microbiologia 2

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Universidad Nacional de Ingeniería Facultad de Ingeniería Ambiental I. OBJETIVO Identificar el GRAM, forma y agrupación al que pertenecen las muestras que se analizaran en laboratorio utilizando el microscopio compuesto. Reconocimiento de las partes del microscopio, así como utilizarlo para observar muestras con la lente de 10X. II. FUNDAMENTO TEORICO COLORACION DE BACTERIAS Los microorganismos, excepto las algas, son por lo general incoloros y muy ligeramente refractantes y por lo tanto son más difíciles de ser estudiados tal y como se los encuentra en la naturaleza. Para poder hacerlos visibles se los colorea o tiñe previamente antes de observarlos en el microscopio. La coloración hace resaltar también algunas características morfológicas que de otra manera no son visibles porque las distintas partes de la célula tienen afinidad por diferentes colorantes. Los colorantes más comunes son aquellos derivados de la anilina como la fucsina, el azul de metilo y otros. La coloración se usa también para diferenciar a los organismos o partes de ellos que de otra manera son muy semejantes; el proceso se conoce entonces como diferenciación de coloración. La diferenciación de coloración se puede hacer Laboratorio 2: Uso del Microscopio y Coloración de bacterias 1

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I. OBJETIVO

Identificar el GRAM, forma y agrupación al que pertenecen las muestras que se analizaran en laboratorio utilizando el microscopio compuesto.

Reconocimiento de las partes del microscopio, así como utilizarlo para observar muestras con la lente de 10X.

II. FUNDAMENTO TEORICO

COLORACION DE BACTERIAS

Los microorganismos, excepto las algas, son por lo general incoloros y muy ligeramente

refractantes y por lo tanto son más difíciles de ser estudiados tal y como se los encuentra

en la naturaleza. Para poder hacerlos visibles se los colorea o tiñe previamente antes de

observarlos en el microscopio. La coloración hace resaltar también algunas características

morfológicas que de otra manera no son visibles porque las distintas partes de la célula

tienen afinidad por diferentes colorantes. Los colorantes más comunes son aquellos

derivados de la anilina como la fucsina, el azul de metilo y otros.

La coloración se usa también para diferenciar a los organismos o partes de ellos que de

otra manera son muy semejantes; el proceso se conoce entonces como diferenciación de

coloración. La diferenciación de coloración se puede hacer utilizando un tinte policromado

en cuyo caso algunos organismos o partes de un organismo retienen un color mientras que

otros retienes otro color. Sin embargo la diferenciación de bacterias por coloración

generalmente depende de la habilidad de un organismo o de parte de el de retener un

colorante especifico después de que haya sido tratado con un agente decolorante. Los

pasos fundamentales para hacer una diferenciación de bacteria por coloración son: a)

coloración, b) decoloración y c) contracoloración.

Como ilustración, se verá en el presente informe en la parte del procedimiento el método

GRAM para la coloración de bacterias.

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Identificación de Bacterias por Tinción GRAM: Morfología Bacteriana

Ya hemos visto que la tinción de GRAM aporta dos ideas básicas para la deficinión "taxonómica" de las bacterias: el color que adquieren tras la tinción y la forma que presentan las células bacterianas.

En lo relativo a la coloración, ya hemos explicado anteriormente que hablamos de microorganismos Gram-positivos cuando aparecen teñidos de color azul-violeta y de Gram negativos cuando se visualizan de color rojo-rosado.

Formas básicas en que se puede visualizar la morfología bacteriana en una tinción GRAM:

Cocos

Micrococos, aparecen aislados y dispersos tras la división celular. Diplococos, aparecen por pares. Estreptococoss, tienden a unirse formando cadenas. Estafilococos, aparecen en grupos irregulares, a veces de gran tamaño

forma

esféri

ca: se

llama

Coco

División a lo largo del mismo

plano, formando cadenas

cortas

División a lo

largo de 2

planos

diferentes:

Tétradas

División a lo largo de 3 planos

2 cocos

juntos:

Diplococos

4 - 20 en

cadenas:

Estreptococos

regularmente:

Sarcinas

irregularment

e:

Estafilococos

Bacilos

Grandes variaciones morfológicas: fusiformes, estreptobacilos, cocobacilos

Forma de vara:

se llaman

Bacilos

Dos bacilos

juntos:

Diplobacilos

Cadenas de bacilos:

Estreptobacilos

Empalizadas,

Bacilos lado con

lado o en figuras en

X, V o Y

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Espirales

Forma espiral rígida se

llama: Espirilo

Si la espiral es flexible y ondulada

se llama: Espiroqueta

Utilizamos el término Pleomorfismo para referirnos a la adopción de diferentes formas en una misma especie.

 

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MICROSCOPIO COMPUESTO

Es un microscopio óptico que tiene más de una lente de objetivo. Los microscopios compuestos se utilizan especialmente para examinar objetos transparentes, o cortados en láminas tan finas que se transparentan. Se emplea para aumentar o ampliar las imágenes de objetos y organismos no visibles a simple vista. El microscopio óptico común está conformado por tres sistemas:

El sistema óptico comprende las partes del microscopio permiten un aumento de los objetos que se pretenden observar mediante filtros llamados "de antigel subsecuente".

El sistema mecánico está constituido por una palanca que sirve para sostener, elevar y detener los instrumentos a observar.

El sistema de iluminación comprende un conjunto de instrumentos, dispuestas de tal manera que producen las ranuras de luz.

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A. RECONOCIMIENTO DEL MICROSCOPIO

Parte Óptica:

- Ocular: se encuentra situado en la parte superior del tubo. Su nombre se debe a la cercanía de la pieza con el ojo del observador. Tiene como función aumentar la imagen formada por el objetivo.

- Objetivos: 10X, 43X y 97X: se disponen en una pieza giratoria denominada revólver y producen el aumento de las imágenes de los objetos y organismos, y, por tanto, se hallan cerca de la preparación que se examina. Los objetivos utilizados corrientemente son de dos tipos:

Los objetivos secos se utilizan sin necesidad de colocar sustancia alguna entre ellos y la preparación

El objetivo de inmersión está compuesto por un complicado sistema de lentes. Para observar a través de este objetivo es necesario colocar una gota de aceite de cedro entre el objetivo y la preparación, de manera que la lente frontal entre en contacto con el aceite de cedro

Parte Mecánica:

- El pie y soporte: Constituye la base sobre la que se apoya el microscopio y tiene por lo general forma de Y o bien es rectangular.

- La columna o brazo: llamada también asa, es una pieza en forma de C, unida a la base por su parte inferior mediante una charnela, permitiendo la inclinación del tubo para mejorar la captación de luz cuando se utilizan los espejos. Sostiene el tubo en su porción superior y por el extremo inferior se adapta al pie.

- El tubo portalente: tiene forma cilíndrica y está ennegrecido internamente para evitar los reflejos de la luz. En su extremidad superior se colocan los oculares y en el extremo inferior el revólver de objetivos. El tubo se encuentra unido a la parte superior de la columna mediante un sistema de cremalleras, las cuales permiten que el tubo se mueva mediante los tornillos.

- El tornillo macrométrico: girando este tornillo, asciende o desciende el tubo del microscopio, deslizándose en sentido vertical gracias a un mecanismo de cremallera. Estos movimientos largos permiten el enfoque rápido de la preparación.

- El tornillo micrométrico: mediante el ajuste fino con movimiento casi imperceptible que produce al deslizar el tubo o la platina, se logra el enfoque exacto y nítido de la preparación. Lleva acoplado un tambor graduado en divisiones de 0,001 mm., que se utiliza para precisar sus movimientos y puede medir el espesor de los objetos.

- La platina: es una pieza metálica plana en la que se coloca la preparación u objeto que se va a observar. Presenta un orificio, en el eje óptico del tubo, que permite el paso de los rayos luminosos a la preparación. La platina puede ser fija, en cuyo caso permanece

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inmóvil; en otros casos puede ser giratoria; es decir, mediante tornillos laterales puede centrarse o producir movimientos circulares.

- Las pinzas: son dos piezas metálicas que sirven para sujetar la preparación. Se encuentran en la platina.

- El revólver: es una pieza giratoria provista de orificios en los que se enroscan los objetivos. Al girar el revólver, los objetivos pasan por el eje del tubo y se colocan en posición de trabajo, lo que se nota por el ruido de un piñón que lo fija.

Parte de Iluminación

- Fuente de iluminación: se trata clásicamente de una lámpara incandescente de tungsteno sobrevoltada; en versiones más modernas con leds. Por delante de ella se sitúa un condensador (una lente convergente) e, idealmente, un diafragma de campo, que permite controlar el diámetro de la parte de la preparación que queda iluminada, para evitar que exceda el campo de observación produciendo luces parásitas.

- El espejo: necesario si la fuente de iluminación no está construida dentro del microscopio y ya alineada con el sistema óptico, como suele ocurrir en los microscopios modernos. Suele tener dos caras: una cóncava y otra plana. Goza de movimientos en todas las direcciones. La cara cóncava se emplea de preferencia con iluminación artificial, y la plana, para natural (luz solar). Los modelos más modernos no poseen espejos sino una lámpara que cumple la misma función que el espejo.

- Condensador: está formado por un sistema de lentes, cuya finalidad es concentrar los rayos luminosos sobre el plano de la preparación, formando un cono de luz con el mismo ángulo que el del campo del objetivo. El condensador se sitúa debajo de la platina y su lente superior es generalmente planoconvexa, quedando la cara superior plana en contacto con la preparación cuando se usan objetivos de gran abertura (los de mayor ampliación); existen condensadores de inmersión, que piden que se llene con aceite el espacio entre esa lente superior y la preparación. La abertura numérica máxima del condensador debe ser al menos igual que la del objetivo empleado, o no se logrará aprovechar todo su poder separador

- Diafragma: el condensador está provisto de un diafragma-iris, que regula su abertura para ajustarla a la del objetivo. Puede emplearse, de manera irregular, para aumentar el contraste, lo que se hace cerrándolo más de lo que conviene si se quiere aprovechar la resolución del sistema óptico

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B. ENFOQUE

a) Primero buscar el objetivo de menor aumento 10X y colocarlo en el tubo del revólver, el objetivo hará su ruido característico al estar en posición correcta.

b) Acomode la cara del espejo (plana para la luz natural y cóncava para la luz artificial) a fin de iluminar todo el campo que se observa por el ocular.

c) Prepare el objetivo que va a observar, en nuestro caso es el portaobjetos con muestra de bacterias.

d) Poner el portaobjetos en la abertura de la platina y centrar el objeto a observar.e) Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo micrométrico hasta que este

muy cerca de la lamina.f) Observar por el ocular del microscopio y levantar el objetivo utilizando el tornillo

macrometrico hasta ver la imagen.g) Usar el tornillo micrométrico para enfocar con mayor nitidez.h) Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de imagen.

Recomendaciones para el cuidado del microscopio.

Al sacar el microscopio de su compartimiento para trasladarlo de un lugar a otro, hágalo cuidadosamente transportándolo con ambas manos; con la mano derecha tome firmemente el “brazo” y ponga la mano izquierda debajo de la “base”. Debe mantener el microscopio siempre en una posición vertical.

Coloque el microscopio suavemente sobre la mesa para evitar que se desajuste la parte óptica. Nunca lo coloque en la orilla de la mesa.

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Antes de usar el microscopio observe si todas sus partes se encuentran limpias y en buen estado. Cualquier daño debe ser informado de inmediato al asistente.

Limpie suavemente la parte óptica con el papel de seda especial (papel de lente). Nunca los limpie con el pañuelo o con los dedos, ya que podría rayar los lentes. Esto lo hará antes y después de sus observaciones.

Mientras no esté observando una preparación mantenga apagada la fuente luminosa.

Cuide que sus objetivos no se humedezcan cuando se observan preparaciones liquidas.

Coloque el objetivo de menor aumento en su sitio cuando vaya a guardar el microscopio.

III. INSTRUMENTOS Y EQUIPOS UTILIZADOS

Instrumentos:

¥ Tubo de prueba¥ Placas petri con muestra de cultivo de agar nutritivo y caldo nutritivo¥ rejilla.¥ Mechero.¥ Inoculador¥ Portaobjetos

Sustancias:

¥ Agua destilada.¥ Cristal de Violeta.¥ Lugol.¥ Alcohol Acetona.¥ Safranina.

Equipos:

¥ Microscopio compuesto.¥ Luz incorporada por una lámpara enfocada en el espejo del microscopio compuesto.

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IV. PROCEDIMIENTO

El método de tinción:

Al utilizar la tinción de Gram se deben seguir los siguientes pasos:

Se realizó la preparación del frotis:

Pasar el portaobjetos por la llama del mechero, con el objetivo de esterilizarla, además el portaobjetos debe estar perfectamente limpio y desengrasado.

Esterilizar el inoculado flameando en la llama del mechero, esperar que se enfríe y sacar una gota suero para posteriormente añadir una pequeña cantidad de cultivo que se extenderá de forma que quede fina y homogénea. Dejar que la muestra llegue a temperatura de ambiente.

Cuando la muestra está seca, se procede a fijarla mediante el flameado (se pasó la muestra tres veces por la llama del mechero, sin que la muestre esté en contacto directo con la llama).

Se aplicó sobre el portaobjetos el primer colorante que correspondió a cristal violeta por 1 minuto, luego se lava durante dos segundos con agua destilada para eliminar el exceso de colorante.

Añadimos el mordiente lugol, que actuó fijando el colorante anterior a las bacterias, aplicándose durante 1 minuto, Se vuelve a eliminar el exceso mediante el lavado con agua destilada durante dos segundos.

Decoloramos con alcohol acetona unos 20 segundos y nuevamente lavar con agua destilada durante 2 segundos.

Cubrir la muestra con el segundo colorante, safranina (colorante de contraste) durante un minuto y luego lavar con agua destilada durante 2 segundos para dejar secar a temperatura ambiente.

Se observo la muestra en el microscopio con el objetivo de inmersión, usando aceite de cedro.

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El método de Observación con microscopio:

a) Primero buscar el objetivo de menor aumento 10X y colocarlo en el tubo del revólver, el

objetivo hará su ruido característico al estar en posición correcta.

b) Acomode la cara del espejo (plana para la luz natural y cóncava para la luz artificial) a fin

de iluminar todo el campo que se observa por el ocular.

c) Prepare el objetivo que va a observar, en nuestro caso es l portaobjetos con muestra de

bacterias.

d) Poner el portaobjetos en la abertura de la platina y centrar el objeto a observar.

e) Mirando por el costado bajar el objetivo utilizando el tornillo micrométrico hasta que este

muy cerca de la lamina.

f) Observar por el ocular del microscopio y levantar el objetivo utilizando el tornillo

macrometrico hasta ver la imagen.

g) Usar el tornillo micrométrico para enfocar con mayor nitidez.

h) Abrir o cerrar el diafragma para mejorar la calidad de imagen.

V. RESULTADOS Y/O OBSERVACIONES

DIA JUEVES 7 DE ABRIL Hora: 5:30 pm

GRUPO

N° 1

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

LAB MICRO

Tamaño=1mm

Borde: ondulado Forma: Plano Características ópticas: Traslucida

Pigmentación: Crema Cocos Estafilococos POSITIVO

Huella

Tamaño=4mm

Borde: ondulado Forma: Plana Características ópticas: Opaco Pigmentación: Crema Cocos Estafilococos

POSITIVO

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GRUPO

N° 2

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

LAB MICRO

Tamaño=9mm

Borde: ondulado Forma: Plano Características ópticas: Traslucida Pigmentación: Crema cocos Estreptococos POSITIVO

LAB MICRO

Tamaño=5mm

Borde: ondulado

Forma: Plana

Características ópticas: Translucida

Pigmentación: Crema

cocos Estreptococos

POSITIVO

GRUPO

N° 3

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

BAÑO

Tamaño=2 mm

Borde: ondulado

Forma: Plano

Características ópticas: Opaca

Pigmentación: Blanca

Cocos Estafilococos POSITIVO

BAÑO

Tamaño=1 mm

Borde: ondulado

Forma: Plano

Características ópticas: Opaco

Pigmentación: Naranja

Cocos Estafilococos

POSITIVO

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GRUPO

N° 4

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

HUELLA

Tamaño=8 mm

Borde: ondulado

Forma: Plano

Características ópticas: Opaca

Pigmentación: Blanca

Cocos Estafilococos POSITIVO

PELO

Tamaño=5mm

Borde: LISO

Forma: PLANO Características ópticas: Opaco

Pigmentación: Amarillo

Cocos Estafilococos

POSITIVO

DIA MARTES 12 DE ABRIL Hora: 11:30 am

GRUPO

N° 3

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

Baño

Tamaño=5mm Borde: ondulado Forma: Bacilos Características ópticas: Opaco Pigmentación: Crema

bacilos Estroptobacilos POSITIVO

LAB MICRO

Tamaño=5mm Borde: ondulado Forma: Plana Características ópticas: Opaca Pigmentación: Naranja

Bacilos Estreptobacilos

POSITIVO

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GRUPO

N° 4

AMBIENTE CARACTERES DE LA COLONIA

FORMA AGRUPACION GRAM

HUELLA

Tamaño=5mm

Borde: ondulatorio

Forma: coco

Características ópticas: Opaco

Pigmentación: Amarillo

cocos Estroptococos POSITIVO

BAÑO

Tamaño=8mm

Borde: ondulatorio

Forma: Plana

Características ópticas: Opaca

Pigmentación: Blanca

cocos Estroptococos POSITIVO

Observaciones

- De las muestras analizadas en el microscopio que fueron expuestas al baño de hombres, en 3 se encontraron cocos y en unas sola bacilos, pero además cabe resaltar que el Gram de todas la muestras del baño fueron positivas.

- En las 2 muestras expuestas a la huella digital, se encontró la presencia de cocos de Gram positivo.

- De las muestras expuestas al ambiente del laboratorio de microbiología, en 3 de estas se obtuvieron cocos y solo en una se encontró bacilos.

- En todas las muestras la agrupación fue o de estreptococos o de estreptobacilos, cabe agregar que el Gram en todas las muestras resulto ser positivo.

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VI. CONCLUSIONES

El método Gram para coloración de bacterias es muy útil y permite identificar las características de las bacterias con la utilización del microscopio

Se logro identificar la forma, agrupación y tipo de gram al que pertenece cada muestra, utilizando el microscopio y la coloración de bacterias; pues las bacterias gram positivas se tiñen de color azul oscuro o violeta mientras que las gram negativas se tiñen de un color rosado tenue, esto debido a la diferencia en su pared celular.

Se reconoció adecuadamente las partes del microscopio y pudo utilizarse para la observación y reconocimiento de las bacterias en cada muestra analizada.

VII. RECOMENDACIONES

Para realizar una buena desinfección del inoculador se le debe calentar con el mechero hasta que esté cerca al rojo vivo, de manera que los microorganismos mueran al no soportar tan altas temperaturas.

Tener especial cuidado al momento de esterilizar el inoculador, ya que una mala esterilización no garantiza que solo la muestra de la colonia esté presente en el la observación con microscopio.

Al momento de secar el portaobjetos con el mechero, no flamear directamente solo mantenerlo cerca a la llama pero no llegar a cruzarla.

Para observar en el microscopio es muy necesario utilizar la gota de aceite para poder visualizar la actividad microbiana con mayor resolución y poder apreciar mejor sus características.

Nunca los limpiar con el pañuelo o con los dedos la lente del microscopio, ya que podría rayar los lentes.

Mientras no esté observando nada en el microscopio, mantenga apagada la fuente luminosa para ahorrar energía.

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VIII. BIBLIOGRAFIA

www.wikipedia.org/wiki/Microscopio_compuesto

www.monografias.com/trabajos12/micros/micros.shtml

www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioTinciones.htm

http://bc.inter.edu/facultad/amlugo/biol2013/tincion%20bacte.htmç

http://www.elergonomista.com/microbiologia/11s01.htm

IX. CUESTIONARIO

1.- Establecer la diferencia entre poder de resolución y apertura numérica.

El poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio de percibir por separado dos puntos pequeños, adyacentes y cercanos. Vale decir, es la capacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye la distancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yo los veo como un solo punto borroso tendré menor poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingue perfectamente puntos que distan de 0,5cm entre sí.

La apertura numérica de un sistema óptico es un número adimensional que caracteriza el rango de ángulos para los cuales el sistema acepta luz. La apertura numérica brinda una indicación de la capacidad de colección de luz y poder de resolución a una distancia fija de un objetivo .La apertura numérica es importante porque indica el poder de resolución de una lente. Una lente con una apertura numérica grande será capaz de visualizar más detalles que una lente con una apertura numérica más baja no podrá. Además, las lentes con aperturas numéricas grandes aceptan más luz y dan una imagen más brillante.

La diferencia es que el poder de resolución la capacidad de percibir por separados 2 puntos pequeños muy próximos mientras que la apertura numérica es un número que indica la cantidad de luz y la resolución a una distancia fija de un objeto.

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2.- Hacer una tabla en relación a enfermedades microbianas transmitidas por el aire, agua y alimento.

ENFERMEDADES MICROBIANAS

VIA DE TRANSMICION ENFERMEDAD INFORMACION DE LA ENFERMEDAD

Alimento SALMONELOSIS La salmonelosis humana es una enfermedad infectocontagiosa producida por enterobacterias del género Salmonella. La principal manifestación es la gastroenteritis aguda una de las intoxicaciones alimentarias más comunes causadas por agua y alimentos contaminado, especialmente carnes.[

Alimentos y Agua HEPATITIS A La hepatitis A es una enfermedad infecciosa producida por el virus de la hepatitis A caracterizada por una inflamación aguda del hígado en la mayoría de los casos. La hepatitis A no puede ser crónica y no causa daño permanente sobre el hígado. Seguida de una infección, el sistema inmune produce anticuerpos en contra del virus de la hepatitis A y le confiere inmunidad al sujeto contra futuras infecciones. La transmisión ocurre por agua contaminada o alimentos contaminados

Alimentos y Agua COLERA El Cólera es una enfermedad aguda, diarreica, provocada por la bacteria Vibrio cholerae, la cual se manifiesta como una infección intestinal.

Agua y alimentos TIFOIDEA La fiebre tifoidea o fiebre entérica es una enfermedad infecciosa Su reservorio es el humano, y el mecanismo de contagio es fecal-oral, a través de agua y de alimentos contaminados con deyecciones.

Agua AMEBAIASIS La amebiasis o amibiasis es una enfermedad parasitaria intestinal de tipo alimenticia producida por la infección de la ameba Entamoeba histolytica, protozoo rizópodo muy extendido en climas cálidos y tropicales. El parásito se adquiere por lo general en su forma quística a través de la ingestión oral de alimentos o líquidos contaminados. Cuando invade el intestino, puede producir disentería, aunque también puede extenderse a otros órganos.

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Aire POLIOMIELITIS La poliomielitis es una enfermedad contagiosa, también llamada parálisis infantil, afecta principalmente al sistema nervioso. La enfermedad la produce el virus poliovirus. Se dispersa de persona a persona a través de secreciones respiratorias o por la ruta fecal oral

Aire TUBERCULOSIS La tuberculosis es una enfermedad infecciosa, causada por diversas especies del género Mycobacterium, todas ellas pertenecientes al Complejo Mycobacterium tuberculosis La TBC es posiblemente la enfermedad infecciosa más prevalente en el mundo.

Aire RESFRIADO

COMUN

El resfriado común, catarro o resfrío es una enfermedad infecciosa viral leve del sistema respiratorio superior que afecta a personas de todas las edades, altamente contagiosa, causada fundamentalmente por rinovirus y coronavirus

Aire LEGIANELOSIS La Legionella o Legionela, es una bacteria Gram negativa con forma de bacilo. Viven en aguas estancadas con un amplio rango de temperatura.

3.- ¿Qué diferencias químicas existe entre las paredes celulares de las bacterias gran?

Las bacterias Gram positivas son aquellas que se tiñen de azul oscuro o violeta, esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la pared celular. La pared celular compuesta por una gruesa capa de peptidoglicano, que rodea a la anterior. La pared celular se une a la membrana citoplasmática mediante moléculas de ácido lipoteicoico. La capa de peptidoglicano confiere una gran resistencia a estas bacterias y es la responsable de retener el tinte durante la tinción de Gram. A diferencia de las Gram-negativas, las Gram-positivas no presentan una segunda membrana lipídica externa a la pared celular y esta pared es mucho más gruesa.

Las bacterias Gram negativas son aquellas bacterias que no se tiñen de azul oscuro o violeta por la tinción de Gram, y lo hacen de un color rosado tenue. Esta característica está íntimamente ligada a la estructura de la envoltura celular. Las bacterias Gram-negativas presentan dos membranas lipídicas entre las que se localiza una fina pared celular de peptidoglicano, mientras que las bacterias Gram-positivas presentan sólo una membrana lipídica y la pared de peptiglicano es mucho más gruesa. Al ser la pared fina, no retiene el colorante durante la tinción de Gram.

4.- ¿Afecta la edad de cultivo a la reacción de GRAM?

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Definitivamente la edad del cultivo afecta, pues mientras más tiempo tenga el cultivo tanto mayor será el numero de colonias y el tamaño de de estas. Además al tenr el cultivo mas tiempo, la permeabilidad de la pared celular incrementa; por ejemplo, para cultivos gram positivos que sean viejos, que esten muertos o tengan problemas en la pared celular, al realizar la reacción Gram se obtiene un falso Gram negativo, pues por el problema de la pared celular reacciona como Gram negativo.

Las células envejecidas, o crecidas en condiciones que impiden la síntesis de mucopéptido pueden verse de color rojo. La intensidad de la decoloración con alcohol suele ser el problema más común en la reacción Gram.

5.- Hacer una lista de bacterias GRAM POSITIVO y GRAM NEGATIVO con las enfermedades que producen.

GRAM POSITIVOEnfermedad BacteriaDermatitis gangrenosa

Staphylococus spp. Es un habitante normal del tracto intestinal y de la piel, pero ocasionalmente formas virulentas pueden producir enfermedad en aves susceptibles.Pueden ocasionar problemas vasculares, necrosis de dedos, dermatitis gangrenosa y pododermatitis. Otras veces dan lugar a mortalidad embrionaria, septicemia, artritis, etc.

Amigdalitis Streptococcus pyogenes. Origina síntomas respiratorios: dificultad al respirar, cambios en el canto, etc. El cuadro clínico que aparece es similar al producido por el acaro de los sacos aéreos.

Tetanos Clostridium tetani: Es de forma bacilar, una bacteria anaeróbica que se tiñe Gram positivo en cultivos frescos, pero en cultivos establecidos, se tiñe Gram negativo.Posee un flagelo y desarrolla endospora terminal.Sensible al oxigeno pero resistente al calor.Es el causante principal de la enfermedad del tétanos.

Neumonia Streptococcus pneumoniae es la principal causa de neumonía adquirida en la comunidad

GonorreaNeisseria gonorrhoeae es el causal de una de las ETS (Enfermedades de Transmisión Sexual)  más difundidas: la gonorrea.

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GRAM NEGATIVOEnfermedad BacteriaPeste bubónica Yersinia: este género comprende tres especies, Yersinia pestis,

agente causal de la antigua y temida enfermedad, la peste bubónica; Yersinia pseudotuberculosis, agente causal de una enfermedad parecida a la tuberculosis que afecta los nódulos linfáticos de animales y muy raramente en los humanos; Yersinia enterocolitica, agente causal de una infección intestinal y ocasionalmente también de infecciones sistémicas en los humanos y otros animales.

Disentería Bacilar Shigella dysenteriae es normalmente patógena para los humanos y causa una gastroenteritis bastante grave que suele denominarse disentería bacilar. Se transmite por los alimentos y por el agua y puede invadir las células del epitelio intestinal. Cuando se ha establecido produce una endotoxina y una neurotoxina que causan efectos enterotóxicos.

Tifus Epidemico Rickettsias: son células cocoides o bacilares, son parásitos intracelulares estrictos. Son los agentes etiológicos de enfermedades como el tifus epidémico, por ejemplo Rickettsia prowazekii y Ricketssia typhi. Otras son causantes de las fiebres de las Montañas Rocosas y las fiebres Q. Dentro de este género se encuentra la especie Coxiella burnetii que es el agente etiológico de la fiebre Q.

DIARREAS EPIDEMICAS

Escherichia coli: son habitantes universales del tracto intestinal de los humanos y de los animales homeotermos, puede desempeñar una función nutricional en el tracto intestinal mediante la síntesis de vitaminas, especialmente de vitamina K. Las cepas silvestres de E. coli casi nunca muestran requerimientos de ningún factor nutritivo y pueden crecer a partir de una gran variedad de fuentes de carbono y energía, como azúcares, aminoácidos, ácidos orgánicos, etc. Existen cepas patógenas, algunas pueden causar diarreas infantiles, que alcanzan proporciones epidémicas en guarderías o en departamentos de obstetricia.

COLERA Vibrio cholerae es una bacteria Gram negativa con forma de bastón (un bacilo) curvo que provoca el cólera en humanos.

LEGIANELOSIS La Legionella o Legionela, es una bacteria Gram negativa con forma de bacilo. Viven en aguas estancadas con un amplio rango de temperatura. Su crecimiento se ve favorecido por la presencia de materia orgánica. La especie Legionella pneumophila produce la enfermedad del legionario o Legionelosis. La infección por Legionella puede presentarse como neumonía típica o como una enfermedad febril sin focalización pulmonar denominada Fiebre de Pontiac.

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