Introducción general

Equipo:

Argueta Ayala Zaira

Guillen Palma Irais

Lozano Salazar Yannin Arizbeth

Muñoz Aquiáhuatl Susan Elena

Profesora: Martha Corona Tinoco

Grupo: 612 Sección A

Universidad Nacional Autónoma de México

Escuela Nacional Preparatoria

Plantel 5: “José Vasconcelos”

La microbiología, es la ciencia que estudia los microorganismos en su naturaleza, vida y acción. El término, etimológicamente, es de amplio significado, pero suele utilizarse en sentido limitado para comprender determinadas formas microscópicas de vida.

Su campo incluye las bacterias, las rickettsias, los virus, las levaduras, los

mohos y los protozoos en relación con el hombre y sus actividades, los

animales, las plantas y entre ellos mismos.

Los microorganismos pueden estar constituidos por una sola célula

(unicelulares), así como pequeños agregados celulares formados por células

equivalentes ; estos pueden ser eucariotas (células con núcleo) tales como

hongos y protistas o procariotas (células sin núcleo definido) como las

bacterias.

La existencia de este mundo microbiano se desconocía hasta la invención del

microscopio (principios del siglo XVII), instrumentos ópticos que sirven para

ampliar objetos que son tan pequeños que no se puede ver claramente por el

ojo humano sin ayuda, abriendo el reino biológico de lo muy pequeño a la

exploración científica sistemática. La mayoría de los microorganismos son de

vida libre.

La microbiología permite conocer los microorganismos con sus características morfológicas, biológicas y antigénicas; su relación con la infección y con la enfermedad en el hombre; las vías de penetración del hospedero, las acciones y los cambios quimiofisiológicos y celulares que ocasionan; la resistencia natural adquirida que ofrece el organismo, así como otros estados inmunitarios a que dan lugar.

Ésta práctica está dividida en tres partes correspondientes a: bacterias,

hongos y protistas, pues resulta más fácil explicar y entender el desarrollo de cada uno.

Objetivo:

Preparar adecuadamente los medios de cultivo para bacterias.

Observar e identificar la morfología de bacterias que se desarrollan en alimentos como frutas y verduras jugosas.

Distinguir su composición de pared celular, mediante tinción Gram y así dar clasificación taxonómica.

Planteamiento del problema:

La diferencia de composición bioquímica de las paredes de las bacterias es responsable de su diferente comportamiento frente a un colorante, con base a ello dar clasificación a las bacterias encontradas dentro de los 4 grupos donde están agrupadas: firmicutes, gracilicutes, mendosicutes y tenericutes.

Hipótesis:

Si la preparación de los medios de cultivo se tiñe de morado

entonces serán bacterias Gram positivas y pertenecerán al

grupo firmicutes.

Marco Teórico: 2

Las bacterias (del griego bakterion, pequeño bastón) constituyen uno de los grupos de seres unicelulares más pequeños (siendo entonces células procariotas) y abundantes de la naturaleza debido a la gran variedad de metabolismos que pueden presentar. Su tamaño va desde 0.1 µm a 1 µm de ancho y de espesor, con una longitud de 0.5 µm a 10 µm. Pueden vivir aisladas o en colonias. Tienen como único medio de locomoción flagelos cuyo número es variable. Normalmente se reproducen asexualmente por bipartición. Para la nutrición la mayoría de las bacterias utilizan sustancias químicas orgánicas, que en la naturaleza pueden provenir de organismos vivos ó muertos. Algunas bacterias pueden producir sus propios alimentos mediante la fotosíntesis y algunas pueden nutrirse a partir de sustancias inorgánicas.

Clasificaciones

Forma y agrupación: Se clasifican en tres grupos: bacilos, cocos y espirilos. Pueden presentarse aisladas, en grupos de dos o formando cadenas largas, así como constituyendo racimos, dependiendo esto de la especie y condiciones del medio ambiente.

Los bacilos se dividen únicamente en un plano pero en algunas ocasiones pueden encontrarse células unidas por los extremos o por los lados debido a la etapa del desarrollo en que se encuentren o a las condiciones del cultivo.

Las bacterias en espiral generalmente no se agrupan, crecen individuales y aisladas.

Pared Celular Están recubiertas por paredes celulares que en gran parte están constituidas por un complejo de hidrato de carbono y proteína denominado peptidoglucano.

Da forma a la bacteria y sobre todo soporta fuertes presiones osmóticas de su interior.

Según la composición de ésta y la tinción que adquieren se dividen en:

Gram Negativas (G-)

Su pared es estrecha y compleja. Tienen sobre los peptidoglucanos una capa externa de lipopolisacáridos y proteínas, muchas de ellas enzimas.

Gram Positivas (G+) Su pared es ancha, carecen de capa externa, poseen numerosas capas de peptidoglucano y sobre ellos tienen una capa con ácidos teicoicos (compuesto complejo que incluye azúcares, fosfato y aminoácidos) como componente más típico. Un método muy utilizado en microbiología para la tinción de bacterias es la tinción de Gram. En esta tinción se forma un complejo violeta-yodo, insoluble dentro de la célula, que sólo es extraído por el alcohol en las bacterias Gram negativas, su apariencia es rosácea. Las Gram positivas tienen unas paredes celulares muy gruesas que se deshidratan por el alcohol, lo que cierra sus poros evitando que los complejos violeta- yodo salgan de las células y por ello se ven moradas.

Taxonomía: La clasificación taxonómica más utilizada divide a las bacterias en cuatro grandes grupos según las características de la pared celular. Gracilicutes: Son bacterias con pared celular delgada (Gram negativas); por lo que se tiñen de rosa. Firmicutes: Sus paredes celulares son gruesas, son Gram positivas y se tiñen de morado. Tenericutes: Sin pared celular, por tanto no se tiñen. Mendosicutes: Bacterias con ausencia de ácido murámico (azúcar del peptidoglucano) en su pared celular y se tiñen de morado-rosa.

El ser humano se encuentra en todo momento expuesto al medio

ambiente, de donde adquiere microorganismos. Por lo general,

mantiene un equilibrio conviviendo con ellos e incluso obtiene

algunos beneficios; sin embargo algunos organismos como las

bacterias pueden proliferar y causarle entonces una enfermedad,

utilizando los productos de su metabolismo, por lo cual es

importante conocer e identificar a las bacterias y las estructuras

que las componen, ya que tales conocimientos son de gran utilidad

para tratar de forma preventiva o curativa las enfermedades. Si

bien no está de más recordar que las bacterias no sólo causan daño

sino que también son de gran utilidad en la industria de fármacos,

en la elaboración de algunos alimentos, en general en la

investigación, todo en función de sus componentes y cualidades.

Diseño Experimental:

Material:

Uso de bata en todo el procedimiento del diseño experimental. Cabello recogido. Esterilizar área de trabajo al inicio y final de la práctica.

Para medio de cultivo:

Siembra: Tinción Gram:

Agar Mac Conkey Agar Bacteriológico

Pesa de monoplano

Vidrio de reloj Guantes Agua destilada Algodón Matraz Erlenmeyer

Mechero de Bunsen

Hisopo Tubos de ensayo Marcador indeleble

Encendedor

Medios de cultivo natural (frutas ó/y verduras jugosas) Caja de petri Tubos de ensayo Asa Algodón Lámpara de alcohol

Cristal violeta Azul de metilo Portaobjetos Agua Alcohol Safranina Lugol Guantes Cubre boca Microscopio óptico

Procedimientos:

Para medio de cultivo:

Para ello se requerirá ocupar Agar bacteriológico y Agar Mac

Conkey de a cuerdo al modo de preparación de cada uno.

Agar Bacteriológico Agar Mac Conkey Procesado especialmente para ser utilizado como agente solidificante en medios de cultivo microbiológicos. Ajustar y/o suplementar como se requiera para cumplir los criterios de funcionalidad.

Sobre la pesa de monoplano colocar el vidrio de reloj y medir 50g de Agar Mc Conkey.

Vaciar al matraz erlenmeyer y suspender los 50g del medio en 1L de agua purificada.

Calentar con agitación suave hasta su completa disolución y hervir durante un minuto.

Retirar del fuego y con algodón se tapará la boca del matraz.

Esterilizar en autoclave a 121°C durante 15 minutos.

Enfriar a una temperatura entre 45-50°C.

Vaciar en placas de Petri y tubos de ensayo estériles.

Tanto para los tubos de ensayo como cajas petri, se verterá Agar

Mac Conkey de la siguiente manera:

Encender la lámpara de alcohol.

Se retira el algodón que tiene el matraz erlenmeyer para poder

esterilizar la boca de este.

Se esteriliza también la boca del tubo de ensayo y las cajas petri

y se vacía el Agar.

A los tubos de ensayo se les pone como tapón un poco de

algodón y se colocan en horizontal, recargándolos con su boca

sobre el recipiente.

Se concluye la preparación para los medio de cultivo cuando los

tubos de ensayo que se inclinaron estén fríos y el medio de cultivo

se haya solidificado, se procede a sembrarlos.

Para siembra:

Se empleará siembra en estría simple y siembra cuadrante

cruzada.

Siembra cuadrante cruzada

Se enciende la lámpara de alcohol y se coloca cerca la caja de

petri para la siembra (siembra en cuadrante cruzada) y los tubos de

ensayo (siembra en estría simple).

El asa para sembrar debe tener el extremo del alambre

formando un círculo (pequeño).

Se toma el asa por la extremidad del mango con los dedos

pulgar, índice y medio de la mano derecha. En seguida se flamea al

rojo vivo del alambre del asa, se deja enfriar sobre un poco de Agar

solidificado.

Se coloca la punta del asa sobre la colonia de bacterias que se

elija, pare que tocando la superficie se adhieran gran número de

bacterias.

Se destapa la boca del tubo de ensayo y se esteriliza (se flamea

un poco con la lámpara de alcohol) para luego introducir el asa,

haciéndola pasar suavemente por la superficie del medio

solidificado, haciendo una estría simple, que se inicia en la parte

más interna del tubo, teniendo cuidado de no romper el Agar al

hacer la siembra.

Se saca el asa del tubo, se tapa el tubo y el asa se flamea al rojo

vivo, quedando lista para otra siembra; en este caso la siembra en

cuadrante cruzada que tendrá el mismo procedimiento.

Finalmente se marcarán las cajas de petri con el grupo que las

sembró.

Para tinción:

Con un asa previamente esterilizada se coloca en un

portaobjetos una pequeña cantidad algún cultivo bacteriano,

anteriormente hecho.

Se hace fijación de las bacterias al portaobjetos (Frotis): Se

coloca una pequeña gota de agua al portaobjetos inmediatamente

pasar tres veces el portaobjetos por la llama durante unos

segundos. Dejar enfriar el portaobjetos entre los pases.

Una vez seco, se agrega cristal violeta reposar 1min.

Luego se sustituye cristal violeta por azul de metilo 1 min.

Se elimina el exceso: lavado.

Se cubre la preparación con una solución yodo-yodurada: Lugol

1min.

Se elimina exceso: lavado

Se agrega alcohol para decolorar (5-10 gotas), con esto las

células Gram positivas retienen el compuesto de cristal-violeta-

yodo y conservan su color azul, mientras que las Gram negativas se

decoloran completamente por la acción del alcohol.

Se elimina exceso: Lavado

Se aplica un colorante contraste, el rojo de safranina 1min, con

el cual las células Gram negativas que antes se habían decolorado

se tiñen después.

Eliminar exceso: Lavado

Finalmente dejar secar y luego se podrá observar al

microscopio.

Análisis de resultados:

MEDIO DE

CULTIVO: Agar

Mc Conkey

SIEMBRAS:

Estría simple y

en cuadrante

cruzada.

TINCIÓN

GRAM:

Paso 1: Poner en

portaobjetos un poco de

cultivo bacteriano.

Paso 2: Fijar

muestra (Frotis).

Paso 3:

Cristal violeta

(1min).

Paso 4: Azul de

metilo (1 min)

Paso 5:

Eliminar

exceso

Paso 6:

Lugol (1min)

Paso 7:

Eliminar exceso

Paso 8: Alcohol

(5-10 gotas)

Paso 9: Eliminar

exceso

Paso 10:

Safranina

Paso 11:

Eliminar

exceso

Paso 13:

Observar en

microscopio

Paso 12:

Secar al aire

Paso 13:

Resultados

Conclusión:

De acuerdo a los resultados obtenidos en la práctica podemos concluir que la

hipótesis planteada resultó falsa pues los resultados de la tinción de los

medios de cultivo utilizados fue: bacilos, morado-rosas por lo tanto nos

referimos al grupo mendosicutes (con ausencia del azúcar del

peptidoglucano en pared celular) y otro al no tener pared celular no se tiñó

por lo tanto fue tenericute (bacilos). Entonces no pudimos obtener bacterias

Gram positivas pertenecientes al grupo firmicutes. Por último podemos

afirmar que se lograron los tres objetivos planteados, pues se prepararon

adecuadamente los medios de cultivo para el desarrollo de bacterias en

frutas y verduras; se observó la morfología de algunas bacterias desarrolladas

en frutas y se les pudo dar clasificación de acuerdo a la tinción Gram.

Bibliografía:

Velasco M., López R., Romero M., Salamanca C. Biología 2º

Bachillerato: Editex, España 2006.

Piña López C.: Diversidad microbiana, tipos de microbios.

http://www.unad.edu.co/fac_ingenieria/pages/Microbiologia_mutimedia/bact_clasif.htm

Franco Martínez F.: UNAM Facultad de Odontología, Microbiología, guía

de estudio 2002. http://132.248.225.10/licenciatura/guiasyprogramas/guias/2_microbiologia.pdf

Microbiología clínica:

http://danival.org/600%20microbio/6200microclin/bhim/bhim_2-3.html

http://www.mcd.com.mx/pdfs/AGAR%20MAC%20CONKEY.pdf

http://www.mcd.com.mx/pdfs/agar_bacteriologico.pdf

http://www.joseacortes.com/practicas/frotisbact.htm