UNIVERSIDAD NACIONAL AGRARIA LA MOLINA

EQUIPOS Y MATERIALES UTILIZADOS EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Alumno:

Valverde Ovalle, Eduardo

Código:

20110437

Curso:

Microbiología Pesquera

Grupo:

A

Profesora:

Nancy Martínez Ordinola

1.- INTRODUCCION

Un laboratorio de microbiología es un lugar donde se pueda habilitar, manejar y examinar microrganismos. Debe ser extremadamente limpio y ordenado. Cuenta de una zona limpia para preparar los medios de cultivos y realizar los análisis microbiológicos y una zona sucia donde se acondiciona el material con el que se va a trabajar.

En un laboratorio de microbiología encontraremos distintos tipos de materiales: vidrio, plástico, porcelana; además de equipos como autoclave, horno, incubadoras, refrigeradoras, centrifugas, etc.

Cuando manejamos cualquier tipo de muestra debemos evitar que microorganismos ajenos a nuestros cultivos y presentes en el ambiente se introduzcan en ellos contaminándolos, o que los microorganismos de la muestra nos contaminen a nosotros. Por ello se debe trabajar en condiciones de estabilidad.

2.- OBJETIVOS

Conocer el ambiente del laboratorio de microbiología, los equipos y materiales que son necesarios para realizar las prácticas.

Tener un conocimiento del uso adecuado de los equipos utilizados en el laboratorio de microbiología.

3.- REVISION BIBLIOGRAFICA

AUTOCLAVE

La autoclave de laboratorio es un dispositivo que sirve para esterilizar material de laboratorio, utilizando vapor de agua a alta presión y temperatura, evitando con las altas presiones que el agua llegue a ebullir a pesar de su alta temperatura. El vapor alcanza una presión interna de 103 kPa y una temperatura de 121°C y el tiempo típico de esterilización a esta temperatura y presión es de 15 minutos.

A la temperatura de 100°C no se logran eliminar todas las bacterias, lo que se busca es eliminar el clostridium botulinum ya que es mortal.

Si se desea saber si el quipo esta funcionando bien se utilizan indicadores que son colocados a cada material y si se colorea es que no ha llegado a la temperatura adecuada. La autoclave también puede ser utilizada para esterilizar material que ha sido usado y se ha contaminado.

HORNO U ESTERILIZADOR

Este dispositivo se utiliza especialmente para la destrucción de los microrganismos, sean patogicos o no, que estén sobre o dentro del material mediante el calor seco . Se debe trabajar a una temperatura de 180°C por un tiempo de 2 horas.

REFRIGERADORES

Son útiles para guardar reactivos perecederos y para la mantención de los medios de cultivos, cuya temperatura de almacenamiento debe ser controlado , algunos presentan regulador electrónico digital de temperatura.

ESTUFAS O INCUBADORAS

Es un dispositivo con funciones especificas que permite controlar, según su diseño, temperatura y humedad para crear un ambiente adecuado apto para la reproducción y desarrollo de organismos vivos. Algunas de la aplicaciones mas comunes son los cultivos microbiológicos, micológicos y virales, entre otros. Pueden ser diseñadas para aplicaciones donde se puede controlar parámetros como temperatura, DBO o condiciones atmosféricas.

CONTADOR DE COLONIAS

Está diseñado para el conteo rápido y preciso de las colonias de bacterias y moho en placas de cultivo. Permite el conteo de las colonias de bacterias por cada pulsación del contador quedando grabado en la pantalla digital de tres (3) dígitos hasta un total de 999 colonias. Provisto de luz blanca que ilumina directamente desde

abajo, lo cual permite una óptima visualización de las cajas petri con cultivos o colonias de bacterias de colores diferentes.

CENTRIFUGA

Se utiliza para acelerar la separación por gravedad de partículas solidas suspendidas en liquidos. Hay centrifugas de tamaño y velocidades variables. La velocidad a la cual se sedimentaran las partículas en un líquido depende de varios factores.

BAÑO MARIA

Es un método empleado para conferir temperatura uniforme a una sustancia liquida o solida o para calentarla lentamente, sumergiendo el recipiente que la contiene en otro mayor con agua que esta en ebullición. Tiene salida de aire y presentan un termostato que regula la temperatura del agua, además de presentar un piso para colocar los materiales.

GABINETE MIROBIOLOGICO

Equipo para manipular muestras biológicas bajo una atmósfera microbiológicamente controlada. Gabinete de seguridad biológica con ventana frontal deslizable y alarma que indica el nivel de apertura de la ventana. Flujo de aire vertical y recirculación de aire filtrado. De acero inoxidable. Con filtros absolutos de eficiencia del 99.99% (HEPA) y retención de partículas de 0.3 micras. Con llave para toma de oxígeno.MECHERO

Es un tubo con un diámetro de 1.5 cm. con una base redonda de aproximadamente 10 cm. de diámetro, que en la parte baja del tubo se encuentra una entrada para el gas butano y un anillo regulador. Por la parte superior del tubo se forma la flama del mechero la cual brinda un margen de seguridad al formar un área de esterilidad de aproximadamente 15 a 25 cm. de radio.

PROBETA

La probeta o cilindro graduable es un instrumento volumétrico, que permite medir volúmenes superiores y mas rápidamente que las pipetas, aunque con menor precisión. Esta formado por un tubo generalmente transparente de unos centímetros de diámetro, y tiene una serie de marcas grabadas. En la parte inferior esta cerrada y posee una base que le sirve de apoyo y la superior esta abierta.

MATRAZ

Es un frasco transparente de forma conica con una abertura en el extremo angosto, generalmente prolongado conun cuello cilíndrico, suele incluir algunas marcas. Por su forma es útil para realizar mezclas por agitación y para la evaporación controlada de liquidos; además, su abertura estrecha permite utilizar tapones. El matraz enlermeyer no se suele utilizar para la medición de liquidos ya que sus medidas son imprecisas.

PIPETAS

Instrumento volumétrico que permite medir alícuotas de liquido con bastante precisión. Suelen ser de vidrio. Formado por un tubo hueco transparente que termina en una de sus puntas en forma cónica y tiene una graduación indicando distintos volúmenes.

TUBOS DE PRUEBA

Consiste en un pequeño tubo de vidrio con una punta abierta que puede tener tapa, y la otra cerrada y redondeada, que se utiliza para contener pequeñas muestras liquidas. Se emplean como recipientes de cultivo, deben ser de vidrio neutro, paredes gruesas y equilibradas.

JARRA DE ANAEROBIOSIS

Este aparato sirve para mantener bacterias anaerobias. Tiene unos tubos en donde se conectan a una maquina que succiona el aire. La tapa tiene un catalizador para facilitar el proceso. En otros casos se coloca un reactivo que reacciona con el oxigeno eliminándolo.

MICROSCOPIO OPTICO

El microscopio óptico es un instrumento que sirve para aumentar el tamaño de un objeto a través de un sistema de lentes. Puede conseguirse con este método un aumento de hasta 2000 veces. Las partes de las que se compone un microscopio se pueden dividir en parte mecánica y en parte óptica. Tambien se usa el microscopio electrónico para observar la parte interna de los miroorganismos.

BALANZA DIGITAL

Instrumento de precisión para pesar los medios de cultivos y reactivos que se preparan en un laboratorio de microbiología.

PLACA PETRI

Son recipientes cilíndricos de vidrio, plástico u otro material constituido por dos piezas, una tapa y una base. Se utilizan para colocar los medios de cultivos para el cultivo y aislamiento de microrganismos. Las mas usadas son las de 10, 15 o 20mmx100mm.

LAMINAS PORTA OBJETOS

Placa de vidrio rectangular que sirve para realiza diferentes tipos de frotis.

LAMINAS CUBREOBJETOS

Placa de vidrio muy delgada, de forma cuadrada o rectangular que sirve para colocarla sobre frotis húmedos o fijos.

AGUJA DE KOLLE Y ASA DE KOLLE

Se utilizan para pescar, transportar y sembrar el material bacteriológico. Deben ser esterilizados al rojo vivo antes y después de las siembras bacteriológicas. La Asa de Kolle se usa para suspender un organismo que este en un medio liquido.

dotarle de calor necesario para calentar algunas soluciones químicas.

CUESTIONARIO

1. ¿Qué es la esterilización?

Es la eliminación completa de toda forma de vida microbiana de objetos inanimados incluyendo esporas. Puede conseguirse a través de métodos físicos químicos o gaseosos.

Es una técnica de saneamiento preventivo para conseguir la destrucción de todos lo microorganismos y sus formas de resistencia que puedan existir en la superficie o en el espesor de un objeto. Obtiene como resultado la ausencia de todo germen vivo consiguiendo material estéril.

2. Describa las principales formas de esterilización. Material y equipos.

Los métodos de esterilización comprenden entonces, todos los procedimientos físicos, mecánicos y químicos que se emplean para destruir gérmenes patógenos. Los más utilizados en la actualidad son los métodos físicos (calor, radiaciones, filtración, centrifugación) y los métodos químicos (agente químico).

Métodos físicos

Esterilización por medio de calor húmedo

La utilización del calor y su eficacia depende de dos factores: el tiempo de exposición y la temperatura. Todos los microorganismos son susceptibles, en distinto grado, a la acción del calor. El calor húmedo produce desnaturalización y coagulación de proteínas. Estos efectos se deben principalmente a dos razones: 1) El agua es una especie química muy reactiva y muchas estructuras biológicas son producidas por reacciones que eliminan agua y 2) El vapor de agua posee un coeficiente de transferencia de calor mucho más elevado que el aire.

Ventajas:

Rápido calentamiento y penetración

Destrucción de bacterias y esporas en corto tiempo

No deja residuos tóxicos

Hay un bajo deterioro del material expuesto

Económico

Desventajas:

No permite esterilizar soluciones que formen emulsiones con el agua

Es corrosivo sobre ciertos instrumentos metálicos

a) Ebullición: Se requiere un recipiente con agua. Es la aplicación del calor mediante la ebullición del agua a presión atmosférica (100 °C). Mediante este método se esterilizan inyectadoras, agujas e instrumentos de cirugía menor. No es confiable en su totalidad este método por cuanto quedan las esporas

b) Pasteurización:

La pasteurización implica la exposición de líquidos a temperaturas de 55 a 75 °C para eliminar todas las bacterias vegetativas importantes para las enfermedades en humanos; este proceso no afecta las esporas. La pasteurización se emplea comercialmente para hacer que la leche sea segura y ampliar su calidad en almacenamiento. Se utiliza para alimentos y equipo médico frágil.

c) Vapor a presión -Autoclave

Es el método más eficaz para esterilizar medios de cultivo y debe utilizarse para aquellos medios resistentes a las temperaturas elevadas. También se emplea para material de vidrio e instrumentos y para esterilizar cultivos y material contaminado antes de proceder a su lavado. La temperatura del interior de la autoclave depende de la presión del vapor.

La esterilización en autoclave se consigue manteniendo el material a una temperatura de 121°C durante 15-30minutos en vapor puro saturado a 1.054 kg/cm2 sobre la presión atmosférica. El periodo de tiempo necesario, a la temperatura deseada, depende de una serie de factores, entre los que se encuentran los siguientes:

a) La carga microbiana del material que se esta esterilizando y la naturaleza de los contaminantes. Los ingredientes de los medios de cultivo y de los medios deshidratados suelen fabricarse de una forma tal que garantizan un nivel de contaminación muy bajo. Sin embargo en los medios o ingredientes deshidratados pueden aparecer ciertas esporas de bacillus spp. Muy resistentes al calor, a unos niveles tan altos que una descontaminación produciría una importantes desnaturalización térmica.

b) El tamaño del envase y el espesor de su pared. Para que el calor penetre en un recipiente de tipo plano de 500 ml lleno de medio, se necesita doble cantidad de tiempo que para realizar la misma operación en un frasco del mismo tipo, con capacidad para 100 ml, y lleno del mismo medio. Del mismo modo si tuviera paredes mas gruesas.

c) La naturaleza del contenido. En presencia de agar el tiempo necesario para que el calor penetre suele ser aproximadamente el doble del que necesitaría si en su lugar hubiera agua.

Esterilización por medio de calor seco

El calor seco produce desecación de la célula, es esto tóxicos por niveles elevados de electrolitos, fusión de membranas. Estos efectos se deben a la transferencia de calor desde los materiales a los microorganismos que están en contacto con éstos. La acción destructiva del calor sobre proteínas

y lípidos requiere mayor temperatura cuando el material está seco o la actividad de agua del medio es baja.

Ventajas

No es corrosivo para metales e instrumentos.

Permite la esterilización de sustancias en polvo y no acuosas, y de sustancias viscosas no volátiles.Desventajas:

Requiere mayor tiempo de esterilización, respecto al calor húmedo, debido a la baja penetración del calor.

Entre los métodos que utilizan el calor seco como medio de esterilización se destacan:

a) Flameado al rojo con el mechero Bunsen

Consiste en la exposición directa del instrumento a una flama en forma directa por poco tiempo con el mechero de Bunsen. Se emplea para esteriliza alambres, asas e instrumentos metálicos que se han utilizado para sembrar y que son resistentes al fuego. Si se están cultivando patógenos muy infecciosos, es indispensable disponer de quemadores con cono protector o esterilizadores de asas diseñados a propósito para protegerse del material que salpique.

b) Incineración: Consiste en someter el material contaminado a altas temperaturas en hornos especiales para reducirlo prácticamente a cenizas. Su fin es evitar el vertido de material de alto riesgo en la basura.

c) Estufa - Horno Pasteur de aire caliente

Este horno se calienta por medio de electricidad o de gas y se controla termostáticamente. La esterilización se emplea generalmente para instrumentos de vidrio, como tubos de ensayo, placas de Petri de vidrio, matraces y pipetas. Las placas de vidrio y las pipetas se empaquetan fácilmente en envases de cobre, aleación o acero inoxidable preparados para este fin. El material de vidrio debe secarse antes de introducirlo al horno. El horno se utiliza asimismo para esterilizar materiales secos que se encuentran dentro de envases cerrados herméticamente, como por ejemplo, cal y para los aceites minerales que se emplean para la conservación de cultivos bacterianos. La esterilización debe durar al menos 2 horas, empezando a contarse desde que le termómetro marque la temperatura de 160°C. los objetos no deben extraerse del horno hasta que este se haya enfriado, para evitar que el vidrio se quebré.

Esterilizacion por Radiaciones.

La acción de las radiaciones del tipo de radiación y el tiempo de exposición.

a) Radiaciones ionizantes: Producen iones y radicales libres que alteran las bases de los ácidos nucleicos, estructuras proteicas y lipídicas, y componentes esenciales para la viabilidad de los microorganismos, dando lugar a mutaciones en los microorganismos que los incapacitan metabólicamente para producir una enzima esencial y sobreviniendo la muerte bacteriana. Las radiaciones tienen gran penetrabilidad y se las utiliza para esterilizar materiales termolábiles (termosensibles) como jeringas descartables, sondas, etc. Se utilizan a escala industrial por sus costos.

b) Rayos Gamma: Su empleo esta basado en los conocimientos sobre la energía atómica. Este tipo de esterilización se aplica a productos o materiales termolábiles y de gran importancia en el campo industrial. Puede esterilizar antibióticos, vacunas, alimentos, etc.

c) Rayos X: Penetran bien, pero requieren mucha energía, son pocos operativos para su empleo masivo, su uso es muy costoso, por lo tanto son muy poco usados con fines de esterilización

d) Rayos Ultravioletas: Afectan a las moléculas de DNA de los microorganismos. El ADN absorbe una longitud de onda de 2600ª y libera energía ocasionado rearreglo de enlaces químicos son escasamente penetrantes y se utilizan para superficies, se utilizan para la esterilización en quirófanos.

Métodos químicos

a) Oxido de etileno: Es un agente alquilante que se une a compuestos con hidrógenos lábiles como los que tienen grupos carboxilos, amino, sulfhidrilos, hidroxilos, etc. Es utilizado en la esterilización gaseosa, generalmente en la industria farmacéutica. Destruye todos los microorganismos incluso virus; es un agente microbiano de amplio espectro, destruye la bacteria en estado vegetativo, incluyendo al bacilo de la tuberculosis, las esporas y los virus. Sirve para esterilizar material termosensibles como el descartable (goma, plástico, papel, etc.), equipos electrónicos, bombas cardiorrespiratorias, metal, etc. Es muy peligroso por ser altamente inflamable y explosivo, y además cancerigeno.

b) Aldehídos: Son agentes alquilantes que actúan sobre las proteínas, provocando una modificación irreversible en enzimas e inhiben la actividad enzimática. Estos compuestos destruyen las esporas.

c) Glutaraldehído: Consiste en preparar una solución alcalina al 2% y sumergir el material a esterilizar de 20 a 30 minutos, y luego un enjuague de 10 minutos. Este método tiene la ventaja de ser rápido y ser el único esterilizante efectivo frío. Puede esterilizar plástico, goma, vidrio, metal, etc.

d) Formaldehído: Se utilizan las pastillas de paraformaldehido, las cuales pueden disponerse en el fondo de una caja envueltas en gasa o algodón, que después pueden ser expuesta al calor para una rápida esterilización (acción del gas formaldehído). También pueden ser usadas en Estufas de

Formol, que son cajas de doble fondo, en donde se colocan las pastillas y se calienta hasta los 60° C y pueden esterilizar materiales de látex, goma, plásticos, etc. Las pastillas de formalina a temperatura ambiente esterilizan en 36 hs.

e) Esterilización por gas-plasma de Peróxido de Hidrógeno: Es proceso de esterilización a baja temperatura la cual consta en la transmisión de peróxido de hidrógeno en fase plasma (estado entre líquido y gas), que ejerce la acción biocida.

BIBLIOGRAFIA

Harrigan, W.F. (1979). Métodos de laboratorio en Microbiología de alimentos y Productos Lácteos. . Impreso en España. Editorial academia León.

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/dl/free/6071505545/895751/ Ryan_MicrobiologiaMedica_5a_capitulo_muestra.pdf

http://www.podologiaclinica.cl/menu/material/esterilizacion.html

http://www.dcnls.com/Productos/Laboratorio/estufas.htm

http://biblioteca.duoc.cl/bdigital/Documentos_Digitales/600/610/39586.pdf