microbiologia

TEMA 23.- ENTEROBACTERIAS I

1. INTRODUCCIÓN.

2. CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES.

3. ESTRUCTURA ANTIGÉNICA.

3.1 Antígenos: O, H y K (capsular).3.2 Toxinas: exotoxinas, endotoxinas, hemolisinas y colimicinas.

4. GÉNEROS.

4.1 Fermentadores rápidos de lactosa.4.2 Fermentadores lentos de lactosa.4.3 No fermentadores de lactosa

5. PRUEBAS BIOQUÍMICAS.

6. AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS.

6.1 Medios de cultivo: Diferenciales poco selectivos: McKonkey y EMB. Diferenciales selectivos: SS, XLD y Hektoen. Complejos diferenciales: KIA y TSI.

6.2 Caldos de enriquecimiento: Selenito. Tetrationato.

6.3 Prueba de la DNAasa.

1.INTRODUCCIÓN.

Son bacilos gram -, aerobios y/o anaerobios facultativos, móviles (con flagelación) o inmóviles que en la última edición del manual de Bergey’s se clasifican en la familia Vibrionaceae.

Se caracterizan por ser fermentadores de glucosa, suelen ser huéspedes habituales del tracto gastrointestinal de hombres y animales, produciéndose en muchas ocasiones efectos patógenos, en otros casos puede actuar como saprofito de la flora intestinal.Se pueden encontrar en agua y suelo y se pueden comportar como oportunistas.

2. CARACTERÍSTICAS MÁS IMPORTANTES.

Son cocobacilos gram -. Aerobios y/o anaerobios facultativos. Móviles o inmóviles. Oxidasa -. Catalasa +. Fermentadores de glucosa. Reducen nitratos a nitritos. Son muy importantes las pruebas del INVIC, KIA y TSI. Pueden producir gran cantidad de fermentos como gelatinazas, descarboxilasas,

ureasas y galactosidasas. Algunos pueden producir sulfhídrico. Presentan gran similitud biológica con los vibrios, por eso se estudian conjuntamente

aunque los vibrios son oxidasa +.

3.- ESTRUCTURA ANTIGÉNICA

3.1.- ANTÍGENOS

Antígeno somático O : Termosestable, ligado a la pared bacteriana siendo una endotoxina que presenta una parte proteica responsable del poder antigénico, y una parte lipídica responsable, en parte de la toxicidad.

Antígeno capsulado K : De naturaleza polisacárida con propiedades antiparasitarias. Antígeno flagelar H : De carácter proteico y responsable de la acción patógena de las

bacterias.

3.2.- TOXINAS

Exotoxina : son enterotoxinas. Endotoxinas : responsables del shock tóxico. Hemolisinas : las producen algunas cepas. Colimicinas : susutancias son efecto antibiótico (son tóxicas para las cepas de la misma o

distinta especie de las cepas que las producen).

4.- GÉNEROS DE ENTEROBACTERIAS

Las enterobacterias siempre han sido clasificadas en función de su capacidad de fermentar la lactosa. Hay tres grupos:

1. Fermentadores rápidos de lactosa : en él se encuentran Escherichia coli, Klebsiella y Enterobacter.

2. Fermentadores lentos de lactosa : se encuentran Citrobacter,Serratia, Yersinia y Shigella sonnei. Estos dos grupos de les denomina coliformes por su capacidad de fermentar la lactosa.

3. No fermentadores de lactosa: son no coliformes, se encuentran Salmonella, Shigella y Proteus.

5.- PRUEBAS BIOQUÍMICAS

(Ver tabla 13.2)

6.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

6.1.- MEDIOS DE CULTIVO

Los medios más utilizados son:

1.- Medios diferenciales poco selectivos: Permiten ver las diferencias entre fermentadores y no fermentadores de lactosa. Se utilizan:

- Mackonkey (MK): donde los fermentadores aparecen formando colonias rosas y los no fermentadores colonias incoloras

- EMB (Medio eosina azul de metileno o Levine)

2.- Medios diferenciales más selectivos: Son:- Agar SS- Medio XLD- Medios Ektoen

3.- Complejos diferenciales: Son:- KIA (agar triple Fe): contiene lactosa y glucosa- TSI (triple azucar Fe): contiene lactosa, glucosa y sacarosa

Tanto TSI como KIA son medios sólidos en tubo que constan de 2 partes:a.- Parte superior acabada en pico de flauta que permite ver el crecimiento aerobiob.- Parte inferior que permite ver el crecimiento anaerobio.La siembra se hace a partir de una colonia bien aislada, tanto en la inclinación como en

el fondo.Las reacciones que pueden tener lugar y sus interpretaciones son:

Parte aeróbica

Fondo

Alcalino Ácido Inclinación roja y fondo amarillo, solo hay fermentación de la glucosa.

Parte aeróbica

Fondo

Ácido Ácido Amarillo / Amarillo, fermentación de glucosa y lactosa.Alcalino Alcalino Rojo / Rojo, no hay fermentación.Alcalino Sin

cambioIndica inclinación roja / fondo naranja, no hay fermentación de azucares, únicamente utiliza las peptonas.

Los medios KIA y TSI permiten observar si hay producción de gas en cuyo caso aparecerá burbujas de aire o elevación del medio y en ocasiones desquebrajamiento del medio.

A las bacterias productoras de gas se les denomina aerogénicas y las no productoras anaerogénicas.

La producción de sulfhídrico se pone de manifiesto con la aparición de coloración negra, debido a las sales ferrosas como consecuencia de la reacción del sulfhídrico con Fe 3+.

Por tanto KIA y TSI ponen de manifiesto tres características: - Capacidad para fermentar la lactosa (KIA) o lactosa y sacarosa (TSI).- Producción de gas por fermentación de azucares.- Producción de sulfhídrico.

6.2.- CALDOS DE ENRIQUECIMIENTO

Para que las bacterias se multipliquen y crezcan podemos utilizar caldos de enriquecimiento, ej.:

- caldo selenito → Salmonella - caldo tetrationato → Salmonella y Shigella.Estos caldos son muy utilizados en las pruebas de heces, se toma con una torunda la muestra y se disuelve en dicho caldo 24 – 48 h.

6.3.- PRUEBA DE LA ADN asa

Se realiza sobre un agar que contiene verde de metilo como indicador y ADN como sustrato. Los organismos que producen ADNasa se identifican por la producción de una zona clara alrededor de la colonia.

TEMA 24.- ENTEROBACTERIAS II

1.- SALMONELLA

1.1.- Introducción1.2.- Epidemiología1.3.- Acción patógena e interés clínico

- Fiebres tifoideas- Fiebres paratifoideas- Infección gastrointestinal

1.4.- Tratamiento

1.5.- Aislamiento y Características bioquímicas

2.- SHIGELLA

2.1.- Introducción2.2.- Acción patogénica e interés clínico

- Ag O y K- Exotoxinas (neurotoxina, citotoxina y enteroinvasiva)

2.3.- Tratamiento

3.- ESCHERICHIA COLI

3.1.- Introducción3.2.- Clasificación según cuadro clínico

a. Enteropatógenasb. Enterotoxígenac. Enterohemorrágicad. Enteroinvasiva

3.3.- Profilaxis y tratamiento3.4.- Aislamiento y Características bioquímicas

4.- YERSINIA

4.1.- Introducción4.2.- Especies más importantes

a. Yersinai pestis (bubónica, pulmonar y septicémica)b. Yersinia pseudotuberculosisc. Yersinia enterocolítica

4.3.- Aislamiento y Características bioquímicas

5.- OTRAS ENTEROBACTERIAS (OPORTUNISTAS)

1.- SALMONELLA

1.1.- INTRODUCCIÓN

El género Salmonella es el responsable de un gran número de gastroenteritis por los alimentos.Es móvil, con flagelación perítrica, no coliforme, no esporulado y casi nunca capsulado. Tiene un carácter más o menos patógeno según las especies.

1.2.- EPIDEMIOLOGÍA

Las fuentes más frecuentes de infección son las aves (pollos, patos, etc.) y sus productos (huevos).

Los brotes suelen aparecer por ingestión de alimentos que contienen huevos crudos o carnes poco hechas, dado que la Salmonella es sensible al ácido gástrico se tienen que ingerir

un gran número de microorganismos (106-109 o/ml. o gr.) para que aparezcan los síntomas, multiplicándose en el intestino delgado.

1.3.- ACCIÓN PATOGÉNICA E INTERÉS CLÍNICO

Su acción patogénica va a ser dependiente de los antígenos estructurales y toxinas. Poseen 3 antígenos:

Antígeno somático O. Antígeno flagelar H. Antígeno capsular K.

También posee una endotoxina y una enterotoxina responsable del efecto irritante y en ocasiones citotóxico sobre el tracto intestinal.

Las especies del género Salmonella pueden actuar sobre el hombre y animales, los más importantes son: S. typhi, S. paratyphi, S. choleraesuis y S. enteritidis.Los principales cuadros clínicos son:

a.- Fiebres tifoideas( S. Typhy) y Fiebres paratifoideas( S. paratyphi ) La Salmonella tras ser ingerida llega al intestino delgado y penetra por endocitosis

destruyendo parte de la mucosa intestinal. Una vez dentro la Salmonella son fagocitadas por macrófagos originando una primera bacteriemia que tiene una duración de 8-15 días, a partir de aquí hay un comienzo brusco de signos y síntomas de la enfermedad.La Salmonella en sangre es de nuevo captada por los mononucleares y de aquí pasa al bazo, hígado, etc. produciendo la multiplicación de nuevas Salmonellas, volviendo de nuevo al intestino donde provocan unas placas ulceradas con necrosación denominadas placas de peyer y en casos más graves pueden originar perforación y hemorragias.Las fiebres pueden alcanzar 40ºC y durar varias semanas. Van acompañadas de dolores de cabeza, anorexia, debilidad, dolor muscular, etc.El germen se elimina a través de las heces (Salmonella en heces es patógeno)

b.- Infecciones gastrointestinales Es la infección más frecuente en caso de Salmonella. El periodo de incubación es de 8-

48 horas de haber ingerido el alimento contaminado. Aparecen nauseas, vómitos, etc.El síndrome requiere tratamiento de aproximadamente 6 días. Puede ser que no existan bacterias en sangre , sin embargo sí aparecen en heces.

Las personas más propensas a padecer la infección son niños, ancianos e inmunodeprimidos.Tras una infección de fiebres tifoideas un 1-3% se vuelven portadores crónicos eliminándolo en las heces durante largos periodos de tiempo.Desde el punto de vista epidemiológico tiene gran importancia dado que de este modo se contribuye a la diseminación del patógeno.En las salmonelosis no tifoideas menos del 1% de los pacientes van a seguir excretando el bacilo por heces.

1.4.- TRATAMIENTO

Ampicilina, cloranfenicol, trimetropim, sulfametoxazol y cefalosporinas.

1.5.- AISLAMIENTO Y CARACTERÍSTICAS BIOQUÍMICAS

Toma de muestras

Se realiza en alimentos contaminados, sangre y heces.

En caso de enfermedades gastrointestinales son importantes los coprocultivos y alimentos sospechosos. En casos de fiebres tifoideas y paratifoideas las muestras se obtienen de sangre, orina y heces.

2.- SHIGELLA

2.1.- INTRODUCCIÓN

Bacilo gram -, no esporulado, no flagelado, no produce desaminasas, ni gas, ni H2S.

2.2.- ACCIÓN PATOGÉNICA

Se debe a los factores antigénicos 0 y K y a la producción de toxinas, principalmente exotoxinas que presentan propiedades citotóxicas, neurotoxicas y enteroinvasivas.La toxina esta compuesta por 2 subunidades:

- subunidad b, que actúa adheriendose a las células del epitelio gastrointestinal (efecto enteroinvasivo).

- subunidad a, cuyo mecanismo consiste en el bloqueo de la síntesis proteica (efecto citotóxico que origina un estado de necrosis celular con la consiguiente formación de ulceras, hemorragias y perforaciones, siendo un cuadro clínico muy grave.

Cualquier especie de Shigella al llegar al intestino comienza a ejercer la acción toxica para pasar después al colón complicando el proceso, lo que origina neurosis y en general los signos y síntomas anteriormente descritos.

Los cuadros diarreicos van acompañados de dolor cólico, nauseas, vómitos, fiebre y deposiciones cada vez más sanguinolentas (disentería bacilar), con moco y pus, los más afectados son los niños.

2.3.- TRATAMIENTO

El mismo que para Salmonellas y también fluoroquinolonas.

3.- ESCHERICHIA COLI

3.1.- INTRODUCCIÓN Y CLASIFICACIÓN SEGÚN EL CUADRO CLÍNICO

Bacilo gram negativo, no esporulado, móvil con flagelos períticos, raramente capsulado y su capacidad antigénica se debe a los Ag O y K confiriéndole propiedades antifagocitarias y de resistencia frente a sustancias bactericidas, proporcionándole con ello alto poder invasivo.

También presenta distintos tipos de toxinas, así los cuadros clínicos de las cepas patogénicas para el hombre son más o menos variables según el tipo de toxina que la origina:

1. Escherichia coli enteropatógena : forma una enterotoxina citotóxica con cuadros diarreicos en brotes epidémicos que afecta principalmente a niños y lactantes.

2. Escherichia coli enterotoxígena : forma una enterotoxina semejante a la del Vibrio cholerae, provocando procesos diarreicos que afecta a niños y adultos. Produce la diarrea del viajero.

3. Escherichia coli enterohemorrágica : es similar a Shigella disenteriae que produce procesos diarreicos graves de tipo hemorrágico (sangre).

4. Escherichia coli enteroinvasiva : se presenta principalmente en niños y adultos produciendo cuadros diarreicos graves con fiebre, dolor abdominal, diarreas con gran contenido de moco junto con leucocitos y PMN.

En Escherichia coli no se recomienda dar profilaxis antibiótica para diarrea del viajero con el fin de evitar cepas resistentes, sí es conveniente tomar precauciones como tomar agua embotellada, no consumir hortalizas crudas, etc. En caso de padecer esta infección se procederá a la restauración del equilibrio electrolítico.

3.2.- TRATAMIENTO

El tratamiento en lactantes es neomicina y en adultos fluorquinolonas.


Escherichia coli es saprofito del tubo digestivo y en general su presencia en agua y alimento es indicativo de contaminación fecal reciente.A parte de trastornos gastrointestinales puede originar otras lesiones urinarias, biliares, infección de heridas y lesión en meninges principalmente en neonatos.Es uno de los principales microorganismos productores de infecciones nosocomiales.En cuanto a las pruebas bioquímicas, destacar:- las de la tabla 13.2- las pruebas del IMVIC- Kliger

4.- YERSINIA

4.1.- INTRODUCCIÓN

Bacilo o cocobacilo gram negativo con flagelación peritrica, moviles a 25 ºC e inmoviles a 37ºC. No fermentan la lactosa, no forman esporas y excepcionalmente pueden presentar capsula.4.2.- ESPECIES MÁS IMPORTANTES

Son: Yersinia pestis Yersinia pseudotuberculosis Yersinia enterocolitica

1.- YERSINIA ENTEROCOLITICA

Afecta principalmente a animales aunque también al hombre y principalmente a niños. Es un patógenos capaz de crecer a temperaturas de refrigeración (4ºC), por lo que es un microorganismo a tener en cuenta en industria alimentaria. Se requiere un inóculo de 109 o /gr para adquirir la infección. Tras un periodo de incubación de 4-7 días aparecen síntomas clínicos como: dolor abdominal, fiebre y en ocasiones diarrea. En los casos en los que no hay diarrea se confunde la yersioniosis con apendicitis aguda.Afecta a niños de 5-15 años y principalmente en Europa.Es sensible a aminoglucosidos, cloranfenicol y trimetroprim-sulfametoxazol. No se recomienda la utilización de Ab en caso de que los síntomas solo sean gastrointestinales, ya que la infección suele ser autolimitada.

2.- YERSINIA PESTIS

Es el agente causal de la peste en el hombre. Se origina de forma epidémica, da lugar a cuadros agudos y febriles con alta inflamación de ganglios linfáticos, hemorragias internas, petequias y cuadros septicémicos y de neumonía.Es grave y muy contagiosa aunque para ello es necesario la presencia de ratas y roedores, encargados de su diseminación. Se origina en lugares de salubridad baja.Los factores de virulencia que determinan la gravedad de Yersinia pestis son:

Toxina murina : de carácter proteico; bloquea la utilización de oxígeno por parte de ciertas células y en general sólo se liberan al medio cuando muere la bacteria.

Endotoxinas : liberadas por la bacteria en el transcurso de la enfermedad; están relacionadas con el proceso febril.

Antígeno V : le confiere propiedades antofagocitarias. Coagulasas y fibrinolisinas .

A Yersinia pestis también se le denomina Yersinia bubónica; Llega al hombre a través de pulgas infectadas por ratas con peste. Tras la picadura de la pulga atraviesa los vasos linfáticos y de aquí a los ganglios donde se multiplica formando bubones (inflamación de los ganglios). De aquí pasa a sangre y posteriormente se disemina por bazo, hígado, pulmones, piel y mucosas donde aparecen lesiones con carácter piógeno, hemorrágico, necrótico y edematoso.En casos graves puede aparecer coagulación intravascular por acción de las coagulasas y hemorragias por acción de las fibrinolisinas, colapso circulatorio, toxemia generalizada y muerte.

Existen varias formas clínicas dependiendo de su localización. Las más importantes son:a. Peste bubónica : Es la más frecuente y tras un periodo de incubación de 3-7 días

aparecen los primeros síntomas con escalofríos, vómitos, bubones en ingles, axilas y zona submaxilar. Si no hay tratamiento se produce la muerte.

b. Peste pulmonar : Es una complicación de la peste bubónica, produciéndose una afectación pulmonar grave con insuficiencia respiratoria, siendo altamente mortal.

c. Peste septicémica : Corresponde a los últimos estadíos de la peste en cualquiera de sus formas, pulmonar o bubónica. Es generalmente mortal.


La toma de muestra es a través de exudados purulentos, bubón, sangre, LCR, tejido pulmonar, esputo, etc.

5.- OTRAS ENTEROBACTERIAS OPORTUNISTAS

Klebsiella, Enterobacter y Serratia producen enfermedades nosocomiales. Klebsiella neumoniae es el agente etiológico del 3% de las neumonías de origen

bacteriano. Afecta principalmente a individuos con diabetes mellitus y alcohólicos con infección pulmonar crónica.

Enterobacter se asocia a infecciones de heridas, quemaduras, e infecciones del tracto urinario y respiratorio.

Serratia coloniza el tracto respiratorio y urinario de pacientes hospitalizados. Citrobacter se asocia a infecciones respiratorias y urinarias y, en ocasiones, en neonatos

se ha aislado en meningitis. Proteus, Morganella y Providencia se han relacionado con enfermedades del tracto

urinario; tienen la capacidad de hidrolizar urea con liberación de amoniaco produciendo la alcalinización de la orina que induce a la formación de cálculos renales. La movilidad de Proteus favorece la invasividad del tracto urinario. El género Providencia se ha asociado a bacteriemias en pacientes con catéteres venosos.

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