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CAMACHO LUNA MITZI SORAYAVERGEL JIMÉNEZ LAURA MIRIAMEQUIPO: 18

PRÁCTICA 6

“HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA Y ENSAYOS PARA PROTEÍNAS Y AMINOÁCIDOS”

INSTITUTO POLITÉCNICO NACIONAL ESCUELA NACIONAL DE CIENCIAS BIOLÓGICAS

QUÍMICO BACTERIÓLOGO PARASITÓLOGOQUÍMICA BIOORGÁNICA

Profesores:Adriana Benavides MacíasAlberta de la Rosa IbáñezHugo Alejandro Jiménez Vázquez

OBJETIVOS

2. IDENTIFICAR ALGUNOS AMINOÁCIDOS PRESENTES EN UN HIDROLIZADO Y DESNATURALIZADO, POR MEDIO DE SUS PROPIEDADES FÍSICOQUÍMICAS.

1. EFECTUAR LA HIDRÓLISIS Y DESNATURALIZACIÓN DE UNA PROTEÍNA.

3. IDENTIFICAR POR CROMATOGRAFÍA EN PLACA FINA ALGUNOS DE LOS AMINOÁCIDOS PRESENTES EN UN HIDROLIZADO DE PROTEÍNA.

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INTRODUCCIÓN • Las proteínas son las macromoléculas más

versátiles de los seres vivos y desempeñan funciones cruciales en prácticamente todos los procesos biológicos.

• Funcionan como catalizadores, transportan y almacenan otras moléculas como el oxígeno.

• Proporcionan apoyo mecánico y protección inmunológica, generan movimiento, transmiten impulsos nerviosos y controlan el crecimiento y diferenciación.

• Las proteínas son polímeros lineales construidos a partir de monómeros llamados aminoácidos, empalmados unos con otros.

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AMINOÁCIDOSLos a aminoácidos son compuestos orgánicos que se combinan para formar proteínas. Los a aminoácidos y las proteínas son los pilares fundamentales de la vida.

Los 20 aminoácidos tienen características estructurales comúnes

Carbono a

Grupo R

Grupo amino Acido carboxílico

Difieren en:Grupos REstructuraTamañoCarga eléctrica

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El átomo de Carbono a es un centro quiral.

Los aminoácidos son imágenes especulares no superponibles (enantiómeros)Ópticamente activas, es decir, pueden hacer girar el plano de la luz polarizada con la dirección de rotación diferente para los diferentes enatiómeros

AMINOÁCIDOSLa configuración absoluta del centro quiral puede ser:L: izquierdaD: derecha

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LOS AMINOÁCIDOS SE CLASIFICAN SEGÚN SU GRUPO R

PROPIEDADES ACIDO-BASE DE LOS AMINOÁCIDOS

• Todo aminoácido tiene un grupo carboxilo y un grupo amino, y cada grupo puede existir en forma acida o en forma básica, dependiendo del pH de la disolución en que este disuelto.

• La forma acida (esto es, con sus protones unidos a ellos) predomina si el pH de la disolución es menor que el pKa del grupo ionizable y que predomina la forma básica (esto es, sin sus protones) si el pH de la disolución es mayor que el pKa del grupo ionizable.

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• Los a aminoácidos que solo tienen un grupo amino y un grupo carboxilo cristalizan a partir de soluciones acuosas neutras en forma de especies totalmente ionizadas llamadas zwitteriones.

LOS AMINOÁCIDOS SE IONIZAN EN SOLUCIÓN ACUOSA

PUNTO ISOELÉCTRICO • El punto isoeléctrico (pI) de un aminoácido es el pH al cual no tiene carga

neta, es decir, es el pH al cual la cantidad de carga positiva en un aminoácido es exactamente a la cantidad de carga negativa.

• Un aminoácido tiene carga positiva si el pH de la disolución es menor que el pI del aminoácido, y tendrá carga negativa si el pH de la disolución es mayor que el pI del aminoácido.

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PÉPTIDOS Dos moléculas de aminoácidos pueden unirse de forma covalente a través de un enlace amida sustituido, denominado enlace peptídico, formando un dipéptido.

Los péptidos que se encuentran en la naturaleza varían en su forma, tamaño desde pequeñas moléculas que contienen 2 o 3 aminoácidos hasta macromoléculas con miles de ellos.

El enlace peptídico es el enlace covalente más importante que une aminoácidos en los péptidos y proteínas.

El residuo aminoácido del final de un péptido tiene un grupo:amino libre- amino terminalcarboxilo- carboxilo terminal

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MECANISMO: FORMACIÓN DE UN ENLACE PEPTÍDICO.

12LOS PÉPTIDOS TIENEN RELACIONES QUÍMICAS

CARACTERÍSTICASLos péptidos experimentan reacciones químicas que son características de sus grupos funcionales:Los grupos amino, carboxilo libres y los grupos R.

La hidrólisis de los enlaces peptídicos es un paso necesario en la determinación de la composición en los aminoácidos de las proteínas.

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PROTEÍNASLas proteínas proporcionan estructura, catalizan reacciones celulares y llevan a cabo una multitud de tareas

Se clasifican de acuerdo a su función biológica

Enzimas Son las proteínas más variadas y altamente especializadas, son las que tienen actividad catalítica. Todas las reacciones químicas de las biomoléculas orgánicas están catalizadas por enzimas.

Proteínas de transporte Las proteínas de transporte del plasma sanguíneo fijan y transportan moléculas o iones específicos de un órgano a otro. En las membranas plasmáticas e intracelulares de todos los organismos están presentes otros tipos de proteínas transportadoras, estás proteínas están adaptadas para fijar glucosa, aminoácidos u otras sustancias y transportarlas a través de la membrana.

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Proteínas nutrientes y de reserva Las semillas de muchas plantas almacenan proteínas nutrientes requeridas para el crecimiento de las semillas en germinación.La ovoalbúmina, principal proteína de la clara de huevo.

Proteínas contráctiles o móviles Algunas proteínas confieren a las células y orgánulos la capacidad de contraerse, cambiar de forma o moverse.

Proteínas estructurales Muchas proteínas actúan como filamentos de soporte, para conferir fuerza o protección a las estructuras biológicas. El principal componentes de los tendones y cartílagos es la proteína fibrosa de colágeno, que posee una resistencia a la tensión.

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Proteínas reguladoras Algunas proteínas ayudan a regular la actividad celular o fisiológica, entre ellas se encuentran las hormonas.

Proteínas de defensa Muchas proteínas defienden a los organismo contra la invasión por otras especies o los protegen contra las heridas.Los anticuerpos, son proteínas especializadas fabricadas por los linfocitos, pueden reconocer y neutralizar bacteria, virus o proteínas invasoras de otras especies.

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ESTRUCTURA TRIDIMENSIONAL DE LAS PROTEÍNASCada proteína tiene una función química

o estructural específica, lo que sugiere que cada proteína posee una estructura tridimensional única

1. La estructura tridimensional de una proteína viene determinada en primer lugar por su secuencia de aminoácidos.2. La función de una proteína depende de su estructura tridimensional.

3. La estructura tridimensional de una proteína es única

4. Las fuerzas que que estabilizan la estructura tridimensional específica de una proteína son interacciones no covalentes.

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ESTRUCTURA PRIMARIAIncluye todos los enlaces covalentes entre aminoácidos unidos por enlace peptídicos y la localización de los puentes disulfuro

Por convención el orden de escritura es siempre desde el grupo amino-terminal hasta el carboxilo final

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ESTRUCTURA SECUNDARIA • Las cadenas polipéptidicas se pueden plegar en estructuras regulares

como la hélice alfa, la hoja plegada beta.• En 1951 Linus Pauling y Robert Corey propusieron 2 estructuras

periódicas llamadas hélice a y la hoja plegada B

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LA CONFORMACIÓN DE UNA PROTEÍNA ESTÁ ESTABILIZADA POR INTERACCIONES DÉBILES

• Puente de Hidrógeno atracción electroestática resultante en entre el átomo de oxígeno de una molécula de agua y el hidrógeno de otra.

• Interacciones iónicas son interacciones electroestáticas que se producen entre átomos o grupos cargados.

• Interacciones hidrofóbicas Fuerzas que mantienen juntas las regiones apolares de las moléculas, estás se forman para alejarse de las interacciones con el agua.

• Fuerzas de van der Waals Cuando 2 átomos no cargados se encuentran muy cerca, las nubes electrónicas que los rodean se influyen mutuamente. Se crea un dipolo electrico transitorio, que induce un dipolo opuesto también, entonces los dos dipolos se atraen débilmente.

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ESTRUCTURA SECUNDARIA• Una hélice alfa es una apretada hélice formada por una cadena polipeptídica, se va enrollando

en espiral sobre si misma debido a los giros que se producen en torno al carbono-α de cada aminoácido.

• La cadena polipeptídica principal forma la estructura central, y las cadenas laterales se extienden por fuera de la hélice.

• El grupo carboxilo (CO) de un aminoácido se une por puente hidrógeno al grupo amino (NH) de otro aminoácido.

• De esta manera cada grupo CO y NH de la estructura central se encuentra unido por puente hidrógeno.

Hélice a

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ESTRUCTURA SECUNDARIAHélice a

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ESTRUCTURA SECUNDARIALáminas βLas láminas beta son el otro tipo de estructura secundaria.

• Es la conformación mas extendida posible en las cadenas polipeptídicas• Se encuentra extendida en zig-zag• Paralelas con la misma orientación amino-carboxilo en el polipéptido• Antiparalelas con orientaciones opuestas

Paralela Antiparalela

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ESTRUCTURA TERCIARIALa estructura terciaria esta representada por los super plegamientos y enrrollamientos de la estructura secundaria, constituyendo formas tridimensionales geométricas muy complicadas que se mantienen por enlaces fuertes y otros débiles.

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ESTRUCTURA TERCIARIADesde el punto de vista funcional, esta estructura es la más importante pues, al alcanzarla es cuando la mayoría de las proteínas adquieren su actividad biológica o función.

• Muchas proteínas tienen estructura terciaria globular caracterizadas por ser solubles en disoluciones acuosas, como las enzimas.

• No todas las proteínas llegan a formar estructuras terciarias. En estos casos mantienen su estructura secundaria alargada dando lugar a las llamadas proteínas filamentosas, que son insolubles en agua y disoluciones salinas siendo por ello idóneas para realizar funciones esqueléticas.

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ESTRUCTURA CUATERNARIA• Muchas proteínas están constituidas por más de una cadena polipeptídica, se conocen con el

nombre de proteínas oligómeras y a cada cadena como protómero.

• La estructura cuaternaria se refiere al modo en el que encajan unas cadenas polipeptídicas con otras.

• La estructura cuaternaria se mantiene gracias a interacciones de tipo débil entre cadenas laterales de aminoácidos pertenecientes a las distintas cadenas (puentes de hidrógeno, uniones electrostáticas, fuerzas de van der Waals).

• Las cadenas polipeptídicas encajan unas en otras perfectamente como consecuencia de su configuración tridimensional.

• Las distintas subunidades tienen capacidad de autoensamblaje, es decir, reasociarse de manera espontánea.

• No todaslas proteínas se pliegan espontáneamente a medida que se sintetizan. En muchas proteínas el plegamiento está facilitado o asistido por la acción de otras proteínas llamadas chaperonas y chaperoninas

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HEMOGLOBINA formada por cuatro cadenas polipeptídicas iguales dos a dos

ESTRUCTURA CUATERNARIA

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HIDRÓLISIS DE UNA PROTEÍNA• La hidrólisis de proteínas es la ruptura de la estructura primaria, es decir la

ruptura de la secuencia de una proteína.• La hidrólisis de las proteínas termina por fragmentar las proteínas en a

aminoácidos.

Existen 3 tipos de hidrólisis :

• Hidrólisis ácida: Se basa en la ebullición prolongada de la proteína con soluciones ácidas fuertes (HCl y H2SO4). Este método destruye completamente el triptófano y parte de la serina y la treonina.

• Hidrólisis básica: Respeta los aminoácidos que se destruyen por la hidrólisis anterior, pero con gran facilidad, forma racematos. Normalmente se utiliza NaOH ó BaOH

• Hidrólisis enzimática: Se utilizan enzimas proteolíticas cuya actividad es lenta y a menudo incompleta, sin embargo no se produce racemización y no se destruyen los aminoácidos; por lo tanto es muy específica.

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DESNATURALIZACIÓN DE UNA PROTEÍNA. • Cuando la proteína no ha sufrido

ningún cambio en su interacción con el disolvente, se dice que presenta una estructura nativa.

• La destrucción de la estructura terciaria de una proteína altamente organizada se llama desnaturalización. Todo lo que rompa los enlaces que mantienen la forma tridimensional de la proteína hará que se desnaturalice (SE DESDOBLE). Como esos enlaces son débiles, las proteína se desnaturalizan con facilidad. La conformación totalmente aleatoria de una proteína desnaturalizada se llama espiral aleatoria.

FORMAS DE DESNATURALIZAR A LAS PROTEÍNAS

• Un cambio de pH desnaturaliza a las proteínas por que cambia las cargas de muchas de sus cadenas laterales. Con eso se interrumpen las atracciones electrostáticas y los puentes de hidrogeno.

• Los disolventes orgánicos desnaturalizan a las proteínas al romper las interacciones hidrofobias.

• También se pueden desnaturalizar las proteínas con calor o con agitación. Las dos cosas aumentan el movimiento molecular, que puede alterar las fuerzas de atracción. Un ejemplo bien conocido es el cambio que se produce en la clara de huevo cuando se calienta o se bate.

• Interacciones de estabilización que son las responsables de la estructura terciaria de una proteína.

31AMINOÁCIDOS PRINCIPALES DE LA GRENETINA

Grupos R alifáticos Grupos R aromáticos

Grupos R polares sin carga

Tirosina

Glicina

Prolina

Alanina

Valina Leucina

Glutamina

Grupos R cargados positivamente

Arginina

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AMINOÁCIDOS PRINCIPALES DE LA ALBÚMINA

Grupos R polares sin carga

Treonina

Grupos R cargados positivamente

Lisina Histidina

Grupos R aromáticos

Fenilanina TriptofanoMetionina

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REACCIÓN XANTOPROTEÍCA• Determina la presencia de proteínas en una

muestra.• Esta reacción se debe a la presencia de un

grupo fenilo con un grupo activante en la molécula proteica.

• Los complejos de la molécula proteica que son de importancia son la tirosina y el triptófano.

• La fenilalanina no reacciona en las condiciones que se realiza en el laboratorio.  

• La reacción Xantoproteíca se puede considerar como una sustitución electrofílica aromática, de los residuos de triptofano de las proteínas por el acido nítrico que reacciona.

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¿QUÉ CRITERIO SE UTILIZA PARA DETERMINAR SI LA PRUEBA RESULTA POSITIVA O NEGATIVA?

Positiva

• La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con:

• Aminoácidos portadores de grupos aromáticos

• Da un compuesto color amarillo a pH ácido

• La adición de base fuerte hace que el color se torne más oscuro hacia anaranjado.

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REACCIÓN DE PRECIPITACIÓNEl enlace disulfuro es un enlace covalente que se produce cuando dos grupos sulfhidrílo (SH) reaccionan para formar un puente disulfuro (SS)

• Los residuos de cisteína pueden formar puentes disulfuro

• Pueden unir 2 cadenas peptídicas o una sola para formar un anillo

¿QUÉ CRITERIO SE UTILIZA PARA DETERMINAR SI LA PRUEBA RESULTA POSITIVA O NEGATIVA?

Positiva

• La prueba resulta positiva en los enlaces peptídicos que contengan residuos de cisteína

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REACCIÓN DE BIURET• La producen los péptidos y las proteínas, pero

no los aminoácidos, ya que se debe a la presencia

del enlace peptídico (- CO- NH -) que se destruye kkal liberarse los aminoácidos

• Cuando una proteína se pone en contacto con un álcali concentrado (NaOH ó KOH), se forma una sustancia compleja denominada Biuret.

La reacción se basa en la formación de un complejo de coordinación entre los iones Cu2+ y los pares de electrones no compartidos del nitrógeno que forma parte de los enlaces peptídicos

El Cu, en un medio fuertemente alcalino, se une con los enlaces peptídicos formando un complejo de color violeta (Biuret) cuya intensidad de color depende de la concentración de proteínas.

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¿QUÉ CRITERIO SE UTILIZA PARA DETERMINAR SI EL MISMO RESULTA POSITIVO O NEGATIVO?

• El Hidróxido de sodio no participa en la reacción, pero proporciona el medio alcalino necesario para la reacción tenga lugar.

Positiva

• El reactivo, de color azul vira a violeta en presencia de proteínas

• Se refiere a que se ha detectado presencia de enlaces peptídicos

Negativa

• El reactivo vira a rosa cuando se combina con polipéptidos de cadena corta

REACCIÓN CON NINHIDRINA• La ninhidrina es un reactivo común para la visualización de manchas o

bandas de aminoácidos que se han separado por electroforésis o cromatografía. Cuando la ninhidrina reacciona con los grupos amino de un aminoácido, uno de los productos es un anión violeta oscuro estabilizado por resonancia llamado púrpura de Ruhemann. La ninhidrina produce este mismo colorante purpura sin importar la estructura del aminoácido original. La cadena lateral del aminoácido se pierde como un aldehído.

¿QUÉ CRITERIO SE UTILIZA PARA DETERMINAR SI LA PRUEBA RESULTA POSITIVA O NEGATIVA?

Positiva

• La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con:

• a aminoácidos con un grupo amino primario produciendo una coloración purpura.

• La prolina que tiene un grupo amino secundario reacciona diferente dando lugar a una coloración amarilla.

REACCIÓN CON ÁCIDO NITROSO• Las aminas primarias reaccionan con ácido nitroso, mediante el ion

nitrosonio, para formar los cationes diazonio que tienen la estructura R-N-N. Este procedimiento se llama diazotización de una amina. Las sales de diazonio son productos útiles obtenidos de las reacciones de las aminas con acido nitroso. El mecanismo para la formación de la sal de diazonio comienza con un ataque nucleofílico sobre el ion nitrosonio para formar una N-nitrosoamina.

• Esta reacción nos ayuda a identificar los grupos amino libres mediante la cantidad de nitrógeno liberado.

¿QUÉ CRITERIO SE UTILIZA PARA DETERMINAR SI LA PRUEBA RESULTA POSITIVA O NEGATIVA?

Positiva

• La prueba da resultado positivo en aquellas proteínas con:

• Aminoácidos libres produciendo liberación o desprendimiento de gases en forma de gases.

ACCIÓN REGULADORA DE AMINOÁCIDOS

• Los aminoácidos en disolución acuosa, muestran un comportamiento anfótero, es decir pueden ionizarse dependiendo del pH.

• El grupo a-amino y el grupo a-carboxilo pueden protonarse o desprotonarse dependiendo del pH del medio:

1) El grupo a-carboxilo se protona a un pH alrededor de 2 (en este valor de ph el grupo amino se encuentra protonado).

2) El grupo a-amino se desprotona a un pH alrededor de 9.

CROMATOGRAFIA EN PLACA FINALa propiedad física en la que se basa la separación depende del material solido y del disolvente que se escoja como fase móvil. Dependiendo de sus polaridades, los aminoácidos tienen diferentes afinidades la fase móvil (eluyente) y la estacionaria (placa) y en consecuencia ascienden en la placa con distinta rapidez.Mientras mas polar sea el aminoácido se adsorbe con mas fuerza a la placa, que es relativamente mas polar. Los aminoácidos menso polares ascienden por la placa con una mayor rapidez porque presentan mas afinidad por la fase móvil (eluyente).

• Los aminoácidos mas polares son los que tiene cadenas laterales con carga; los siguientes en polaridad son los que tiene cadenas laterales que pueden formar puentes de hidrogeno, y los menos polares son aquellos con cadenas laterales de hidrocarburos. Para aminoácido con cadena lateral de hidrocarburo, mientras mayor sea el grupo alquilo, el aminoácido es menos polar.

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PARTE EXPERIMENTAL

49REACTIVOSACETATO DE PLOMO HIDROXIDO DE SODIO CARBON ACTIVADO

P.M.: 379.34 g/mol P.M. 40.01 g/mol P.M. 12.01 g/molPunto de ebullición: 100°C Punto de ebullición: 1390 ° C Punto de ebullición:4827 °C

Punto de fusión: 75 °C Punto de fusión: 318 ° C Punto de fusión: 3550 °C

Solubilidad:443 g/l (20 °C) Solubilidad: Soluble en agua y también en alcoholes como metanol y etanol.

Solubilidad: No es soluble.

P.Toxicológicas •Tumorigeno,mutageno, efectos reproductivos.

P.Toxicológicas •Ingestión: quemaduras severas de boca, garganta y estómago.•Inhalación: irritación en el tracto respiratorio.•Contacto: irritación, y severas quemaduras.

P.Toxicológicas•Ingestión: nocivo de baja toxicidad •Inhalación: irritaciones en el tracto respiratorio •Contacto: irritaciones y enrojecimiento.

C

50ACIDO CLORHIDRICO ÁCIDO NÍTRICO

(HNO3) FENOLFTALEINA:

P.M.:36.46 g/mol P.M. 63.02 g/mol. P.M.:318.32 g/mol

Punto de ebullición:48.72 °C. Punto de ebullición:86 °C.

Punto de fusión:– 66 °C. Punto de fusión: 42 °C. Punto de fusión: 258°C – 262°C

Solubilidad: Es soluble en agua, desprendiéndose calor.

Solubilidad: Completamente miscible en agua.

Solubilidad: Insoluble en agua; soluble en alcohol.

P.Toxicológicas •Inhalación: El gas causa dificultad para respirar, tos e inflamación y ulceración de nariz, tráquea y laringe.•Contacto con la piel: Causa quemaduras serias, dermatitis y fotosensibilización.•Ingestión: Produce corrosión de las membranas mucosas de la boca, esófago y estómago.

P.Toxicológicas •Inhalación: Problemas para respirar, irritación del tracto respiratorio y dolor del tórax. •Contacto con la piel: Causa quemaduras severas, la piel adquiere un color amarillo y se presenta dolor y dermatitis.•Ingestión: Salivación, sed intensa, dificultad para tragar, dolor y shock. Se producen quemaduras en boca, esófago y estómago, hay dolor estomacal y debilitamiento.

P.Toxicológicas •Inhalación: Puede provocar irritación en las vías respiratorias.•Ingestión: A l ingerir grandes dosis puede provocar trastornos gastrointestinales. •Contacto con los ojos: Puede causar irritación y ardor•Contacto con la piel: Puede causar irritación y enrojecimiento de la piel.

HCI

51NINHIDRINA NITRITO DE SODIO SULFATO DE COBRE

P.M.:178.15 g/mol P.M.:69 g/mol P.M.:159,6 g/mol

Punto de ebullición: 652.78 º C

Punto de fusión: 250 – 258 ºC Punto de fusión: 271°C Punto de fusión: 150 °C

Solubilidad: En agua 20 g/l a 20 ºC Solubilidad: 45% en agua. Solubilidad:31.6 g / 100 ml de agua  

•P.Toxicológicas Ingestión: Irritación de las mucosas en la boca, garganta, esófago y tracto estomago – intestinal.•Inhalación: Tos, insuficiencia respiratoria, irritación de las mucosas.•Contacto con la piel: Provoca irritación cutánea. •Contacto con los ojos: Provoca irritación ocular grave.

P.Toxicológicas •Inhalación: Irritación en el tracto respiratorio •Ingestión: puede bajar la presión sanguínea, dolor de cabeza, nauseas, vómitos.•Contacto con los ojos: Puede dañar la cornea, dificultar la visión y causar conjuntivitis. •Contacto con la piel: Irritación no muy severa.

•P.Toxicológicas Inhalación: Causa irritación del tracto respiratorio pudiendo resultar en ulceraciones y/o perforaciones del mismo. •Contacto con la piel: Es irritante y corrosivo sobre la piel. Puede causar quemaduras severas si no se lava a tiempo. •Ingestión: Provoca irritación severa en el sistema digestivo dolor abdominal, nauseas, vomito y diarrea. Puede causar hemorragias en el tracto-digestivo.

52VALINA GLICINA ALANINA

P.M.:117.15   g/mol P.M.:75,07 g/mol P.M.:159,6 g/mol

Punto de fusión: 315ºC Punto de fusión: : 232-236 ºC Punto de fusión: 295-297 °C

Solubilidad: 5.70 g/100 g en agua a 20 ºC; insoluble en solventes neutrales comunes.

Solubilidad: 250 g/l en agua a 20°C Solubilidad:166.5 g/l a 25°C en agua

•P.Toxicológicas Ingestión: Irritación de las mucosas en la boca, garganta, esófago y tracto estomago – intestinal.•Inhalación: Tos, insuficiencia respiratoria, irritación de las mucosas.•Contacto con la piel: Provoca irritación cutánea. •Contacto con los ojos: Provoca irritación ocular grave.

P.Toxicológicas •Sustancia no toxica.

•P.Toxicológicas En la piel: No produce irritaciones.•En el ojo: No produce irritaciones.•Tras inhalación No produce irritaciones.•Sensibilización: No se conoce ningún efecto sensibilizante.

53FENILALANINA

P.M.:165.19   g/mol

Punto de ebullición:

Punto de fusión: 279 – 283 º C

Solubilidad: Agua soluble (1:35),etanol ligeramente soluble, cloroformo ligeramente soluble, éter ligeramente soluble.

P.Toxicológicas• Sustancia no peligrosa.

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PARTE EXPERIMENTALPreparación de soluciones

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I. HIDRÓLISIS DE GRENETINA (SOLUCIÓN “A“).

1g de Grenetina

10 mL de HCL

200 mL

Calentar por 35 min

* Adicionar 0.5 g de carbón activado

*Continuar calentando por 2 min

*Filtrar

10 mL de H2O destilada

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MECANISMO DE HIDRÓLISIS

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II. SOLUCIÓN NEUTRALIZADA DE HIDROLIZADO DE GRENETINA (SOLUCIÓN

“B“)

Tomar 5.0 mL de la solución “A“

Neutralizar con:

10%Neutralizar Filtrar

NOTA: Utilizar la solución B para efectuar* Cromatografía * Prueba de Ninhidrina* Acción reguladora de aminoácidos

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III. SOLUCIÓN DE GRENETINA SIN HIDROLIZAR (SOLUCIÓN “C“).

0.5 g de Grenetina

20 mL de H2O destilada

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IV. SOLUCIÓN DE ALBÚMINA (SOLUCIÓN “D“).Preparar una solución de

Albúmina.

Agitar la clara de huevo por 10 segundos. • Agregar 100 mL

de agua• Agitar

Filtrar en manta de cielo.

NOTA: Utilizar el filtrado (solución “D“) para efectuar las siguientes pruebas.

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REACCIONES DE IDENTIFICACION

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1) REACCIÓN XANTOPROTEÍCA

Tubo 1 Tubo 2

2 mL de grenetina Hirolizada(Sol. A)

2 mL deAlbúmina(Sol. D)

5 mL de HNO3 a cada tubo

Calentar a baño María y observar coloración

• Enfriar• Agregar

NaOH hasta un pH básico

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SUSTITUCIÓN ELECTROFÍLICA

AROMÁTICA

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2) REACCIÓN DE PRECIPITACIÓN

2 mL de grenetina hidrolizada (Sol. A)

2 mL de albúmina (Sol. D)

2 mL de agua destilada

Agregar a cada tubo 5 mL de NaOh y 1.0 mL de Acetato de Plomo

Calentar a ebulliciónObservar

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3) REACCIÓN DE BIURET

Tubo 1 Tubo 2 Tubo 3

Tubo 4 Tubo 5 Tubo 6

Testigo

*0.5 mL Agua destilada *0.5 mL de NaOH

*0.5 mL grenetina sin hidrolizar (Sol. C)*0.5 mL de NAOH

* 0.5 mL de albúmina (Sol. D)

* 0.5 mL de grenetina hidrolizada (Sol. A)* 0.5 mL de NaOH

* 0.5 mL albúmina* 0.5 mL de NaOH

* 0.5 mL de grenetina hidrolizada (Sol. A)

A cada tubo agregar 2 mL de CuSO4 al 2%

Concluir

4)REACCION CON NINHIDRINA

0.5 mL de agua destilada

0.5 mL de sol de grenetina hidrolizada “Solución B”

0.5 mL de sol de grenetina sin hidrolizada “Solución C”

0.5 mL de sol. De albumina “Solución C”

0.5 mL de sol. al 1% de un aminoacido patrón.

Agregar a cada tubo 0.5 mL de sol. De ninhidrina al 3% y calentar a baño María

Observar y concluir

5)REACCIÓN CON ACIDO NITROSO

HCI +

2 mL hidrolizado de grenetina “Solución B”

HCI +

2 mL grenetina sin

hidrlolizar “Solución C”

HCI +

2 mL sol. De albumina

“Solución D”

HCI +

Tubo testigo sin proteina

Enfriar +

1mL de sol. acuosa de

NaNO2

Observar y concluir

5) ACCION REGULADORA2mL de

hidrolizado de grenetina a Ph

neutro “Solución B”

+Sol. Indicadora de rojo Congo.

2mL de agua destilada

+Sol. Indicadora de rojo Congo

Agregar gota a gota HCI 0.1

hasta un cambio de coloración.

Agregar gota a gota HCI 0.1

hasta un cambio de coloración.

5) ACCION REGULADORA2mL de

hidrolizado de grenetina a Ph

neutro “Solución B”

+Fenolftaleína

0.1%.

2mL de agua destilada

+Fenolftaleína

0.1%.

Agregar gota a gota NaOH 0.1

hasta un cambio de coloración.

Agregar gota a gota NaOH 0.1

hasta un cambio de coloración.

6) CROMATOGRAFIA EN PLACA FINA

Hidrolizado de grenetina neutra “Solución B”

Patrón de a. a 1Patrón

de a. a 2

Mezcla de alcohol

terbutilico-agua 3:1

Eluir el cromatograma y secar en estufa

Revelar con ninhidrina y determinar

los valores de Rf.

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BIBLÍOGRAFIA• Jeremy M. Berg, John L. Tymoczko, Lubert Stryer.“Bioquímica”. 6ª Edición.

Reverté.2009.Pag. 25-37.• LEHNINGER, David L. Nelson, Michael M. Cix, “Principios de Bioquímica“,

2ª edición, Ediciones Omega. Pag. 110-200• WADE, Leroy.”Química Orgánica”. Volúmen 2. 7ª Edición. Editorial

PearsonEducacion.México.2011.Pag.755-756;1010-1011;1169,1177.• YURKANIS BRUICE,Paula. “Química Órganica”. 5ª Edición. Editorial

PearsonEducacion.México.2008.1017-1030;1052-1058.