Anatomía Patológica2019

Dra. Leonor Moyano Schlegel

Servicio de Anatomía Patológica

Instituto Nacional del Cáncer

Hospital Clínico Universidad de Chile

TEMARIO

• DEFINICION

• RESEÑA HISTORICA

• LINEA DE TIEMPO

• AMBITOS DE LA PATOLOGIA

• TECNICAS Y PROCESOS

• INFORME HISTOPATOLOGICO

• FRONTERAS MOLECULARES

• IMPORTANCIA DEL COMITÉONCOLOGICO

Definición de :Patología

• Pathos: Enfermedad Logos: Estudio

• PATOLOGIA: Es el estudio científico de las enfermedades

• Implica los cambios morfológicos, funcionales y estructurales producidos en la Enfermedad.

Anatomía Patológica

La anatomía patológica es hoy una ciencia que estudia las enfermedades desde la morfología hasta la biología molecular .

• La patología la impulsaron los cirujanos y

ginecólogos, por necesidad en su práctica

clínica.

• La estrecha relación con estas

especialidades se mantiene hasta hoy.

- Comités oncológicos

- Reuniones de correlación

Línea de Tiempo

FUNCIONES DE UN SERVICIO DE

ANATOMIA PATOLOGICA

• Biopsias intraoperatorias o contemporáneas

• Biopsias diferidas

• Citologías ginecológicas y misceláneas

• Autopsias no medicolegales

• Reuniones anátomo-clínicas

• Comités oncológicos

• Interconsultas y auditorías

• Investigación

• Docencia

PUNTOS DE ACCION EN CLINICA DE LAANATOMIA PATOLOGICA

Diagnóstico: Benigno / Maligno“In situ”/ InvasorTipo HistológicoEstadio

Pronóstico: Factores HistopatológicosFactores InmunohistoquímicosFactores Moleculares

Tratamiento: Evaluación de respuestaIdentificación de dianas

CONTROL DE CALIDADGeneralidades

• FASE PREANALITICA– Toma de la Muestra– Solicitud de examen– Laboratorio confiable

• FASE ANALITICA– Diagnóstico hecho por especialista– Oportunidad– Correlación diagnóstica

• FASE POSTANALITICA– Asegurar la intervención y seguimiento– Participación en comité oncológico

Método de estudio en patología

• Macroscopía.

• Citología.

• Histología básica.

• Histoquímica y técnicas especiales.

• Inmunohistoquímica.

• Inmunofluorescencia.

• Microscopía electrónica.

• Citofotometría - Morfometría.

• Patología molecular.

• Telepatología.

Anatomía patológica: Material utilizado

Muestras célulares

fragmentos tisulares

órganos

Examen

macroscópico

microscópico

técnicas especialesDiagnóstico

histopatológico

Ca Papilar del Tiroides

Macroscopía

• Exámen visual básico

de las muestras.

• Permite orientar el

diagnóstico, la toma

de muestras para el

proceso y elegir las

técnicas para el

diagnósticoDescripción del órgano

Tamaño

Relaciones

Color

Consistencia

Corte

Alteraciones

HISTERECOMIA TOTAL

POLIPO

VESICULA BILIAR

CONGESTION

CALCULOS

DG: COLECISTITIS CRONICA LITIASICA REAGUDIZADA

Examen Macroscópico

44022

Ca de labio

BP 7756 - 01

BP 23825

Citología

• Estudio de la morfología

celular

• Permite examinar las

características nucleares

y citoplasmáticas

que diferencian unas

células de otras en

especial las de tipo

neoplásicas.

HE 100x

SERIE MIELOIDE EN MIELOGRAMA - GIEMSA

a b c d e f

TIPOS DE CITOLOGÍA

• Exfoliativa ( cuello uterino )

• Aspirativa o por punción ( mama, tiroides )

• Fluidos líquidos o lavados de cavidades. (Pleura )

• Raspado impronta o aposición de tejidos. ( úlceras )

Fijadores : Spray, alcohol de 96°

Mezcla de alcohol - citrato

Muy importante la fijación inmediata

BIOPSIA INTRAOPERATORIA

• Fijando el tejido por congelación durante el acto operatorio.

• Los cortes se realizan con un micrótomo de congelación.

• Las láminas se tiñen ( HE , azul de toluidina …)

• El proceso demora alrededor de 15

Indicaciones1. Definir carácter biológico de la lesión para decidir el tipo de cirugía.

2. Estudio de extensión para decidir magnitud de la cirugía.

3. Confirmación de bordes quirúrgicos.

RECURSO CARO Y ESCASO

Existen riesgos de error diagnóstico.

SOLO CUANDO IMPLICA CAMBIOS EN LA CIRUGIA

ETAPAS DEL PROCESEMIENTODE LAS BIOPSIAS

BIOPSIA DIFERIDA

• Es aquella que se estudia en forma definitiva con los

elementos diagnósticos disponibles.

• El nivel de estudio depende del tipo de muestra,

patología y recursos disponibles.

• Se debe considerar el estado del arte para efectos

médico legales.

Etapas de una BIOPSIA DIFERIDA

1. OBTENCION DE LA MUESTRA

2. ENVASE

Frasco de plástico, transparente, con tapa rosca y boca ancha, para que la muestra ingrese y salga con facilidad del frasco e impida la evaporación de la formalina.

TIEMPO DE ISQUEMIA

4. IDENTIFICACION DE LA MUESTRA

5. SOLICITUD DE EXAMEN:

debe contener :

- Nombre completo con ambos apellidos.

- Edad del paciente o fecha de nacimiento.

- Sexo.

- Nombre del profesional solicitante.

- Organo o lugar de procedencia del tejido.

- Tiempo de evolución de la enfermedad.

- Opinión diagnóstica

- Fecha del examen

- Toda información clínica relevante.

FECHA Nº

Solicitud de Biopsia/Citología C.R. ANATOMIA PATOLOGICA

IDENTIFICACION

Nombres A. Paterno A. Materno

RUT

FECHA NACIMIENTO

TELEFONO

EDAD SEXO F BENEFICIARIO M PRIVADO PROCEDENCIA

SERVICIO

PABELLON

FECHA DE OBTENCION MUESTRA

MUESTRAS

DIAGNOSTICO CLINICO

ANTECEDENTES

INTERCONSULTA:

MEDICO RESPONZABLE

Nombre Firma

ANTECEDENTES GINECOLOGICOS ( si procede )

G: P: A: FUR : pap alt: Tratamientos previos:

Embarazo: Cono: HT: RT: QT:

…………………………………………………………………………………………………………… USO ANATOMIA PATOLOGICA Cod dg Screening cod dg NOTIFICACION

RECHAZO CODIGOS MACRO ARCHIVO Aceptada 01-08-001

Rechazo 01-08-002 Tipo 1 01-08-004

Tipo 2 01-08-005

Tipo 3 01-08-006 Tipo 4 01-08-007 01-08-008

BANCO TUMORES

NUMERO DE MUESTRAS: TUMOR

SANO Patólogo Responzable

ES UNA INTERCONSULTA

FIJACION

• La fijación es el proceso mediante el cual

se detiene el proceso de autodigestión

citoplasmática y nuclear.

• Permite que la célula mantenga la forma

que tenía cuando estaba vital.

FORMALINA

• Fijador universal, – tiene como componente activo el formaldehido

• El volumen del líquido fijador – 5 a 10 volúmenes por 1 volumen de muestra.

• La solución comercial es al 37-40 % – al diluir 1L de esta solución 10 veces se alcanzará

entonces la dilución de formaldehído al 4% ó formalina al 10%.

Formalina tamponada o neutralizada.

EN EL LABORATORIO• RECEPCION EN LABORATORIO

• MACROSCOPIA

• ENCAPSULACION

• INCLUSION

• DESHIDRATACION E IMPREGNACION

• CORTE

• TINCION CORRIENTE

• MICROSCOPIA

• TINCIONES COMPLEMENTARIAS

• INFORME ANATOMO PATOLOGICO

• ARCHIVO

RECEPCION

Identificacion únicaIngreso al sistema

INCANCER: Sistema informatizado con base de datos desde 2014

1991

PROCESADOR DE TEJIDOS

Secuencia de baños de parafina, alcohol y xilol que permiten incluir los tejidos y hacerlos compatibles con los reactivos de tinción.

INCLUSION

Moldes o bloques o inclusiones

CORTE - MICROTOMO DE ROTACION

TINCIONY MONTAJE AUTOMATIZADO

Diagnóstico

HISTOQUÍMICAPAS

HE

IHQ - CMV

Banco de Tejidos en Parafina

TINCION CORRIENTE HEMATOXILINA EOSINA

Vellosidad placentaria

citotrofoblasto

Sinciciotrofoblasto

Eritroblastos fetales

NUCLEOS AZULES

CITOPLASMA ROSADO

Unidad Túbulo - Lobulillar

Células mioepiteliales

Actina +

S100 +

CALPONINA+

P63+

CD10+

TUMOR ENDOCRINO DE PANCREAS

Páncreas normal

tumor40x 100x

TECNICAS HISTOQUIMICAS

• Técnicas de tinción con acción bioquímica sobre el tejido.

Rojo Congo - Amiloide

Gram - Bacterias

Ziehl Neelsen - Bacilos ácido alcohol resistentes

Pearls - Fierro

Fontana Masson - Gránulos neurosecresión

Reticulina - retículo

Von Kossa - Calcio

Giemsa - hematología, gérmenes

Oil red O - Grasa

Luxol fast blue - Mielina

PAS

La técnica más utilizada es el

PAS que permite la identificación

de:

-mucopolisacáridos presentes en

las membranas basales.

- pared de hongos

- mucina de adenocarcinomas.

COLONIA DE BACTERIAS

ACTINOMICES

PAS PLATA

ASPERGILLUS (hifas ramificadas en 45° )

Van GiessonTinción tricrómica:

Colágeno rojo

Núcleo negros

Citoplasma amarillo

Linfocitos

Endotelio

Vaso

Colágeno

Van Giesson

Infarto antiguo de Miocardio

cicatriz

INMUNOFLUORESCENCIA

• Utiliza anticuerpos monoclonales contra diferentes antígenos tisulares o depósitos de inmunoglobulina en membranas basales. – Ig A, IgG, Complemento…

• Estos anticuerpos son acoplados a sustancias fluorescentes y luego visualizadas mediante un microscopio

que emite Luz Ultravioleta.

PIEL , PULMON Y RIÑON

INMUNOHISTOQUIMICA

Aplica la tecnología inmunológica

que ha permitido producir anticuerpos

monoclonales específicos contra

antígenos conocidos

Existen numerosos anticuerpos

disponibles que reconocen

marcadores tumorales, sustancias

tejido específica, diferentes

componentes celulares epiteliales,

estromales etc.

INMUNOHISTOQUIMICA (2)

Indicaciones:

• Tipificar estirpe celular

• Dg. diferencial de neoplasias de células grandes o pequeñas

• Tipificar neoplasias hematológicas

• Factores pronósticos.

Se usan en paneles de sondas para diagnóstico

Se requiere tejido muy bien conservado.

Paneles Dg Inmunohistoquímicos

Inmunohistoquímica Automatizada

TUMOR INDIFERENCIADO GASTRICO

GLANDULAS RESIDUALES

CELULAS TUMORALES

CD 20 +

DG: LINFOMA MALT

= linfocitos B

Ac. Anti - Citomegalovirus

Ac anti- EVB

LINFOMA DEL MANTO

CD 20 CICLINA D1

LEUCEMIA DE CÉLULAS VELLUDAS

aaaaaaa

CELULA DE REED STERNBERG

Célula binucleada con al menos un nucléolo en

cada lóbuloCD15

MICROSCOPIA ELECTRONICA

Es una técnica de gran costo y sofisticación, Actualmente restringida al estudio renal y de algunos tumores

La Fijación: se realiza en glutaraldehido, los cortes son semifinos, se montan en grillas metálicas y se somete a un haz de rayos catódicos

Los aumentos utilizados son:M corriente: 4x 10x 40x 1000x M.electrónica: 10000x 40000x

Se pueden observar:Gránulos de neurosecreción

Gránulos de Birbeck

Cuerpos de Weibel Palade

Melanosomas

BIOLOGIA MOLECULAR

Hibridación in situ

• FISH (con sonda fluorescente)– Her2 mama

– t11-14, 8-18 linfoma

– delp17

• PCR: (1984) Método de amplificación de DNA usando una DNA polimerasa en geles.

- para reconocer gérmenes TBC, HPV …

- translocaciones genéticas Linfomas

- reordenamientos Linfoma T

Gene expression patterns of 85 samples representing 78 carcinomas, three benign tumors, and four normal tissues, analyzed by hierarchical clustering using the 476 cDNA intrinsic clone set.

luminal subtype A, dark blue; luminal subtype B, yellow; luminal subtype C, light blue; normal breast-like, green; basal-like, red; and ERBB2+, pink. (B) The full cluster diagram scaled down (the complete 456-clone cluster diagram is available as Fig. 4). The colored bars on the right represent the inserts presented in C–G. (C) ERBB2 amplicon cluster. (D) Novel unknown cluster. (E) Basal epithelial cell-enriched cluster. (F) Normal breast-like cluster. (G) Luminal epithelial gene cluster containing ER.

Luminal A RE +++

Ck7 / 8 /18/ 5 +

BRCA2

Luminal B RE ++

Mut P53

Tipo Basal Triple –

EFGR +

BRCA1

Her2+ RE y RP-

Her2 +

Tipo mama normal RE+-

CK 5 / 7 -

Clasificación Genética del Cáncer de Mama

Oncotype DX: 21-Gene “Recurrence Score” Assay

Sobrevida para PAM50 Subtipos y Valores de ROR

Clin Cancer Res. 16(21): 5222–5232, 2010

Nature 490:61-70, 2012

2013;11:174-182 J Natl Compr Canc Netw

Cambios Genéticos en Tumores Sensibles o Resistentes a Inhibidores de Aromatasa

2013;11:174-182 J Natl Compr Canc Netw

Cambios Genéticos Intra - subtipos

Alteraciones Genéticas Linfomas

Ca. De Mama c-erb B2

Amplificación Her2neunormal

Paciente de alto riesgo. Susceptible a tto con HERCEPTIN

Laboratorio de Patología molecular INCANCER 2019

Identificación Mutación c.182A>T; p(Gln61Leu) en gen NRAS

Mutación NRAS

Control interno(calidad ADN)

La curva en color negro (fluoróforo FAM) indica la presencia de la Mutación c.182A>T;p(Gln61Leu) en gen NRASmientras que la curva anaranjada (Fluoróforo Hex) es el control interno de la muestra que indica que elADN genómico extraído es confiable para la reacción de PCR, representa la amplificación de otra región de ADN. Enparalelo se realizaron los controles negativos y positivos los cuales resultaron en lo esperado, es decir controlesnegativos amplificación (sin señal de fluorescencia FAM, HEX) controles positivos si hay amplificación (presencia defluorescencia FAM, HEX)

PCR EN TIEMPO FINAL : CASO CANCER DE COLON

Informe Histopatológico

• Protocolizados• Diagnósticos universales• Etapificación patológica

• Consensuados en COMITES ONCOLÓGICOS

• Son documentos públicos

Utiles para el diagnóstico, pronóstico y tratamiento.Herramienta para la docencia e investigación.

GRACIAS