manual de laboratorio clinico 3

7/24/2019 Manual de Laboratorio Clinico 3

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PRÁCTICA No. 1

BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO CLINICO

Definición: Conjuntos de normas y procedimientos para obtener una situación carentede riesgos o con riesgos limitados.

PRECAUCIONES UNIVERSALES:1. Acceso restringido, permitido solo a personas autorizadas2. Prohibido usar el celular, comer, fumar, beber o almacenar comidas o cualquier

objeto de uso personal dentro del laboratorio.. !sar ropa protectora de trabajo como mandil, mascarillas, guantes "de l#te$% la

misma que debe ser retirada antes de abandonar el laboratorio. &otas y gorra encasos de e$posición a microorganismos de alta peligrosidad.

'. Antes de iniciar cualquier acti(idad en el laboratorio asegurarse de que en la

mano no e$istan escoriaciones. )n caso contrario cubrir las mismas de maneraadecuada.

*. Cambio inmediato de los guantes en caso de rotura y la(ado de manos.+. o tocarse la boca ni los ojos con las manos enguantadas-. )(itar la formación de aerosoles y gotas.. /anejo adecuados de los objetos corto punzantes. !na (ez utilizados se deben

almacenar en recipientes r0gidos y eliminarse luego de ser decontaminados.. erminantemente prohibido pipetear con la boca. 3ebe utilizarse los

pipeteadores autom#ticos.14. 3econtaminar las superficies de trabajo una (ez terminado el trabajo diario.5e

recomienda el uso de hipoclorito de sodio al 146

11. )(itar conductas inseguras y de riesgo.12. /anejo adecuado de los desechos desde el lugar de origen y realizar tratamiento

adecuado especialmente de los infecciosos.1. 7os desechos de los fluidos corporales pueden eliminarse por las ca8erias

habituales una (ez que hayan sido decontaminados.1'. 7a(arse las manos con abundante agua y jabón luego de haber terminado el

trabajo diario.1*. Plan de inmunizaciones para el personal de laboratorio

TRABAJO EN CLASE:Poner en pr#ctica las normas anteriores durante cada sesión de laboratorio

PRACTICA No. 2

Tem: oma de muestras de sangre "(enosa y capilar%

Autora9 3ra. Celia &o:en

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O!"e#i$o%:1. Conocer la t;cnica para la obtención de muestras de sangre como medio para

mantener la integridad del profesional de salud y la del paciente2. Adiestramiento adecuado para el manejo de instrumentos necesarios en la toma

de muestras sangu0neas&. Aplicar las precauciones uni(ersales de bioseguridad en el laboratorio conrespecto al manejo de l0quidos biológicos y material infeccioso

'. Conocer los usos de los diferentes anticoagulantes empleados en el laboratorio

()n*men#o #eó+ico:7a relati(a facilidad con que se obtiene la sangre (enosa hace de esta t;cnica el

principal m;todo de obtención de sangre en los laboratorios de an#lisis cl0nicos. A partir de la sangre sin anticoagulante se obtiene suero, si la sangre contiene anticoagulante, seobtiene plasma. 3el plasma forma parte el fibrinógeno, sustancia de la que carece elsuero.

,#e+i-e%:<orniquete<Algodón<Alcohol antis;ptico "isoprop0lico al -46%<=eringuillas<5istema (acutainer9 capsula, tubos al(ac0o, agujas de toma m>ltiple< 7ancetas<ubos capilares heparinizados<Plastilina

Tcnic *e - /)nción $eno%:1. 5e identifica al paciente comprobando que la solicitud de e$#menes corresponda

al mismo2. 5i se solicita una muestra en ayunas, debe comprobarse que efecti(amente el

paciente no ha ingerido alimentos. ?ay que dirigirse al paciente e informarle sobre el procedimiento a que (a a ser

sometido. 5e debe tranquilizarle, eliminando en lo posible su tensión.'. 5e ha de colocar adecuadamente al paciente, seg>n ;ste se encuentre sentado, o

en dec>bito prono, para tener acceso f#cil y cómodo a la fosa antecubital.*. ?ay que preparar todo el material, incluidos los tubos para recogida de la

muestra, el torniquete, los objetos que se emplean para limpiar la piel, las jeringas, cuando sea necesario, la aguja est;ril para e$tracción de sangre ydispositi(o utilizado para fijar la aguja al tubo de e$tracción al (ac0o.

+. 5e solicita al paciente que cierre el pu8o para que las (enas resulten m#s palpables.

-. 5e seleciona una (ena adecuada para la punción. 5e prefieren las (enas de lafosa antecubital, en particular la cubital interna y la cef#lica. ambi;n puedenutilizarse las (enas de la mu8eca, el tobillo y la mano. 5i e$istiera ya un cat;ter intra(enoso en un brazo, se utilizar# el otro para la e$tracción de la muestra.

. Preparar la c#psula insertando la aguja pero dejando un poco flojo la capucha dela parte e$terna de la misma para retirarlo al momento de la punción.

. 5e aplica un torniquete (arios cent0metros por encima de la zona de punción"apro$imadamente a cuatro dedos sobre el doblez del brazo%. o hay que dejar


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nunca el torniquete m#s de 1 minuto. )n casos e$cepcionales no debe usarse eltorniquete, por ejemplo cuando en el pedido est# el Calcio.

14. 5e limpia la zona de la (enopunción con una torunda embebida en solución enalcohol antis;ptico. 5e comienza en el punto de la punción y se prosigue lalimpieza hacia fuera siguiendo un mo(imiento en espiral. 5e deje que la zona se

seque y no se toca con ning>n objeto que no haya sido esterelizado pre(iamente.11. 5e fija firmemente la (ena tanto por encima como por debajo del lugar de punción, con la ayuda de los dedos pulgar y medio, o 0ndice y pulgar.

12. 5e realiza la (enopunción. a% 5e penetra a tra(;s de la piel con la agujaformando un #ngulo de apro$imadamente 1*@ con el brazo y con el bisel haciaarriba. 5e sigue la dirección de la (ena con la aguja. &% 5e introduce la aguja consua(idad pero con la suficiente rapidez para reducir las molestias del paciente.

o hay que enterrar la aguja. C% 5i se utiliza una jeringa, se tira hacia atr#s del;mbolo, con tensión lenta y uniforme a medida que la sangre (a fluyendo en suinterior. o debe realizarse este mo(imiento con e$cesi(a rapidez, ya que podr0ahemolizarse la sangre o colapsarse la (ena. d% 5i se utiliza un tubo al (ac0o, en

cuanto la aguja haya penetrado en la (ena, se dirigir# el tubo todo lo posiblehacia delante en el dispositi(o de sujeción. Al mismo tiempo se sujetatenuemente la aguja en su lugar. !na (ez que haya llenado el tubo, se retira,cogi;ndolo por su e$tremo y tirando sua(emente de ;l.

1. Cuando la sangre comience a fluir, se suelta el torniquete.1'. !na (ez que se haya e$tra0do toda la muestra, hay que indicar al paciente que

relaje el pu8o y que no bombee con la mano.1*. 5e coloca sua(emente sobre el punto de la punción una bola de algodón est;ril.

5e e$trae la aguja y a continuación se ejerce presión sobre la zona.1+. 5e (enda el brazo. )n general es suficiente una tira de esparadrapo sobre la bola

de algodón, para detener la hemorragia.1-. 5e mezclan los tubos con el anticoagulante. 5i la muestra ha sido e$tra0da con

jeringa, se transferir# la sangre a los tubos correspondientes tomando las debidas precauciones para e(itar la hemólisis de las muestras.

1. 5e comprobar# el estado del paciente por ejemplo, si se ha mareado y si lahemorragia est# controlada.

1. 5e elimina el material contaminado9 agujas, jeringas, algodones, etc.24. 5e marcan las etiquetas y se registra la hora en que se e$trajeron las muestras.21. 5e en(0an los tubos de sangre para su an#lisis a los correspondientes

departamentos del laboratorio. 5i es preciso, se hace constar la hora en lasolicitud.

P)nción c/i-+:1. ener todo el material en perfecto orden9 algodón, alcohol, lancetas, tubos

capilares y plastilina.2. Pedir al paciente que se frote el dedo pulgar hasta que obtenga una buena

irrigación de la zona de punción.. 3esinfectar la zona y secarla con otro algodón libre de alcohol'. 5acar la lanceta y realizar la punción de forma r#pida y firme.*. 3eshechar la primera gota para e(itar contaminación con restos de alcohol.+. Colocar el capilar en la zona e ir llen#ndolo hasta las tres cuartas partes del tubo.-. Betirarlo de la zona y colocar un algodón con poco alcohol y solicitar al paciente

que se sostenga por unos minutos para que deje de fluir la sangre.


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. )l capilar sellarlo con plastilina y colocarlo en el lugar designado para ese paciente.

An#ico0)-n#e% )#i-i*o% con m% f+ec)enci

EDTA #/ón -i-3: ubo est;ril con anticoagulante )3A: sal de #cido etilenodiamina tetrac;tico di o tripotasica o di sódica, concentración9 1,2 a 2,4mgml desangre"',1 a +,mmoll de sangre% basado en )3A anhidro. Para uso en hematolog0a

Ci#+#o *e %o*io #/ón )- 145 6 #/ón ne0+o 14'3: citrato trisódico con 4,144 a4,1+ moll de #cido c0trico. 5e recomienda 4,14* moll para lograr la estandarizaciónrecomendada por la D?E para que quede a ,26. 5e usa para pruebas de coagulación"P, P, fibrinógeno%, utilizar l parte de citrato y de sangre entera.

T/ón +o"o: ubo est;ril sin anticoagulantes ni aditi(os ni geles separadores. Para

obtener suero.

7os tapones de colores con una !n* G+i% 0+e0* indican que el tubo correspondea uno los anteriores y que adem#s contiene gel separador de suero o plasma

TRABAJO EN CLASE:

)studiar bien las instrucciones anteriores para ponerlo en pr#ctica con alg>n compa8erode clase

PRACTICA No. &

Tem: So-)cione% 6 *i-)cione%

O!"e#i$o%:< Conocer lo que es un soluto y un sol(ente para preparar soluciones a diferentes

concentraciones< Conocer dos formas de e$presar matem#ticamente la proporción de soluto a

sol(ente dentro de una solución "p( y ((%< Bealizar diluciones simples a partir de una solución

()n*men#o #eó+ico:7as %o-)cione% son mezclas homog;neas de dos o m#s substancias, que puedensepararse por m;todos f0sicos en sus di(ersas substancias componentes. )n unasolución, aquella substancia que se encuentra en mayor proporción se conoce como5ol(ente y las dem#s como 5olutos.

)$isten (arias formas de e$presar la concentración de una solución, esto es, la proporción de soluto a sol(ente. Para efectos cualitati(os, frecuentemente se habla desoluciones diluidas, concentradas, saturadas o sobresaturadas. Aunque e$isten di(ersasformas de e$presar matem#ticamente la proporción de soluto a sol(ente dentro de una

solución, las de uso mas e$tendido suelen ser /olaridad, el Porcentaje Peso a Folumen,el Porcentaje Peso a Peso y las Partes por /illón.


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)l porcentaje Peso a Folumen es una relación que e$presa los gramos de soluto que sehallan contenidos en cada 144 mililitros de solución.

,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:

,#e+i-e%:< Probeta graduada de *4 ml< Faso de precipitación de *4 ml< /atraz aforado de *4 ml< Pipetas graduadas de 9 1, 2, * y 14 ml.< Peras de seguridad< ubos de ensayo< Gradillas< &alanza< Farilla de (idrio

Rec#i$o%:< 5afranina en pol(o< Cloruro de sodio en pol(o< Agua destilada

P+oce*imien#o:1. ,#o*o /+ /+e/++ %o-)cione%:!nidades de medidas9

p( H peso de soluto sobre (olumen de sol(ente e$presado en gr 144ml(( H (olumen de soluto sobre (olumen de sol(ente e$presado en ml144 ml.

E"em/-o *e %o-)cione% /4$:P+e/++ 78 m-. *e %o-)ción *e NC- c-o+)+o *e %o*io3 - 8.97 en 0) *e%#i-* D#o%

F1H *4 ml.F2H 144 mlConcentrac. 5oluciónH 4.*6 "pesar 4.* gramos de aCl y aforar con agua destilada hasta obtener 144 ml de solución%

4.* gr. aCl 144 ml agua destilada I *4 ml agua destilada

IH 4.'2* gr. de aCl disol(er en agua destilada hastaobtener *4 ml de solución

E"em/-o *e %o-)cione% $4$:P+e/++ '8 m-. *e %o-)ción *e E#no- - ;8 en 0) *e%#i-*

D#o%F1H '4 ml.F2H 144 mlConcentrac. 5oluciónH -46 "-4 ml de etanol puro diluidos en 144 ml de aguadestilada%-4 ml de etanol 144 ml agua destilada

I '4 ml agua destilada


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IH 2 ml. de etanol puro diluir en 12 ml de agua destilada paraobtener una solución de '4 ml de etanol al -46

2. ,#o*o /+ +e-i+ *i-)cione% Partiendo de una solución cualquiera que sea su concentración las diluciones se

realizan del siguiente modo9 5i se tiene una solución ?Cl "#cido clorhidrico% y se quiere diluir en agua destilada1924 para obtener un (olumen final de *4 ml se realiza los siguientes c#lculos9 1ml de soluc. ?Cl 24 ml. de agua destilada I *4 ml de agua destilada

I H2.* ml de ?Cl se necesita para obtener unasolución de *4 ml en agua destilada "medir '-.* ml de agua%

&. P+ o!#ene+ e- fc#o+ *e *i-)ción:!tilizando el ejemplo anterior el factor de dilución se obtiene del siguiente modo9

Jd H Folumen mayor H *4 H 24 Folumen menor "al0cuota% 2,*

7a solución en efecto est# diluida 24 (eces

PRACTICA No. '

Tem: E-emen#- 6 mic+o%có/ico *e o+in

O!"e#i$o%:1. Analizar la orina realizando e$#menes macróscopico, qu0micos y microscópicos

en la misma2. Correlacionar los par#metros analizados con enfermedades renales o del tracto

urinario

Definición *e e<men +)#in+io *e o+in: )s un e$amen f0sico yo qu0mico de laorina y comprende una serie de pruebas qu0micas y microscópicas para e(aluarinfecciones del tracto urinario, enfermedad renal y enfermedades de otros órganosque pro(ocan la aparición de metabolitos anormales "productos de descomposición% en

la orina.)l e$amen elemental y microscópico de orina consta de tres partes91% /acroscópico9 color, aspecto2% Ku0mico "tira reacti(a%9 p?, leucocitos, prote0nas, glucosa, urobilinógeno,

bilirrubina, cuerpos cetónicos, sangre% /icroscópico9 leucocitos, eritrocitos, c;lulas bajas, c;lulas altas "se reporta

numero por campo en 14 camposcon lente de '4$%, moco, bacterias, cristales, par#sitos, hongos "se reporta por cruces en 14 campos con lente de '4 $% ycilindros se reporta n>mero por placa "con lente de 14$%.

1. In%#+)ccione% /+ +eco0e+ )n m)e%#+ /+ci- *e o+in

a. )l frasco tiene que ser suministrado por el 7aboratorio, o adquirir en la farmaciauno est;ril apropiado para la recolección de orina.


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http://www.nlm.nih.gov/medlineplus/spanish/ency/article/000521.htm






b. )s preferible que la orina sea la primera orina de la ma8ana.c. Practicar pre(io aseo genital, con agua y jabón, sin dejar residuos. )sto es

especialmente importante en la mujer que debe la(arse el #rea entre los labios dela (agina y e(itar la contaminación de la muestra con crema, antis;pticos ysecreciones (aginales. 7os hombres y ni8os deben limpiarse la cabeza del pene

d. 3eje escapar la porción inicial de la micción al inodoro, a continuación recolecteen el frasco la porción media "14 ml% y descarte la porción final de la micciónnue(amente en el inodoro.

e. ape bien el frasco y entr;guelo r#pidamente al 7aboratorio "m#$imo dos horasluego de tomar la muestra%.

f. E recoger la muestra durante el Periodo /enstrual2. ,#o*o /+ e- n=-i%i% *e o+in mc+o%có/ico 6 >)?mico:

a. 3espu;s de recibir la orina en el laboratorio, analizarla tan pronto como sea posible. Antes del an#lisis las muestras de orina deben estar a la temperaturaambiente

b. Bealizar la homogenización de la orinac. Con mo(imientos moderados en el recipiente transportado hasta el laboratorio

"bien mezclada y no agitada%d. Ferter en un tubo de ensayo de 1+ $ 144 mm apro$imadamente 14 mle. 3eterminar el color, aspecto "nitidez%f. Begistrar la presencia de un olor inusual y de cantidades anormales de espuma

coloreadag. 5umergir bre(emente la tira reacti(a, no m#s de un segundo "e(itar tocarla con

los dedos, ya sea antes o despu;s de sumergirla%h. )liminar el e$ceso de orina en la tira,9 limpiar el borde de la misma con el

reborde del tubo o con papel secantei. o permitir que los reacti(os de la tira se junten

j. o depositar la tira reacti(a directamente sobre la superficie de trabajoL. 5eguir e$actamente las recomendaciones en cuanto al tiempo para cada test

qu0micol. /antener la tira reacti(a junto a la carta de colores y leer bajo una buena

iluminaciónm. ener en cuenta las fuentes de error, la sensibilidad y la especificidad de cada

prueba con la tira reacti(a2.1. P+=me#+o% >)e %e o!%e+$n en e- e<men mc+o%có/ico :

)n el e$amen macroscópico se analiza el aspecto como por ejemplo si es trasnparente,ligeramente turbia, turbia, espesa, opaca y el color de la orina que puede ser amarilla p#lida, amarilla oscura, #mbar, roja, (erde, azul entre otros.

2.2. P+=me#+o% >)e %e o!%e+$n en e- e<men >)?mico:

3ensidad "ó gra(edad espec0fica%9 Begistra la concentracuión iónica de laorina "es decir, qu; tan concentrada o diluida se encuentra%. 5e basa en laliberación de protones por un formador de complejos en presencia de cationes.)sto causa un (iraje de color del indicador azul de bromotimol, de azul haciaamarillo, pasando por (erde azulado

p?9 Mndican la acidez o alcalinidad de la orina. 7os (alores p? m#s frecuentesen orina fresca de personas sanas se encuentran entre * y +. )l test es


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espec0fico para la detección de iones hidronio, siendo el (alor p? el logaritmodecimal negati(o de la concentración de iones hidronio. )l papel reacti(ocontiene los indicadores rojo de metilo, fenolftale0na y azul de bromotimol.

7eucocitos9 Comprueba la acti(idad ester#sica de granulocitos. )sta enzimasdesdoblan un ;ster de indo$ilo a indo$ilo, que reacciona con una sal de

diazonio formando un colorante (ioleta. se detectan leucocitos intacto ytambi;n los lisados "indicio de MF!% itrito9 7os agentes patógenos m#s frecuentemente causantes de infecciones

de las (0as urinarias, ). coli y la mayor0a de los g;rmenes patógenos urinarios,transforman el nitrato absorbido con la alimentación en nitrito. )ste esdetectado por una coloración del rosa al rojo de la zona reacti(a. )l ensayo se

basa en el principio de la prueba de Griess y es espec0fico para el nitrito."indicio de MF!%

Prote0nas9 )l test se basa en el principio del error proteico de indicadores de p? y reacciona de manera especialmente sensible a la alb>mina.

Glucosa9 7a detección de glucosa se efect>a seg>n el m;todo espec0fico de la

glucosa<o$idasa<pero$idasa. Cuerpos cetónicos9 7a detección se realiza en el principio de la prueba de legal

y reacciona m#s intensamente al #cido acetilac;tico que a la acetona. 7ascetonas son un subproducto del metabolismo de las grasas, presente coninanición y diabetes.

!robilinógeno9 )s un producto de degradación de la bilirrubina. )l test se basaen que una sal de diazonio estable produce con el urobilinógeno, casiinstant#neamente un colorante azóico rojo

&ilirrubina9 )n la orina es un producto de degradación de la hemoglobina. 7adetección se basa en la copulación de una sal de diazonio con bilirrubina para

formar un colorante azoico. Mncluso los m#s le(es matices rosa ya deben ser considerados como positi(os. ?emoglobina9 )s un indicio de hemólisis. 7a mioglobina cataliza la o$idación

del indicador por el hidroperó$ido org#nico contenido en el papel reacti(o.Puntos (erdes aislados hasta acumulados en la zona reacti(a amarilla indicanla presencia de eritrocitos intactos. 7a hemoglobina as0 como los eritrocitoshemolizados o la mioglobina son indicados por una coloración (erdehomog;nea de la zona reacti(a.

. ,#o*o /+ +e-i+ e- e<men mic+o%có/ico *e- %e*imen#o )+in+io

a. !na (ez realizado el e$amen microscópico y qu0mico de la orina, se lacentrifuga por *<14 minutos a 1*44<2444 rpm con la orina pre(iamentehomogenizada

b. )liminar cuidadosamente el sobrenadante. )l (olumen final utilizado pararesuspender el sedimento puede (ariar seg>n el sistema estandarizado que seuse, pero debe ser siempre constante en cualquier laboratorio dado.

c. Besuspender con sua(idad el sedimento, eliminar las dos primeras gotas ycolocar la tercera gota en una placa portaobjetos, cubrir con un cubreobjetos.3ejar que la orina se deposite durante 4 a +4 segundos.

d. Ebser(ar al microscopio con objeti(os de peque8o y gran aumento. Paradetectar algunas entidades del sedimento con un 0ndice bajo de refracción

ser# necesaria una luz amortiguada o una iluminación de contraste de fase.)l foco fino debe (ariarse continuamente mientras se e$amina. Progresar de


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manera sistem#tica a lo largo de toda la placa, teniendo cuidado de e$aminar los bordes en busca de cilindros.

e. Becuento del n>mero de cilindros por lo menos en 14 campos de peque8oaumento "14$% y anotar en el informe el n>mero de cilindros por campo.Puede utilizarse un margen razonable, es decir, 4 a 2, 2 a *, * a 14, etc. !sar

el gran aumento "'4$% para indicar el tipo de cilindros. 7os cilindros seapreciar#n si se utiliza microscopio de contraste de fase.f. Mdentificación y recuento de los eritrocitos, leucocitos y c;lulas epiteliales

renales utilizando el objeti(o de gran aumento "'4$%. )fectuar el recuento por lo menos 14 campo de gran aumento y e$presarlo como c;lulas por campo. )n el informe puede utilizarse un margen razonable.

g. Beportar9h. 7as c;lulas epiteliales "bajas% y altas si est#n presentes en gran n>mero o

como fragmentos "c;lulas transicionales%i. &acterias, le(aduras, microorganismos. !na bacteriuria detectable a peque8o

aumento puede e$presarse por lo menos como 2 N.

j. 7os cristales se cuantifican bajo peque8o aumento. 7a presencia de cristalesanormales debe confirmarse qu0micamentey correlacionarse con la historiadel paciente

L. Grandes cantidades de moco

OBSERVACI@N: P+ e- %i0)ien#e -i#e+- /o+ f$o+ +e$i%+ e- #-% /+ %e0)n*oni$e- )!ic*o en e- in#e+ne# c)6 /=0in e% f#/./)ce.e*).ec

.1. E-emen#o% >)e %e o!%e+$n en e- e<men mic+o%có/ico:

• 7as bacterias y otros microorganismos "normalmente no est#n presentes%•

Cilindros urinarios • Cristales• Grasa• /oco• Glóbulos rojos "un indicio de da8o en los t>bulos%• C;lulas tubulares renales • C;lulas epiteliales de transición• Glóbulos blancos "un indicio de infección del tracto urinario%

TAREA EN CLASE:

Cada estudiante debe traer su muestra de orina siguiendo las instrucciones anteriores,realizar el an#lisis cl0nico durante la pr#ctica y realizar el reporte de la misma paraarchi(ar en la carpeta.

PRACTICA No.

CARBOIDRATOS: De#e+minción *e 0-)co% en %n0+e

1. O!"e#i$o%:

1. Conocer la t;cnica mediante la cual se determina la glucosa en sangre2. 3iferenciar pacientes con hipo e hiperglicemia


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ftp://ftp.puce.edu.ec/



ftp://ftp.puce.edu.ec/





2. ()n*men#o #eó+ico:

7a glucosa es la principal fuente de energ0a de las c;lulas en el organismo. 7a glucosaes un monosac#rido con una concentración postpandrial de 4 mgdl en la sangre y sir(ecomo una fuente de energ0a indispensable para la función celular.

)l diagnóstico de los trastornos del metabolismo de los hidratos de carbono se apoya en parte en la medición de la glucosa plasm#tica, ya sea en ayuna o tras estimulación o pruebas de supresión.

7os resultados de la glucosa plasm#tica pueden clasificarse como hipergluc;micos"como la diabetes mellitus% o hipogluc;micos.

P+inci/io *e - +ección:

7a prueba utilizada se determina mediante el m;todo enzim#tico colorim;trico, basado

en la reacción de rinder.

Glucosa N E2 N ?2E GE3 "glucosa o$idasa% #cido glucónico N ?2E2

2?2E2 N '<aminoantipirina N fenol PE3 "pero$idasa% quinoneimina "rojo% N '?2E

7a glucosa se determina despu;s de la o$idación enzim#tica en presencia de glucosao$idasa. )l peró$ido de hidrógeno formado reacciona bajo la cat#lisis de pero$idasa confenol y '<aminoantipirina formando un complejo rojo (ioleta llamado quinoneimina.

P)n#o fin- *e )n +ección: 7as reacciones catalizadas por enzimas son >nicas en elsentido de que presentan aumentos muy grandes de la (elocidad en relación a lasreacciones no catalizadas y muestran una cin;tica de saturación, es decir la (elocidad dela reacción alcanza un (alor m#$imo a una concentración determinada de sustrato, nodan por resultado aumento de la (elocidad de la reacción. 7a medida se realiza siempreen las condiciones óptimas de p?, temperatura, presencia de cofactores, etc. )n estascondiciones, la (elocidad de reacción obser(ada es la (elocidad m#$ima "F ma$%. 7a(elocidad puede determinarse bien midiendo la aparición de los productos o ladesaparición de los reacti(os.

)n el caso de la reacción de la glucosa catalizada por la enzima glucosa o$idasa y la

pero$idasa llega a su punto final cuando todo el sustrato "glucosa% se ha o$idado, ydespu;s se mide el cambio de color.

E%/ec#ofo#óme#+o:

7a absorbancia y la transmitancia de una sustancia en disolución se miden con unaparato denominado e%/ec#+ofo#óme#+o, el cual consta b#sicamente de los siguientescomponentes9

()en#e *e -)9 7#mpara que emite una mezcla de longitudes de onda.

Co-im*o+9 Conjunto de lentes que enfocan la luz con(irti;ndola en un haz de rayos paralelos.


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,onoc+om*o+9 3ispositi(o que selecciona luz de una >nica longitud de onda.

De#ec#o+ fo#oe-c#+ico9 ransductor de luz en electricidad. 7a luz pro(oca eldesplazamiento de electrones en el metal del detector, produciendo una corrienteel;ctrica que es proporcional a la intensidad de la luz recibida.

Re0i%#+*o+9 /ide la se8al del detector, la compara y genera una medida en una escaladeterminada.

A3 E%>)em *e )n e%/ec#+ofo#óme#+o *e )n %o-o B3 E%>)em *e )n e%/ec#+ofo#óme#+o *e *o!-e en e- c)- %e co++i0en -%$+icione% e%/ec#+-e% *e -o% *ife+en#e% e-emen#o% ó/#ico% >)e -o com/onen

)l funcionamiento del espectrofotómetro es el que sigue9 la luz de una fuente continua pasa a tra(;s de un monocromador, que selecciona una banda estrecha de longitudes deonda del haz incidente.

)sta luz Omonocrom#tica atra(iesa una muestra de espesor b, y se mide la potencia radiante de la luz que sale. )s necesario calibrar el espectrofotómetro con un blanco antes de medir las absorbancias de la disolución problema. )sta celda o cubetade referencia sir(e para compensar los efectos de refle$ión, dispersión o absorción deluz de la celda con el disol(ente.

Cuando emerge poca luz de la muestra "absorbancia alta%, la intensidad es dif0cilde medir. Cuando emerge mucha luz de la muestra "absorbancia baja%, es dif0cil detectar la diferencia de absorbancia entre las celdas de muestra y de referencia.

&. P+#e e</e+imen#-:

&.1. P+oce*imien#o:

En%6o:


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7ongitud de onda9 ?g *'+ nm.Paso de luz9 1 cmemperatura9 24<2*@C/edición9 frente a un blanco de reacti(o. 5e requiere un blanco de reacti(o por serie

E%>)em *e /i/e#eo:

,ic+o*e#e+minción

Pipetear en las cubetas &lanco de reacti(o 53 ó muestra

53 ó muestra * ul

Beacti(o para glucosa *44 ul *44 ul/ezclar, incubar por 14 minutos de 24<2*@C ó * minutos a -@C. /edir la absorbanciadel 53 y las muestras frente a un blanco de reacti(o antes de +4 minutos.

,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:

,#e+i-e% Rec#i$o%

)spectrofotómetro Beacti(o para glucosa

ubos de ensayo )st#ndar de glucosa "144 mgdl%

Gradilla /uestras de suero sangu0neo "ó plasma%

Pipetas autom#tica

Puntas de pl#stico para pipetas autom#t..

Beloj

Cubetas de pl#stico para espectrofot.

No#: )l espectrofotómetro debe estar encendido 24 minutos antes de leer lasabsorbancias.

1. C=-c)-o *e - concen#+ción *e - 0-)co%

C "mgdl%H 144 $ QA muestra

QA )st#ndar


P#gina 12



V-o+e% *e +efe+enci: -4 R 144 mgdl

TRABAJO EN CLASE:

Bealizar el an#lisis de glucosa en un suero sangu0neo y luego reportar los c#lculos en lacarpeta con la respecti(a interpretación del resultado

PRÁCTICA No ;

LPIDOS: De#e+minción *e co-e%#e+o- en %n0+e

1. O!"e#i$o%:

. Conocer la t;cnica mediante la cual se determina el colesterol en sangre'. 3iferenciar pacientes con hipo e hipercolesteremia

2. ()n*men#o #eó+ico:

7os principales l0pidos del plasma humano son el colesterol, los ;steres del colesterol,los triglic;ridos, los fosfol0pidos y los #cidos grasos no esterificados. )l colesterol es unimportante componente estructural de las membranas celulares y un precursor para la

bios0ntesis de los #cidos biliares y las hormonas esteroideas.

)l riesgo cardio(ascular es una función continua de la concentración de colesterol y quelos indi(iduos situados en el l0mite superior del margen normal tienen un riesgo mayor que los que est#n situados en el l0mite inferior.

7a prueba utilizada para determinar colesterol es mediante el m;todo enzim#ticocolorim;trico del siguiente modo9

P+inci/io *e - +ección:

)steres de colesterol N ?2E C?)"colesterol esterasa% colesterol N #cidos grasos

Colesterol N E2 C?E "colesterol o$idasa% colesterol< <ona N ?2E2

2?2E2 N '<aminoantipirina N fenol PE3 "pero$idasa% Kuinoneimina "rojo% N ' ?2E

)l colesterol se determina despu;s de hidrólisis enzim#tica y o$idación. )l indicador esla quinoneimina "complejo rojo% formada por el peró$ido de hidrógeno y '<aminoantipirina en presencia de fenol y pero$idasa.

2. P+#e e</e+imen#-:

2.1. P+oce*imien#o:

En%6o:


P#gina 1



7ongitud de onda9 ?g *'+ nm.Paso de luz9 1 cmemperatura9 24<2*@C/edición9 frente a un blanco de reacti(o. 5e requiere un blanco de reacti(o por serie

E%>)em *e /i/e#eo:

,ic+o*e#e+minción

Pipetear en las cubetas &lanco de reacti(o 53 ó muestra

53 ó muestra * ul

Beacti(o para colesterol *44 ul *44 ul/ezclar, incubar por 14 minutos de 24<2*@C ó * minutos a -@C. /edir la absorbanciadel 53 y las muestras frente a un blanco de reacti(o antes de +4 minutos.

,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:

,#e+i-e% Rec#i$o%

)spectrofotómetro Beacti(o para colesterol

ubos de ensayo )st#ndar de colesterol "244 mgdl%

Gradilla /uestras de suero sangu0neo "o plasma%

Pipetas autom#tica


Beloj



2. C=-c)-o *e - concen#+ción *e co-e%#e+o-

C "mgdl%H 244 $ QA muestra QA )st#ndar

V-o+e% *e +efe+enci: hasta 244 mgdl


P#gina 1'



TRABAJO EN CLASE:

Bealizar el an#lisis de colesterol en un suero sangu0neo y luego reportar los c#lculos en

la carpeta con la respecti(a interpretación del resultado

CONSULTA:Criterios de la E/5 para9

< 50ndromes metabólicos< Jactores de riesgo cardio(ascular

ota9 Archi(ar en la carpeta y estudiar para la e(aluación parcial

PRÁCTICA No. 9

TE,A: ,#o*o /+ e-ec#+ofo+e%i% *e /+o#e?n% en %)e+o

O!"e#i$o:Aplicar la t;cnica de electroforesis para separar las di(ersas fracciones prote0cas delsuero humano

()n*men#o #eó+ico:7a electroforesis es una t;cnica basada en los mo(imientos de mol;culas cargadas en uncampo el;ctrico, cada mol;cula se mue(e hacia el electrodo de carga opuesta "c#todo y#nodo%, este mo(imiento denominado Oelectroforesis da nombre a la t;cnica. )n eltransporte electrofor;tico, a la fuerza del campo el;ctrico se opone la resistencia (iscosadel medio, produci;ndose, cuando se igualan una (elocidad constante dedesplazamiento de las part0culas.

)n resumen, puede decirse que cuando una mol;cula cargada se coloca en un campoel;ctrico se mo(er# hacia uno u otro electrodo dependiendo de9 1% su carga el;ctrica, 2%su tama8o, % la intensidad del campo el;ctrico y '% la temperatura del medio.

7a electroforesis se aplica en el campo de la &ioqu0mica a la separación de compuestos

que poseen grupos ionizables "amino#cidos, p;ptidos, prote0nas, #cidos nucleicos%teniendo en cuenta que la carga neta de estas sustancias depende del p? del medio enque se encuentren. 5i la mol;cula tiene carga positi(a migrar# hacia el c#todo, si tienecarga negati(a hacia el #nodo. 7a fuerza iónica de la solución tampón tiene unaimportancia fundamental en la electroforesis, puesto que cuando es baja, permite(elocidades de migración de los solutos m#s r#pidas y con menor desprendimiento decalor.

7as prote0nas est#n compuestas de amino#cidos que poseen grupos ionizables"principalmente <CEE< y R?N

%, pueden encontrarse cargadas positi(a onegati(amente, o bien de permanecer el;ctricamente neutras seg>n la proporción de los

di(ersos grupos ionizados a un determinado p?. )n su punto isoel;ctrico "pM o p? M%, la


P#gina 1*



prote0na tiene carga neta cero. Por debajo de pM las prote0nas estar#n cargadas positi(amente y por encima del pM negati(amente.

)l porcentaje normal de estas prote0nas en el suero humano es9<Alb>minaSSS*'<+26

<T<globulinasSS<1*6<U<globulinasSS1'<16<V<globulinasSS1'<16

)n el siguiente cuadro se obser(a la concentración normal en mgdl , peso molecular "P/% y funciones de las prote0nas "el cuadro no presenta una clasificación completa delas prote0nas, se obser(an unos cuantos ejemplos que se encuentran en mayor concentración%

PBE)WA5 P/ CEC)BACMX J!CMX1%Alb>mina +444 *44 a '*44 mgdl Presión oncótica y

transporte2%Globulinas alfa1Alfa1 glucoprote0na#cida

'4444 ** a 1'4 mgdl Prote0na de faseaguda

Alfa 1 antitripsina *'444 244 R '44 mgdl Proteasa inhibidora%Globulinas alfa2Alfa2macroglobulina

-2*444 1'4 R '24 mgdl Proteasa inhibidora

?aptoglobina 4444 4 a -4 mgdl 7iga ?& circulante.Globulinas betaransferrina -+444 244 a 44 mgdl ransporte del Je?emope$ina *-44 *4 a 144 mgdl 7iga el hem'.Gama globulinasMgG 1*4444 -44 a 1*44 mgdl AnticuerposMgA 1*4444 a 44444 < AnticuerposMg/ -*4444 a 44444 < AnticuerposCrioglobulinas 224 < 3esconocido

TRABAJO EN CLASE:

Bealizar el an#lisis de las prote0nas en un suero sangu0neo y luego reportar en la carpetacon una foto los resultados con una posible patolog0a de la respecti(a consulta "realizar un ejemplo de cada una en la misma foto%

CE5!7A9Patolog0as que se presentan cuando hay aumento ó disminución de cada una de las

proteinas "alb>mina, alfa1 y alfa2 globulina, beta1 y beta globulina, gamma globulina% ota9 Archi(ar en la carpeta y estudiar para la e(aluación parcial


P#gina 1+



PRÁCTICA No. 5

TE,A: De#e+minción *e )+e ,#o*o enim=#icoFco-o+im#+ico3

()n*men#o #eó+ico:

7a urea es el principal compuesto nitrogenado no proteico m#s imporatnte en la mayor0ade los l0quidos biológicos. )n el hombre es el principal producto final del metabolismo prote0co. 5e produce en el h0gado y es e$cretada en la orina a tra(;s de los ri8ones.

!na ele(ación de la concentración s;rica de urea, se interpreta generalmente como una posible disfunción renal. 5in embargo, no debe dejarse de lado el hecho de que los(alores s;ricos de urea se encuentran 0ntimamente relacionados con la dieta y elmetabolismo proteico, por lo que cualquier alteración en estas (ariables se traducir# enun cambio de la concentración de urea en suero.

()n*men#o *e- m#o*o:

7a urea se hidroliza por acción de la ureasa en presencia de agua para producir amon0aco y dió$ido de carbono. )n una reacción de berthelot modificada los ionesamonio reaccionan con hipoclorito y salicilato produciendo un complejo (erde llamadoindofenol que se determina colorim;tricamente. ureasa NH2 – CO – NH2 + H2O (NH4

+)2 + CO2

itroprusiato "no es enzima%(NH4

+)+salicilato+ClONa+ 2-oxoglutarato Indofenol (verde)

P+#e e</e+imen#-:1.P+oce*imien#o en %)e+o o /-%m3:

1.1. )n cuatro tubos de ensayo marcados como & "blanco%, 5 "5tandard%, /1 "muestra1% y /2 "muestra 2% agregar9

B S ,1 ,25tandard < 14 ul5uero o plasma < < 14 ul 14 ulBeacti(o 1 1444 ul 1444 ul 1444 ul 1444 ul)nzima ureasa * ul * ul * ul * ul/ezclar por agitación sua(e e incubar 14 minutos a 24<2*@ C o por minutos a -@CBeacti(o 2 1444 ul 1444 ul 1444 ul 1444 ul/ezclar por agitación sua(e e incubar 14 minutos a 24<2*@ C o por * minutos a -@C.

7eer la absorbancia de la muestra "QA muestra% y del est#ndar "QA )st#ndar% enespectrofotómetro a ?g *- nm frente a un blanco reacti(o antes de +4 minutos

C=-c)-o% *e concen#+ción *e )+e:C "mgdl%H QAYmuestra $ 4 QA estandar

V-o+e% *e +efe+enci en %)e+o: 14 R *4 mgdlP+=me#+o% con%i*e++:< )l espectrofotómetro debe estar encendido 24 minutos antes de realizar las lecturas de

las muestras


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2.,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:2.1. ,#e+i-e%:<Gradilla<Cuatro tubos de ensayo<)spectrofotómetro

<Pipetas autom#ticas<Puntas de pl#stico para pipeta autom#tica<Cubetas de pl#stico para espectrofotómetro<Beloj

2.2.Rec#i$o%:<Beacti(o 19 &uffer fosfatos "p? -.4%, 5alicilato de sodio, itroprusiato de sodio,

)3A<Beacti(o 29 &uffer fosfato "p?Z 1%, hipoclorito<5tandard9 solución de urea 4 mgdl<!reasa "enzima%9 5olución estabilizada y tamponada de alta potencia

<5uero sangu0neo

TRABAJO EN CLASE:Bealizar el an#lisis de urea en un suero sangu0neo y luego reportar los c#lculos en lacarpeta con la respecti(a interpretación del resultado

PRÁCTICA No. 18

TE,A: De#e+minción *e #+n%min%% : TGO 6 TGP

7as transaminasas son unas enzimas, principalmente localizadas en el h0gado. 7as m#simportantes son9

< GE9 ransaminasa glut#micoo$alac;tica. )st# presente en casi todos losórganos, dentro de las c;lulas y que cuando se encuentran en sangre en ni(elesmuy ele(ados significa que ha habido destrucción celular.

< GP9 ransaminasa glut#micopir>(ica. 5e localiza principalmente en el h0gado ysu misión es la fabricación de glucosa.

5e utilizan en la cl0nica para la confirmación diagnóstica del infarto agudo de miocardioy para el estudio de enfermedades hep#ticas o musculares.

Para realizar el e$amen en sangre, pre(iamente es necesario que el paciente, unos d0asantes, haga una dieta en la que no sobrecargue el h0gado, no tomando alcohol, escasas

prote0nas y grasas y tambi;n es necasrio no realizar esfuerzos f0sicos importantes

P+#e e</e+imen#-:1.P+oce*imien#o en %)e+o o /-%m3 #n#o /+ TGO como /+ TGP:

7ongitud de onda9 ?g ' nmemperatura9 2*@ C

Cubeta9 1 cm paso de luzAjuste cero9 contra el aire


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Beacti(o de trabajo 1444 ul colocar en la cubeta/uestra 144 ul colocar en la cubeta

/ezclar e incubar por 1 minuto a temperatura de 2*@ C, leer en el espectrofotómetro

"A1%, repetir las lecturas e$actamente al 2do." A2% y er. /inuto"A%

Bealizar los c#lculos9 QA min H A1 < A2 "usando los dos primeros minutos de lecturas de absorbancia%

QA1 min H A1 < A2 "usando los tres minutos de lecturas de absorbancia% QA2 min H A2 R A QA min H "QA1 N QA2%2 Concentración de GP H QA $ 1-4

Concentración de GEH QA $ 1-4 Beportar los resultados en !lV-o+e% *e +efe+enci $+? *e c)e+*o - m+c come+ci- *e- +ec#i$o 6 -#em/e+#)+ *e me*ición3:

TGO: /ujeres hasta 2 !l ?ombres hasta !lTGP: /ujeres hasta 1 !l ?ombres9 hasta '1 !l

P+=me#+o% con%i*e++:< )spectrofotómetro encender 24 minutos antes de realizar las lecturas de las muestras

2.,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:2.1. ,#e+i-e%:)spectrofotómetro, pipetas autom#ticas, puntas de pl#sticos para pipeta, cubetas, reloj

2.2.Rec#i$o%: GE y GP

TRABAJO EN CLASE:

Bealizar el an#lisis de GE ó GP en un suero sangu0neo y luego reportar los c#lculosen la carpeta con la respecti(a interpretación del resultado

PRÁCTICA No. 11

TE,A: De#e+minción *e !i-i++)!in #o#- 6 *i+ec#)l 4<*6 de la bilirrubina se origina de la degradación de la hemoglobina con un 1*<246 que es deri(ada del citocromo, mioglobina y catalasas. 7a bilirrubina noconjugada, la c>al se liga a la alb>mina del plasma, es producida en el curso de la

degradación en el sistema reticuloendotelial, c;lulas [upffer del h0gado, bazo y m;dula


P#gina 1



ósea. 7os ensayo de bilirrubina son posible para e(aluar el grado de se(eridadad de loss0ntomas cl0nicos de la ictericia as0 como para e(aluar la función y el estado del h0gado.

Si0nific*o *e -o% +e%)-#*o% no+m-e%

7a ictericia es la coloración amarillenta de la piel y de la esclerótica del ojo, que ocurrecuando la bilirrubina se acumula en la sangre a un ni(el mayor a 2.* mgd7apro$imadamente. 7a ictericia se presenta porque los glóbulos rojos se est#ndescomponiendo demasiado r#pido para que el h0gado los procese, lo cual podr0asuceder debido a una enfermedad hep#tica o a una obstrucción de las (0as biliares.

5i hay una obstrucción de las (0as biliares, la bilirrubina directa se acumular#, escapar#del h0gado y terminar# en la sangre. 5i los ni(eles son lo suficientemente altos, una

parte de ella aparecer# en la orina. 5ólo la bilirrubina directa aparece en la orina. )laumento de la bilirrubina directa generalmente significa que las ( ? as biliares "secreciónhep#tica% est#n obstruidas.

)l aumento de la bilirrubina indirecta o bilirrubina total pueden ser un signo de9

• 50ndrome de Crigler<ajjar • )ritoblastosis fetal • )nfermedad de Gilbert • Cicatrización de un hematoma grande "moretón o sangrado bajo la piel%• Anemia hemol0tica • )nfermedad hemol0tica del reci;n nacido• ?epatitis• Mctericia fisiológica "normal en los reci;n nacidos%• Anemia drepanoc0tica • Beacción a una transfusión • Anemia perniciosa

)l aumento de la bilirrubina directa puede indicar9

• Ebstrucción de las (0as biliares • Cirrosis • 50ndrome de 3ubin<=ohnson "muy raro%• ?epatitis • Colestasis intrahep#tica "acumulación de bilis en el h0gado% debido a cualquier

causa

)n presencia del acelerador cafe0na, la bilirrubina total se acopla con el #cido sulfónico para formar un complejo azobilirrubinado rojo, la intensidad del color es proporcional ala concentración de la bilirrubina. 7a determinación de la bilirrubina directa esdesarrollada sin aditi(o de cafe0na. 7a adición de tartrato alcalino causa unatransformación del complejo rojo de la azobilirrubina a un complejo azul y las lecturasde las absor(ancias son entre *'+<*- nm.

Bi-i++)!in #o#-:

Acido sulfan0lico N aE2 #cido sulfónico diazotizado


P#gina 24





























&ilirrubina N #cido sulfónico diazotizado cafe0na azobilirrubina "rojo%

Azobilirrubina N tartrato complejo (erde

1. E%>)em *e /i/e#eo:

Bi-i++)!in #o#-

,ic+o*e#e+minción

Pipetear en las cubetas &lanco de reacti(o /uestra

Beacti(o 1 144 ul 144 ul

Beacti(o 2 <<<<<< 2* ul

Beacti(o *44 ul *44 ul

/uestra 144 ul 144 ul

/ezclar, incubar por 14<+4 minutos a temperatura ambiente. A8adir9

Beacti(o ' *44 ul *44 ul

/ezclar e incubar a temperatura ambiente por *<4 minutos. 7eer la absorbancia de lamuestra contra el blanco

Bi-i++)!in *i+ec#

Pipetear en las cubetas &lanco de reacti(o /uestra

Beacti(o 1 144 ul 144 ul

Beacti(o 2 <<<<<< 2* ul

5olución aCl 4.6 1444 ul 1444 ul

/uestra 144 ul 144 ul

/ezclar, incubar por * minutos a temperatura ambiente. 7eer la absorbancia de lamuestra contra el blanco

2. C=-c)-o%:

&ilirrubina total9 C "mgdl%H 14. $ QA bilirrubina total

&ilirrubina directa9 C "mgdl%H 1.- $ QA bilirrubina directa&ilirrubina indirecta9 &MH &ilirrubina total "&% < bilirrubina directa "&3%


P#gina 21



&. ,#e+i-e% 6 +ec#i$o%:

,#e+i-e% Rec#i$o%

)spectrofotómetro Beacti(os para bilirrubina

ubos de ensayo /uestras de suero sangu0neo "ó plasma%

Gradilla

Pipetas autom#tica


Beloj



V-o+e% *e +efe+enci:Bi-i++)!in #o#-: %# 1.8 m04*-Bi-i++)!in *i+ec#: %# 8.27 m04*-

TRABAJO EN CLASE:

Bealizar el an#lisis de las bilirrubinas en un suero sangu0neo y luego reportar losc#lculos en la carpeta con la respecti(a interpretación del resultado

BIBLIOGRA(IA:• Ángel M., G. y M. Ángel R., Interpretación Clínica del Laboratorio, 6ª. edición, Editorial

Médica Panaericana, !ogot", #.$$%• &enry, '. !., (iagnó)tico y *rataiento Clínico) por el Laboratorio, +ª. Edición, Editorial

al-at Médica, Méico, %.++/• Man0al de !io)eg0ridad en el Laboratorio, 1. M. ., Ginebra, %.++2• Método) !")ico) de Laboratorio en Para)itología Médica, 1. M. ., Ginebra, %.++#• Mor"n 3illaroto, 1btención de M0e)tra) ang0ínea) de Calidad 4nalítica, Editorial Médica

Panaericana, Méico, #.$$%


manual de laboratorio clinico 3

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