universidad nacional agraria de la selva · 2017. 5. 25. · universidad nacional agraria de la...
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UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA DE LA SELVA
FACULTAD DE RECURSOS NATURALES RENOVABLES
DEPARTAMENTO ACADEMICO DE CIENCIAS AMBIENTALES
INFORME DE PRACTICA PRE-PROFESIONAL
CALIDAD MICROBIOLOGICA AMBIENTAL DEL AIRE EN LOS
INTERIORES DEL HOSPITAL EsSALUD EN TINGO MARIA
EJECUTOR : IZQUIERDO LOPEZ, Gady Sadith
ASESOR : Blgo. GOZME SULCA, Cesar Augusto
INSTITUCION : Laboratorio de Microbiología de la UNAS
FECHA DE INICIO : 12 de enero 2016
FECHA DE CULMINACION : 12 de abril 2016
TINGO MARIA, PERÚ
2016
2
INDICE
Página
I. INTRODUCCION ....................................................................................... 1
1.1. Objetivos ............................................................................................... 3
1.1.1. Objetivo General ............................................................................. 3
1.1.2. Objetivos Específicos ...................................................................... 3
II. REVISION DE LITERATURA .................................................................... 4
2.1. Calidad del aire en interiores ................................................................. 4
2.2. Contaminación del aire interno .............................................................. 5
2.2.1. Contaminantes físicos ..................................................................... 5
2.2.2. Contaminantes químicos ................................................................. 6
2.2.3. Contaminantes biológicos ............................................................... 6
2.3. Factores ambientales que intervienen en el desarrollo de los
microorganismos ................................................................................... 6
2.3.1. Humedad relativa ............................................................................ 7
2.3.2. Temperatura.................................................................................... 8
2.3.3. Oxigeno ........................................................................................... 8
2.4. Microorganismos del aire ...................................................................... 8
3
2.4.1. Bacterias ......................................................................................... 9
2.4.2. Fungí ............................................................................................. 12
2.5. Calidad del aire interior y áreas críticas de los hospitales ................... 16
2.5.1. El riesgo infeccioso por contaminación aérea ............................... 17
2.6. Niveles de contaminación biológica..................................................... 19
III. MATERIALES Y METODOS ................................................................... 20
3.1. Lugar de ejecución .............................................................................. 20
3.1.1. Ubicación del área de estudio ....................................................... 20
3.1.2. Ubicación geográfica ..................................................................... 21
3.1.3. Descripción del lugar de estudio ................................................... 21
3.1.4. Aspectos ambientales ................................................................... 21
3.2. Materiales y equipos ............................................................................ 22
3.2.1. Medios de cultivos ......................................................................... 22
3.2.2. Medios de cultivo para pruebas bioquímicas ................................ 22
3.2.3. Reactivos ...................................................................................... 22
3.2.4. Materiales de laboratorio ............................................................... 23
3.2.5. Equipos ......................................................................................... 23
3.3. Identificación del área de estudio ........................................................ 23
3.4. Muestreos ............................................................................................ 23
3.5. Metodología ......................................................................................... 24
4
3.5.1. Determinación del parámetro temperatura en los ambientes del
EsSalud ......................................................................................... 24
3.5.2. Identificación de bacterias ............................................................. 24
3.5.3. Identificación de fungí ................................................................... 31
3.5.4. Identificar la diversidad de géneros de microrganismos
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud ........................ 33
3.5.5. Identificar los microorganismos patógenos presentes en los
ambientes del Hospital EsSalud .................................................... 33
IV. RESULTADOS ........................................................................................ 34
4.1. Determinación el parámetro temperatura en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María ........................................................ 34
4.1.1. Temperatura.................................................................................. 34
4.2. Unidades formadoras de colonias bacterianas y fúngicas por
centímetro cúbico de aire (UFC/m3) de las instalaciones del Hospital
EsSalud de Tingo María ...................................................................... 37
4.2.1. Número de unidades formadoras de colonias bacterianas y
fúngicas metro cúbico de aire (UFC/m3) en relación con la
temperatura ................................................................................... 39
4.3. Identificar la diversidad de géneros de microrganismos
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud ............................... 41
4.3.1. Diversidad de géneros microbianos en las instalaciones del
Hospital EsSalud ........................................................................... 41
5
4.3.2. Diversidad de géneros fúngicos en las instalaciones del Hospital
EsSalud ......................................................................................... 42
4.4. Identificar los microorganismos patógenos presentes en los
ambientes del Hospital EsSalud .......................................................... 43
4.4.1. Géneros bacterianos patógenas ................................................... 43
4.4.2. Géneros fúngicos patógenos ........................................................ 44
V. DISCUSION ............................................................................................. 45
VI. CONCLUSION ......................................................................................... 48
VII. RECOMENDACIONES ............................................................................ 49
VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA ............................................................. 50
IX. ANEXOS .................................................................................................. 56
ANEXO A – Unidades formadoras de colonias ............................................. 57
ANEXO B – Identificación de microorganismos ............................................ 58
ANEXO C – Tabla de pruebas bioquímicas .................................................. 60
ANEXO D – Galería de imágenes ................................................................ 64
6
INDICE DE CUADROS
Cuadro Página
1. Niveles de microorganismos en el aire de ambientes de interiores no
industriales ................................................................................................... 19
2. Temperatura (°C) del 1er y 2do muestreo en los diferentes ambientes del
Hospital EsSalud de Tingo María ................................................................. 34
3. Temperatura promedio con respecto a los ambientes muestreados en el
Hospital EsSalud de Tingo María. ................................................................ 35
4. Número de (UFC/m3) bacterianas y fúngicas en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María ................................................................. 37
5. Cuadro de resumen de las especies bacterianas presentes en los
ambientes muestreados del Hospital EsSalud de Tingo María .................... 41
6. Cuadro de resumen de las especies fúngicas presentes en los ambientes
muestreados del EsSalud ............................................................................ 42
7. Bacterias patógenas para el hombre ........................................................... 43
8. Hongos patógenos para el hombre .............................................................. 44
9. Número de microorganismos por área muestreo. ........................................ 57
10. Número de microorganismos por área de muestreo .................................. 57
7
11. Presencia de colonias de bacterias en cuatro diferentes medios de
cultivos en el primer muestreo para su posterior identificación
bioquímica ................................................................................................. 58
12. Presencia de colonias de bacterias en cuatro diferentes medios de
cultivos en el segundo muestreo para su posterior identificación
bioquímica ................................................................................................. 58
13. Bacterias identificadas morfológicamente por medio de la tinción de
Gram – Primer muestreo ........................................................................... 59
14. Bacterias identificadas morfológicamente por medio de la tinción de
Gram – Segundo muestreo ........................................................................ 59
15. Tabla de pruebas bioquímicas ................................................................... 60
16. Resultados de las pruebas bioquímicas del primer muestreo en el
medio de cultivo de CLED ......................................................................... 61
17. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en el
medio de cultivo de M77 ............................................................................ 61
18. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en el
medio de cultivo de CLED ......................................................................... 62
19. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en el
medio de cultivo de M77 ............................................................................ 63
8
INDICE DE FIGURAS
Figura Página
1. Mapa de Ubicación de la UNAS ................................................................... 20
2. Cálculo del número de microorganismos por el método de diluciones
seriadas ....................................................................................................... 26
3. Temperatura (°C) del 1er y 2do muestreo en los diferentes ambientes del
Hospital EsSalud de Tingo María ................................................................. 35
4. Temperatura promedio con respecto a la hora de muestreo en las
instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo María ..................................... 36
5. Número de (UFC/m3) bacterianas y fúngicas en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María ................................................................. 38
6. Relación entre la temperatura y el número de UFC Bacteriana/m3 de aire
las instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo María ................................ 39
7. Relación entre la temperatura y el número de UFC Fúngica/m3 de aire las
instalaciones del Es Salud de Tingo María .................................................. 40
8. Muestreo de bacterias y hongos en las diferentes áreas del Hospital
EsSalud. ...................................................................................................... 64
9. Muestreo de bacterias y hongos en el área de Centro Quirúrgico. .............. 64
10. Conteo de bacterias en el equipo contador de bacterias. .......................... 65
11. Preparación de muestras para realizar la coloración Gram (+) y (-)........... 65
9
12. Siembra en las pruebas bioquímicas. ........................................................ 66
13. Diferenciación en los resultados de las pruebas bioquímicas. ................... 66
14. Muestras de aire en CLED, Mack Conkey, Manitol Salado Y M77. ........... 67
15. Crecimiento de Staphylococcus en medio de cultivo CLED - Primer
muestreo. ................................................................................................... 67
16. Crecimiento de Staphylococcus epidermides en medio de cultivo Manitol
Salado - segundo muestreo. ...................................................................... 68
17. Crecimiento de en Enterobacter sp en medio de cultivo Manitol Salado -
segundo muestreo. .................................................................................... 68
18. Crecimiento de Staphylococcus aureus en medio de cultivo Manitol
Salado - segundo muestreo. ...................................................................... 69
19. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X. .................. 69
20. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X. .................. 70
21. Staphylococcus sp observados al microscopio con aumento de 100X. ..... 70
22. Bacillus sp (esporulados) observados al microscopio con aumento de
100X. ................................................................................................................ 71
23. Streptomyces sp observados al microscopio con aumento de 100X. ........ 71
24. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X. .................. 72
25. Lactobacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X. ......... 72
26. Muestras de aire en Agar Saburaud –segundo muestreo. ......................... 73
27. Microcultivo de muestras Fungí – Centro Quirúrgico. ................................ 73
28. Aspergillus sp observado al microscopio con aumento de 40X. ................ 74
29. Aspergillus sp observado al microscopio con aumento de 40X. ................ 74
30. Penicillum sp observado al microscopio con aumento de 40X................... 75
10
Figura 31. Geotrichum sp observado al microscopio con aumento de 40X. .... 75
Figura 32. Candida sp observado al microscopio con aumento de 40X. ......... 76
Figura 33. Rhizopus sp observado al microscopio con aumento de 40X. ........ 76
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I. INTRODUCCION
Los hospitales como edificación corresponden a la existencia de una
institución social (peculiar), preparado para solucionar problemas de la salud
humana. En tanto ha debido de enfrentarse a conflictos propios de un medio
interno específicamente habilitado para dar cobijo a una humanidad con riesgos.
Desde este punto de vista se puede concebir, aparte de otras perspectivas, como
un espacio critico (VAQUERO DE LA HOZ, 2011).
Las condiciones en que se encuentren los ocupantes de un hospital
es un problema muy antiguo y, a la vez, emergente. (VAQUERO DE LA HOZ,
2011). La contaminación del aire en hospitales ha sido un problema potencial
derivado de la posibilidad de que los contaminantes sean transportados y se
precipiten sobre las superficies, los materiales o las personas (SAMPSP, 2016).
El análisis de la calidad del aire se recomienda para obtener
información sobre la mayoría de los microorganismos relacionados con
enfermedades infecciosas intrahospitalarias. Adicionalmente, la estimación de la
densidad y diversidad de estos microorganismos en hospitales es un indicador
de la calidad del ambiente Burge (1990), Hoseinzadeh et al., (2013) citado por
MALDONADO et al., (2014), Por lo que el control de la calidad del aire en el
2
interior de los hospitales adquiere un papel importante en la prevención de
infecciones intrahospitalarias y puede ser útil para el diseño de estrategias que
protejan tanto a los empleados del hospital, como a los pacientes (LEUNG y
CHAN, 2006).
Para afirmar esto es necesario determinar la calidad microbiológica
ambiental de los interiores del Hospital EsSalud de la ciudad de Tingo María con
la finalidad de identificar microorganismos como bacterias y hongos que pueden
afectar a los pacientes, asimismo alterar el aire interno, para que así la misma
institución de EsSalud, confieran la importancia que merece el control
epidemiológico y de esta manera los pacientes de dicha institución cuenten con
la seguridad de un ambiente limpio e inocuo.
Ante ello, al no tener información oficial de la calidad microbiológica
ambiental del Hospital EsSalud de la ciudad se hace indispensable la
determinación de dicha calidad, por lo que surge la siguiente interrogante: ¿Qué
microorganismos patógenos se encontrarán en el EsSalud, que influyen en su
calidad microbiológica ambiental?, teniendo como hipótesis que los
microorganismos encontrados en el Hospital EsSalud podrían ser uno de los
principales agentes que inciden en la salud de los usuarios, tanto como de los
pacientes así como también trabajadores del establecimiento.
3
1.1. Objetivos
1.1.1. Objetivo General
Determinar la calidad microbiológica ambiental del aire en los
interiores del Hospital EsSalud en Tingo María.
1.1.2. Objetivos Específicos
- Determinar el parámetro temperatura en los ambientes del
Hospital EsSalud.
- Cuantificar las unidades formadoras de colonias bacterianas y
fúngicas por metro cubico de aire (UFC/m3) de los ambientes del
Hospital EsSalud de Tingo María.
- Identificar la diversidad de géneros de microrganismos
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud.
- Identificar los microorganismos patógenos presentes en los
ambientes del Hospital EsSalud.
4
II. REVISION DE LITERATURA
2.1. Calidad del aire en interiores
En las últimas décadas, la evaluación de la calidad del aire de los
ambientes o dentro de las edificaciones, está recibiendo especial atención, dado
que diversas investigaciones demuestran que el aire dentro de los edificios
cerrados puede estar más seriamente contaminado que el aire exterior (DIAZ,
2009). El análisis de la calidad del aire interno se recomienda para obtener
información sobre la mayoría de los microorganismos relacionados con
enfermedades infecciosas o alergénicas. Adicionalmente, la estimación de la
densidad y diversidad de estos microorganismos en hospitales es un indicador
de la calidad del ambiente (BURGE, 1990).
La calidad del aire interior está ampliamente considerada como un
problema significativo de salud ambiental y económica. Los indicadores de
calidad del aire deben determinar que el aire interior: satisfaga los requerimientos
respiratorios, prevenga la acumulación de contaminantes; y permita el bienestar
(BROWN, 1997). Por lo que el control de la calidad del aire en el interior de los
hospitales adquiere un papel importante en la prevención de infecciones
hospitalarias y puede ser útil para el diseño de estrategias que protejan tanto a
5
los empleados del hospital, como a los pacientes, especialmente aquellos
inmunocomprometidos e inmunosuprimidos (LEUNG y CHAN, 2006).
2.2. Contaminación del aire interno
Los espacios interiores son microambientes importantes al abordar
los riesgos de la contaminación del aire. La mayor parte de la exposición diaria
de una persona a muchos de los contaminantes del aire proviene de la inhalación
en interiores, tanto por la cantidad de tiempo que se pasa en estos ambientes
como por los mayores niveles de contaminación que hay en ellos (OMS, 2004).
Contaminante es todo agente presente en el medio ambiente y que
produce o puede producir efectos indeseables para la salud y/o el bienestar
humano. Bajo este nombre se incluyen varias categorías de agentes
potencialmente dañinos: físicos, químicos y biológicos (VAQUERO DE LA HOZ,
2011).
2.2.1. Contaminantes físicos
Son distintas formas de energía que, generadas por fuentes
concretas, pueden afectar a quienes están expuestos a ellas. Pueden ser
mecánicas (ruidos, vibraciones, electromagnéticas, radiaciones ionizantes,
radiaciones no ionizantes (incluso lumínicas), etc. (VAQUERO DE LA HOZ,
2011).
6
2.2.2. Contaminantes químicos
Es toda sustancia orgánica e inorgánica, natural o sintética que,
durante una fabricación, manejo, transporte, almacenamiento o uso, puede
incorporarse al medio ambiente en cantidades suficientes para lesionar la salud
de las personas que entran en contacto con ellas (VAQUERO DE LA HOZ,
2011).
2.2.3. Contaminantes biológicos
La contaminación biológica aérea está constituida por los
microorganismos, que son virus, bacterias y hongos cuya propagación expone a
enfermedades infecciosas Hernández (1993), citado por ESPARZA (2015).
Ciertos de estos agentes se transmiten de persona a persona, sirviendo los
sistemas de ventilación como facilitadores de su difusión (tuberculosis, cuadros
gripales y catarrales). Las infecciones propagadas por el aire se transmiten mejor
en ambientes cerrados por el volumen de aire en que se diluye es más bajo y
porque el tiempo de exposición de las personas suele ser mayor (VAQUERO DE
LA HOZ, 2011).
2.3. Factores ambientales que intervienen en el desarrollo de los
microorganismos
El desarrollo de microorganismos está influenciado por diferentes
factores, físicos tales como temperatura, humedad relativa, oxigeno, luz y polvo.
Pero lo primero que determina que una bacteria o un hongo se mantengan en el
7
ambiente viable es la cantidad de agua disponible que existe Mishalski (1985),
citado por HERRERA (2009).
Los factores ambientales como el aire, el agua y las superficies
clínicas de contacto pueden actuar como reservorios de microorganismos y
juegan un rol muy importante como vehículos de infección Pasquarella et al.,
(2010), citado por ZAMBRANO (2013).
2.3.1. Humedad relativa
Es el factor determinante en el crecimiento de los microorganismos.
Cuando la humedad relativa del aire decrece, disminuye el agua disponible para
los microorganismos, lo que causa deshidratación y por tanto la inactivación de
muchos de ellos. El límite menor para el crecimiento de hongos es del 65 %. Las
bacterias requieren una mayor humedad. Las Gram negativas resisten peor la
desecación que las positivas; esto se refleja en que existe poca evidencia de
transmisión por el aire de bacterias Gram negativas, con la excepción de
Legionella Lidwell (1990), citado por DE LA ROSA et al., (2002).
La humedad y la temperatura son los factores esenciales para la
viabilidad de los microorganismos presentes en suspensión dentro de la
atmosfera. Para cada microorganismo se tiene una temperatura y humedad
relativa óptima de crecimiento y desarrollo (JUANTUNEN et al., 1987)
8
2.3.2. Temperatura
Está muy relacionada con la humedad relativa, por lo que es difícil
separar los efectos que producen ambas. Diversos estudios muestran que el
incremento de la temperatura disminuye la viabilidad de los microorganismos
(MOHR, 1997). La mayoría de las bacterias se desarrollan a un rango de
temperatura por encima de 30 °C, pero las temperaturas mínimas y máximas
varían considerablemente para las diferentes especies. Las bacterias patógenas
al hombre crecen mejor a una temperatura cercana al cuerpo humano (37°C).
(LLOP et al., 2001).
2.3.3. Oxigeno
Se ha observado una correlación negativa entre la concentración de
oxígeno y la viabilidad, que aumenta con la deshidratación y el tiempo de
exposición. La causa de la inactivación podría ser radicales libres de oxigeno
(DE LA ROSA et al., 2002).
2.4. Microorganismos del aire
Los microorganismos son y siempre han sido un factor importante
para la salud humana. Estos microorganismos han desarrollado una
extraordinaria capacidad de supervivencia que les ha permitido colonizar
prácticamente cualquier espacio natural de la tierra. La atmósfera no tiene una
microbiota autóctona, pero es un medio para la dispersión de muchos tipos de
microorganismos (esporas, bacterias, virus y fungí), procedentes de otros
ambientes. Los microorganismos dispersados por el aire tienen una gran
9
importancia biológica y económica porque producen enfermedades en plantas,
animales y humanos, causan alteraciones en los alimentos y materiales
orgánicos y contribuyen al deterioro y corrosión de monumentos y metales. El
transporte se realiza sobre partículas de polvo, fragmentos de hojas secas, piel,
fibras de la ropa, en gotas de agua o en gotas de saliva eliminadas al toser,
estornudar o hablar. El número de microorganismos del aire en las zonas
pobladas depende de la actividad en esa zona (tanto industrial o agrícola), la
presencia de seres vivos y la cantidad de polvo (PASTOR, 2010).
2.4.1. Bacterias
Son microrganismos unicelulares, de forma diferente, habitad
variable, algunas son capaces de formar una envoltura o capsula, se multiplican
por división otras son capaces de formar endosporas más resistentes a las
formas adversas de vida. Son capaces de producir enfermedades por medios
tales como: producción de toxinas dañinas para el hombre, las plantas y algunos
animales, es importante que se conozca las características de cada cepa, lo cual
permite la identificación de las mismas (PELCZAR et al., 1993).
Las bacterias se desarrollan con mayor facilidad a pH 7-8 Y
temperaturas entre 25 y 38°C, aunque muchas especies toleran temperaturas
inferiores a 0°C, otras, como las termófilas, resisten más 45°C Shames (2008)
citado por HERRERA (2009).
10
2.4.1.1. Géneros bacterianos aislados del aire
Dentro de los géneros bacterianos encontrados en el aire con
frecuencia están Staphylococcus, Streptococcus, Bacillus subtilis, Micrococcus
y Actinomyces como Gram positivas, ampliamente relacionadas con cuadros
infecciosos de vías respiratorias. De las que no se encuentran con mucha
frecuencia están: Klebsiella sp, Pseudomona sp, Enterobacter sp, Citrobacter sp,
y Serratia sp como bacterias Gram negativas (NICOLLE, 2006).
2.4.1.1.1. Género Staphylococcus
Los Staphylococcus son microorganismos que están presentes en la
mucosa y en la piel de los humanos y de otros mamíferos y aves. Incluyendo a
35 especies y 17 subespecies, muchas de las cuales se encuentran en humanos.
Las especies que se asocian con más frecuencia a las enfermedades en
humanos son Staphylococcus aureus, Staphylococcus epidermidis,
Staphylococcus saprophticus, Staphylococcus capitis y Staphylococcus
haemolyticus (NICOLLE, 2006). Los staphylococcus patógenos casi siempre
causan hemólisis, coagulación del plasma y producen varias enzimas y toxinas
extracelulares (JAWETZ et al., 2002).
2.4.1.1.2. Género Bacillus
El género de bacterias en forma de bastón y Gram positiva. Son
aerobios estrictos o anaerobios facultativos. Viven en el suelo, agua del mar y
ríos, aparte de alimentos que contaminan con su presencia. Aunque
generalmente son móviles, con flagelos peritricos, algunas especies de interés
11
sanitario (Bacillus anthracis, causantes del carbunco) son inmóviles. Hay
especies productoras de antibióticos (PALAVECINO, 2001). Una característica
importante es que forman esporas extraordinariamente resistentes a condiciones
desfavorables (BARTRAM et al., 2003).
2.4.1.1.3. Género Enterobacter
Los microorganismos que pertenecen a este género raras veces
causan infecciones en huéspedes sanos, pero son aislados nosocomiales
frecuentes. Tres especies de Enterobacter, E. cloacae, E. aerogenes y E.
sakazakii, son responsables de la amplia mayoría de infecciones por
Enterobacter. Pantoea agglomerans, hasta hace poco conocida como
Enterobacter agglomerans, es también un aislado frecuente que puede causar
una amplia variedad de infecciones, entre ellas neumonía. Estas bacterias
fermentan la lactosa, son móviles y forman colonias mucoides (MANDELL et al.,
2006).
2.4.1.1.4. Género Salmonella
El género Salmonella pertenece a la familia Enterobacteriaceae. Son
bacilos gramnegativos móviles que no fermentan la lactosa, aunque la mayoría
producen sulfuro de hidrógeno o gas por fermentación de los hidratos de
carbono. Inicialmente, se agruparon en más de 2000 especies (serotipos) en
función de sus antígenos somáticos (O) y flagelares (H) (esquema de Kauffman-
White). Actualmente se considera que esta clasificación está por debajo del nivel
de especie: en realidad sólo hay dos o tres especies (Salmonella enterica o
12
Salmonella choleraesuis, Salmonella bongori y Salmonella typhi) y los serotipos
se consideran subespecie (BARTRAM, 2003).
2.4.1.1.5. Género Shigella
El género Shigella, perteneciente a la familia Enterobacteriaceae,
está formado por bacilos gramnegativos, no esporulantes e inmóviles que son
aerobios facultativos. Las especies de este género tienen un patrón antigénico
complejo y su clasificación se basa en sus antígenos (O) somáticos, muchos de
los cuales son comunes a otros bacilos entéricos, como E. coli. Shigella spp.
puede ocasionar enfermedades intestinales graves, incluida la disentería bacilar.
La mayoría de las infecciones por Shigella se producen en niños menores de
diez años. La ingestión de tan solo 10 a 100 microorganismos puede producir
una infección, una dosis infectiva sustancialmente más baja que la de la mayoría
de las demás bacterias entéricas. Al comienzo de la enfermedad aparecen
cólicos, fiebre y diarrea acuosa. Las especies del género Shigella están, al
parecer, mejor adaptadas a la infección del ser humano que la mayoría de las
demás bacterias entéricas patógenas (PEGRAM et al., 1998).
2.4.2. Fungí
Los hongos son organismos evolutivamente más desarrollados que
las bacterias. Su desarrollo óptimo se establece a un pH entre 4-6, humedades
relativas superiores a 70% y temperaturas entre 22-30°C Shames, (2008) citado
por HERRERA, (2009). El crecimiento de hongos en edificios puede producir en
sus habitantes determinadas patologías entre las que cabe destacar asma y
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alveolitis alérgicas. La contaminación ambiental por hongos en el interior de
edificios, es debida básicamente a hongos filamentosos y levaduras (BROCK et
al., 2001).
Los fungí son típicamente más abundantes en verano que en el resto
del año, mientras que las bacterias son más abundantes en primavera y otoño
debido a factores como la temperatura, humedad relativa del aire, exposición a
la luz solar, etc. (BOVALLIUS et al., 1978).
2.4.2.1. Géneros fúngicos aislados del aire
Los hongos ambientales se encuentran tanto en el exterior como en
el interior de los domicilios. A pesar de que las diferencias entre la concentración
de elementos fúngicos presentes en espacios cerrados y ambientes abiertos es
controvertida, se acepta que los niveles de hongos en el exterior están muy
condicionados por las variaciones climáticas, y esto también influye en la
diversidad de los hongos del interior (GARRET, 1998).
Cada región geográfica puede presentar una flora fúngica
atmosférica diferente, dependiente, en gran medida de las condiciones
climáticas; así, el Penicillum y Cladosporium son los géneros más abundantes
en ambientes interiores (JACOB et al., 2002).
14
2.4.2.1.1. Género Aspergillus
Es un hongo filamentoso (compuestos de cadenas de células,
llamadas hifas), su habitad natural son el heno y el compostaje. Es un hongo
oportunista y uno de los que toma ventaja de personas inmunocomprometidas
(GARCIA et al., 2001). El Aspergillus, es un hongo del que existen 12 ó más
patógenos siendo los más destacados fumigatus, flavus, niger y terrae. Por su
detección accesible y su vinculación a la contaminación aérea se les puede
otorgar carácter de indicadores de riesgo biológico aéreo (SEMPSPH, 1999). Sin
embargo, este hongo se ha convertido en el más prevalente de los hongos
patógenos en suspensión en el aire, debido a su capacidad para causar
infecciones en huéspedes con un sistema inmune debilitado, con al menos un
50% de tasa de mortalidad en los seres humanos. El hongo también está
asociado con asma grave y sinusitis (CHURBA, 2008).
2.4.2.1.2. Género Candida
Son hongos levaduriformes que forman parte de la flora normal de
algunas zonas de nuestro cuerpo. Producen enfermedades cuando las defensas
naturales son afectadas por algún factor predisponente, considerándose, por lo
tanto, como un hongo oportunista. Los cuadros clínicos pueden ir desde una
infección cutánea benigna hasta las formas diseminadas, generalmente fatales.
La forma clínica más frecuente es la candidiasis vaginal. La mayoría de las
infecciones por cándidas provienen de fuente endógena (LLOP et al., 2001). Los
hongos que pertenecen al género Cándida, en especial Candida albicans (el cual
produce candidiasis), pueden infectar los órganos internos y las membranas
15
mucosas de la boca, garganta y tracto genital. En las personas con inmunidad
deteriorada, este organismo puede originar una infección crónica. (RIPPON,
2005).
2.4.2.1.3. Género Penicillium
Este género se caracteriza por formar conidios en una estructura
ramificada semejante a un pincel que termina en células conidiógenas llamadas
fiálides (WEBSTER, 1986). Los miembros del genero Penicillium son
filamentosos. Las especies de Penicillium están ampliamente distribuidas en la
naturaleza y se hallan en el suelo, la vegetación caída, en el aire o en materia
orgánica en descomposición, encontrado de preferencia en interiores. El
aislamiento de especies de Penicillium son considerados contaminantes
habituales en el laboratorio, pero pueden causar infecciones, especialmente en
huéspedes inmunocomprometidos (BRIDGE et al., 1992).
2.4.2.1.4. Género Geotrichum
Hongo de distribución cosmopolita, produce geotricosis, que es una
micosis oportunista producida por este hongo que está presente en el medio
ambiente, la piel y mucosas del huésped humano. Las infecciones usualmente
se adquieren vía ingestión o inhalación, las formas clínicas son varias y la más
frecuente es la pulmonar, con manifestaciones muy similares a la tuberculosis
(ROMERO, 2007). Esta rara enfermedad puede causar lesiones en la piel, los
bronquios, la boca, pulmones e intestinos Labarrere (2003) citado por QUAN
(2012).
16
2.4.2.1.5. Género Rhizopus
Es un género de hongos filamentosos hallados en el suelo,
degradando frutos y vegetales, heces animales, y residuos (ARENAS, 2003).
Algunas spp. de Rhizopus son agentes oportunistas de zigomicosis humana.
Pueden causar serias (y con frecuencia mortales) infecciones en humanos y
en animales debido a su rápido crecimiento a relativamente altas
temperaturas. Algunas especies son patógenos vegetales (KOBAYASI et al.,
1992). La exposición a concentraciones elevadas de esporangiosporas de
Rhizopus se ha descrito como causa de alveolitis alérgica extrínseca (pulmón de
serrador) en serrerías suecas (ARISTEGUI, 2002). Usualmente se relaciona con
alergias ocupacionales. Al igual que Mucor afecta los pulmones, senos nasales,
cerebro, ojos y la piel (KAY et al., 1991).
2.5. Calidad del aire interior y áreas críticas de los hospitales
La contaminación del aire en las áreas de riesgo hospitalarias es un
problema potencial derivado de la posibilidad de que los contaminantes sean
transportados y eventualmente depositados sobre las superficies, los materiales
o las personas que queremos proteger (SAMPSP, 2016).
El inicial repaso histórico sobre los edificios hospitalarios permite
fijarse en algunas ideas claves: que a medida que el hospital ganaba en
cualificación médica fue haciéndose más viva la apreciación de que estar en él
comportaba serios riesgos higiénicos; que estos riesgos cobraban mayor
17
vigencia en ciertos ámbitos, el quirúrgico de forma especial, y que eran sobre
todo de carácter infectocontagios (VAQUERO DE LA HOZ, 2011).
Los lugares donde selectivamente todo esto podía ocurrir dentro de
la macroinstalación hospitalaria se pueden denominar “áreas críticas”. Según
(GONZÁLEZ, 2009) en un hospital todas las áreas son de riesgo, pero son “áreas
críticas” aquellas en que el paciente está más expuesto a riesgos sobreañadidos.
Los riesgos derivados de las condiciones ambientales inadecuadas,
particularmente centradas en el aire, en relación a las bajas defensas del
paciente expuesto a las mismas, constituye un riesgo ambiental (VAQUERO DE
LA HOZ, 2011).
2.5.1. El riesgo infeccioso por contaminación aérea
Dentro del hospital las infecciones suelen transmitirse por contacto,
pero también alguna lo pueden hacer por vía aérea (BEGGS et al., 2008), lo que
hace que sean clave las instalaciones de climatización, las cuales permitan
controlar la concentración y el tiempo de permanencia de las partículas
infecciosas en el aire. En el hospital el riesgo infeccioso está más intensamente
acrecentado para los pacientes críticos, que están ubicados en áreas como las
unidades de cuidados intensivos, las de grandes quemaduras, las de cuidados
intensivos pediátricos, y, en menor grado, de enfermos cancerosos y crónicos
muy deteriorados, entre los que destacan los inmunocomprometidos. Así que las
salas quirúrgicas también ofrecen un riesgo especial (BENÍTEZ DEL ROSARIO
et al., 2006).
18
Los microorganismos o microbios son el elemento clave en tanto
hablamos de biocontaminación y de riesgo infeccioso. Es por ello que es hacia
los microorganismos patógenos (DOMÍNGUEZ, 2009) donde hay que dirigir la
atención y en concreto hacia los responsables de los principales riesgos
infecciosos ambientales, según sea la importancia de los riesgos derivados, por
su gravedad o su frecuencia y, por otra parte, según la posibilidad de su
identificación en aire ambiente. Con arreglo a estos criterios hay que considerar
en el aire bacterias y hongos:
- Bacterias: Pseudomonas aeruginosa, Acinetobacter,
Streptococcus, Staphylococcus aureus, Enterobacterias (E. Coli,
coliformes y salmonelas).
- Hongos. De las 72 especies existentes de hongos destacan las
cuatro siguientes de hongos filamentosos: Aspergillus spp.,
Mucor, Scedosporium y Rhizopus.
Cobra especial significado el Aspergillus, del que existen 12 ó más
patógenos siendo los más destacados fumigatus, flavus, niger y terrae. Por su
detección accesible y su vinculación a la contaminación aérea se les puede
otorgar carácter de indicadores de riesgo biológico aéreo (SEMPSPH, 1999).
19
2.6. Niveles de contaminación biológica
La AENOR ha propuesto un Comité Técnico de Normalización (CTN
171) para elaborar directrices sobre la calidad del aire interior. En este contexto,
la Comisión de la Comunidad Europea ha propuesto cinco categorías diferentes
para evaluar el nivel de contaminación microbiana en el aire en el interior de los
ambientes no industriales (CEC, 1993). Estas categorías se describen en el
cuadro 1.
Cuadro 1. Niveles de microorganismos en el aire de ambientes de interiores no
industriales
Categoría de contaminación
UFC/m3 en el aire
Bacteria Hongos
Muy bajo < 50 < 25
Bajo 50 - 100 25 - 100
Intermedia 100 - 500 100 - 500
Alto 500 - 2.000 500 - 2.000
Muy alto > 2.000 > 2.000
Fuente: Documento editado en 1993 por la Comisión de las Comunidades
Europeas
20
III. MATERIALES Y METODOS
3.1. Lugar de ejecución
3.1.1. Ubicación del área de estudio
La presente practica se realizó en dos ámbitos: en las instalaciones
internas del Hospital EsSalud de Tingo María y en el laboratorio de Microbiología
General, de la Universidad Nacional Agraria de la Selva, ambos políticamente
ubicados en la ciudad de Tingo María, distrito de Rupa Rupa, provincia de
Leoncio Prado, Región Huánuco.
Figura 1. Mapa de Ubicación de la UNAS.
21
3.1.2. Ubicación geográfica
Geográficamente el Hospital del EsSalud está ubicado en las
coordenadas UTM (E: 389925 N: 8971058) y el laboratorio de Microbiología
General está ubicado en las coordenadas UTM (E: 390552 m. y N: 8970269 m.).
3.1.3. Descripción del lugar de estudio
El Hospital EsSalud pertenece al segundo nivel de atención, con 5°
nivel de complejidad, en la categoría II-1 (NT N° 021-MINSA/DGSP7/V. 01,
2010), como tipo de establecimiento corresponde a un Hospital I (NT Nº 0021-
MINSA, 2004).
3.1.4. Aspectos ambientales
Ecológicamente de acuerdo a la clasificación de zonas de vida o
formaciones vegetales del mundo y el diagrama bioclimático, Tingo María se
encuentra en la formación vegetal bosque muy húmedo Pre-montano Tropical
bmh-PT, y de acuerdo a las regiones naturales del Perú corresponde a Rupa
Rupa o Selva Alta, ubicado entre los 650 y 1,200 m.s.n.m. Hidrográficamente
pertenece a la cuenca del río Huallaga; el comportamiento climático es variable,
con una precipitación anual promedio de 3328.9 mm. Las mayores
precipitaciones se producen entre los meses de septiembre a abril y alcanza un
máximo extremo en el mes de febrero con un promedio mensual de 608.4 mm.
(HOLDRIDGE, 1987). La temperatura media anual es de 22° y 25°C; las
temperaturas máximas absolutas 33° y 36°C, y la mínima entre 8° y 15°C.
22
3.2. Materiales y equipos
3.2.1. Medios de cultivos
Los medios de cultivos utilizados en la presente práctica pre
profesional fueron los siguientes: caldo BHI (Brain Heart Broth), Agar CLED
(Cistina-Lactosa Deficiente en Electrolitos), Agar glucosa al 4% según
Sabouraud, Agar Mac Conkey, Agar M77, Agar Plate Count, Agar Manitol
Salado.
3.2.2. Medios de cultivo para pruebas bioquímicas
Para la realización de las pruebas bioquímicas se utilizó los
siguientes caldos y agares:
- Caldos: Caldo peptona 0.1%, caldo Rojo de Metilo y Voges –
Proskauer (RMVP), Caldo Malonato.
- Agares: Agar Sulfuro Indol Movilidad (SIM), Agar Hierro - triple
azúcar (TSI), Agar Lisina Hierro (LIA), Agar Citrato de Simmons,
Agar Urea.
3.2.3. Reactivos
Reactivo de Indol según Kovacs, Rojo de metilo, Hidróxido de sodio
al 4% (NaOH), Alfa naftol, Cristal Violeta, Lugol, Alcohol Acetona, Azul lactofenol
– glicerol.
23
3.2.4. Materiales de laboratorio
Matraces Erlenmeyer, placas petri, tubos de ensayo, algodón,
pipetas, jeringas de 60 ml, pinzas, varillas de vidrio, porta objetos, cubre objetos,
mechero de bunsen, mechero de alcohol, gradillas para tubos de ensayo, asa de
siembra, anza micológica, espátulas, papel mantequilla, guantes quirúrgicos,
mascarillas.
3.2.5. Equipos
Autoclave, baño maría, balanza, microscopio, termómetro en forma
horizontal, estufa, contador de colonias, cámara fotográfica.
3.3. Identificación del área de estudio
Se realizó la visita respectiva para reconocer el área en estudio en
él se identificaron 8 áreas de muestreo:
- Área de hospitalización: centro obstétrico, cirugía, ginecología
y pediatría.
- Sala de operaciones: Centro quirúrgico.
- Laboratorio: Laboratorio.
- Emergencias: Emergencia y Trauma shock.
3.4. Muestreos
Se realizaron dos muestreos (2), realizándose un muestreo en cada
mes (febrero - marzo), para cada muestreo se eligieron ocho (8) áreas, siendo
24
elegidas las que presentan más presencia de pacientes en dicho nosocomio. En
cada muestreo se realizaron la toma de temperatura a las 12:00 pm., tanto para
el muestreo de bacterias y fungís.
3.5. Metodología
Para el cumplimiento de los objetivos planteados se llevó a cabo una
investigación de tipo descriptiva y cuantitativa, en este trabajo se recopiló
información proveniente de la toma de muestras en las instalaciones internas del
Hospital EsSalud de Tingo María, cuyas etapas se describen a continuación.
3.5.1. Determinación del parámetro temperatura en los ambientes del
Es Salud
El parámetro a medir fue la temperatura en grados centígrados (°C)
con la ayuda de un termómetro en forma horizontal, exponiendo el censor al aire
exterior de cada área a muestrear.
3.5.2. Identificación de bacterias
3.5.2.1. Muestreo por método volumétrico empleando jeringa
de 60 ml
Para las 8 áreas de muestreo en el aire se preparó 8 matraces con
BHI el cual es un caldo para cultivo de gran variedad de microorganismos,
considerando 3.3 gr del mismo para 90 ml de agua destilada (LÓPEZ, 2004).
25
Para muestrear el aire se utilizó jeringas de 60 ml cada una para cada
área a muestrear, se realizó 20 aspiraciones en cada área. Después de cada
aspiración se descargó el aire contenido en la jeringa dentro de un matraz con
medio de BHI. Se utilizó la metodología del Impinger o burbujeo, que consiste en
tomar aire con un dispositivo automático o mecánico y depositarlo
inmediatamente en un medio de cultivo líquido.
3.5.2.2. Incubación de muestras con BHI
Los matraces con medio BHI para crecimiento de bacterias se
incubaron a 37 ºC por un tiempo de 48 horas.
3.5.2.3. Enumeración de bacterias y fungi
Para la enumeración de bacterias se realizó el método de recuento
de placa, con la ayuda de una micropipeta se obtuvo 0.1 µL de muestra de cada
matraz con BHI y se vierte en una placa Petri vacía y esterilizada, en el cual
posteriormente se adicionó 10 mL de Agar Plate Count, para luego agitar de
manera suave con cinco movimientos a la derecha y cinco movimientos a la
izquierda, se dejó solidificar por 5 minutos. Para posteriormente llevar las placas
a la estufa a 37 °C por 48 horas. Después de ese tiempo con la ayuda del
contador de colonias se realizó el conteo de bacterias y fungí. La fórmula para la
enumeración de microorganismos (m.o) es la siguiente:
“m.o / m3 aire = N° Colonias x Inóculo x Factor de dilución” formula. (1)
26
Fuente: Modificado de TÓRTORA, 2007.
Figura 2. Cálculo del número de microorganismos por el método de diluciones
seriadas
3.5.2.4. Preparación de medios de cultivo
Los agares necesarios para el crecimiento de bacterias son los
siguientes y se preparó de esta manera:
- Agar Manitol Salado: 400 mL de agua destilada con 4 g del
agar peptona, 0.4 gr de extracto de carne, 30 gr de cloruro
sódico, 4 gr D (-) manita, 0.01 gr de rojo de fenol y 4.8 gr de Agar
Agar.
- Agar CLED: 500 mL de agua destilada con 18 g del agar.
27
- Agar Mac Conkey: 500 mL de agua destilada con 25.8 g del
agar.
- Agar M77: 400 mL de agua destilada con 2 gr de peptona, 0.2
gr de KH2PO4, 0.08 gr de MgSO4 7H2O, 0.08 gr DE NaCl, MnSO4
trazas, FeCl3.6H2O trazas, 6 gr de manitol, 2 gr de extracto de
levadura y 10 gr de Agar Agar.
- Agar Plate Count: 300 mL de agua destilada con 7.05 g del
agar.
Para el crecimiento de hongos se utilizó:
- Agar glucosa 4% según Sabouraud: 500 mL de agua destilada
con 32.5 g del agar.
Todos los matraces se mezclan bien para luego ser llevados a baño
maría, después llevarlos al autoclave para el proceso de esterilización a 15 Lb
de presión por 15 minutos, se deja enfriar hasta 45 ºC para luego proceder a
plaquear (LÓPEZ, 2004).
3.5.2.5. Siembra en las placas Petri con medios
enriquecedores
De los matraces con BHI y muestras de aire incubados a 37 °C por
48 horas se retiraron mediante un asa de siembra, un inóculo para luego sembrar
en las placas Petri. El método de siembra se realizó por estrías. Seguidamente
28
las placas Petri ya sembradas se llevaron a incubación por 48 horas a una
temperatura de 37 °C (LÓPEZ, 2004).
3.5.2.6. Diferenciación bioquímicas
La batería de pruebas bioquímicas que se utilizaron para la
identificación de bacterias estuvo constituida por las siguientes pruebas: Indol,
rojo de metilo, Voges-Proskauer, TSI, LIA, citrato de Simmons, SIM, caldo
malonato, urea. La metodología fue de la siguiente manera:
Después de incubar las placas petri para el crecimiento de bacterias,
se realizaron las pruebas bioquímicas:
- Indol: Se vierte aproximadamente 9 mL de caldo peptona al
0.1% a un tubo de ensayo, se realizó la siembra de bacterias con
el anza de siembra por el método de enjuague. Se incubo por 48
horas, para la determinación se usó el reactivo de Kovacs, de 2
– 3 gotas.
- Rojo de metilo: Se utilizó el caldo rojo de metilo y Voges-
Proskauer (RMVP), aproximadamente 9 mL en cada tubo de
ensayo, se sembró mediante el método de enjuague; se incubo
por 48 horas y como reactivo se adiciono el rojo de metilo de 2 -
3 gotas.
- Voges-Proskauer: Se vierte en el tubo de ensayo el caldo
RMVP, se sembró mediante el método de enjuague y se incubo
29
por 48 horas; como reactivo se utilizó hidróxido de sodio (NaOH)
al 4% de 2 - 3 gotas y se adicionó alfa naftol de 2 – 3 gotas.
- TSI: Se vertió el agar a 45 ºC hasta la tercera parte de los tubos
de ensayo, se dejó enfriar en pico de flauta, luego se sembró con
puntura y estrías, se incubará a 37 ºC por 48 horas; el tipo de
reacción positivo o negativo se conoció por el cambio de color.
- LIA: Se verterá el agar a los tubos de ensayo a una temperatura
de 45 ºC y se dejó enfriar en pico de flauta, para proceder a
sembrar la colonia de bacteria seleccionada mediante el método
de puntura y estrías; la reacción se muestreo mediante el cambio
de color.
- Citrato de Simmons: Se vertió el agar en los tubos de ensayo
y se dejó enfriar en modo inclinado para luego sembrar por el
método de estrías. Pasada las 48 horas de incubación, el cambio
a color azul indico reacción positiva.
- Caldo Malonato: Se vertió el caldo en los tubos de ensayo y se
realizó la siembra por el método de enjuague, después se incubo
por 48 horas, se observó si hubo o no reacción (es positivo si
cambia a color azul).
- Úrea: Se distribuyó el agar en tubos de ensayo, se sembró la
colonia de bacterias por el método de puntura, al cabo de las 48
horas el cambio de color nos presentó si hubo una reacción
positiva.
30
Luego leímos los resultados, agregando reactivos de confirmación a
los tubos que correspondió y observamos el cambio de color, para luego con los
datos obtenidos hacer la comparación con la tabla de pruebas bioquímicas (Ver
ANEXO C) (LÓPEZ, 2004).
3.5.2.7. Tinción de Gram
Se seleccionó la muestra a identificar para así tomar una pequeña
muestra de la cepa, posteriormente se hizo un frotis fino del material de estudio
fijando así la muestra al calor, flameándola en el mechero a gas. De manera
haciendo que el material no se desprenda durante el lavado (tinción).
Se colocó el frotis en un soporte para tinción y recubrió la superficie
con solución de cristal violeta (2 o 3 gotas) se esperó de 1 - 3 minutos de
exposición al colorante (cristal violeta), se lavó exhaustivamente con agua
destilada, luego se cubrió el frotis con reactivo de lugol (2 o 3 gotas), durante 1 -
3 minutos. Nuevamente se lavó con agua destilada después se impregno la
superficie con 2 o 3 gotas de decolorante alcohol-acetona (haciendo
movimientos de vaivén), esto suele tomar 10 – 5 segundos, posteriormente se
lavó con agua corriente y colocó el frotis nuevamente en el soporte para tinción.
Se cubrió la superficie con la tinción de safranina (2 o 3 gotas) durante 1 minuto.
Se lavó con agua corriente, y se colocó el frotis en posición vertical en el soporte
para tinción, para permitir que el exceso de agua drene y el frotis se seque.
Después se agrega una gota de aceite de inmersión y se observa en el
microscopio a 100X (LÓPEZ, 2004).
31
3.5.3. Identificación de fungí
3.5.3.1. Muestreo por método volumétrico empleando jeringa
de 60 ml
Para el muestreo de aire para la identificación de hongos se procedió
hacer la misma metodología aplicada en el muestreo de bacterias con la única
diferencia que el contenido de los 8 matraces es BHI más antibiótico
(Ceftriaxona) (LÓPEZ, 2004).
3.5.3.2. Incubación de muestras con BHI mas antibiótico
A diferencia de los matraces para la muestra de bacterias, los
matraces con medio BHI más antibiótico usados para el crecimiento de hongos
se llevaron a incubar a temperatura ambiente por un tiempo de 3 – 5 días
(LÓPEZ, 2004).
3.5.3.3. Siembra de hongos (Siembra por el método de puntura)
Para la siembra de hongos, se retiró un inóculo de cada caldo de
peptona más antibiótico y se sembró por el método de puntura en Agar
Sabouraud para el primer muestreo y segundo muestreo. Las placas se
incubaron a temperatura ambiente por un tiempo de 5 – 8 días (LÓPEZ, 2004).
3.5.3.4. Microcultivo de fungí
Se esterilizo las placas Petri conteniendo: un soporte de vidrio en
forma de herradura, un porta y un cubre objeto.
32
Luego se preparó una placa Petri con medio agar de Sabouraud
glucosa 4%, dividido en cubitos de aproximadamente 20 × 20 × 10 mm. Cada
cubito se colocará sobre el porta objeto dentro de la placa de microcultivo y sobre
la varilla de vidrio.
De los cultivos aislados de fungi se eligió diferentes tipos de colonias
por cada placa de microcultivo. Luego de elegir la colonia, con la ayuda de un
anza micológica, se tomó un inoculo de la misma y se trasladó sobre el cubito de
medio de sabouraud que se ha colocado sobre el porta objeto dentro de la placa
de microcultivo.
Se colocó el cubre sobre el cubito de agar, luego se puso dentro de
la placa un algodón húmedo para asegurar la humedad y el crecimiento del
hongo. La placa de microcultivo se llevó a incubación a temperatura ambiente
por un tiempo de 5 - 8 días (LÓPEZ, 2004).
3.5.3.5. Identificación de hongos
Al término de la incubación, se retiró suavemente con ayuda de una
pinza el cubre objeto de la placa de microcultivo y se colocó sobre un porta objeto
limpio y desengrasado al que ha colocado previamente 1 – 2 gotas de azul de
lacto glicerol. Con la ayuda de papel secante, se absorbió el exceso de colorante,
luego se sellaron los lados laterales con esmalte de uñas transparente.
33
Luego se eliminó el cubito de medio sabouraud llevándolo a un
recipiente conteniendo lejía diluida al 10%, se retiró el porta objeto de la placa
de microcultivo y agrego de 1-2 gotas de azul lacto glicerol, luego se añadió un
cubre limpio y desengrasado. Con papel secante, se absorbió el exceso de
colorante. Selló los lados laterales con esmalte de uñas transparente.
Las muestras obtenidas, se observaron al microscopio utilizando un
lente ocular de 10x y un lente objetivo de 40X, así el aumento total será de 10x40
= 400X aumentos (LÓPEZ, 2004). Asimismo, se utilizó el manual Ilustrated
Genera of Imperfect Fungi (BARNETT, 1960) para el respectivo reconocimiento.
3.5.4. Identificar la diversidad de géneros de microrganismos
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud
Para la identificación de la diversidad de géneros bacterianos se
realizó mediante la tabla de pruebas bioquímicas, y para la identificación de la
diversidad de géneros fúngicos, se utilizó el manual Ilustrated Genera of
Imperfect Fungi (BARNETT, 1960).
3.5.5. Identificar los microorganismos patógenos presentes en los
ambientes del Hospital EsSalud
Para la identificación de los microorganismos patógenos bacterianos
y fúngicos se realizó mediante la búsqueda de información en libros e internet
que enfermedad produce cada microorganismo.
34
IV. RESULTADOS
4.1. Determinación el parámetro temperatura en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María
4.1.1. Temperatura
En el cuadro 2 y figura 3 se observa los valores de temperatura en
la hora de muestreo de las instalaciones internas del Hospital EsSalud. El valor
máximo de temperatura en el 1er muestreo se registró en el área de Ginecología
con un valor de 27.8 °C y el valor mínimo se registró en el área de Cirugía con
un valor de 27.1 °C y en el 2do muestreo el valor máximo se registró en el área
de centro Obstétrico con un valor de 28.4 °C y el valor mínimo se registró en el
área de emergencia con un valor de 27.8 °C.
Cuadro 2. Temperatura (°C) del 1er y 2do muestreo en los diferentes ambientes
del Hospital EsSalud de Tingo María.
Ambientes Temperatura (°C)
1er muestreo 2do muestreo
Centro obstétrico 27.2 28.4
Cirugía 27.1 28.1
Ginecología 27.8 28
Pediatría 27.6 27.9
Centro quirúrgico 27.4 28.2
Laboratorio 27.2 27.9
Emergencia 27.6 27.8
Trauma shock 27.4 28.2
35
Figura 3. Temperatura (°C) del 1er y 2do muestreo en los diferentes ambientes
del Hospital EsSalud de Tingo María.
Cuadro 3. Temperatura promedio con respecto a los ambientes muestreados
en el Hospital EsSalud de Tingo María.
26
26.5
27
27.5
28
28.5
1er muestreo 2do muestreo
Temperatura (°C) Temperatura (°C)
Centro obstetrico Cirujia Ginecologia Pediatria
Centro quirurgico Laboratorio Emergencia Trauma shock
Ambientes T (°C) Promedio
Centro obstétrico 27.8
Cirugía 27.6
Ginecología 27.9
Pediatría 27.75
Centro quirúrgico 27.8
Laboratorio 27.55
Emergencia 27.7
Trauma shock 27.8
36
En el cuadro 3 y figura 4 se observa los valores de temperatura
promedio en la hora de muestreo de las instalaciones internas del Hospital
EsSalud de Tingo María. El valor máximo de temperatura se registró en el área
de Ginecología con un valor de 27.9 °C y el valor mínimo se registró en el área
de Laboratorio con un valor de 27.55 °C.
Figura 4. Temperatura promedio con respecto a la hora de muestreo en las
instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo María.
Centroobstetric
oCirujia
Ginecologia
Pediatria
Centroquirurgic
o
Laboratorio
Emergencia
Traumashock
TP (°C) 27.8 27.6 27.9 27.75 27.8 27.55 27.7 27.8
27.3
27.4
27.5
27.6
27.7
27.8
27.9
28
37
4.2. Unidades formadoras de colonias bacterianas y fúngicas por
centímetro cúbico de aire (UFC/m3) de las instalaciones del Hospital
EsSalud de Tingo María
En el cuadro 4 se puede observar el número promedio de unidades
formadoras de colonias por metro cúbico (UFC/m3) de bacterias y fungí en las
instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo María, siendo el número máximo de
3073000 UFC Bacteriana/m3 de aire y el mínimo 257000 UFC Bacteriana/m3 de
aire; así como el número máximo 4000 UFC Fúngica/m3 de aire y el mínimo 1000
UFC Fúngica/m3 de aire.
Cuadro 4. Número de (UFC/m3) bacterianas y fúngicas en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María.
Ambientes Bacteria Fungí
UFC/m3 UFC/m3
Centro obstétrico 302000 4000
Cirugía 388000 2000
Ginecología 257000 3000
Pediatría 496000 2000
Centro quirúrgico 2015000 1000
Laboratorio 3073000 2000
Emergencia 325000 3000
Trauma shock 282000 2000
38
En la figura 5 se observa el número de Unidades Formadoras de
Colonias Bacterianas y Fúngicas por metro cubico (UFC/m3) de aire en las
instalaciones del Hospital EsSalud. El valor máximo de UFC/m3 de aire
bacteriano se registró en el área de laboratorio con 3073000 UFC/m3 y el valor
mínimo se registró en el área de Ginecología con 257000 UFC/cm3, el valor
máximo de UFC/m3 de aire fúngico se registró en el área de Centro Obstétrico
con 4000 UFC/m3 y el valor mínimo se registró en el área de Centro quirúrgico
con 1000 UFC/m3. El valor observado para bacterias se encuentra en el rango <
3703000 UFC Bacteriana/m3 en el aire y los valores observados para fungí se
encuentran en el rango < 4000 UFC Fúngica/m3 en el aire.
Figura 5. Número de (UFC/m3) bacterianas y fúngicas en las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María.
0
500000
1000000
1500000
2000000
2500000
3000000
3500000
UFC/m3 UFC/m3
Bacteria Fungi
Centro obstetrico Cirujia Ginecologia Pediatria
Centro quirurgico Laboratorio Emergencia Trauma shock
39
4.2.1. Número de unidades formadoras de colonias bacterianas y
fúngicas metro cúbico de aire (UFC/m3) en relación con la
temperatura
En la figura 6 se observa la relación que existe entre el número de
UFC Bacteriana/m3 de aire con la temperatura la cual es inversamente
proporcional con respecto a las instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo
María.
Figura 6. Relación entre la temperatura y el número de UFC Bacteriana/m3 de
aire las instalaciones del Hospital EsSalud de Tingo María
C. Obstétrico
Cirujía
Ginecología
Pediatría
C. Quirúrgico
Laboratorio
Emergencia
T. Shock
27.3
27.4
27.5
27.6
27.7
27.8
27.9
28
3 0 2 0 0 0 3 8 8 0 0 0 2 5 7 0 0 0 4 9 6 0 0 0 2 0 1 5 0 0 0 3 0 7 3 0 0 0 3 2 5 0 0 0 2 8 2 0 0 0
TEM
PER
ATU
RA
°C
NUMERO DE MICROORGANISMOS UFC/M3
40
En la figura 7 se observa la relación que existe entre el número de
UFC Fúngica/cm3 de aire con la temperatura con respecto a las instalaciones del
Hospital EsSalud de Tingo María.
Figura 7. Relación entre la temperatura y el número de UFC Fúngica/m3 de aire
las instalaciones del EsSalud de Tingo María
C. Obstétrico
Cirujía
Ginecología
Peditria
C. Quirúrgico
Laboratorio
Emergencia
T. Shock
27.3
27.4
27.5
27.6
27.7
27.8
27.9
28
4 0 0 0 2 0 0 0 3 0 0 0 2 0 0 0 1 0 0 0 2 0 0 0 3 0 0 0 2 0 0 0
TEM
PER
ATU
RA
°C
NUMERO DE MICROORGANISMOS UFC/M3
41
4.3. Identificar la diversidad de géneros de microrganismos presentes en
los ambientes del Hospital EsSalud
4.3.1. Diversidad de géneros microbianos en las instalaciones del
Hospital EsSalud
Cuadro 5. Cuadro de resumen de las especies bacterianas presentes en los
ambientes muestreados del Hospital EsSalud de Tingo María
Ambientes Especie de Bacterias Total
Centro Obstétrico
Salmonella sp, Enterobacter aerogenes, Bacillus sp
3
Cirugía Pantoea agglomerans, Citrobacter freundii, Salmonella sp, Shigella sp, Staphylococus sp
5
Ginecología Shigella sp, Edwardsiella sp, Salmonella sp, Staphylococus sp, Klebsiella sp, Lactobacillus sp, Bacillus sp
7
Pediatría Citrobacter freudii, Staphylococus sp, Bacillus sp 3
Centro Quirúrgico
Salmonella sp, Enterobacter aerogenes, Bacillus sp
3
Laboratorio Enterobacter aerogenes, Salmonella arizonae, Citrobacter freudii, Staphylococus sp, Bacillus sp, Streptomyces sp
6
Emergencia Enterobacter aerógenes, Pantoea agglomerans, Salmonella Arizonae, Staphylococus sp, Streptomyces sp
5
Trauma Shock Citrobacter freudii, Bacillus sp 2
En el cuadro 5 se observan los valores de los géneros de bacterias
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud de Tingo María. El valor
máximo de géneros bacterianos del aire se registró en Ginecología, Laboratorio
con 7 géneros de bacterias y el valor mínimo se registró en el área de Trauma
Shock con 2 géneros de bacterias.
42
4.3.2. Diversidad de géneros fúngicos en las instalaciones del Hospital
EsSalud
Cuadro 6. Cuadro de resumen de las especies fúngicas presentes en los
ambientes muestreados del EsSalud.
Ambientes Especie de Hongos Total
Centro Obstétrico
Aspergillus sp, Candida sp, Rhizopus sp
3
Cirugía Aspergillus sp 1
Ginecología Aspergillus sp, Geotrichum sp, Oidium sp
3
Pediatría Aspergillus sp, Geotrichum sp, Penicillun sp
3
C Quirúrgico Aspergillus sp 1
Laboratorio Aspergillus sp, Geotrichum sp 2
Emergencia Aspergillus sp, Geotrichum sp, Rhizopus sp, Oidium sp
4
Trauma Shock Aspergillus sp, Geotrichum sp 2
En el cuadro 6 se observan los valores de los géneros fungí
presentes en los ambientes del Hospital EsSalud de Tingo María. El valor
máximo de géneros hongos del aire se registró en el área de Emergencia con 4
especies de hongos y el valor mínimo se registró en el área de Centro Quirúrgico
con 1 género de fungí.
43
4.4. Identificar los microorganismos patógenos presentes en los
ambientes del Hospital EsSalud
4.4.1. Géneros bacterianos patógenas
Cuadro 7. Bacterias patógenas para el hombre.
Especies identificadas Patogenicidad Afecciones o enfermedades
Shigella sp Patógenos entéricos
Disentería, afecciones gastrointestinales
Pantoea agglomerans** Oportunista Artritis, sinovitis, infecciones nosocomiales
Staphylococcus sp Patógeno Infecciones cutáneas o mucosas
Enterobacter cloacae Bacteriemia nosocomial, sepsis
Salmonella sp Patógeno Salmonelosis
Enterobacter aerogenes Oportunistas Infecciones vías urinarias, respiratorias, cutáneas
Citrobacter freundii Patógenas
oportunistas
Producen infecciones urinarias, infecciones del tracto respiratorio e infecciones de heridas
Edwardsiella sp Oportunista Heridas, trastornos intestinales
Klebsiella sp* Patógenos Infecciones intrahospitalarias
Salmonella arizonae Patógeno Infecciones entéricas
Bacillus cereus Toxoinfección Disentería Hemorrágica
Streptomyces sp Patógeno
oportunista
Infecciones sistémicas (Pericarditis crónica, paniculitis, neumonía entre otros)
* Relevancia clínica ** Es oportunista con pacientes inmuno comprometidos
De 12 las especies identificadas las más patógenas para el hombre
son Klebsiella sp, Staphylococcus sp, Pantoea agglomerans, Shigella sp.,
Arizona sp.
44
4.4.2. Géneros fúngicos patógenos
Cuadro 8. Hongos patógenos para el hombre.
Especies identificadas Patogenicidad Afecciones o enfermedades
Oidium sp Patógeno de vegetales -
Geotrichum sp Oportunista* Geotricosis
Aspergillus sp Oportunista* Aspergilosis, onicomicosis,
otomicosis, sinusitis alérgica
Penicillium sp Oportunista* Peniciliosis
Candida sp Oportunistas Candidiasis
Rhizopus sp Oportunistas Alveolitis, zigomicosis * Oportunista en personas inmunocomprometidas
De las 6 especies identificadas los más patógenos para el hombre
son Cándida sp, Rhizopus sp y el oportunista Aspergillus sp., los otros hongos
identificados son patógenos de vegetales, pero pueden comportarse como
oportunistas si hay personas con un sistema inmune vulnerable
45
V. DISCUSION
Según MOHR (1997) Diversos estudios muestran que el incremento
de la temperatura disminuye la viabilidad de los microorganismos esto se
confirma en la figura 5 pues la mayor incidencia de temperatura de 27.9°C se
registró en el área de Ginecología donde la viabilidad de los microorganismos
bacterianos es de 257000 UFC/m3 y la menor incidencia de temperatura de
27.55°C se registró en el área de Laboratorio donde la viabilidad de los
microorganismos bacterianos es de 3073000 UFC/m3.
BOVALLIUS et al., 1978 nos menciona que los fungí son típicamente
más abundantes en verano que en el resto del año, mientras que las bacterias
son más abundantes en primavera y otoño debido a factores como la
temperatura, humedad relativa del aire, exposición a la luz solar, etc. Es por ello
que este factor puede ser uno de los inconvenientes del por qué los fungí no
cumplen con el estudio de que el incremento de la temperatura disminuye la
viabilidad de los microorganismos esto lo podemos confirmar en la figura 6 la
cual nos da a conocer que la mayor incidencia de temperatura de 27.9 °C se
registró en el área de Centro Obstétrico donde la viabilidad de los
microorganismos fúngicos es de 4000 UFC/m3 y la menor incidencia de
46
temperatura de 27.55 °C se registró en el área de Centro Quirúrgico donde la
viabilidad de los microorganismos fúngicos es de 1000 UFC/m3.
Según el Documento editado en 1993 por la Comisión de las
Comunidades Europeas el nivel de contaminación de biológica en el Hospital del
EsSalud de Tingo María de acuerdo a la concentración de bacterias corresponde
a la categoría de concentración MUY ALTA con 3073000 UFC/m3 de aire y la
concentración de hongos corresponde a la categoría de contaminación MUY
ALTA con 4000 UFC/m3 de aire, como se puede observar en el cuadro 4 por lo
que podemos constatar que el hospital EsSalud tiene una mala calidad
microbiológica ambiental del aire.
NICOLLE, (2006) menciona que dentro de los géneros bacterianos
encontrados en el aire con frecuencia están Staphylococcus, Streptococcus,
Bacillus subtilis, Micrococcus y Actinomyces de acuerdo a los resultados
obtenidos en el cuadro 5 se pude confirmar que los géneros más abundantes
son, Bacillus sp y Staphylococcus sp. De las que no se encuentran con mucha
frecuencia están: Klebsiella sp, Pseudomona sp, Enterobacter sp, Citrobacter sp,
y Serratia sp como bacterias Gram negativas siendo el microrganismo sin
presencia alguna en los dos muestreos los géneros de Pseudomona sp, Serratia
sp.
GARCIA et al., (2001) menciona que el género Aspergillus es un
hongo oportunista y uno de los que toma ventaja de personas
47
inmunocomprometidas. De igual manera CHURBA, (2008) dice que este hongo
se ha convertido en el más prevalente de los hongos patógenos en suspensión
en el aire, como lo podemos confirmar en el cuadro 6 el Genero Aspergillus es
el más predominantes en todas las áreas muestreadas.
Asimismo, SEMPSPH (1999) menciona que el género Aspergillus,
es un hongo que por su detección accesible y su vinculación a la contaminación
aérea se les puede otorgar carácter de indicadores de riesgo biológico aéreo por
lo que indica que la obtención del Aspergillus en todas las áreas de muestreo en
las instalaciones del Hospital del EsSalud existe un riesgo biológico dentro de
cada área muestreada.
Los microorganismos o microbios son el elemento clave en tanto
hablamos de biocontaminación y de riesgo infeccioso. Es por ello que es hacia
los microorganismos patógenos (DOMÍNGUEZ, 2009) donde hay que dirigir la
atención (SEMPSPH, 1999). Como podemos ver el cuadro 7 y 8 se puede
observar las 12 especies de bacterias identificadas las más patógenas para el
hombre son Klebsiella sp, Staphylococcus sp, Pantoea agglomerans, Shigella
sp., Arizona sp y de las 6 especies identificadas de Hongos los más patógenos
para el hombre son Cándida sp, Rhizopus sp y el oportunista Aspergillus sp., los
otros hongos identificados son patógenos de vegetales, pero pueden
comportarse como oportunistas si hay personas con un sistema inmune
vulnerable.
48
VI. CONCLUSION
1. Los valores máximos y mínimos de temperatura de registraron en las
áreas de ginecología y laboratorio siendo (27.9 °C y 27.55 °C)
respectivamente.
2. El valor máximo y mínimo de UFC/m3 de aire para bacterias y fungí,
corresponde a las categorías de contaminación MUY ALTA, según el
documento editado en 1993 por la Comisión de las Comunidades
Europeas.
3. Las especies de bacterias encontradas son: Salmonella sp, Enterobacter
aerogenes, Shigella sp, Pantoea aglomerans, Edwardsiella sp,
Citrobacter freundii, Enteobacter cloacae, Staphylococcus sp, Salmonella
arizona; Bacillus sp, Lactobacillus sp, Klebsiella sp; los géneros fungí
encontrados son: Aspergillus sp, Candida sp, Rhizopus sp, Geotrichum
sp, Oidium sp, Penicillun sp.
4. Los géneros bacterianos de mayor patogenicidad detectados son
Klebsiella sp, Staphylococcus sp, Arizona sp. Shigella sp y Pantoea
agglomerans los cuales están ligados a los residuos fecales de animales
y alta humedad; y los géneros fúngicos patógenos encontrados son:
Candida sp, Rhzopus sp, Pencillum sp y el oportunista Aspergillus sp los
cuales indirectamente provocan afecciones en la salud y la agricultura.
49
VII. RECOMENDACIONES
1. En nuestro país se debe implementar normativas legales sobre los valores
límites para agentes biológicos que muestren el nivel de contaminación
de acuerdo a la concentración de bacterias y hongos en el aire
2. Es de suma importancia y prioridad ampliar la investigación con respecto
a la identificación de bacterias y hongos en los ambientes de los hospitales
tales como programas contra los microorganismos que son prejuiciosos
para la salud humana. Puesto que presentan un peligro para la salud y es
necesario y preciso su identificación para su posterior control.
3. Implementar un plan de mejora continua de acuerdo al protocolo de
descontaminación microbiológica, que considere el aire interior, que
constituya un plan de desinfección a nivel de todo el Hospital Es Salud.
4. Para prevenir problemas de salud relacionados con enfermedades
respiratorias, gastrointestinales y de tipo alérgico, se debe realizar de
manera rutinaria un análisis de la calidad microbiológica del aire, así como
una limpieza periódica de cada área para evitar los padecimientos
asociados con los microorganismos presentes en el ambiente interno.
50
VIII. REFERENCIA BIBLIOGRAFICA
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56
IX. ANEXOS
57
ANEXO A – Unidades formadoras de colonias
Cuadro 9. Número de microorganismos por área muestreo.
Ambientes N° de microorganismos x103
1° muestreo 2° muestreo
Centro obstétrico 60x103 544x103
Cirugía 200x103 576x103
Ginecología 25x103 488x103
Pediatría 24x103 968x103
Centro quirúrgico 5x103 4024x103
Laboratorio 26x103 6120x103
Emergencia 9x103 640x103
Trauma shock 11x103 552x103
Cuadro 10. Número de microorganismos por área de muestreo.
Ambientes N° de microorganismos x103
1° muestreo 2° muestreo
Centro obstétrico 2 x10-3 5 x10-3
Cirugía 1 x10-3 2 x10-3
Ginecología 3 x10-3 3 x10-3
Pediatría 1 x10-3 2 x10-3
Centro quirúrgico 1 x10-3 1 x10-3
Laboratorio 2 x10-3 2 x10-3
Emergencia 2 x10-3 3 x10-3
Trauma shock 2 x10-3 2 x10-3
58
ANEXO B – Identificación de microorganismos
Cuadro 11. Presencia de colonias de bacterias en cuatro diferentes medios de
cultivos en el primer muestreo para su posterior identificación
bioquímica.
Ambientes
Medios de Cultivo
CLED M77 Mc
Conkey Manitol salado
Centro obstétrico + - - - Cirugía + - - -
Ginecología + - - +
Pediatría + - - +
Centro quirúrgico + - - -
Laboratorio + - - +
Emergencia + - - +
Trauma shock - - - -
+: Desarrollaron colonias -: no desarrollaron colonias
Cuadro 12. Presencia de colonias de bacterias en cuatro diferentes medios de
cultivos en el segundo muestreo para su posterior identificación
bioquímica.
Ambientes Medios de Cultivo
CLED M77 Mc
Conkey Manitol Salado
Centro obstétrico + + - +
Cirugía + + + -
Ginecología + + - +
Pediatría + + - +
Centro quirúrgico + + - +
Laboratorio + + - +
Emergencia + + - +
Trauma shock + + - + +: Desarrollaron colonias -: No desarrollaron colonias
59
Cuadro 13. Bacterias identificadas morfológicamente por medio de la tinción
de Gram – Primer muestreo.
Ambientes Medios de Cultivo
CLED M77 Mc Conkey
Manitol Salado
Centro obstétrico
Bacillus (Gram -)
Ausencia Ausencia Ausencia
Cirugía Bacillus (Gram -)
Ausencia Ausencia Ausencia
Ginecología Bacillus (Gram +)
Ausencia Ausencia Staphylococcus (Gram +)
Pediatría Staphylococcus (Gram +)
Ausencia Ausencia Staphylococcus (Gram +)
Centro quirúrgico
Bacillus (Gram +)
Ausencia Ausencia Ausencia
Laboratorio Staphylococcus (Gram +)
Ausencia Ausencia Staphylococcus (Gram +)
Emergencia Bacillus (Gram +)
Ausencia Ausencia Bacillus (Gram -)
Trauma shock Ausencia Ausencia Ausencia Ausencia
Cuadro 14. Bacterias identificadas morfológicamente por medio de la tinción
de Gram – Segundo muestreo.
Ambientes Medios de Cultivo
CLED M77 Mc Conkey Manitol Salado
Centro obstétrico
Bacillus (Gram +)
Bacillus (Gram +)
Ausencia Bacillus
(Gram +)
Cirugía Bacillus
(Gram +) Staphylococcus
(Gram +) Cocobacillus
(Gram -) Ausencia
Ginecología Klebsiella Bacillus, Lactobacillus
(Gram +) Ausencia
Lactobacillus (Gram +)
Pediatría Bacillus
(Gram +) Bacillus
(Gram +) Ausencia
Bacillus, Lactobacillus
(Gram +) Centro
quirúrgico Bacillus
(Gram +) Bacillus
(Gram +) Ausencia
Bacillus (Gram +)
Laboratorio Streptomyces
(Gram +) Bacillus
(Gram +) Ausencia
Bacillus (Gram +)
Emergencia Bacillus
(Gram +)
Streptomyces, Bacillus
(Gram +) Ausencia
Bacillus (Gram +)
Trauma shock Bacillus
(Gram +) Bacillus
(Gram +) Ausencia
Bacillus (Gram +)
60
ANEXO C – Tabla de pruebas bioquímicas
Cuadro 15. Tabla de pruebas bioquímicas.
PRUEBA BIOQUIMICA
ESCHERICHIAEA
EDWARDSIELLEAE
SALMONELLEAE KLEBSIELLEAE PROTEEAE
Escherichia
Shigella
Edwardsiella
Salmonell
a
Arizona
Citrobacter Klebsiella pneumoni
a
Enterobacter Serratia Proteus Providencia
Freundii
diversus
cloacae
aerogenes
hafniae
agglomera
ns
marcescens
liquefacien
s
rubidaea
vulgaris
mirabilis
morganii
rettgeri
alcalifaciens
situartii
INDOL (+) (+ o -) (+) (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (+ o -) (-) (-) (-) (+) (-) (+) (+) (+) (+)
MOTILITY (SIM)
(+ o -) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (+) (+) (+ o -) (+) (+) (+ o -) (+) (+) (+ o -) (+) (+) (+)
METHYL RED (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+ o -) (-) (-) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (+) (+) (+) (+) (+) (+)
VOGES -PROSKAUER
(-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (+) (+) (+ o -) (+ o -) (+) (+ o -) (+) (-) (+ o -) (-) (-) (-) (-)
LYSINE DECARBOXYL
ASE (LIA) (d) (-) (+) (+) (+) (-) (-) (+) (-) (+) (+) (-) (+) (+ o -) (+ o -) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
GRAS FROM GLUCOSE
(TSI) (+) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (d) (+ o -) (+) (+ o -) (+ o -)
(+ o -)
(-)
HYDROGEN SULFIDE (TSI)
(-) (-) (+) (+) (+) (+ o -) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (+) (-) (-) (-) (-)
SIMONS CITRATE
(-) (-) (-) (d) (+) (+) (+) (+) (+) (+) (d) (d) (+) (+) (+ o -) (d) (+ o -) (-) (+) (+) (+)
MALONATE (-) (-) (-) (-) (+) (+ o -) (+) (+) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (+ o -) (-) (-) (+ o -) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
UREA (-) (-) (-) (-) (-) (d) (d) (+) (+ o -) (-) (-) (d) (d) (d) (d) (+) (+) (+) (+) (-) (-)
61
Cuadro 16. Resultados de las pruebas bioquímicas del primer muestreo en el
medio de cultivo de CLED.
MEDIOS DE CULTIVO
PRUEBAS BIOQUIMICAS
AMBIENTES
Cirugía C. Obstétrico Ginecología
CLEED
INDOL (-) (-) (-)
RM (-) (+) (+)
RMVP (+) (-) (-)
CITRATO (-) (-) (-)
TSI K/A + gas A/A A/A
UREA (-) (-) (-)
SIM (-) (-) (-)
LIA K/K K/A K/K
MALONATO (-) (-) (-)
Genero encontrado
Enterobacter agglomerans
Salmonella sp
Shigella sp
Cuadro 17. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en
el medio de cultivo de M77.
MEDIOS DE CULTIVO
PRUEBAS BIOQUIMICAS
AMBIENTE
Cirugía
M. CONKEY
INDOL (-)
RM (+)
RMVP (-)
CITRATO (-)
TSI K/K
UREA (-)
SIM (-)
LIA K/A
MALONATO (-)
Genero encontrado
Shigella sp
62
Cuadro 18. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en el medio de cultivo de CLED.
PRUEBAS BIOQUIMICAS
AMBIENTES
C. Obstétrico Cirugía Ginecología C. Quirúrgico Pediatría T. Shock Emergencia Laboratorio
INDOL (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) RM (-) (+) (+) (-) (+) (+) (+) (+)
RMVP (+) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (-) CITRATO (+) (-) (-) (+) (+) (+) (+) (+)
TSI K/A A/A A/A K/A + H2S A/A K/A K/A + gas K/A UREA (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) SIM (-) (-) (-) (+) + H2S (+) + H2S (+) + H2S (+) + H2S (+) + H2S LIA K/A A/A A/A K/K K/K K/K K/A K/K
MALONATO (+) (-) (-) (-) (-) (+) (+) (+)
Genero encontrado
Enterobacter aerogenes
Salmonella sp
Salmonella sp
Enterobacter cloacae
Citrobacter freundii
Citrobacter freundii
Salmonella arizona
Citrobacter freundii
63
Cuadro 19. Resultados de las pruebas bioquímicas del segundo muestreo en el medio de cultivo de M77.
PRUEBAS
BIOQUIMICAS
AMBIENTES
Centro.
Obstétrico Cirugía
Centro.
Quirúrgico Ginecología Pediatría
Trauma.
Shock
Emergencia
1
Emergencia
2
Laboratorio
1 Laboratorio 2
INDOL (-) (-) (-) (+) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
RM (+) (+) (+) (+) (+) (+) (-) (+) (-) (+)
RMVP (-) (-) (-) (-) (-) (-) (+) (-) (+) (-)
CITRATO (+) (+) (+) (-) (+) (+) (+) (+) (+) (+)
TSI A/A + gas K/K K/A A/A K/A K/A K/A K/A K/A K/A
UREA (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-) (-)
SIM (-) (-) (-) (+) (+) + H2S (+) + H2S (+) + H2S (-) (+) + H2S (+) + H2S
LIA K/A K/K K/A K/A K/K K/K K/A K/K K/A K/K
MALONATO (-) (+) (-) (-) (+) (+) (-) (-) (+) (+)
Genero
encontrado
Salmonella
sp
Citrobacter
freundii
Salmonella
sp Edwardsiella
Citrobacter
freundii
Citrobacter
freundii
Enterobacter
aerogenes
Pantoea
aglomerans
Enterobacter
aerogenes
Salmonella
arizona
64
ANEXO D – Galería de imágenes
Figura 8. Muestreo de bacterias y hongos en las diferentes áreas del Hospital
EsSalud.
Figura 9. Muestreo de bacterias y hongos en el área de Centro Quirúrgico.
65
Figura 10. Conteo de bacterias en el equipo contador de bacterias.
Figura 11. Preparación de muestras para realizar la coloración Gram (+) y (-).
66
Figura 12. Siembra en las pruebas bioquímicas.
Figura 13. Diferenciación en los resultados de las pruebas bioquímicas.
67
Figura 14. Muestras de aire en CLED, Mack Conkey, Manitol Salado Y M77.
Figura 15. Crecimiento de Staphylococcus en medio de cultivo CLED - Primer
muestreo.
68
Figura 16. Crecimiento de Staphylococcus epidermides en medio de cultivo
Manitol Salado - segundo muestreo.
Figura 17. Crecimiento de en Enterobacter sp en medio de cultivo Manitol
Salado - segundo muestreo.
69
Figura 18. Crecimiento de Staphylococcus aureus en medio de cultivo Manitol
Salado - segundo muestreo.
Figura 19. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X.
70
Figura 20. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X.
Figura 21. Staphylococcus sp observados al microscopio con aumento de 100X.
71
Figura 22. Bacillus sp (esporulados) observados al microscopio con aumento
de 100X.
Figura 23. Streptomyces sp observados al microscopio con aumento de 100X.
72
Figura 24. Bacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X.
Figura 25. Lactobacillus sp observados al microscopio con aumento de 100X.
73
Figura 26. Muestras de aire en Agar Saburaud –segundo muestreo.
Figura 27. Microcultivo de muestras Fungí – Centro Quirúrgico.
74
Figura 28. Aspergillus sp observado al microscopio con aumento de 40X.
Figura 29. Aspergillus sp observado al microscopio con aumento de 40X.
75
Figura 30. Penicillum sp observado al microscopio con aumento de 40X.
Figura 31. Geotrichum sp observado al microscopio con aumento de 40X.
76
Figura 32. Candida sp observado al microscopio con aumento de 40X.
Figura 33. Rhizopus sp observado al microscopio con aumento de 40X.