MICROBIOLOGÍA

Concepto de Microbiología Historia

Definición de Microbiología

Ciencia que estudia los microorganismos (MO), cuyo tamaño se encuentra por debajo del poder resolutivo del ojo humano (< 100u)

Definición implica que su objeto de estudio está determinado por la metodología: Microscopio Técnicas de cultivo puro en laboratorio

Descubrimiento de los microorganismos

Antonij van Leeuwenhoek: Microscopio simple Descubrimiento de los microorganismos

(“animálculos” en agua de estanque, 1675) Describe bacterias Describe protozoos

Robert Hooke: Microscopio compuesto Describe hongos filamentosos (1667)

Leeuwenhoek y su microscopio simple

Primeros dibujos de bacterias (Leeuwenhoek)

Microscopio compuesto de Robert Hooke

Clasificación de los microorganismos

Antes del descubrimiento de los MO se creía que los seres vivos conocidos eran animales y plantas. Los reinos animal y vegetal podían separarse de forma precisa; mientras que los conocimientos sobre los MO eran escasos.

Para evitar clasificaciones arbitrarias, Ernest Haeckel, en 1866, propuso el reino de los PROTISTAS, que incluía a las algas, hongos, protozoarios y bacterias.

PROTISTAS

Algas Hongos

Protozoarios Bacterias

Historia de la Microbiología

Historia. Las grandes controversias del siglo XIX y su resolución

El debate sobre la generación espontánea

Ideas asumidas desde Aristóteles Redi (1668): experimentos que descartan la

generación espontánea de animales “Omne vivo ex ovo” Pero aún no se acepta “Omne vivo ex vivo”

La disputa entre Spallanzani y Needham Los experimentos se interpretan erróneamente

(Needham) como que al calentar los frascos el aire pierde su “fuerza vital” (vitalismo)

Pasteur zanja la polémica sobre la generación espontánea

Experimentos con frascos abiertos al aire dotados de largos cuellos curvados (“cuellos de cisne”). Una vez llevados a ebullición, no

aparecen microorganismos si el frasco no se mueve

Aparecen microorganismos si el líquido alcanza el cuello curvo

“Trampas” para capturar microorganismos

Avances técnicos: cultivo puro

Dos teorías sobre forma de microorganismos: pleomorfismo y monomorfismo

Su resolución dependió de cultivos puros (laboratorio de Robert Koch) Medios sólidos a base de rodajas de patata Medios sólidos a base de gelatina Medios sólidos a base de agar-agar

Petri (en el laboratorio de Koch) inventa la placa que lleva su nombre

Medios de enriquecimiento y medios diferenciales (Beijerink, Winogradsky)

Avances técnicos: microscopios y técnicas de tinción

Koch colabora con la industria alemana del vidrio (Schott) y pide ayuda a expertos en óptica (Abbé, Zeiss) Lentes acromáticas mejoradas Iluminación inferior con condensador. Objetivo de inmersión (1878)

Koch colabora con industria química BASF: Tinciones para observar bacterias (azul de metileno,

fuchsina, violeta de genciana, etc), 1877 y siguientes Ziehl y Neelsen: tinción diferencial AAR (1883) Hans C. Gram: tinción diferencial Gram (1884)

Periodo especulativo (Teológica) La humanidad conoce las actividades microbianas

sin saber nada de los microorganismos

Papel de los microorganismos en las enfermedades infecciosas

“miasmas” • Lucrecio (s. I a. C.): “semillas de enfermedad”• Fracastorius (1545): gérmenes vivos • Alimentos y bebidas fermentados (queso, leches fermentadas, vino, cerveza, etc.)

Periodo especulativo (Miasmático)

Papel de los microorganismos en las enfermedades infecciosas

Pasteur resuelve una enfermedad del gusano de seda (pebrina). En 1869 identifica al protozoo Nosema bombycis

El cólera aviar Trabajó en la rabia

Periodo microbiano

Papel de los microorganismos en las enfermedades infecciosas

Koch (1876): con su técnica de cultivo puro aísla y propaga experimentalmente por primera vez una bacteria patógena responsable del carbunco

Primeras microfotografías de Bacillus anthtracis teñido con azul de metileno

Confirma que esta bacteria presenta una fase resistente (endosporas)

La enfermedad se puede reproducir experimentalmente al reinocular bacilos a animales de laboratorio

Postulados de Koch (1882)

El patógeno debe estar presente en los individuos enfermos

El microorganismo debe aislarse del huésped enfermo en cultivo puro

El microorganismo crecido en cultivo puro, al inocularse en individuos sanos, induce en ellos la enfermedad

De estos individuos ya enfermos, se puede volver a reaislar el mismo microorganismo

Postulados de Koch

La escuela de Koch aísla numerosos agentes patógenos Cólera (1883) Difteria (1884) Tétanos (1885) Neumonía (1886) Meningitis (1887) Peste (1894) Sífilis (1905)

Asepsia, quimioterapia

La introducción de anestesia (mediados siglo XIX) trae infecciones quirúrgicas

Lister introduce el uso del fenol y de sales de mercurio (asepsia en quirófano)

Paul Ehrlich: idea de las “balas mágicas” Colabora con industria química y descubre el

salvarsán 606, contra la sífilis “Quimioterapia”

Domagk (1935): rojo de prontosilo contra neumococos Época de las sulfamidas

Desarrollo de la asepsia

Antibioterapia

Fleming (1929): extracto crudo de penicilina (del hongo Penicillium notatum)

Chain y Florey (1940-4): purificación penicilina. Uso en 2ª Guerra Mundial

Waksman (1944) Descubrimiento estreptomicina de Streptomyces griseus

Tras la Guerra, se descubren numerosos antibióticos, producidos sobre todo por Actinomicetos

Desarrollo de la antibioterapia

Auge de la microbiología general:litotrofía y autotrofía Sergei Winogradsky

1888: Bacterias del hierro crecen en medios minerales

1889: Bacterias del azufre oxidan sulfuros o S y obtienen energía de ello litotrofia

1890: Bacterias nitrificantes fijan CO2 con la energía de la oxidación del amonio o nitrato quimiolito-autotrofia

Primer aislamiento de bacteria fijadora de nitrógeno (Clostridium pasteurianum)

Explica el ciclo del N en la biósfera

Auge de la microbiología general: bacterias fijadoras de nitrógeno

Beijerink: descubre Azotobacter (1901) Demuestra que incorpora el N de atmósfera (1909)

(Beijerink 1888; Hellriegel y Willfahrt, 1888), Papel de Rhizobium en la simbiosis fijadora de las

leguminosas Incorporación de la Microbiología agrícola a

las universidades y estaciones experimentales

Trabajos claves en microbiología

1684 - van Leeuwenhoek Descubrimiento de bacterias1798 - Jenner Vacunación contra la viruela1864 - Pasteur Fin de la controversia de la generación espontánea1881 - Koch Métodos de cultivo axénico1884 - Koch Postulados de Koch1884 - Gram Método de la tinción de Gram1889 - Winogradsky Concepto de virus1929 - Fleming Descubrimiento de la penicilina1944 - Avery et al DNA es el material genético1946 - Tatum & Lederberg Conjugación bacteriana1953 - Watson, Crick & Franklin Estructura del DNA1977 - Woose & Fox Descubrimiento de las Archaea1981 - Prusiner Caracterización de los priones1985 - Mullis Descubrimiento de PCR1995 - Venter & Smith Secuencia completa de un genoma bacteriano

(Haemophilus influenzae)2010- Venter Creación de una bacteria sintética.

BACTERIA: Tamaño y forma agrupaciones bacterianas

Tamaño de los procariotas

Por lo general, más pequeño que el de las células eucarióticas

Pero existen bacterias Gigantes (≥0,5 mm) Enanas (<0,1 micra)

Un tamaño “típico”: 0,5 x 3 micras

Tamaño pequeño: consecuencias metodológicas

Hay que recurrir a microscopios y normalmente a tinciones

La inmensa mayoría de los estudios se realiza con poblaciones enormes, de las que se sacan “promedios”

Es muy raro estudiar un individuo cada vez

Formas típicas

Cocos Bacilos Espirilos Vibriones Otras formas:

Filamentos Anillos casi cerrados Con prolongaciones (prostecas)

Agrupaciones bacterianas

Un solo plano de división De dos células:

Diplococos diplobacilos

Cadenetas de varias células estreptococos, Estreptobacilos

Dos o más planos de división (en cocos) Dos planos perpendiculares: tétradas Tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes

cúbicos) Muchos planos aleatorios: estafilococos

ESTRUCTURAS DE LA CÉLULA PROCARIÓTICA

Pared celular* Membrana citoplasmática*, Citoplasma, incluye: genoma (nucleoide) ,

constituido por un cromosoma*, ribosomas* Pueden existir, además: cápsula, plásmidos,

flagelos, fimbrias (= pelos), espora

La pared celular procariota

La pared celular está constituida por la MUREINA o PEPTIDOGLUCANO:

En Gram positivas grueso (95%)En Gram negativas delgado (5%)

La mureína, está representada por AMINOAZÚCARES: N-acetil Glucosamina N-acetil Murámico Una cadena tetrapeptídica

Pared celular

Peptidoglucano: composición química

La unidad disacarídica que se repite es: N-acetilglucosamina (NAG)... ...unida por enlace β(14) con... ... N-acetilmurámico (NAM)

Las distintas unidades disacarídicas se unen entre sí mediante enlaces β(1—4) Este enlace puede ser roto por la lisozima

La cadena tetrapeptídica sale desde el grupo –COOH del lactilo de cada NAM y suele ser: L-ala D-glu m-DAP D-ala

El PG de bacterias Gram negativas

Normalmente: 1 capa de PG. Las distintas cadenas se unen por enlaces peptídicos

directos entre el grupo ε-NH2 del m-DAP de una cadena con el –COOH de la D-ala de otra cadena

Malla floja con grandes “poros”: 50% NAM carece de tetrapéptidos

En espiroquetas, el diaminoácido en posición Nº 3 es la L-ornitina (en lugar de m-DAP)

Estructura global del PG de bacterias Gram-positivas Múltiples capas de PG (distintos niveles,

hasta 50 en especies de Bacillus) Entrecruzamientos entre cadenas del mismo

nivel y entre un nivel y el inmediato superior o inferior

La mayoría de NAM tienen tetrapéptidos La mayoría de tetrapéptidos participan en

enlaces Consecuencia: red tridimensional gruesa,

con poros pequeños, más compacta que Gram-

Relaciones estructura-función en el peptidoglucano

Gran rigidez aguanta las fuerzas osmóticas del protoplasto (5-15 atm). Rigidez viene de: El grado de entrecruzamiento El enlace β(14) es muy compacto. La alternancia de NAM y

NAG uno de los polisacáridos más estables que existen La alternancia de aa en L y en D estabilidad adicional

(cadenas laterales al mismo lado, puentes H) Al mismo tiempo, gran flexibilidad soporta variaciones

de presión osmótica protoplasto Condiciona la forma celular Es muy permeable Puede estar como endotoxina (antígeno somático “O”)

Pared de las bacterias ácido-alcohol resistentes (BAAR) Pared especial de ciertas Gram-

positivas: Nocardia, Mycobacterium Resisten la decoloración con

clorhídrico-etanol ( ácido-alcohol resistentes)

Esta propiedad deriva de: Ácidos micólicos (ceras) Glucolípidos

Ácidos micólicos

Son ß-hidroxiácidos grasos ramificados en α, de cadena muy larga

Forman parte de un esqueleto muy peculiar de la pared celular: PGarabinogalactanoácidos micólicos

Papeles conferidos por la pared BAAR Aspecto y consistencia cérea de las

colonias en placas de Petri En líquidos crecen formando grumos Gran impermeabilidad

Resistencia a desecación Resistencia a agentes antibacterianos

Detergentes Oxidantes Ácidos y bases

Membrana citoplasmática

Nucleoide

Representado por el cromosoma de la bacteria (ADN), de tira única y circular

Plásmido

Elementos genéticos (ADN) extracromosómicos con capacidad de replicación autónoma

Espora

Cuerpos esféricos, ovoides refringentes incluidos en la célula vegetativa (célula madre). Constituidos por iones Ca++ y ácido dipicolínico, que le confieren elevado poder de resistencia a las condiciones hostilesPueden ser deformantes o no deformantes

Espora

Flagelos

Son largos filamentos extracelulares, helicoidales, compuestos por flagelina. Es antigénico (antígeno flagelar o “H”)

Lofotricas

Peritricas Monotricas

Fimbrias

Son apéndices filamentosos rectos y rígidos, más cortos y más finos que los flagelos, compuestos por la pilinaExisten dos tipos principales de pili: adhesivas y sexuales

Cápsula y capas mucilaginosas: conceptos generales Cápsulas en sentido estricto son rígidas e

integrales Las capas mucilaginosas son flexibles y

periféricas Glucocálix: capas superficiales compuestas

de polisacárido Sirven para adhesión entre células, y

colonización de nichos. En muchas patógenas sirven, además, para protegerse de agentes antibacterianos

Cápsula: composición química yestructura Composición química

cápsulas polisacarídicas heteropolisacáridos aniónicos heteropolisacáridos neutros (levanos,

dextranos, pentanos, celulosa) alginatos

cápsulas polipeptídicas (en Bacillus) Constituyen el antígeno capsular K

Papeles y propiedades generales conferidos por la cápsula

Mejora difusión de nutrientes Protección contra la desecación Evita la fagocitosis Protección contra agentes

antibacterianos Adhesión a sustratos

Papeles de la cápsula en la adhesión a sustratos

A sustratos inertes, microcolonias de la misma especie y consorcios de diferentes especies, con ventajas metabólicas. Ello tiene secuelas económicas: corrosión de cañerías formación de placa dental y caries formación de biopelículas en catéteres y prótesis

A sustratos vivos: actúan como adhesinas efectos benéficos: colonización de flora autóctona en

intestino de mamíferos en sistemas patológicos: como factores de virulencia; a

veces sirven para escapar del sistema inmune

Reproducción

Se reproducen por bipartición o fisión binaria, en la que a partir de una célula madre se originan dos células hijas idénticas a la primera. El tiempo requerido para formar 2 células a partir de una se denomina tiempo de generación, que puede ser de minutos, horas o días.

Metabolismo bacteriano

Conceptos

Energía de radiaciones fototrofía Fotolitotrofía: captación de energía lumínica con

nutrición exclusiva a partir de sustancias inorgánicas Fotoorganotrofía: captación de energía lumínica con

requerimiento de sustancias orgánicas Energía de sustancias químicas quimiotrofía

Quimiolitotrofía: energía química a partir de sustancias inorgánicas

Quimioorganotrofía: energía química a partir de sustancias orgánicas

Energía para el movimiento, transporte de nutrientes,etc

Catabolismo

Productos de desecho

Componentes celulares

Nutrientes

Anabolismo

Energía para el desarrollo

Fuente de energía

FASES DEL METABOLISMOFASES DEL METABOLISMO:

ANABOLISMO : Formación o síntesis de compuestos químicos (Biosíntesis)

CATABOLISMO : Degradación o descomposición de compuestos

TRANSPORTADORES DE ENERGÍA

La célula microbiana utiliza la energía química para :

Sintetizar grandes moléculas a partir de otras más pequeñas.

• Transportar sustancias hacia la célula microbiana y organizarlas en su interior.

Sacar las sustancias de desecho de la célula microbiana o para realizar la secreción

• El trabajo mecánico de las célula microbianas.

Los procesos por los cuales los microorganismos obtienen su energía son:

FOTOSÍNTESIS QUIMIOSÍNTESIS RESPIRACIÓN

Aeróbica Anaeróbica Fermentación

RESPIRACIÓN: Proceso por el cual la célula microbiana libera la energía almacenada en los alimentos.

• Este proceso ocurre en las mitocondrias en la mayoría de las células eucariotes o en la membrana celular de las células procariotes

RESPIRACIÓN AEROBIA

C6H12O6 + 6 O2

Enzimas

6CO2 +6 H2O+Energía (38 ATP)Energía (38 ATP)

G = 686 KcalG = 686 Kcal

La glucólisis, ruta metabólica común a

todos los organismos

A partir la glicólisis pueden darse la respiración aerobia o la anaerobia.

RESPIRACIÓN ANAEROBIA

El oxígeno gaseoso no interviene.

El aceptor de electrones es un compuesto distinto al oxígeno.

Cuando el aceptor es un compuesto orgánico se denomina fermentación

Cuando es inorgánico respiración anaerobia

• La respiración sin oxígeno, está restringida en gran parte a los saprófogos (bacterias, levaduras, mohos, protozoos).

GLUCOSA

Glucólisis

2C3H4O3 (ácido pirúvico) + 4H

2C2H5OH + 2CO2 +2 ATP

Alcohol etílico Dióxido de carbono Energía

+ 2 NADH + 2 H+

COOH

Ácido pirúvico

CH3

OC2 H

Ácido láctico

2 C CH3 +2NAD+

CH3

COOH

GLUCOSA

Ácido pirúvico Ácido acético + Ácido fórmico

Ácido succínico

Ácido acéticoAcetona

Acetil CoA Ácido fórmico

Alcohol etílico CO2Ácido láctico H2

Diferentes rutas de fermentación

BIOSÍNTESIS(Anabolismo)

Intermediarios de bajo peso

molecular

Unidades estructurales

Macromoléculas(Alto peso molecular)

Asociaciones supra -

moleculares

Organelas

Acetato,Malonato

Ácidos grasos,Glicerina

Lípidos

Fosfopiruvato, Malato

Azúcares sencillos

Poli - sacáridos

Cetoácidos

Aminoácidos

Proteínas

Ribosa carbamil fosfato

Mono -nucleóticos

Ácidos Nucléicos

Complejos enzimáticos, Ribosomas,

Sistemas contráctiles

Núcleo, mitocondria, cloroplasto, etc.

Mediciones de masa bacteriana en cultivo líquidoLos métodos mas comunes incluyen:

a) Turbidez: la opacidad del líquido del cultivo bacteriano-  es una estimación del total de bacterias [vivas y muertas]- Esta se cuantifica usualmente con un espectrofotómetro

 b) El número de bacterias viables en un cultivo- se

determina contando en número de colonias que crecen después de sembrar un volumen conocido sobre una placa (“conteo en placa” ó UFC). En ambos casos se grafica el logaritmo de la turbidez o el número de células vivas contra el tiempo y a este se le llama curva de crecimiento. El tiempo de generación se define como el tiempo requerido para duplicar la masa bacteriana del cultivo.

Curva de crecimiento

GENÉTICA BACTERIANA

GENOMA BACTERIANO- Macromolécula circular cerrada covalentemente formada

por 2 cadenas de nucleótidos unidas por puentes de H.- La nueva cadena se forma en el mismo sitio en que se

produjo la rotura del ADN bicatenario.- El crecimiento de la molécula se produce en forma

bidireccional a partir de inicio de la replicación.- Interviene ADN polimerasa y debe existir en citoplasma

precursores en forma de sal trifosfato.

PLÁSMIDOS Y EPISOMAS

- Elementos genéticos constituidos por ADN de doble cadena superenrrollado y cerrado covalentemente.

- Los Episomas pueden integrarse al genoma bacteriano, quedando bajo su control de replicación.

- Plásmidos codifican básicamente 3 grupos de genes: los de replicación, los de caract. fenotípicos, los de formación de pili.

- En E. coli es bien conocido el plásmido del factor F (fertility) que se puede transferir y además integrarse en el cromosoma-episoma.

ELEMENTOS TRANSPONIBLES: TRANSPOSONES

Los genes en los seres vivos no son estáticos, pudiendo en algunos casos cambiar su secuencia bajo ciertas condiciones: ej, secuencias de inserción.

Para la inserción se produce la rotura de las cadenas sencillas, mediante la enzima transposasas.

Los transposones o genes saltarines son segmentos de ADN capaces de moverse desde una posición a otra en el genoma, o desde el ADN cromosómico a un plásmido o viceversa.

El transposon se une a los extremos de las cadenas sencillas y se reparan las mismas que resultan de la replicación.

La importancia de la transposición viene dada porque estos elementos móviles pueden insertarse en plásmidos y favorecer la aparición de resistencia a antimicrobianos.

VARIACIÓN GENÉTICA Conj. de mecanismos por lo que las bacterias pueden

variar su nivel de información: Mutaciones en el ADN. Adquisición de nuevos genes: transformación, conjugación,

transducción y transposición. Mutaciones son cambios generalmente letales o

heredables producidos por la alteración de la secuencia de bases en el ADN.

Las mutaciones se producen de forma espontánea o inducida por agentes mutagénicos (Fcos o Qcos)

Los mutágenos físicos son: la luz UV, rayos X, rayos cósmicos y radiación gamma.

Los mutágenos químicos se diferencian en cuatro grupos: análogos de bases, agentes alquilantes, modificadores de bases y agentes intercalantes.

TIPOS DE MUTACIONES Pueden ser puntuales, en una sola base o por sustitución,

inserción o delección de varias bases. En sustitución se denomina transiciones, si se produce un

cambio entre las bases del mismo grupo (púricas o pirimídicas), y si el fenómeno ocurre a la inversa transversiones.

Al cambiar la secuencia de los codones pueden traducirse para aminoácidos distintos, obteniendo como resultado una proteína mutada o no afectar a la traducción.

La mutación por inserción o delección de bases produce una modificación de la secuencia de bases en el ADN, que cambia todos los tripletes a partir de la zona de daño. Se produce raramente de forma espontánea y es típica de las radiaciones ionizantes y de determinados grupos de agentes químicos.

A U G C A G A A A A G G C U G G U C U A C

Met Gly Lys Arg Leu Val Tyr

A U G C A G A A A A G G C U G G U C U U C

Met Gly Lys Arg Leu Val Isoleu

USustitución de una base

Afecta a un solo aminoácido

Delección de una base

A U G C A G A A A A G G C U G G U C U A C

Met Gly Lys Arg Leu Val Tyr

A U G C G A A A A G G C U G G U C U A C

Met Arg Lys Gly Trip Ser ?

A

Afecta a varios aminoácidos

EXPRESIÓN FENOTÍPICA DE LAS MUTACIONES

Las mutaciones producen en la cepa mutada la pérdida o ganancia de una o varias habilidades, tales como: Pérdida en la utilización de una o varias fuentes de C. Son

frecuentes los mutantes defectivos para la lactosa (Lac -) Pérdida de la capacidad de síntesis de uno varios

aminoácidos y vitaminas. La adquisición de resistencia a un antimicrobiano. Alteraciones en la composición de los componentes

superficiales de las bacterias: Glucocálix, flagelos. Pérdidas de la síntesis principalmente de exotoxinas pero

también de endotoxinas.

RECOMBINACIÓN GENÉTICASurge cuando dos elementos genéticamente distintos se combinan en uno. Comprende tres procesos: Transformación, conjugación y transducción.La TRANSFORMACIÓN es la adquisición de nuevos genes por parte de algunas especies bacterianas. Fue descubierta por Griffith en 1928 estudiando la infección gonocócica en ratones.

Griffith comprobó que la virulencia del neumococo guardaba relación con la presencia de una cápsula polisacárida.

La transformación puede ser natural o artificial. Algunas bacterias patógenas que se transforman en forma natural son Streptococcus peumoniae, Neisseria gonorrhoeae y Haemophilus influenzae.

El desarrollo de la transformación artificial fue esencial para el avance de la tecnología del ADN, también llamada ingeniería genética.

RECOMBINACIÓN GENÉTICALa CONJUGACIÓN transferencia de ADN cromosómico o plasmídico, desde una bacteria donadora a una receptora, mediante contacto físico.

En bacterias Gram(-) la transferencia de ADN se hace a través del pili.

En bacterias Gram(+), las dadores de ADN forman proteínas de contacto (adhesinas) en la superficie celular para receptores de superficie (un ácido lipoteicoico) de las células carentes de plásmidos, que obran como inductoras de adhesinas mediante la síntesis de feromonas (Streptococcus faecalis).

Se han hallado plásmidos R (resistencia a los antibióticos) conjugadores en Gram(+) como Streptococcus, Streptomyces y Clostridium.

                        

                       

                      

                        

                        

                       

                      

                        

RECOMBINACIÓN GENÉTICALa TRANSDUCCIÓN, transformación de ADN mediada por bacteriófagos. Éstos pueden infectar a las bacterias con replicación masiva de los mismos – ciclo lítico- o bien integrarse en su genoma –ciclo lisogénico, haciéndose en este último caso más lenta la liberación de los fagos.

La integración del fago puede hacerse en un lugar predeterminado del cromosoma o bien al azar.

La transducción generalizada o no específica es la que generalmente se produce en el ciclo lítico. Cualquier secuencia genómica puede quedar unida a la del virus y convertirse en infectante para otras bacterias.

La transducción especializada tiene lugar preferentemente durante el ciclo lisogénico y en la misma se transfiere uno o varios genes concretos. Un ejemplo , es el de fago lambda en E. coli.