practica no 01 microbiologia
DESCRIPTION
Practica No 01 Microbiologia 2015TRANSCRIPT
2015
PRACTICA N° 01
RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO
I.INTRODUCCION:
Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de
Microbiología, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos
asegurar que los valores que indican son los reales.
En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado
en un laboratorio de Microbiología que es muy variado y depende fundamentalmente de las
líneas de trabajo a las que está dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo
equipamiento en un centro de investigación con un alto grado de especialización.
Por tanto, aquí sólo nos referiremos al material básico que se suele encontrar en un
laboratorio mínimamente dotado
II. OBJETIVOS:
Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de
microbiología veteriniaria.
Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y
materiales usados en la sala de praqcticas de microbiología veterinaria.
Instruir al estudiante en las reglas básicas de comportamiento y seguridad dentro de
la sala de practicas de microbiología veterinaria.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 1
2015
III. MARCO TEÓRICO:
A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas
reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos
como los agentes físicos, químicos y mecánicos.
1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.
2. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y
jabón.
3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar
cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los
desinfectantes más habituales para este propósito son la lejía y el etanol 70-96°.
4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben
evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean
corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.
5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se
manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,
ojos...
6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la
realización de la práctica eben ser apartados del lugar de trabajo.
7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes
adecuados. Estos recipientes serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe
tirar nada por el fregadero o la basura común
8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del
laboratorio.
9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones
propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo
que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la práctica, evitar
la presencia de sustancias inflamables y revisar periódicamente las
conducciones.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 2
2015
10. En las prácticas en que se trabaje con luz ultravioleta debe tenerse en cuenta
que la exposición a este tipo de radiación es peligrosa, ya que tiene poder
mutagénico. Por tanto, nunca se debe mirar directamente la fuente de luz. Es
conveniente el uso de gafas, guantes y máscaras.
11. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.
12. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de
microorganismos...) se comunicará inmediatamente al instructor
B. EQUIPOS:
1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y
aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podríamos
percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeños
para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliación.
PARTE MECÁNICA
Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de
iluminación.
Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se
encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema
de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas
que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina
presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que
permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y
transversal respectivamente.
Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte
de oculares y objetivos.
Revólver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.
Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomat el
microscopio para trasladarlo de lugar.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 3
2015
Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque
de la muestra al utilizrse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina
verticalmente de forma perceptible.
Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque precidso de la
muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También
desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es
el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al
ir cambiando a objetivos de mayor aumento.
PARTE ÓPTICA
Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en
la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes
convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos
(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).
Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o
binoculares.
Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del
tubo, mediante el revólver.
Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los
concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste.
Se regula en altura mediante un tornillo
Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está
constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del
microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los
rayos luminosos hacia la platina.
Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o
cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.
Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es
necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en
el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para
regular la intensidad de la luz.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 4
2015
2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscópico tiene dos lentes
objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio
compuesto; ambas características le permiten producir imágenes tridimensionales. Las
partes de este microscopio son prácticamente las mismas que las discutidas para el
microscopio compuesto
El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo
general forma de Y o bien es rectangular
El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las
molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan
los oculares.
El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los
objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en
posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija.
La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte
posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo
inferior se adapta al pie.
La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto
que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el
paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso
permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos
laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.
Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la
preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a
izquierda.
El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del
microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos
movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.
El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al
deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparación.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 5
2015
Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para
precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.
3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,
la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido
dedióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior necesarios
para el desarrollo de un cultivo microbiano.
4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,
productos biológicos y patológicos, así como mantener la supervivencia de
algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10
5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70° C y son indispensables
para conservar determinados productos biológicos (sueros, microorganimos).
Nos permite darles un tiempo mas prolongado de almacenamiento.
6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrifuga para separar
estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los globulos rojos en la
sangre.
7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza para mezclar líquidos o
preparar disoluciones y suspensiones, a travez de vibraciones, ideal para agitar
tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma
intercambiable.
8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado
para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en
unaplaca de agar. Los primeros contadores sólo eran superficies iluminadas
sobre las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con
un rotulador en la superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el
recuento manua
9. BALANZA: Se denomina con el término de balanza al instrumento que sirve y
se utiliza para medir o pesar masas.
10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal
para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero
inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de
oxígeno.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 6
2015
11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la
esterilización.
12. EQUIPO DE SIEMBRA
a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de
diámetro
b. Asa de kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrón que termina en
argolla, utilizado para realizar siembras por estria.
c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrón que termina en
punta, que se utiliza para realizar las siembras por puncion o picadura.
d. Espatula o sas de drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una
forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminación.
EQUIPO DE ESTERILIZACIÓN:
1. HORNO ELÉCTRICO: La esterilización puede llevarse a cabo mediante calor
seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destrucción
microbiana se produce por oxidación de los componentes celulares y
desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia
de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los
tiempos de exposición. 180°C -200°C(1 hora)
2. AUTOCLAVE: El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es
el agente esterilizante más frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye
eficazmente los microorganismos por desnaturalización de proteínas y enzimas,
y desestabilización de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121°C X
15 min y a presión de 15 libras.
3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos
físicamente o adsorbidos por los filtros con un tamaño de poro adecuado. El
tamaño de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 µm
aunque más recientemente se tiende a la utilización de poros de 0.1 µm
a. Filtro de seitz
b. Matraz de kitasato
c. Boma de vacio:
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 7
2015
4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios
de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentración de
hidrogeniones.
5. DESTRILADOR ELÉCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,
mediante procesos controlados de vaporización y enfriamiento. Al aplicar
energía térmica al agua en fase líquida, luego de un proceso de calentamiento, se
convierte en vapor de agua. Esto permite separar las moléculas de agua, de las
moléculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o
diluidos. El vapor de agua se recolecta y
MATERERIALES DE VIDRIO:
1. PROBETA: Este material permite medir volúmenes, las hay de
vidrio y de plástico y de diferentes capacidades
2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas
formas que se emplean en el laboratorio para calentar líquidos citando hay
peligro de pérdida de vaporación, o para titular en el análisis cuantitativa.
3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y
angosto se usa para preparar soluciones.
4. VASO DE PRECIPITACIÓN:
5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plástico de forma cilíndrica
compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos
sólidos cuando se desea disponer de una gran superficie
6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los líquidos con
mayor exactitud.
7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el
volumen de los líquidos.
8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeñas
cantidades de sustancias líquidas o sólidas y preparación de cultivos. Estos
pueden ser grandes medianos y pequeños.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 8
2015
9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se
oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm
10. PORTAOBJETOS: son láminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados
que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados
para realizar preparaciones microscópicas coloreadas o sin colorear.
11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaños variados, de
forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar
la observación microscópica del material que se desea examinar.
12. EMBUDO: Sirve para trasvasar líquido de un recipiente a otro, evitando que se
derrame líquido, también se utiliza en operaciones de filtración.
13. TRÍPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y
recipientes en observación, o para poner estos al fuego y aumentar su
temperatura.
MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:
1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,
factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones
necesarias para el desarrollo de los microorganismos
2. BATERIAS DE COLORACIÓN DE GRAM: Los colorantes que lo componen
son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.
3. BATERIA DE COLORACIÓN ACIDO RESISTENTE: La batería esta
compuesto por: fucsina básica fenolada, alcohol acido y azul de metileno.
4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del
microscopio óptico.
5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, además se usa para
realizar pruebas bioquímicas por ejemplo la prueba de la catalasa
6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para
identificar las especies bacterianas.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 9
2015
MATERIAL FUNGIBLE:
1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,
para llevarlos al proceso de esterilización por calor húmedo.
2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.
3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.
4. JABON CARBÓLICO
5. PAPEL TOALLA
IV. MATERIALES Y METODOS:
1. El estudiante hará un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se
usan, así como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior
debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.
2. El profesor hará una demostración experimental de la forma como se llenan las
pipetas
V.RESULTADOS
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 10
pudimos poner en practica nuestros conocimientos sobre los utensilios que se usaran en futuras practicas y así sera mas fácil las actividades
2015
VI. CONCLUCIONES
CUESTIONARIO
1. ¿Establezca la diferencia entre los siguientes términos?
Esterilización:
El proceso de destrucción de todas las formas de vida en un objeto o material, incluidas las endosporas, las formas más resistentes de vida microbiana. La esterilización es absoluta; no hay grados de esterilidad.
Desinfección:
El proceso de destrucción de las formas vegetativas de los patógenos, pero no necesariamente endosporas o virus. Normalmente un desinfectante es un
compuesto químico que se aplica sobre un objeto o material. Los desinfectantes tienden a reducir o inhibir el crecimiento; no suelen esterilizar.
Antisepsia:
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 11
Es muy importante haber reconocido todos los materiales a utilizar en el laboratorio y saber su utilidad para la práctica. También era necesario para prevenir cualquier accidente no provocado y no lamentar consecuencias.
Conocer la calidad de las principales herramientas a utilizar como los tubos de ensayo, las pipetas, las cajas petri, los matraces, etc.
2015
Desinfección química de la piel, mucosas u otros tejidos, en vivo.
Higienización:
La reducción del número de patógenos que hay en un objeto hasta niveles aceptables para la salud pública mediante lavado mecánico o con agentes químicos.
Germicida:
Un agente químico que mata rápidamente a los microbios, pero no necesariamente a sus esporas.
Asepsia:
exclusión continuada de microorganismos contaminantes.
Bactericida:
es aquel que produce la muerte a una bacteria. Un efecto bactericida está producido por sustancias bactericidas. Estas sustancias son secretadas por los organismos como medios defensivos contra las bacterias.
2. ¿Cuál es el método de esterilización mas efectivo? Mencione las características.
El calor húmedo es un método térmico de esterilización y mata microorganismos por la coagulación de proteínas (desnaturalización), lo que es causado por la rotura de los puentes de hidrógeno que son los que mantienen a las proteínas en su forma tridimensional
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 12
2015
3. ¿Cuál es la función de los siguientes equipos y coloque las partes en las correspondientes flechas?
4. ¿Cuál es la
diferencia entre la congeladora y refrigeradora?
Congeladora :
Refrigeradora:
5. ¿Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 13
2015
6. ¿Cuál es la función del microscopio y describa los diferentes objetivos?
La función del microscópio es hacer visible al ojo humano cosas que no lo son directamente, a través del aumento de la imagen mediante lentes. Las utilidades comprenden todas aquellas que puedan surgir de la visión de estructuras.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 14
2015
7. ¿Cuantos placas Petri observamos según su tamaño?
3
8. ¿Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?
este aparato sirve para mantener bacterias anaerobias. Tiene unos tubos en donde se conectan a una maquina que succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar el proceso.
9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 15
2015
10. ¿Defina el término siembra y medio de cultivo?
En Microbiología se entiende como siembra el proceso mediante elc u a l s e d e p o s i t a u n a p e q u e ñ a c a n t i d a d d e m i c r o o r g a n i s m o s (inóculo) en un medio de cultivo estéril. El inóculo puede procederd e u n a m u e s t r a o d e u n c u l t i v o p r e v i o . ( a l c r e c i m i e n t o d e microorganismos obtenido, se le denomina cultivo)L a f i n a l i d a d d e l a s i e m b r a e s p e r m i t i r l a m u l t i p l i c a c i ó n d e l o s microorganismos, al proporcionarles las condiciones óptimas paras u d e s a r r o l l o , d e n t r o d e l a s c u a l e s , s e d e b e c o n s i d e r a r : temperatura, nutrientes, pH, disponibilidad de oxígeno, entre otros.
MEDIO DE CULTIVO .consta de un gel o una solución que cuenta con los nutrientes necesarios para permitir, en condiciones favorables de pH y temperatura, el crecimiento de virus, microorganismos, células, tejidos vegetales o incluso pequeñas plantas.
VII. BIBLIOGRAFIA:
1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Practicas de microbiología.
2. TORRES Miguel. 1996. Manual practico de Bacteriologia medica.
3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 16
2015
M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 17