento de micelio

constituye una Hifa. En algunos hongos, el protoplasma recorre las hifas en

forma interrumpida, constituyendo hifas Aceptadas o Cenociticas. Las hifas de

otros hongos tienen paredes transversales llamadas septos con uno o varios

poros que permiten el paso del protoplasma. A este tipo de hifas se les

denomina Septadas. Los hongos se reproducen asexualmente a través de

esporas asexuales desarrolladas dentro de un esporangio, se denominan

Esporangiosporas. Si las esporas se reproducen libremente en el extremo o al

lado de las hifas, se denominan Conidiosporas.

Existen hongos unicelulares que no forman estructuras filamentosas, estos

reciben el nombre de levaduras y pueden distinguirse de las bacterias por su

mayor tamaño y por la presencia de un núcleo simple.

Ocasionalmente puede observarse el desarrollo de estructuras conspicuas

denominadas Cuerpos Fructíferos los cuales portan las esporas sexuales de

reproducción. Estas estructuras se utilizan como base de la clasificación natural

de los hongos. De esta manera se definen tres divisiones: Zygomicota,

Ascomicota y Basidiomycota.

El micelio de los Zygomycota es aceptado excepto en las estructuras de

reproducción. Los miembros de esta división forman esporas asexuales de tipo

esporangiosporas. Las esporas sexuales son la denominadas Zigosporas que

desarrollan en ausencia de un cuerpo fructífera.

Los hongos al igual que la mayoría de las bacterias son heterótrofos, ningún

hongo es capaz de crecer bien en ausencia de sustancias alimenticias

orgánicas.

Ningún hongo posee pigmentos fotosintetizantes y ninguno es capaz de utilizar

el dióxido de carbono. Sin embargo, en presencia de un suministro exterior de

azucares de otro alimento orgánico, muchos hongos exhiben una sorprendente

capacidad de síntesis y produce una gran variedad de sustancias orgánicas

complejas.

La mayor parte de hongos son filamentosos. Los filamentos conocidos por hilos

están ordinariamente muy ramificados y forman colectivamente el talo

vegetativo o Micelo. En los hongos superiores las hifas pueden agregarse

para formar estructuras sólidas complejas que en algunas especies pueden

alcanzar un tamaño muy considerado.

Los Ascomycotas tienen micelio septado. La reproducción asexual es muy

variada involucrando procesos de fisión, gemación, fragmentación, formación

de Clamidiosporas o formación de conidias, dependiendo de las especies y de

las condiciones ambientales.

La fisión y la gemación son comunes en levaduras mientras que la mayoría de

ascomicetos forman uno o varios grupos de esporas terminales llamadas

Conidia que desarrollan a partir de hifas ramificadas llamadas Conidioforos y

Esterigmas.

Las esporas sexuales son llamadas Ascosporas desarrolladas dentro de sacos

y protegidos en cuerpos fructíferos denominados Ascoscarpos. Estas

estructuras pueden ser de tres tipos: CLEISTOTECIO, PERITECIO Y

APOTECIO, dependiendo de las características de cada grupo de Ascomycota.

Los presentantes de los Basidiomycota incluyen especies filamentosas

levaduriforme. Entre las formas filamentosas y levaduriforme. Entre las formas

filamentosas puede encontrarse especies microscópicas y macroscópicas.

Estas últimas forman cuerpos fructíferos visibles que portan las Basidias y

estas a las Basidiosporas o esporas sexuales. Los basidiomicetos se

reproducen asexualmente a través de conidias, el micelio es septado y

mayormente constituido en porciones anastomosadas a manera de pseudo-

tejido, que forma los Cuerpos. Fructiferos.

b) HABITAD:

Los hongos ocupan una amplia variedad de ambientes. La mayoría ocupa los

lugares húmedos de la tierra, aunque algunos en particular las especies de

Aspergillus, Penicillum pueden resistir unas condiciones de mayor sequedad.

Muchos hongos son parientes activos de plantas, incluso de las más

importantes plantas cultivadas y algunas especies causan enfermedades en el

hombre y en los animales domésticos.

C) REPRODUCCIÓN:

La reproducción en los hongos se realiza habitualmente por esporas. Los más

frecuentes son unas células aisladas incoloras, pero pueden poseer gruesas

membranas esculpidas pueden llamar apéndices o pueden estar rodeadas de

una cubierta gelatinosa. La mayor parte de los hongos producen mas de una

especie de esporas, cuando las condiciones son favorables al crecimiento de

estas.

La mayoría de los hongos son muy variables, tanto en condiciones naturales

como en el cultivo de laboratorio. Algunas veces la variación esta inducida por

cambios en las condiciones ambientales y el hongo regresa a la forma manual

cuando revierten los cambios ambientales.

También ocurren al tener una base genética de los cultivos de placas petri se

pueden producir sectores que difiere del resto del cultivo con algunas

características, como la forma, el color, la velocidad de crecimiento y la

intensidad de esporulación.

d) VARIACIÓN AMBIENTAL:

Los hongos son afectados por muchas influencias ambientales, como la

naturaleza y la concentración del suministro nutritivo, la humedad, la

temperatura, la luz y la concentración de hidrogeniones.

Los cambios de estos factores pueden inducirnos cambios tan grandes en la

morfología, que hace difícil el reconocimiento del hongo.

e) VARIACIÓN GENETICA:

Los estudios recientes sobre las bases genéticas de la variación en los hongos

han demostrado que son validos los mismos principios que para los

organismos superiores.

MARCO TEORICO

Los hongos, organismos eucarióticos, pueden ser pluricelulares (hongos

miceliales o mohos) y unicelulares (hongos levaduriformes o levaduras).existen

hongos ambientales que no causan enfermedad y otros que son patógenos.

El estudio de h. patógenos puede ser realizado a partir de muestras de

micosis superficiales ( que afectan piel, pelos y uñas ) o en micosis sistémicas

que afectan órganos internos como pulmones, intestinos, ganglios linfáticos,

etc.

Los métodos diagnósticos en el laboratorio varían de acuerdo a la

localización del cuadro clínico y en consideración del tipo o especie de hongo

probable causante de la enfermedad.

PROCESO EXPERIMENTAL

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN

Aislamiento:

• Examen directo: debe hacerse una suspensión del producto presuntamente patológico con unas gotas de hidróxido de potasio (KOH) al 30%. La técnica más empleada es la de la tinta china, sobretodo en el líquido cefalorraquídeo y suero. Se hace sobretodo cuando hay sospecha de criptococos.

Otra técnica sería la tinción de gram, donde se observan células gram positivas grandes, pero los colorantes que más se utilizan para los hongos sen el azul de metilenos y el giemsa.

También se puede utilizar blanco calcoflúor, se ve con microscopio de fluorescencia y se observan de color verde fluorescente.

También se pueden observar a partir de cortes histológicos que se utilizan sobretodo para hongos oportunistas.

• Cultivo: en general son pocos exigentes. Crecen bien al igual que las bacterias en medios de cultivo artificiales, es relativamente fácil aislarlos pero no es fácil identificarlos.

El medio de cultivo por excelencia es el Sabouraud (no es el mejor para todos los hongos pero se utiliza para todos). Se emplea a pH = 5’6 porque dificulta el crecimiento bacteriano, para esto también se pueden añadir antibióticos e incluso antimicóticos para hacerlos selectivos.

Casi todas las descripciones sobre hongos para la identificación y diagnóstico de hongos están basadas en el aspecto, característico que resulta de este medio.

La mayor parte de los medios empleados en bacteriología también crecen hongos.

Se cultivan en aerobiosis y la temperatura idónea es de 25-30ºC para los que causan infecciones superficiales; y de 35ºC para los que causan infecciones sistémicas.

Identificación:

• Detección de hongos

~ Aspecto macroscópico: aspecto que presentan las colonias en el medio. Se utiliza el anverso y el reverso de la placa.

~ Aspecto microscópico

• Detección de levaduras:

~ Aspecto macroscópico

~ Aspecto microscópico

~ Morfología de las colonias cuando crecen en medios pobres

~ Prueba bioquímica: asimilación y fermentación de carbohidratos. Esta consiste en poner la levadura en contacto, solamente con una fuente de carbono o nitrógeno y ver si se nutre de ella o no.

Para ambos se utiliza la serología. Tiene un uso pobre en micología porque la respuesta humoral es pobre y la serología lo que usa es la detección de antígenos-anticuerpos.

Detección de antígenos fúngicos, está en desarrollo y con un buen futuro.

CONCLUSIONES

- El hongo se clasificó dentro de los deuteromycetos por tener una reproducción asexual llevada acabo por intermedio de la esporulación (conidios).

- El estudio de los hongos, tiene una gran importancia; ya que desempeñan un papel en la descomposición de materia vegetal de origen terrestre que cae al agua, influyendo de manera decisiva en el transporte de materiales entre el medio terrestre y el acuático.- El estudio de los hongos en el aire ha sido muy importante para la industria debido al papel que desempeñan.

- Se pudo establecer que el aire no tiene una microflora definida, una de las razones es que el aire es portador de polvo, material particulado, etcétera, los cuales pueden estar cargados de microbios.

- Se utilizo el método de sedimentación, ya que permite que por la fuerza de gravedad los microorganismos queden adheridos a la caja de petri con Agar nutritivo.

CUESTIONARIO

1,.Dibujar las estructuras de 5 hongos de diferentes genero .

2.- Describir otra técnica de aislamiento de hongos.

La técnica de dilución es también útil para el aislamiento de los hongos en los productos agrícolas, pero a veces conviene sembrar el inoculo tomado directamente de la superficie de material en estudio

Para el aislamiento de levaduras osmofílicas son muy útiles los medios con  un 30 - 50% de glucosay 30% de agar. Luego, las especies aisladas, en su mayoría, crecen sin dificultad en medios con concentraciones normales de glucosa. En sentido general se prefieren medios de cultivos sólidos ya que posibilitan la observación de las colonias (caracteres macroscópicos). Sin embargo, para el estudio de hongos acuáticos el aislamiento debe iniciarse en medios líquidos para lograr una aproximación a su hábitat

3.- Consultar en que consiste el medio de Micosel y cual es su utilidad

USO Medio selectivo para aislamiento de especies de hongos patógenos de lento crecimiento a partir de diversas muestras que puedan tener alto contenido de flora bacteriana

La peptona y la dextrosa proporcionan la fuente de nutrientes utilizadas para el crecimiento de los hongos. La cicloheximida inhibe a hongos saprófitos, el cloranfenicol de amplio espectro inhibe el crecimiento de una gran variedad de bacterias. Se pueden sembrar medios inclinados en tubo o en cajas de Petri estériles por duplicado, incubar a 25º y a 35ºC. Los dermatofitos y la mayor parte de los hongos causantes de las micosis sistémicas crecen rápidamente, la mayoría de los hongos saprófitos y bacterias son inhibidos.

4.-Consultar la técnica para la obtención de una colonia gigante de hongo

Observación macroscópica

Colonia Gigante

Sembrar con ansa aguja en el centro de botellas utilizadas en los hemocultivos o tubos de ensayos con el medio dispuesto en pico de flauta, también se pueden usar cajas de Petri, que contengan un sustrato de por lo menos 3-4 mm

de espesor. Incubar.

Describir las caracteres macroscópicos de las colonias (diámetro, elevación, aspecto óptico, textura, bordes, color, etc.), haciendo las observaciones a los 3 ó 4 días y luego cada semana, durante un mes.

5.-Mencionar la importancia de los hongos en Microbiología Ambiental

Importancia de los Hongos:

-Se utilizan en la elaboración de productos alimenticios como el pan, vino, cerveza y queso.-Son una valiosa fuente de alimentación para el ser humano como los champiñones, las setas, las frutas.-Algunas especies se utilizan en la industria para producir ácidos orgánicos, como el cítrico láctico o galico.-Algunos son patógenos, para plantas, animales, y hombre (pié de atleta, tiña y candidiasis)

ANEXOS