Universidad Agraria La Molina

INFORME Nº 1

Título:Preparación de una muestra fija de bacterias para tinción y

Tinción simple con colorantes básicos.

Profesor: Roberto Ramos

INTEGRANTES:

CODIGO APELLIDOS Y NOMBRES

2012124420120431

Chavez Mansilla, Carlos EduardoCarbajal Carrasco , Stefany G

MESA Nº 3

INTRODUCCIÓNLa microbiología es una ciencia biológica que se encarga de estudiar a los microorganismos. Estos microorganismos son seres vivos diminutos que individualmente suelen ser demasiado pequeños para ser observados a simple vista, por lo que se usan microscopios para su observación y unas muestras que se enseñaron a preparar en la práctica de laboratorio. La preparación de una muestra fija de bacterias para tinción y tinción simple con colorantes básicos.

En el informe se explicaran dichas técnicas de fijación y tinción, los microorganismos que se estudiaron, también la forma, tamaño y agrupaciones del microorganismo.

Objetivos

1.- Aprender los procedimientos para la preparación de una muestra fija de bacterias para tinción.

2.- Aprender los procedimientos para la tinción simple con colorantes básicos.

3.- Observar las diferentes formas, tamaños y agrupaciones que presentan el microorganismo aplicando el método simple de tinción.

4.- Que colorante básico es más reactivo y eficiente al contacto con los microorganismos.

I) MATERIALES Y MÉTODOS Portaobjetos

Microscopio óptico

Solución de cristal violeta

Solucion de cloruro de azul de metileno

Solución de carbolfucsina

Asa de Kolle

Mechero de alcohol

Piseta con agua

Aceite de inmersión

Papel secante

Soporte para tinción

Cultivos: E. coli. , Staphylococus sp. , Bacillus sp.

Metodología:

-Primero se preparó la muestra: Se colocó una gota de agua sobre la lámina portaobjeto limpia. Con la

asa de Kolle se colocó la muestra a fijar, se esparció bien hasta que se

formó una película delgada. Se secó la lámina al aire y con ayuda del

mechero. Se pasó la lámina tres veces sobre el mechero, cuidando que

la película este hacia arriba y que la lámina no se recaliente pues podría

alterar la forma y estructura del microorganismo.

-Luego se hizo la tinción de la muestra:Se agregó una cantidad razonable de colorante básico (cristales de

violeta, azul de metileno o carbolfucsina) para la tinción de muestra,

actuando un tiempo correspondiente a cada colorante básico (10 seg.,

20 seg. o 5 seg.) respectivamente luego se removió con agua de la

piseta, finalmente se secó la muestra sobre el mechero después de ello

se coloca una gota del aceite de cedro colocándolo así en el

microscopio compuesto a 100 x y se procedió a observar la muestra.

CUESTIONARIO

Pregunta 1

¿Cuáles son las agrupaciones más frecuentes de bacterias?

Para Vera García Crotés (2005),Las células bacterianas, principalmente los cocos, presentan agrupaciones que son características de la especia, por lo que el tipo de agrupación tiene valor practico en la identificación.

Los cocos forman diversas agrupaciones, debido a dos factores: el plano de visión celular y la tendencia de las células a permanecer unidas después de la división. Esto da origen a patrones de agrupamiento conocidos como estreptococos, estafilococos, tetracocos o tétradas y sarcinas.

Los bacilos no forman agrupaciones tan complejas como los cocos, pero se pueden presentar en pares (diplobacilos) o en cadenas (estreptobacilos)

Los espirilos, generalmente, no presentan agrupaciones, pero el número de vueltas de la espiral puede ser característico de la especie.

Fuente de la imagen: Introducción a la microbiología de Vera García Cortes (2005) 2da Edición

Pregunta 2

¿En qué rango de tamaños se definen las bacterias?

Para Marta negroni (2009)“El tamaño término medio es de 1μm, que es el diámetro de cocos y el diámetro menor de los bacilos y los espirilos. El largo de algunas bacilos o formas espiraladas puede alcanzar los 20μm o más”.

Para J. Tortora, R. Funke y L. Case (2007)“Las bacterias son de tamaños y formas muy variables, la mayoría de ellos miden entre 0.2μm y 2μm de diámetro y entre 2μm y 8μm de largo”.

Fuente de las imágenes: Introducción a la microbiología de J. Tortora, R. Funke y L. Case (2007) 9ª edición

(BACILOS)(COCOS)

5.-¿Qué importancia le atribuye a las diferencias en reactividad, los colorantes empleados?

Los colorantes empleados tienen diferentes efectos, en el caso de las gram- negativas, son constantes en su reacción, los organismos gram positivo pueden presentar respuestas variables, por ejemplo los cultivos antiguos de algunas bacterias gram positivas pierden la propiedad de retener el cristal de violeta, y en consecuencia se tiñen con la safranina. (PELCZAR, M; REID, R. 1966.)

Los colorantes más reactivos (como la carbolfucsina), a pesar de ahorrar tiempo, pueden no ser útiles para determinados tipos de bacterias, además en algunos casos pueden teñir tanto bacterias como restos de materia orgánica incluidos en la muestra, o incluso 2 tipos diferentes de bacterias que se quieran diferenciar, lo que causaría confusión e imprecisión. Los colorantes menos reactivos, o aquellos que tardan mayor tiempo en enlazarse, puede que presenten mayor dificultad a la hora de entrar en la bacteria, por tanto pueden ser más específicos y reaccionen en menor medida con la materia orgánica.

6.- ¿Qué función cumple el aceite de cedro?La función del aceite de inmersión es restringir el movimiento de la muestra, además de evitar el rozamiento entre el cubre objetos y el objetivo, generalmente se lo utiliza cuando vamos a observar con el objetivo 100x. Otra función del aceite de inmersión es evitar que la luz se desvíe; al contrario lo que se pretende es que la luz llegue concentrada hacia la muestra

Bibliografía MARTA NEGRONI (2009) Microbiología Estomatológica fundamentos y guía

práctica. 2da Edición. Buenos Aires-Argentina. Editorial Médica Panamericana.640 paginas.

J. Tortora, R. Funke y L. Case (2007) Introducción a la microbiología. 9ª Edición. Buenos Aires-Argentina. Editorial Médica Panamericana. 963 paginas.

Libro en línea. Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=Nxb3iETuwpIC&pg=PA387&dq=rango+de+tama%C3%B1os+se+definen+las+bacterias&hl=es&sa=X&redir_esc=y#v=onepage&q&f=false

Vera García Cortes (2005) Introducción a la microbiología 2da Edición. Costa Rica. Editorial: EUNED. 256 paginas. Libro en línea. Disponible en: https://books.google.com.pe/books?id=K_ETVnqnMZIC&printsec=frontcover&hl=es&source=gbs_ge_summary_r&cad=0#v=onepage&q&f=false

MADIGAN, M; MARTINKO, J. 2009. Brock, biología de los microorganismos. Editorial Pearson Educación SA. España.

PELCZAR, M; REID, R. 1966. Microbiología. Editorial Ediciones Castilla. España.

WISTREICH, G; LECHTMAN, M. 1983. Prácticas de laboratorio en microbiología. Segunda Edición. Editorial Limusa. México