practica no 02 medios de cultivo microbiologia

Guía de prácticas de Microbiología Veterinaria I 2015

PRACTICA N° 01

RECONOCIMIENTO DE EQUIPOS Y MATERIALES DE LABORATORIO

I.INTRODUCCION:

Uno de los factores que nos permiten obtener un resultado confiable en un Laboratorio de

Microbiología, es que los equipos e instrumentos funcionen correctamente y podamos

asegurar que los valores que indican son los reales.

En la presente practica el estudiante se familiarizara con los equipos y material utilizado

en un laboratorio de Microbiología que es muy variado y depende fundamentalmente de las

líneas de trabajo a las que está dedicado; evidentemente, no se precisa el mismo

equipamiento en un centro de investigación con un alto grado de especialización.

Por tanto, aquí sólo nos referiremos al material básico que se suele encontrar en un

laboratorio mínimamente dotado

II. OBJETIVOS:

Familiarizar al estudiante con los implementos usados en la sala de practicas de

microbiología veteriniaria.

Capacitar al estudiante para adquirir habilidad en el manejo de los equipos y

materiales usados en la sala de practicas de microbiología veterinaria.

Instruir al estudiante en las reglas básicas de comportamiento y seguridad dentro de

la sala de practicas de microbiología veterinaria.

M.V.Z. Belinda Mamani Mamani Página 1


III. MARCO TEÓRICO:

A. BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO: Conjunto de medidas preventivas

reconocidas internacionalmente que protegen la salud y la seguridad de riesgos

como los agentes físicos, químicos y mecánicos.

1. Es imprescindible el uso de bata de laboratorio.

2. Al iniciar y finalizar las prácticas, el estudiante se lavará las manos con agua y

jabón.

3. El lugar de trabajo debe estar siempre limpio y ordenado. Antes de comenzar

cada práctica es conveniente desinfectar la superficie de trabajo. Los

desinfectantes más habituales para este propósito son la lejía y el etanol 70-96°.

4. Los microorganismos deben manejarse siempre alrededor de la llama. Se deben

evitar los desplazamientos innecesarios por el laboratorio, ya que crean

corrientes que originan contaminaciones o pueden producir accidentes.

5. Durante las prácticas está prohibido comer, beber y fumar. Cuando se

manipulan microorganismos hay que evitar llevarse las manos a la boca, nariz,

ojos...

6. Libros, carpetas, abrigos y cualquier otro material que no se utilice en la

realización de la práctica deben ser apartados del lugar de trabajo.

7. Para deshacernos del material contaminado utilizaremos los recipientes

adecuados. Estos recipientes serán esterilizados posteriormente. Nunca se debe

tirar nada por el fregadero o la basura común

8. Bajo ningún concepto debe sacarse ninguna muestra contaminada del

laboratorio.

9. El suministro de gas para los mecheros Bunsen requiere las precauciones

propias de estas instalaciones. Los escapes de gas son muy peligrosos, por lo

que hay que cerrar todas las llaves de paso de gas al finalizar la práctica, evitar

la presencia de sustancias inflamables y revisar periódicamente las

conducciones.

10. No se debe pipetear nunca con la boca. Utilizar siempre pipeteadores manuales.



11. En caso de accidente (ruptura de material, derramamiento de

microorganismos...) se comunicará inmediatamente al instructor

B. EQUIPOS:

1. MICROSPOCIO BINOCULAR: Los microscopios magnifican la imagen y

aumentan nuestra capacidad para ver detalles que de otro modo no podríamos

percibir, es un instrumento que sirve para observar objetos demasiado pequeños

para el ojo humano o detalles de los mismos mediante un proceso de ampliación.

PARTE MECÁNICA

Pie o soporte: sirve como base al microscopio y en él se encuentra la fuente de

iluminación.

Platina: superficie sobre la que se colocan las preparaciones. En el centro se

encuentra un orificio que permite el paso de la luz. Sobre la platina hay un sistema

de pinza o similar, para sujetar el portaobjetos con la preparación, y unas escalas

que ayudan a conocer qué parte de la muestra se está observando. La platina

presenta 2 tornillos, generalmente situados en la parte inferior de la misma, que

permiten desplazar la preparación sobre la platina, en sentido longitudinal y

transversal respectivamente.

Tubo: cilindro hueco que forma el cuerpo del microscopio. Constituye el soporte

de oculares y objetivos.

Revólver portaobjetivos: estructura giratoria que contiene los objetivos.

Brazo o asa: une el tubo a la platina. Lugar por el que se debe tomar el

microscopio para trasladarlo de lugar.

Tornillo macrométrico o de enfoque grosero: sirve para obtener un primer enfoque

de la muestra al utilizarse el objetivo de menor aumento. Desplaza la platina

verticalmente de forma perceptible.

Tornillo micrométrico o de enfoque fino: sirve para un enfoque preciso de la

muestra, una vez que se ha realizado el enfoque con el macrométrico. También

desplaza verticalmente la platina, pero de forma prácticamente imperceptible. Es



el único tornillo de enfoque que se utiliza, una vez realizado el primer enfoque, al

ir cambiando a objetivos de mayor aumento.

PARTE ÓPTICA

Oculares: son los sistemas de lentes más cercanos al ojo del observador, situados en

la parte superior del microscopio. Son cilindros huecos provistos de lentes

convergentes cuyo aumento se reseña en la parte superior de los mismos

(normalmente 10X en los microscopios que se utilizarán en esta práctica).

Dependiendo de que exista uno o dos oculares, los microscopios pueden se mono o

binoculares.

Objetivos: son sistemas de lentes convergentes que se acoplan en la parte inferior del

tubo, mediante el revólver.

Condensador: sistema de lentes convergentes que capta los rayos de luz y los

concentra sobre la preparación, de manera que proporciona mayor o menos contraste.

Se regula en altura mediante un tornillo

Fuente de iluminación: en los microscopios a utilizar, el aparato de iluminación está

constituido por una lámpara halógena de bajo voltaje (12V) situada en el pie del

microscopio. La luz procedente de la bombilla pasa por un reflector que envía los

rayos luminosos hacia la platina.

Diafragma o iris: sobre el reflector de la fuente de iluminación. Abriéndolo o

cerrándolo permite graduar la intensidad de la luz.

Transformador: ya que el voltaje de la bombilla es menor que el de la red, es

necesario para enchufar el microscopio. Algunos modelos ya lo llevan incorporado en

el pie del microscopio. Además, el transformador dispone de un potenciómetro para

regular la intensidad de la luz.

2. MICROSCOPIO ESTEREOSCOPIO: El microscopio estereoscópico tiene dos lentes

objetivos y posee una profundidad de foco mucho mayor que la del microscopio

compuesto; ambas características le permiten producir imágenes tridimensionales. Las

partes de este microscopio son prácticamente las mismas que las discutidas para el

microscopio compuesto



El pie. Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo

general forma de Y o bien es rectangular

El tubo. Tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar las

molestias que ocasionan los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan

los oculares.

El revólver. Es una pieza giratoria provista de orificios en los cuales se enroscan los

objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en

posición de trabajo, la cual se nota por el ruido de un piñón que lo fija.

La columna, llamada también asa o brazo, es una pieza colocada en la parte

posterior del aparato. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo

inferior se adapta al pie.

La platina. Es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto

que se va a observar. Presenta un orificio en el eje óptico del tubo que permite el

paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso

permanece inmóvil; en otros casos puede ser giratoria, es decir, mediante tornillos

laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

Carro. Es un dispositivo colocado sobre la platina que permite deslizar la

preparación con movimiento ortogonal de adelante hacia atrás y de derecha a

izquierda.

El tornillo macrométrico. Girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del

microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a una cremallera. Estos

movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.

El tornillo micrométrico. Mediante el movimiento casi imperceptible que produce al

deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nitido de la preparación.

Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm que se utiliza para

precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.



3. ESTUFA O INCUBADORA: La incubadora crea condiciones de temperatura,

la humedad y otras condiciones en grado óptimo, tales como el contenido de

dióxido de carbono (CO2) y de oxígeno en su atmósfera interior necesarios para

el desarrollo de un cultivo microbiano.

4. REFRIGERADOR: son indispensables para conservar los medios de cultivo,

productos biológicos y patológicos, así como mantener la supervivencia de

algunos microorganismos. Su temperatura oscila alrededor de los 2-10

5. CONGELADOR: alcanzan temperaturas entre -20 y -70° C y son indispensables

para conservar determinados productos biológicos (sueros, microorganismos).

Nos permite darles un tiempo mas prolongado de almacenamiento.

6. CENTRIFUGA: Es un instrumento que utiliza la fuerza centrifuga para separar

estratos (capas) de diferente densidad. Ejemplo suero de los globulos rojos en la

sangre.

7. HOMOGENIZADOR VORTEX: Se utiliza para mezclar líquidos o

preparar disoluciones y suspensiones, a travez de vibraciones, ideal para agitar

tubos de ensayo. para un solo tubo de ensayo con cabezal de goma

intercambiable.

8. CUENTA COLONIAS: Un contador de colonias es un instrumento utilizado

para contar colonias de bacterias o de otros microorganismos que crecen en una

placa de agar. Los primeros contadores sólo eran superficies iluminadas sobre

las que se colocaba la placa, con las colonias marcadas con un rotulador en la

superficie externa de la placa mientras el operador realizaba el recuento manual

9. BALANZA: Se denomina con el término de balanza al instrumento que sirve y

se utiliza para medir o pesar masas.

10. JARRA DE ANAEROBIOSIS: La jarra de anaerobiosis, es un recipiente ideal

para realizar incubaciones en anaerobiosis ya que en su soporte de acero

inoxidable se pueden instalar las bolsas de generación de atmósfera libre de

oxígeno.

11. ESTUCHE DE PLACA PETRY Y DE PIPETAS: Son utilizados para realizar la

esterilización.


http://es.wikipedia.org/wiki/Rotulador

http://es.wikipedia.org/wiki/Placa_de_agar

http://es.wikipedia.org/wiki/Microorganismo

http://es.wikipedia.org/wiki/Conteo_bacteriano

http://es.wikipedia.org/wiki/Suspensi%C3%B3n_(qu%C3%ADmica)

http://es.wikipedia.org/wiki/Disoluciones

http://es.wikipedia.org/wiki/Ox%C3%ADgeno_diat%C3%B3mico

http://es.wikipedia.org/wiki/Di%C3%B3xido_de_carbono

http://es.wikipedia.org/wiki/Humedad

http://es.wikipedia.org/wiki/Temperatura


12. EQUIPO DE SIEMBRA

a. Mechero de bunsen: Nos brinda un margen de esterilidad de 10-15 cm de

diámetro

b. Asa de kolle: Compuesto de un mango y alambre de micrón que termina en

argolla, utilizado para realizar siembras por estria.

c. Aguja de Kolle: Posee un mango y un alambre de micrón que termina en

punta, que se utiliza para realizar las siembras por puncion o picadura.

d. Espatula o asa de drigalsky: Es de material de vidrio y termina en una

forma triangular, sirve para realizar una siembra por diseminación.

EQUIPO DE ESTERILIZACIÓN:

1. HORNO ELÉCTRICO: La esterilización puede llevarse a cabo mediante calor

seco y en este caso se realiza en una estufa denominada. La destrucción

microbiana se produce por oxidación de los componentes celulares y

desnaturalización de proteínas. Este es un proceso menos eficaz por la ausencia

de agua y por lo tanto deben incrementarse tanto las temperaturas como los

tiempos de exposición. 180°C -200°C(1 hora)

2. AUTOCLAVE: El calor húmedo por medio de utilización de vapor de agua es

el agente esterilizante más frecuentemente utilizado. Este mecanismo destruye

eficazmente los microorganismos por desnaturalización de proteínas y enzimas,

y desestabilización de membranas. Deben llegar a una temperatura de 121°C X

15 min y a presión de 15 libras.

3. FILTRACION: Los microorganismos no son destruidos sino que son retenidos

físicamente o adsorbidos por los filtros con un tamaño de poro adecuado. El

tamaño de poro que se considera en la actualidad esterilizante es el de 0,22 µm

aunque más recientemente se tiende a la utilización de poros de 0.1 µm

a. Filtro de seitz

b. Matraz de kitasato

c. Bomba de vacio:



4. POTENCIOMETRO: Equipo que es utilizado para medir el pH de los medios

de cultivo, constituido por un par de electrones sensibles a la concentración de

hidrogeniones.

5. DESTRILADOR ELÉCTRICO: se usa para purificar el agua corriente,

mediante procesos controlados de vaporización y enfriamiento. Al aplicar

energía térmica al agua en fase líquida, luego de un proceso de calentamiento, se

convierte en vapor de agua. Esto permite separar las moléculas de agua, de las

moléculas de otras sustancias o elementos que se encuentran mezclados o

diluidos. El vapor de agua se recolecta y

MATERERIALES DE VIDRIO:

1. PROBETA: Este material permite medir volúmenes, las hay de

vidrio y de plástico y de diferentes capacidades

2. MATRAZ DE ERLENMEYER: vasijas o recipientes de vidrio de diversas

formas que se emplean en el laboratorio para calentar líquidos citando hay

peligro de pérdida de vaporación, o para titular en el análisis cuantitativa.

3. MATRAZ AFORADO O FIOLA: Instrumento de vidrio de cuello largo y

angosto se usa para preparar soluciones.

4. VASO DE PRECIPITACIÓN:

5. PLACA PETRI: son recipientes de vidrio o de plástico de forma cilíndrica

compuestos de caja y tapa, recipientes destinados a contener medios de cultivos

sólidos cuando se desea disponer de una gran superficie

6. PIPETA: Son instrumentos de vidrio que se usan para medir los líquidos con

mayor exactitud.

7. PROBETA GRADUADA: Instrumento de vidrio, que se emplea, para medir el

volumen de los líquidos.

8. TUBOS DE ENSAYO: para disolver, calentar o hacer reacciones pequeñas

cantidades de sustancias líquidas o sólidas y preparación de cultivos. Estos

pueden ser grandes medianos y pequeños.



9. VARILLA DE VIDRIO: sirve como agitador, son de vidrio para que no se

oxiden, corroen ni reaccionan con las sustancias y miden de 20 a 30 cm

10. PORTAOBJETOS: son láminas rectangulares de vidrio, de bordes biselados

que miden 76 mm de largo, 26 mm de ancho y 1 mm de espesor. Son utilizados

para realizar preparaciones microscópicas coloreadas o sin colorear.

11. CUBREOBJETOS: son laminillas delgadas de vidrio, de tamaños variados, de

forma cuadrada o redonda, son empleados para cubrir preparaciones y facilitar

la observación microscópica del material que se desea examinar.

12. EMBUDO: Sirve para trasvasar líquido de un recipiente a otro, evitando que se

derrame líquido, también se utiliza en operaciones de filtración.

13. TRÍPODE: este puede ser fijo o desmontable, se utiliza para colocar matraces y

recipientes en observación, o para poner estos al fuego y aumentar su

temperatura.

MEDIOS DE CULTIVOS Y REACTIVOS:

1. MEDIO DE CULTIVO: Un medio de cultivo es un conjunto de nutrientes,

factores de crecimiento y otros componentes que crean las condiciones

necesarias para el desarrollo de los microorganismos

2. BATERIAS DE COLORACIÓN DE GRAM: Los colorantes que lo componen

son el cristal violeta, lugol, alcohol acetona y safranina.

3. BATERIA DE COLORACIÓN ACIDO RESISTENTE: La batería esta

compuesto por: fucsina básica fenolada, alcohol acido y azul de metileno.

4. ALCOHOL ISOPROPILICO: Utilizado para limpiar los objetivos del

microscopio óptico.

5. PEROXIDO DE HIDROGENO: Es un desinfectante, además se usa para

realizar pruebas bioquímicas por ejemplo la prueba de la catalasa

6. REACTIVO DE INDOL: Utilizado para realizar prueba de indol, para

identificar las especies bacterianas.



MATERIAL FUNGIBLE:

1. PAPEL DE CRAF: Papel utilizado para cubrir las placas Petri, tubos de ensayo,

para llevarlos al proceso de esterilización por calor húmedo.

2. GASAS: Nos sirve para elabora los tapones de los mataces de Erlenmeyer.

3. PABILO: Material utilizado para sujetar materiales.

4. JABON CARBÓLICO

5. PAPEL TOALLA

IV. MATERIALES Y METODOS:

1. El estudiante hará un reconocimiento a conciencia de todos los implementos que se

usan, así como las precauciones que se deben tomar durante su manejo, lo anterior

debe quedar consignado en el informe que entregara al profesor.

2. El profesor hará una demostración experimental de la forma como se llenan las

pipetas

V.RESULTADOS



VI. CONCLUCIONES

CUESTIONARIO

1. ¿Establezca la diferencia entre los siguientes términos?

Esterilización:

Desinfección:



Antisepsia:

Higienización:

Germicida:

Asepsia:

Bactericida:

2. ¿Cuál es el método de esterilización mas efectivo? Mencione las características.



3. ¿Cuál es la función de los siguientes equipos y coloque las partes en las correspondientes flechas?



4. ¿Cuál es la

diferencia entre la congeladora y refrigeradora?

5. ¿Dibuje el equipo de siembra y mencione cada una de sus funciones?



6. ¿Cuál es la función del microscopio y describa los diferentes objetivos?

7. ¿Cuantos placas Petri observamos según su tamaño?

8. ¿Dibuje la jarra de anaerobiosis mencione sus partes y funciones?

9. Dibuje el homogenizador vortex y menciones las funciones y partes?



10. ¿Defina el término siembra y medio de cultivo?

VII. BIBLIOGRAFIA:

1. GARCIA Valdez Elena. 2010. Practicas de microbiología.

2. TORRES Miguel. 1996. Manual practico de Bacteriologia medica.

3. MANUAL DE PRACTICAS DE MICROBIOLOGIA GENERAL.2012.



PRACTICA N°02

PREPARACION DE MEDIOS DE CULTIVO

I. INTRODUCCION:

Uno de los sistemas más importantes para la identificación de microorganismos es

observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio.

El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es el Medio de Cultivo y el

crecimiento de los microorganismos es el Cultivo

Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe

reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presión de



oxígeno adecuadas, así como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de

cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar

exento de todo microorganismo contaminante.

Como todos los organismos vivos, los microorganismos requieren ciertos nutrientes

básicos y factores físicos para el mantenimiento de su vida, estas necesidades varían según

el tipo de microorganismo y es necesario conocerlas para cultivarlos en el laboratorio.

II. OBJETIVOS:

Preparar algunos medios de cultivo, líquidos o sólidos, siguiendo las instrucciones

proporcionadas

Reconocer los diferentes medios de cultivo existentes para el crecimiento de

microorganismos, aplicando los conceptos básicos de nutrición y preparación de los

mismos.

III. MARCO TEORICO

Un medio de cultivo es una solución acuosa (bien como tal, o bien incorporada a un

coloide en estado de gel) en la que están presentes todas las sustancias necesarias para el

crecimiento de un(os) determinado(s) microorganismo(s). Composicion general de un

medio de cultivo:

Fuente de Carbono:

Este elemento aporta a los microorganismos esqueletos carbonados, y de su catabolismo

le brindan energía para su crecimiento y multiplicación. Puede ser suministrado a través

de diferentes fuentes, como hidratos de carbono (glucosa, lactosa, sacarosa, maltosa,

dextrosa, xilosa, manita, almidón, etc.).



Fuente de Nitrógeno:

Se pueden suministrar en forma de NO3K, (NH4)2SO4.

Muchos medios de cultivo presentan en un solo compuesto las fuentes de nitrógeno y

carbono; como aquellos que combinan peptonas, aminoácidos, algunas proteínas como

la caseína, etc. El más utilizado en microbiología es el extracto de levadura.

Sales minerales:

Estas son fuente de macroelementos (K, Na, S, P, Ca, Fe) y de microelementos (Mn, Zn,

Co, Cu, Ni).

Factores de crecimiento:

Son aquellos elementos esenciales para el desarrollo de los microorganismos, ya que

estos no lo pueden sintetizar a partir de compuestos más simples. Ej.: vitaminas,

coenzimas, aminoácidos. Para hacer selectivo un medio de cultivo se puede proceder de

la siguiente manera:

a. Aportando los compuestos nutritivos que un determinado microorganismo necesita y

no lo que otros necesitan.

b. Inhibiendo el desarrollo de algunos microorganismos no deseados, a través del pH,

que limite su desarrollo, o incorporando sustancias inhibidoras, como por ejemplo

colorantes (eosina, azul de metileno), metales pesados (bismuto), agentes

antimicrobianos (pimaricina, gentamicina, cloranfenicol), sustancias químicas (sales en

concentraciones que inhiben el desarrollo).

Indicadores de pH:

Cumplen la función de visualizar fácilmente si en un medio hay o no crecimiento o si

acidifica o basifica el medio. Ej: azul de bromotimol, rojo neutro, rojo de fenol, púrpura

de bromocresol, etc.

CLASIFICACION DE LOS MEDIOS DE CULTIVO



1. POR SU ORIGEN:

a. Medios sintéticos o indefinidos: son aquellos que son preparados a partir de

sustancias naturales (animales o vegetales); de composición rigurosamente

constante. Su composición química exacta se desconoce, ya que son el producto de

realizar infusiones y extractos de materiales complejos. Ejemplo la leche, jugos

vegetales, sangre.

b. Medios complejos o definidos: Se obtienen disolviendo en agua destilada

cantidades concretas de distintas sustancias químicas puras, orgánicas,

inorgánicas. Agar nutritivo, agar manitol salado,

2. POR SU CONSISTENCIA

a. Medios líquidos: Es un medio de cultivo fluido, libre de agar que contiene

productos cárnicos o proteicos (peptonas o extractos), con adición de algún tampón

para mantener el pH adecuado. Ejemplo: caldo nutritivo, caldo de tioglicolato, agua

peptonada, etc. Si la bacteria crece en un medio líquido, en la mayoría de los casos

las células que se producen en cada división continúan su vida independientemente

formándose una suspensión de células libres.

b. Medios solidos: Es un medio para verter o en tubos de ensayo, con un contenido de

agar del 1-2%.

Cuando una célula microbiana se siembra sobre un medio de cultivo sólido, ésta se

desarrolla multiplicándose varias veces hasta formar una estructura macroscópica

denominada colonia. Así, se puede definir una colonia como el desarrollo aislado de

una cepa microbiana, la cual crece hasta alcanzar un tamaño determinado que se

mide en milímetros. Una colonia está formada por aproximadamente 108 células

(clones de la célula original que dio origen a la colonia). Su aspecto macroscópico

es característico de cada especie, siempre y cuando se siembre en el mismo medio y



se incube bajo las mismas condiciones ambientales. La caracterización de colonias

se hace en base a los siguientes criterios:

c. Medios semisólidos: Cuando contiene un 0.5% de agar. Útiles para la observación del

metabolismo, así como la propagación y obtención de cultivos de bacterias anaerobias

3. POR SU OBJETIVO:

a. Medios de transporte: Son medios que deben mantener viables a los

microorganismos presentes en una muestra antes de que se procesen, los conserva

evitando su multiplicación y muerte. Mayormente son medios de consistencia

liquida o semisólidos.

.Medio de Stuart: permite la conservación y el transporte e un gran número de

microorganismos patógenos, como Neisseria gonorrhoeae, Heamophilus



influenzae, Corynebacterium diphteriae, Streptococcus sp., Salmonella sp.,

Shigellas sp., etc Se utiliza para transporte muestras de materiales purulentos

Medio de Cary Blair: El medio de transporte Cary-Blair, es semisólido debido a

la baja concentración de agar. Tiene un mínimo aporte de nutrientes que permite

la recuperación de los microorganismos sin que haya replicación, es para la

recolección, transporte y conservación, especialmente para muestras fecales. Se

asegura la viabilidad de Vibrio cholerae durante el tiempo de transporte y de

donde la bacteria pueda ser recuperada mediante coprocultivo.

Medio de amies: es una modificación del medio de Cary Blair, Neisseria sp.,

Haemophilus sp., Corynebacterium sp., Streptococcus pyogenes, Streptococcus

pneumoniae, Enterobacterias, sp., etc. permite la supervivencia de organismos

incluso hasta 48 horas., Algunos microorganismos pueden resistir en el medio

durante tres o más días, sin embargo, es conveniente que la muestra llegue al

laboratorio antes de las 24 horas.

b. Medios de enriquecimiento: Son medios liquidos que por su composición química

favorecen o permiten la multiplicación de, inhibiendo parcialmente a otras.

Despues de la incubación se debe efectuar subcultivos de estos medios en medios

sólidos, para obtener colonias aisladas. Ejemplo:

Caldo de selenito: Se usa para enriquecimiento de miembros del grupo

salmonella, cuando se aíslan de materiales infecciosos como heces, orina, etc. El

selenito inhibe a las coliformes, enterococos y estafilococos, no así a las

salmonellas, proteus, shigella y pseudomonas

Caldo de tetrationato: Caldo utilizado para el enriquecimiento de salmonella.

c. Medios de enriquecimiento mejorados: Son los medios comunes, a los que se les

añaden ciertos productos, a manera de un suplemento nutritivo(sangre, suero,

glucosa, hemoglobina, etc.) que permiten el aporte de factores de crecimiento o

sustancias que neutralizan agentes inhibidores del crecimiento, en bacterias

exigentes. Ejemplo: Agar sangre, agar pata glucosa, etc.



d. Medios de aislamiento: Son medios de consistencia sólida, sirven para poder

observar a las colonias aisladas unas de otras. Se subclasifican en :

d.1. Medios no selectivos: O comunes, son medios cuya única finalidad es el

crecimiento de microorganismos poco frecuentes. Pueden ser liquidos, de

enriquecimiento, para conseguir gran cantidad de bacterias a través del inoculo

efectuado. Tambien pueden ser solidos de aislamiento. Aquí desarrollan la mayor

parte de la flora bacteriana. Ejemplo:

Agar nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propósitos generales, para el

aislamiento de microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a

requerimientos nutritivos, No contiene inhibidores del desarrollo bacteriano.

Características del medio: ámbar claro a medio ligeramente opalescente

Agar tripticasa soya

Agar infusión cerebro corazón

Agar muller hinton: Es un medio que sirve para realizar las pruebas de

sensibilidad bacteriana.

Agar recuento en placa: Medio de cultivo recomendado para el recuento de

bacterias aeró- bicas en aguas, aguas residuales, productos lácteos y otros

alimentos. También es recomendado como medio general para determinar

poblaciones microbianas.

d.2. Medios selectivos: Son aquellos que permiten seleccionar un tipo de

microorganismos. En el laboratorio se emplean muchos medios selectivos.

Medios para el desarrollo de gram negativas: Contienen sustancias, reactivos

que inhiben el desarrollo de las gram positivas, así tenemos a los medios:

+Agar Mac Conkey: Este medio se utiliza para el aislamiento de bacilos Gram

negativos de fácil desarrollo, aerobios y anaerobios facultativos. Permite

diferenciar bacterias que utilizan o no, lactosa en muestras clínicas, de agua y

alimentos. Todas las especies de la familia Enterobacteriaceae desarrollan en

el mismo.



+Agar EMB: Este medio es utilizado para el aislamiento selectivo de bacilos

Gram negativos de rápido desarrollo y escasas exigencias nutricionales.

Permite el desarrollo de todas las especies de la familia Enterobacteriaceae.

+Agar S-S: Medio de cultivo utilizado para el aislamiento de Salmonella spp.

y de algunas especies de Shigella spp. a partir de heces, alimentos y otros

materiales en los cuales se sospeche su presencia. Es un medio de cultivo

selectivo y diferencial. La selectividad, esta dada por la sales biliares y el

verde brillante, que inhiben el desarrollo de bacterias Gram positivas, de la

mayoría de los coliformes y el desarrollo invasor del Proteus spp. Salmonella,

Shigella y otros microorganismos no fermentadores de lactosa, crecen bien en

el medio de cultivo, y producen colonias transparentes.

La producción de ácido sulfhídrico se evidencia como colonias con centro

negro debido a la formación de sulfuro de hierro.

+Agar XLD: El agar XLD (Xilosa, Lisina, Desoxicolato) es un medio

selectivo diferencial, utilizado para el aislamiento y diferenciación de

patógenos entéricos Gram negativos, especialmente del género Shigella. La

degradación de los carbohidratos presentes en el medio (xilosa, lactosa y

sacarosa) genera la producción de ácido haciendo virar el indicador (rojo

fenol) de rojo a amarillo. En este medio se incorpora la xilosa porque es

prácticamente fermentada por todas las enterobacterias con excepción de los

microorganismos pertenecientes al género Shigella.

Medios selectivos para gram positivas:

+Agar Manitol salado: Medio de cultivo selectivo y diferencial, utilizado para el

aislamiento y diferenciación de estafilococos. Es recomendado para el aislamiento

de estafilococos patogénicos a partir de muestras clínicas, alimentos, productos

cosméticos y otros materiales de importancia sanitaria



+Agar SPS (Sulfato polimixina sulfadiazina): Utilizado para aislar al clostridium

Medios especiales:

+Agar Brucella: Medio recomendado para el aislamiento y cultivo de Brucella spp.

Con la adición de sangre, el medio se usa para el aislamiento y cultivo de Brucella

spp. y de microorganismos aerobios y anaerobios nutricionalmente exigentes, a

partir de una gran variedad de muestras clínicas. También es útil para observar

reacciones de hemólisis.

+Agar Sauboroud: Medio utilizado para el aislamiento, identificación y

conservación de hongos patógenos y saprófitos. También es útil para el cultivo de

levaduras.

+Agar TCSC: Contiene: tiosulfito, citrato, sales biliares y sacarosa. Indicador: azul

de Bromotimol Vibrionaceaes

e. Medios bioquímicos: Determinan la actividad metabólica de una cepa pura. Son

empleadas principalmente la identificación y clasificación de bacterias y hongos

Ensayos que ponen de manifiesto características metabólicas de los

microorganismos. Ejmplos: Agar KIA, agar citrato, agar manitol salado, agar TSI,

Caldo peptonado, etc.

IV. MATERIALES Y METODOS:

IV.1. MATERIALES

Matraz de Erlynmeyer.

Probeta graduada.

Balanza de precisión.

Medios de cultivo deshidratado.

Mechero bunzen.



Agua destilada.

Autoclave.

Estufa a 37°C.

IV.2. METODOLOGIA (PROCEDIMIENTO) Haga el desarrollo usted

V. RESULTADOS



VI. CONCLUIONES

CUESTIONARIO

1. ¿Defina los términos?



Colonia

Cepa

Especie

2. ¿Qué es el agar?

3. ¿Qué es medio de cultivo y cultivo?

4. ¿Enumere las 6 diferencias entre los medios selectivos y no selectivos?



5. ¿Ponga 4 ejemplos de medios de cultivos selectivos y fundamente por que?

6. ¿Mencione que medio de cultivo no se debe esteriliza?

7. ¿Por qué utilizamos agua destilada para la preparación de los medios de

cultivo?



8. ¿Qué son los medios bioquímicos y ponga 3 ejemplos?

9. ¿Qué medio de cultivo nos sirve para la identificación de la Escherichia coli?

10. ¿Con que medio vemos la fermentación de la lactosa?

VII. BIBLIOGRAFIA:

MENDO Rubio, Manuel.2014. Manual de laboratorio “Medios de cultivo en

microbiología”, sexta edición, editorial Ebisa. Lima-Perú.

ROJAS Triviño, Alberto. 2011. Conceptos y practica de microbiología general.

https://www.google.com.pe/search?

q=conceptos+y+practica+de+microbiologia+general&oq=conceptos+y+practica+

de+microbiologia+general&aqs=chrome..69i57j69i65j5j69i59j69i61j69i60.7567j0

j9&sourceid=chrome&es_sm=122&ie=UTF-8. 02 de abril del 2015.

AQUIHUATI Ramos, Maria de los Angeles y PERES Chavela, Maria de Lourdes.

2004. Manual de prácticas del laboratorio de microbiología general.

http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL


http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf

https://www.google.com.pe/search?q=conceptos+y+practica+de+microbiologia+general&oq=conceptos+y+practica+de+microbiologia+general&aqs=chrome..69i57j69i65j5j69i59j69i61j69i60.7567j0j9&sourceid=chrome&es_sm=122&ie=UTF-8




_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf. 03 de

abril del 2015

PRACTICA N°03

TECNICAS DE SIEMBRA

I. INTRODUCCION:En Microbiología se entiende como siembra el proceso mediante el cual se lleva una porción de una población de microorganismos, denominada entonces inóculo, de un cultivo crecido a un medio nutritivo para su crecimiento. Todo este proceso hay que llevarlo a cabo con instrumentos y medios previamente esterilizados y siguiendo las instrucciones de los monitores de prácticas. La principal advertencia consiste en trabajar siempre próximos a la llama del mechero que, debido a las corrientes de convección verticales que genera, es capaz de crear un ambiente estéril en la zona inmediatamente alrededor y debajo de la llama.Como instrumento portainóculos más frecuente se utiliza el asa de siembra, con el que

se puede tomar inóculo a partir de colonias o de medio líquido, debido a que mantiene

un pequeño volumen de agua por tensión superficial. Para depositar el inóculo en

líquido basta con introducir el extremo en el medio y agitar ligeramente. Sobre sólido

hay que hacer un recorrido largo sobre la superficie salvo en el caso del medio TSI, en

el que también hay que inocular picando en profundidad para observar reacciones


http://www.uamenlinea.uam.mx/materiales/licenciatura/diversos/AQUIAHUATL_RAMOS_MARIA_DE_LOS_ANGELES_Manual_de_practicas_de.pdf


metabólicas en anaerobiosis. A veces se utilizan pipetas para transportar volúmenes

grandes de inóculos como en la práctica de crecimiento bacteriano.

II. OBJETIVOS:

: qué el alumno realice algunas de las técnicas de cultivo

utilizadas en el laboratorio de bacteriología: estrías, picadura y

agitación

III. MARCO TEORICO:

En términos microbiológicos se entiende por SIEMBRA el proceso mediante el cual se lleva una porción de una población de microorganismos ( inóculo ) de un cultivo bacteriano a un medio nutritivo para su crecimiento.

IV. MATERIALES Y METODOS:V. RESULTADOS:VI. CONCLUCIONES:VII. BIBLIOGRAFIA:


practica no 02 medios de cultivo microbiologia

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