practica microbiologia n°1 y 2 microscopio y colorantes

8/19/2019 PRACTICA MICROBIOLOGIA N°1 Y 2 MICROSCOPIO Y COLORANTES

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PRÁCTICA Nº1 Y 2 MICROBIOLOGÍA

UNIVERSIDAD PRIVADA SAN JUAN BAUTISTAFACULTAD DE CIENCIAS DE LA SALUD

ESCUELA PROFESIONAL DE MEDICINA HUMANASIGNATURA DE MICROBIOLOGÍA MÉDICA

RÁCTICA N° 1

MICROSCO IA: ESTUDIO Y MANEJO DEL MICROSCO IO

I. OBJETIVO

1. Conocer e identificar correctamente las partes ópticas y mecánicas del microscopio compuesto.2. Familiarizar al alumno con el uso correcto, cuidado y conservación del microscopio.

II. MATERIALES

• Microscopios• Pipeta Pasteur • Láminas portaobetos• Plumón indeleble

• Laminillas cubreobetos• Papel lente• Láminas coloreadas• !ela de felpa "2# cm$• %uero fisioló&ico• Fibra de pelo y lana

PARTE MECANICA• !ubo portalentes y cremallera• Condensador • !ornillos macro y microm'trico• (razo y Pie•

)evólver• C*arnela• Platina

PARTE OPTICA• +cular• Lentes de condensador • +betivos• iafra&ma• -speo

/. SISTEMAS QUE COMPRENDE EL MICROSCOPIO1. %istema de soporte0 comprende el brazo, el pie, el tubo ocular, el revólver y la platina.2. %istema de luminación0 comprende el foco, condensador y diafra&ma.. %istema de uste0 comprende el macrom'trico, microm'trico y cremallera3. %istema de umento0 comprende el ocular &eneralmente de 14 5, 1# 5, y los obetivos de 35, 14,245, 34, y 1445.


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RACTICA N° 2

METODOS DE COLORACIONES: COLORACIONES SIM LES. DIFERENCIALES

Y ES ECIALES.

INTRODUCCIONLa mayor parte de los colorantes usados en Microbiolo&6a son de tres tipos0

$ 7uellos en los cuales el ion portador del color "cromóforo$ es el anión llamados colorantesácidos -. -osinato de sodio ó -osina.

($ 7uellos cuyo cromóforo es el catión llamados colorantes básicos -. Cloruro azul de metileno.

C$ Los colorantes neutros, compuestos por básicos y ácidos -. 8emato5ilina "básico$ -osina"ácido$.

-n los trabaos bacterioló&icos &eneralmente se usan colorantes básicos como el azul de metileno,cristal de violeta, fucsina básica, safranina, todos ellos pertenecen al &rupo de los colorantesderivados de la anilina.

Las coloraciones pueden ser se&9n el n9mero de colorantes 7ue utilizan0

$ %imples0 cuando se utiliza un solo colorante como el zul de metileno, !inta C*ina, zul delactofenol

($ iferenciales0 cuando utilizan más de un colorante como la coloración de :ram, y ;ie*l <=eelsen.

C$ -speciales0 cuando se usan colorantes 7ue permiten reconocer ciertas estructuras celularescomo la coloración de Leis*man, /a&o, 8iss "para capsula$, >irtz con?lin "para espora$ etc.

A. COLORACIONES SIMPLES

%on a7uellas coloraciones 7ue utilizan un solo colorante para visualizar la morfolo&6a de losmicroor&anismos.

MATERIAL

• Muestra con mezcla bacteriana• Láminas portaobetos• Laminillas cubreobeto• sa bacterioló&ica de @olle en aro• Colorante zul de metileno• Colorante !inta C*ina• Colorante zul de lactofenol• Mec*ero de (unsen• /arillas para coloración• ceite de cedro• Aylol• Papel lente• Microscopio de luz con obetivo de inmersión

COLORACIÓN DE TINTA CHINA O NEGATIVA01. Colocar una &ota de tinta c*ina sobre la lámina portaobetos2. &re&ar una &ota de la mezcla bacteriana


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. Cubrir la preparación con una laminilla cubreobeto3. +bservar con lente de menor y mayor aumento.

)-%BL!+0 +bservar la capsula en los microor&anismos sin teir resaltan sobre un fondooscuro. Como la capsula de la levadura Cryptococcus

COLORACIÓN AZUL DE LACTOFENOL01 Colocar una &ota del colorante sobre la lámina portaobetos2 Colocar una muestra de un cultivo de *on&o sobre el colorante Cubrir con una laminilla cubreobeto3 +bservar con lente de menor y mayor aumento

)-%BL!+0 Los microor&anismos se observaran en un fondo azul D celeste

PROTOCOLO0 -s7uematice o dibue la morfolo&6a de los microor&anismos observados

B. COLORACIONES DIFERENCIALES%on a7uellas coloraciones 7ue utilizan más de un colorante y, &eneralmente el se&undo colorantees llamado colorante de contraste. -ntre los más usados tenemos la coloración de :ram y la de;ie*l =eelsen o tambi'n llamado ácido< alco*ol resistente

COLORACION DE GRAM-s una coloración diferencial 7ue permite diferenciar a las bacterias en :ram positivas y :ramne&ativas, se&9n la estructura y composición de la pared celular. -n las :ram ne&ativas, elpeptido&lucano tiene una sola capa y las cadenas no están entrelazadasE en las :ram positivas lamayor6a presenta muc*as capas de peptido&lucano.-5isten varias modificaciones del :ram, una de ellas es la de @opeloff

PROCEDIMIENTO1. ividir la lámina en partes0 1 para rotular el =G de muestra y 2 para la preparación del frotis.2. Con el asa bacterioló&ica previamente esterilizada, tomar la muestra y realizar un frotis en elcentro de la lámina portaobeto, e5tendi'ndola en espiral del centro a la periferia, para obtener unapreparación en capa fina.

. Fiar la muestra, mediante el secado del frotis a temperatura ambiente, o con la ayuda de lallama d'bil del mec*ero de (unsen.3. Colocar la lámina portaobetos con la preparación sobre la varilla de coloración.#. Cubrir el frotis con el colorante /ioleta de :enciana, lue&o a&re&ar 1< 2 &otas de la solución debicarbonato de sodio, dear actuar por 2 minutos.H. Lavar con a&ua corriente "evitar la ca6da del c*orro de a&ua directamente sobre el frotis$I. Cubrir con Lu&ol durante 1< 2 minutos, lavar lue&o con a&ua.J. ecolorar el frotis con una solución de alco*ol< acetona "inclinar la lámina y decolorar *asta 7ueno arrastre colorante$ má5imo por 14 se&undos. Lue&o lavar con a&ua.K. Cubrir con el colorante de contraste fucsina básica durante 4 se&undos. Lue&o lavar con a&ua.14. %ecar a temperatura ambiente o con ayuda de la llama d'bil del mec*ero de (unsen11. +bservar al microscopio con el obetivo de inmersión.

RESULTADOSLas bacterias :ram positivas se colorean de violeta y las bacterias :ram ne&ativas de color rosado.

PROTOCOLO0 -s7uematice o dibue lo realizado en prácticas.

PREGUNTASBN -% C+L+)=!-OBn colorante es una sustancia 7ue es capaz de teir las fibras ve&etales y animales. Loscolorantes se *an usado desde los tiempos más remotos, empleándose para ello diversas materias


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procedentes de ve&etales "c9rcuma, 6ndi&o natural, etc.$ y de animales "coc*inilla, moluscos, etc.$as6 como distintos minerales.-n 7u6mica, se llama colorante a la sustancia capaz de absorber determinadas lon&itudes, sonsustancias 7ue se fian en otras sustancias y las dotan de color de manera estable ante factoresf6sicos7u6micos como por eemplo0 luz, lavados, &entes o5idantes, etc.

Para 7ue un colorante funcione en su estructura 7u6mica *a de tener unos determinados &ruposfuncionales denominados cromóforo, "ceder color$ 7ue son los 7ue *acen 7ue la mol'culaabsorba en la re&ión visible del espectro electroma&n'tico. Bn au5ocromo "aumentar color$ es un&rupo funcional 7ue por s6 solo no da color a la mol'cula, pero 7ue si se encuentra conu&ado conun &rupo cromóforo aumenta la intensidad del color.

%e da este nombre a sustancias coloreadas, las cuales son capaces de teir las fibras ve&etales yanimales. Para 7ue un colorante sea 9til debe ser capaz de unirse fuertemente a la fibra y por lavado no debe perder su color. demás debe ser relativamente estable 7u6micamente y soportar bien la acción de la luz.

enominaciones de los colorantes0• denominación &en'rica• denominación 7u6mica• códi&o del Colour nde5 1K23 "1Q edición$• códi&o del Colour nde5 1K#H "2Q edición$

códi&o del %c*ultz

BN !P+% - C+L+)=!- C+=+C-OClasificación de los colorantes

• Colorantes %ustantivos0 %on colorantes 7ue pueden teir directamente las fibras deal&odón.

• Colorantes Mordientes0 -l mordiente es un producto 7ue se adiciona a la fibra y esabsorbido por ella, pudiendo consecutivamente atraer el colorante. -ste t'rmino se usaprincipalmente para los colorantes 7ue se adicionan usando ó5idos metálicos comomordiente. -specialmente se emplean como mordientes los ó5idos de aluminio y cromo

por formar precipitados insolubles.• Colorantes a la !ina0 %on sustancias insolubles 7ue se pueden reducir a materiales al7uil<

solubles. -l colorante se aplica en su forma reducida y se re


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o %ales de =a. @, Ca, ión amonio, eosina, roo con&o, rosa ben&ala, fucsina ácida...• B*si"os(

o -n disolución se car&an positivamente uni'ndose a estructuras con car&a ne&ativacomo las c'lulas.

o Cloruros, sulfatos, azul de metileno, cristal violeta, verde mala7uita, fucsinafenicada o carbol


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La tinción de :ram o coloración de :ram es un tipo de tinción diferencial empleadoen bacteriolo&6a para la visualización de bacterias, sobre todo en muestras cl6nicas. ebe sunombre al bacteriólo&o dan's C*ristian :ram"1J#


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coloración de contraste las c'lulas &ram ne&ativas son roas, mientras 7ue las &ram positivaspermanecen violetas.

La safranina puede o no utilizarse, no es crucial para la t'cnica. %irve para *acer una tinción decontraste 7ue pone de manifiesto las bacterias &ram ne&ativas. l t'rmino del protocolo, las &rampositivas se verán azul


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. %i se encuentra la misma cantidad de bacilos "1 a $ se reporta como ne&ativo poniendo unanota en el diario de trabao sobre lo observado.

BN -% -L !N)M=+ PBC(CL)O

-s una infección con bao nivel de bacilos en la e5pectoración

practica microbiologia n°1 y 2 microscopio y colorantes

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