PRACTICA 04: EXAMEN COPROPARASITOSCÓPICO, TÉCNICA DIRECTA

OBJETIVOS: Realizar un examen Coproparasitoscópico (cps), a una muestra de heces con

el fin de buscar e identificar formas parasitarias.

MATERIAL:- Aplicadores de madera Papel de estraza- Portaobjetos cubreobjetos- Solución de lugol tubos de ensaye de 13x100- Microscopio sol. Salina fisiológica

PROCEDIMIENTO 1. En un portaobjetos se colocan, separadamente (en cada extremo), una gota de solución salina fisiológica y otra de lugol.2. Con uno o dos aplicadores de madera, se toma una muestra de 1 a 4 mg de heces y se mezcla con la solución salina, haciendo una suspensión homogénea.3. Con el mismo aplicador se retiran las fibras y otros fragmentos gruesos.4. Se coloca el cubreobjetos.5. Se efectúa la misma operación en la gota de lugol.6. Se observa al microscopio, primero con objetivo seco débil y después con el seco fuerte.7. La preparación con solución salina, sirve para identificar y reportar el hallazgo de trofozoítos. La preparación con lugol sirve para reportar el hallazgo de quistes, huevos y larvas.8. Realiza el dibujo de lo observado.9. RECUERDA: la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que se tendrán los cuidados necesarios para su manejo que garanticen la correspondiente bioseguridad.

CUESTIONARIO

1. Explica que son los protozoarios, estadios que presentan y cuáles son las

especies patógenas más comunes para el hombre

Los protozoarios son organismos unicelulares cuya unidad es una célula eucariota

con capacidad para cumplir todas las funciones requeridas para asegurar la

persistencia de la especie. 

El núcleo está rodeado por el citoplasma, rico en organelas, donde se efectúan

una parte importante de los procesos fisiológicos. Lo separa del medio externo la

membrana plasmática. Esta última tiene gran importancia en la vida del parásito,

tanto para el reconocimiento del huésped como para la adaptación a cada uno de

sus hábitats.

1.- Phylum Sarcomastigophora:- Subphylum Mastigophora.Utilizan flagelos como medio de locomoción. Cada uno de ellos está formado por un filamento (axonema) compuesto por series de microtúbulos paralelos que exhiben el típico arreglo 9+2.

Independientemente de los flagelados usuales, cabe mencionar aquí a Dientamoeba fragilis, un patógeno polémico, antes considerado una amiba, sin flagelos.

2.- Subphylum Sarcodina.Emiten diferentes tipos de seudópodos como medio de locomoción, lo cual les da la forma "ameboidea". Presentan uno o varios núcleos en los diferentes estadios de vida.

3.-Phylum Ciliophora.Los ciliados poseen dos clases de núcleos: macronúcleo (poliploide), implicado en la producción de RNA mensajero, y micronúcleo (diploide), relacionado con la reproducción sexual. El movimiento de los organismos incluidos en este grupo es mediante cilios, con los mismos componentes proteicos que los flagelos.

4.- Phylum Apicomplexa.Estos protistas se encuentran incluidos en el Reino Chromalveolata, dentro del superphylum Alveolata, con los phyla Ciliophora y Dinoflagellata (llamados alveolados por los sacos en forma de alveolos dentro de sus membranas). Se han nombrado, a la fecha, más de 6 000 apicomplexos, pero los datos obtenidos de muestras ambientales sugieren que puede haber millones de especies dentro de este phylum. Estos organismos se caracterizan por la presencia de un complejo apical, compuesto por micronemas, roptrias, 1 ó 2 anillos polares electrodensos y, en algunas especies, un conoide dentro de los anillos. La estructura general de un apicomplexo varía entre las diferentes grupos. Las formas móviles se desplazan por deslizamiento, aunque actualmente se contemplan otros mecanismos.

2. Indica la clasificación de los helmintos, sus características principales y los

que parasitan con más frecuencia al hombre

Los metazoarios o helmintos son mucho más complejos que los protozoos, sus células se agrupan formando órganos y tejidos; se reproducen sexualmente pudiendo ser hermafroditas o presentar sexos separados. Son ovíparos con excepción de filarias, Dracunculus spp y Trichinella spp, que son vivíparos. Los helmintos incluyen dos Phylum o clases:  1.    Platelmintos: gusanos de cuerpo plano, entre los que se incluyen:

 Cestodes: son hermafroditas, tienen el cuerpo plano y segmentado, y cuando  parasitan al hombre en su estadio adulto, se ubican en intestino delgado. El órgano de fijación es el escólex, provisto de estructuras especialmente adaptadas para esta función, estas pueden ser ventosas y bótrides o ganchos. Del escólex surge un cuello del que se genera el cuerpo, por brotación, constituido por segmentos, denominados proglótides. Cada proglótide es una unidad funcional completa; a medida que se alejan del cuello van madurando, denominándose a los más distantes proglótides maduros. En ellos el útero ocupa casi su totalidad y se encuentran repletos de huevos, los que se liberarán al romperse los segmentos. Se los conoce como tenias por ejemplo Taenia saginata, Taenia solium, Echinococcus granulosus, etc.

  

 Trematodes: a excepción del género Schistosoma, también son hermafroditas y su cuerpo es chato pero indiviso. El estadio adulto es parásito de vertebrados, está cubierto por una cutícula resistente y presentan discos suctorios, órganos de fijación, en la cara ventral. Poseen un tubo digestivo incompleto que se inicia en la boca, llamada citostoma. Poseen un poro genital por donde se eliminan los huevos. El ciclo evolutivo es indirecto y cumplen parte de él en el agua. Los huevos, a excepción del género Schistosoma, presentan un opérculo por el que se libera la larva, denominada miracidio. El primer huésped intermediario es un molusco, puede haber un segundo huésped intermediario dependiendo de la especie.

 

2.   Nematelmintos o Nematodes: son gusanos cilíndricos, tienen sexos separados. Su cuerpo esta recubierto por una cutícula, con cavidad pseudocelómica, tubo digestivo completo que se inicia en la boca y termina en el ano. La boca está rodeada por tres labios, salvo en las uncinarias que presentan una cápsula bucal con elementos cortantes; estas estructuras producen pequeños pero múltiples traumas en la mucosa intestinal que contribuyen a la producción de la anemia macrocítica que suele asociarse a estas parasitosis. Los huevos tienen diferentes características que son útiles para el diagnóstico de las diversas especies. Del huevo se liberará una larva, en el tubo digestivo o en el medio ambiente. Los estadios larvarios son varios y se producen mudas entre estadio y estadio. El hombre se infecta por vía oral, como en el caso de Ascaris lumbricoides, por vía cutánea, como en el caso de las uncinarias o por vía parenteral, como por ejemplo las filarias. Sólo unas pocas especies son parásitos del hombre y existen, a diferencia de los cestodes y trematodes, muchos nematodos de vida libre. 

3. ¿Por qué se dice que la preparación con solución salina fisiológica sirve

para identificar trofozoítos de los parásitos?

La solución salina fisiológica constituye el medio más adecuado para todos los

estadios de los parásitos intestinales. Los trofozoítos y quistes de los protozoarios

se presentan refringentes; en los trofozoítos, cuando están vivos, se aprecian muy

bien las características de sus movimientos además de algunas estructuras como

los cuerpos cromatoidales, glóbulos rojos son más fácilmente reconocibles en este

tipo de examen.

Los montajes en solución salina tienen la ventaja de que retienen la movilidad de

los trofozoitos, sin embargo, es difícil la observación de las estructuras internas,

pues con frecuencia son poco definidas.

4. ¿Además del intestino, donde más pueden los parásitos infectar al hombre?

Parasitosis Cutáneas llamados ectoparásitos.

Escabiosis o sarna: Sarcoptes Scabei

Pediculosis: Pediculus humanus capitis

Infecciones Parasitariasdel Sistema Nervioso Central

Amebiasis del SNC: Naegleria fowleri 

Neuroesquistosomiasis: Schistosoma japonicum y S. mansoni 

 Neurocisticercosis: Taenia solium

Parásitos Hemotisulares

Malaria o Paludismo: Plasmodium

enfermedad de Chagas: Trypanosoma cruzi

5. ¿A qué se refiere cuando decimos que el inconveniente de esta técnica es

que es poco representativa? Explica e indica cómo podemos disminuirla

Implica que puede sufrir cambios porque no han sido extraídas del lugar donde fue la

lesión.

PRACTICA 04: EXAMEN COPROPARASITOSCÓPICO,TÉCNICA DE CONCENTRACIÓN DE FAUST

OBJETIVOS: Realizar un examen Coproparasitoscópico (cps), de concentración utilizando la técnica de Faust; con el fin de buscar e identificar formas parasitarias, en una muestra de heces.

MATERIAL:- Aplicadores de madera Papel de estraza- Portaobjetos cubreobjetos- Solución de lugol tubos de ensaye de 13x100- Microscopio agua de la llave- Asa bacteriológica vaso de precipitados de 100 ml- Gasas gradilla- Centrifuga mechero bunsen o Fisher- Embudo densímetro de 1.100 a 1.200- Sulfato de zinc con densidad 1.18 (aprox. 33%)

PROCEDIMIENTO1) Mezclar bien una porción de materia fecal para preparar una suspensión homogénea con 1 a 2 g de materia fecal en 10 ml de agua destilada.2) Filtrar la suspensión a través de una gasa doblada en cuatro, sobre un tubo de centrífuga, ayudándose con un embudo pequeño.3) Centrifugar el filtrado a 2500 rpm por 1 min.4) Decantar el líquido sobrenadante y completar con agua hasta igualar la medida anterior, centrifugar nuevamente. Resuspender el sedimento.5) Repetir el procedimiento 2 veces hasta que el líquido sobrenadante esté listo.6) Decantar nuevamente el líquido sobrenadante reemplazándolo por igual cantidad de solución de sulfato de Zinc al 33%. Mezclar bien la solución con elsedimento. Centrifugar durante 1 minuto a 1500 rpm.7) Tomar 3 a 4 gotas de las partículas que flotan en la superficie del líquido.Colocarlas en portaobjeto y mezclarla con 1-2 gotas de lugol, colocar cubreobjeto.(Te puedes ayudar con el asa limpia o flameada, para recoge la muestra de la película superficial, durante 2 o 3 ocasiones sucesivas y se deposita en el portaobjetos)8) Examinar al microscopio y reporte sus resultados.9) Realiza el dibujo de lo observado.10) Para ayudarte a identificar a los parásitos que puedas encontrar; recurre alos dibujos de los diversos parásitos mostrados en las gráficas de la practica anterior.NOTA: Recuerda, la materia fecal es potencialmente infectante, por lo que setendrán los cuidados necesarios para su manejo, que garanticen la correspondiente bioseguridad.

CUESTIONARIO

1.- ¿Por qué es importante cuidar la preparación del sulfato de zinc y checar su densidad cada vez que se utilice?

La concentración adecuada aconsejada es la que usa como reactivo una solución acuosa de sulfato Zn al 33% con una densidad al 1.180. El agua utilizada diluye y lava la materia fecal. El filtrado con gasa doblada y evita que los detritos gruesos traspasen las paredes, la centrifugación enriquece en delgada película la superficie del líquido centrifugado con los huevos livianos de algunos helmintos

Se debe verificar la densidad del sulfato de zinc periódicamente para evitar errores de concentración.

2.- ¿Esta técnica de flotación me permite ver a todos los huevos de helmintos? Y a los trofozoítos de amibas? ¿Por qué?

Las técnicas de flotación permiten la separación de quistes de protozoos y huevos de ciertos helmintos del exceso de residuos mediante el uso de soluciones con elevada gravedad específica.  Los elementos parasitarios son recuperados de la capa superficial y los residuos se mantienen en el fondo del tubo. Los trofozoitos se observan por examen microscópico directo.

3.- ¿En todo examen de heces es importante realizar una evaluación física de la muestra. ¿Qué fin tiene este?

Color: Normalmente son de color pardo de diferente intensidad, se debe a la

presencia de urobilina, varía de acuerdo a la ingestión de alimentos y

medicamentos.

Olor: Proviene de la desaminación y descarboxilación del triptofano por las

bacterias.

Consistencia: Normalmente las heces son blandas aunque moldeadas. Se

observan heces extremadamente duras en el estreñimiento y líquidas por

acción de purgantes, o por causas que originen diarrea. Esta consistencia

puede ser: Líquida, blanda o dura.

Aspecto: Hay diferentes aspectos como son: Diarreico, cremoso, mucoide,

granuloso, pastosa, caprino.

Presencia de mucosida (Moco) que es indicativo de infección bacteriana o viral.

PARASITOS OBSERVADAS EN LABORATORIO

1) Trichuris trichiura

Tipo: huevo

Características:

- Es elíptico y con tapones en los extremos

- Mide 50 por 25 μm,

- Es de color café

- Tiene una membrana doble

Clínica:

- Infestaciones de luz son con frecuencia asintomática.

- Las infestaciones severas pueden tener diarrea con sangre.

- La pérdida de sangre de larga data puede llevar a la anemia por deficiencia

de hierro.

Diagnóstico: Se puede diagnosticar cuando se detectan los huevos de T.

trichiura en la materia fecal.

Tratamiento: tiabendazol o ebendazol.

2) Plasmodium vivax

Tipo: trofozoito

Características:

- Ocupa aproximadamente 1/3 del diámetro del eritrocito; se observa un

punto grande de cromatina y un circulo de citoplasma.

Clínica:

- Puede haber fiebre remitente o intermitente.

- Dolor de cabeza frontal intensa y dolores de tronco y miembros

- Diaforesis

Diagnóstico: Observación de las formas parasitarias en gota gruesa o

extendido de sangre periférica

Tratamiento:

La cloroquina en este esquema debe ser administrada en una dosis de 10 mg

por kilo de peso el primer día, seguidos de 7.5mg/kg el segundo dia y 7.5

mg/kg el tercer día.

3) Ascaris lumbricoides

Tipo: huevo

Características:

Los huevos fértiles tienen forma oval o redondeada, con un tamaño de 45 a 75

µm de largo por 35 a 50 µm de diámetro. Presentan una gruesa cubierta

protectora formada por 3 capas: Una membrana vitelina interna, una capa

media transparente y gruesa y finalmente una capa externa mamelonada,

albuminoide, teñida de café por los pigmentos biliares.

Clínica:

- No tiene síntomas.

- En casos graves, sin embargo, sobrevienen calambres abdominales y,

en ocasiones, una agrupación de nematodos bloquea los intestinos, con

dolor, vómitos e hichanzón de estómago.

- Tos

- Fiebre

- Expectoración hemoptoica

Diagnóstico: suelen ser detectables al examinar al microscopio muestras de

heces. 

Tratamiento: El tratamiento incluye medicamentos que paralizan o matan las

lombrices intestinales, como albendazol o mebendazol. Estos fármacos no

deben usarse en pacientes embarazadas.

4) Taenia sp

Tipo: huevo

Características: Los huevos son redondos o ligeramente ovalados, de color

café intenso, cubiertos por una cápsula gruesa y radiada, que le da apariencia

de llanta, miden de  30 a 40 μm de diámetro.

Clínica: a menudo cursa sin síntomas clínicos. Sin embargo, puede provocar:

trastornos digestivos con náuseas y diarreas; dolor de tipo cólico abdominal,

pérdida de peso o un peso estable.

Diagnóstico:  descubrimiento de los anillos en la ropa interior o en las heces del

paciente

Tratamiento: praziquantel en una sola toma o niclosamida.

5) Enterobius vermicularis

Tipo: huevo

Características:

son translúcidos, poseen doble membrana, con un lado aplanado, por lo cual

tienen forma similar a la letra D, en ocasiones pueden ser ovalados. Su tamaño

es de aproximadamente 50 µm de longitud por 25 µm de ancho.

Clínica: 

alteraciones gastrointestinales

prurito anal

bruxismo

Apendicitis

Diagnóstico: recuperación de los huevecillos (no embrionados, embrionados o

larvados) de la piel anal y perianal mediante el uso de la técnica de la cinta

adhesiva (cinta de Graham).

Tratamiento: mebendazol 200 mg (adultos y niños), albendazol 400 mg

(adultos y niños), pamoato de pirantel 750 mg (adultos y niños) y 10 mg/kilo de

peso (niños).

6) Giardia lamblia

Tipo: quiste

Características: ovoide, de 8 a 14 mm. de largo por 7 a 10 mm. de ancho, con

cuatro núcleos y el doble de estructuras flagelares que el trofozoíto; es la forma

infectante

Clínica:

- diarrea

- distensión abdominal 

- marcada disminución del apetito

Diagnóstico: El estudio de la materia fecal para búsqueda del parásito.

Tratamiento: Tinidazol y Ornidazol

7) Fasciola hepática:

Tipo: Fasciola adulta

Caracteristicas:

• Tamaño que oscila entre 2 - 4 cms.

• Aplanado en sentido dorsoventral.

• Simetría bilateral.

• No segmentado. Forma en hoja, oval.

• Fijación: ventosa oral (peribucal) y ventral (acetábulo).

Clinica:

Fase aguda o invasiva: dolor localizado en epigastrio y/o cuadrante superior

derecho con irradiación a escápula del mismo lado, hepatomegalia, brotes

febriles irregulares, naúsea, vómito, diarrea, hiporexia, mialgias, artalgias,

urticaria fugaz con dermografismo ocasional.

Fase crónica (o de estado): signos y síntomas relacionados con la obstrucción

biliar (parcial o completa en casos más severos) y el grado de inflamación:

dolor abdominal, náuseas, vómito, anorexia, hepatomegalia blanda, fiebre, un

cuadro similar al de una colecistitis crónica agudizada.

Diagnostico:

- Fase inicial (migración, aguda).

Serología: hemaglutinación indirecta, ELISA e inmunofluorescencia indirecta.

BH (leucocitosis con eosinofilia)

Hipergammaglobulinemia

Pruebas funcionales hepáticas.

- Fase de estado (crónica).

Exámenes coproparasitoscópicos (CPS) de concentración por sedimentación.

Detección de coproantígenos.

Tratamiento:

El fármaco de elección es el triclabendazol, administrado en 1 - 2 dosis de 10

mg/kg, postprandial.

Se han obtenido resultados variables con nitazoxanida.

Otro fármaco utilizado es el praziquantel.

En ocasiones es necesaria la cirugía.

8) Diphylobotrium pacificum

a) Estadio: Adulto

b) Caracteristicas: puede medir, en promedio, desde 50 cm a 2 m de largo. El

89.76% mide menos de 1 m (con promedio de 75 cm); y el 10.24%, de 1 a 3.72

m. 

c) Clínica: sintomáticos 14.5%, dolor abdominal 69.9%, meteorismo 39.8%,

diarrea 36.9%, eructos 15.5%, anorexia 14.5%, cefalea 13.6%, regurgitación

12.6%, estreñimiento 11.6%.

d) Diagnóstico Se lleva a cabo mediante la identificación de huevos, eliminados

en grandes cantidades (examen microscópico) y/o el hallazgo de proglótidos:

e) Tratamiento: Praziquantel 10mg por kg. en un día en ayunas con 100% de

efectividad (3, 9).

Niclosamida >90% efectividad.

CONCLUSIONES

1.- El diagnóstico de las infecciones parasitarias puede establecerse de dos maneras fundamentales:

- por métodos directos, diseñados para observar o detectar el parásito o alguno de sus elementos identificables

- por métodos indirectos, dirigidos a hacer evidente la respuesta inmune del hospedero frente al parásito. Los métodos indirectos de diagnóstico tienen fundamental importancia para el diagnóstico de parasitosis en que es imposible o muy difícil la visualización directa del parásito o de alguno de sus elementos o para controlar la evolución post-terapéutica de la infección.

* Dentro de los métodos directos se encuentra:

- el análisis parasitológico de heces, el cual consta de un examen microscópico directo, con y sin coloraciones

- examen macroscópico por tamizado

- métodos de concentración.

2.- El método de flotación emplea un medio líquido más pesado que los parásitos permitiendo que los mismos suban a la superficie y puedan ser recuperados de la película superficial.

3.-Las ventajas son que el preparado es más límpido, facilitando la observación microscópica. Y las desventajas: debe hacerse la observación microscópica en menor tiempo debido a que la película superficial puede destruirse y los parásitos caer al fondo del tubo, a su vez, los parásitos de mayor peso que la solución empleada no flotarán.

4.-Existen varios métodos de flotación, el más utilizado es el método de Faust o de Sulfato de Zinc al 33%