informe de laboratorio microbiologia

7/24/2019 Informe de Laboratorio microbiologia

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UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA-UNADEscuela de Ciencias Agrcolas , Pecuarias y del Medio Ambiente-ECAPMA

Programa :Ingeniera Ambiental-IAINFORME Laboratorio de Microbiologa

MICROBIOLOGIA AMBIENTAL

INFORME DE LABORATORIO

DIANA MARCELA PALACIO BARRENECHE

CODIGO: 43.257.915

KELLY FERNANDA SILVA CUTIVA

CODIGO: 1.110.576.298

UNIVERSIDAD NACIONAL ABIERTA Y A DISTANCIA

ESCUELA DE CIENCIAS AGRICOLAS, PECUARIAS Y DEL MEDIO AMBIENTE

INGENIERIA AMBIENTAL

2015


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PRACTICA No 1.TEORA BIOSEGURIDAD EN EL LABORATORIO

INTRODUCCIN: Para el desarrollo de las prcticas de laboratorio es conveniente teneren cuenta algunas normas elementales que deben ser observadas con todaescrupulosidad. Cuando se trabaja en un laboratorio existe el peligro potencial de

ACCIDENTES, debido a las sustancias qumicas y elementos que se utilizan y laposibilidad de cometer algn error al realizar un experimento, por tal motivo la seguridad yla proteccin de la salud son indispensables para un ambiente de estudio y trabajo seguroen un laboratorio, por lo tanto todo estudiante, auxiliar y docente debe cumplir las reglasde seguridad e higiene en el laboratorio.

MENTEFACTO CONCEPTUAL

BIOSEGURIDAD EN EL

LABORATORIO

Conjunto de medidas

Tcnicas, cientficas y

organizativas

Que previenen a:

Personas Instituciones Medio ambiente

De la exposicin

a:Agentes

infecciosos

MATERIALES Y MTODOS

Materiales y Equipos requeridos: N/A Reactivos a utilizar: N/A

PROCEDIMIENTO: N/A

TABLA DE DATOS: N/A

RESULTADOS ESPERADOS:


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Se espera que como estudiantes conozcamos las normas de bioseguridad en ellaboratorio, para que de esta manera la prctica se desarrolle en adecuadas condicionesy no se presente ningn tipo de accidente.

GLOSARIO

Agente biolgico: Microorganismos, con inclusin de los genticamente modificados,cultivos celulares y endoparsitos humanos susceptibles de originar cualquier tipo deinfeccin, alergia o toxicidad.

Agentes patgenos: Todo aquel microorganismo capaz de producir enfermedades oinfeccin.

Contaminacin: Presencia de un agente infeccioso en la superficie del organismo;tambin en vestimenta, instrumentos quirrgicos, apsitos u otros objetos inanimados osubstancias, incluyendo el agua y los alimentos.

Riesgo: Probabilidad de que ante un determinado peligro se produzca un cierto dao,pudiendo por ello cuantificarse.


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PRCTICA No. 1 DE RECONOCIMIENTO DEL LABORATORIO Y MATERIALES DEMICROBIOLOGIA

INTRODUCCION: Es muy importante que los materiales y equipos de uso comn en ellaboratorio se identifiquen por su nombre correcto y uso especifico que tiene cada uno,pero ms importante es saber manejarlo correctamente en el momento oportuno,

teniendo en cuenta los cuidados y normas especiales para el uso de aquellos que as lorequieran. Los instrumentos y tiles de laboratorio estn constituidos de materialesdiversos.


MATERIALES Y EQUIPOS DE

LABORATORIO

Para poder efectuar operacionesconcretas en el laboratorio se

trabaja con aparatos elaborados

con materiales diversos como

vidrio, plstico, porcelana y metal.

Se clasifican de la siguiente

manera:

Material de vidrio

Material de porcelana

Material de plstico

Material de metal y madera

Equipos usados en el laboratorio

Microscopio

Balanza analtica

Horno

Plancha de calentamiento

Centrifugas

MATERIALES Y MTODOS

Materiales y Equipos requeridos:

Materiales EquiposPortaobjetos Estufas

bacteriolgicasCubreobjetos Bao bacteriolgico

Caja petri Horno PasteurPipetas graduadas Autoclave

Pipetas Pasteur Jarra de anaerobiosisTubos de ensayo CentrifugaMatraces Nefelmetro de Mac

FarlandProbetas Membranas millipore

Tubos de Durham Cuenta coloniasAsas de inoculacin Microscopio

Mecheros


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Reactivos a utilizar: N/A

PROCEDIMIENTO: N/A

RESULTADOS.

1. Qu caractersticas debe reunir el vidrio utilizado para la fabricacin del materialde cristalera para los laboratorios y por qu?

El vidrio es la sustancia que se utiliza para fabricar elementos de laboratorio debido a sufcil limpieza y su neutralidad frente a los reactivos qumicos. Se obtiene mediante lafusin de varios xidos, como ser: xido de plomo, slice, potasa, sosa, cal, xido dehierro, anhdrido brico, xido de aluminio, todos ellos en distintos porcentajesdependiendo del uso que se le quiera dar como ser: resistencia al calor, a los lcalis o conbajo coeficiente de dilatacin. Por ejemplo el boro le da ms resistencia al calor y elaluminio lo hace menos quebradizo.

Entre los vidrios que ms se ajustan a estas propiedades y que ms se usan en loslaboratorios de qumica estn: vidrio pirex, vidrio borosilicato y vidrio color caramelo.

El vidrio borosilicato posee bajo coeficiente de expansin, con un contenido bajo deelementos alcalinos que no contiene elementos del grupo del calcio y magnesio, cinc ometales pesados. Es particularmente estable a las condiciones de esterilizacin por vaporo va seca.

El vidrio color caramelo ha sido desarrollado para cumplir con las exigencias impuestaspor el manejo de sustancias fotosensibles por ejemplo: vitaminas, sales de plata, etc, otodas aquellas que se descompongan por accin de la luz. Se emplea en la fabricacin de

frascos y buretas entre otros.Vidrio pirex es el ms empleado en el laboratorio y est constituido por boro-silicato,recibe el nombre de Pirex, ya que de esa manera ha sido registrado por la fabrica que loproduce.

2. Explique brevemente las ventajas y desventajas del uso de materiales de vidrio yde plstico, respectivamente, en los laboratorios de microbiologa.

El material de vidrio tiene ventajas que lo sobreponen sobre otros tipos de materiales quese usan tambin en el Laboratorio como el plstico. Dentro de sus ventajas esta sutransparencia, su inercia frente a reactivos qumicos, su facilidad de limpieza y para

algunos casos su resistencia al calentamiento. Por otra parte, la desventaja ms notoriaen el material de vidrio es su fragilidad. Otra de las desventajas se refiere al campo de laseguridad, dado que por las caractersticas del material, a simple vista no se puededistinguir cuando est caliente, lo cual puede generar un accidente.

Los materiales de plstico pueden ser de uso mltiple, p ej. Las probetas, matraces,vasos de precipitados, las placas de petri. El plstico ofrece algunas ventajas frente alvidrio, es resistente a la rotura, tienen un peso bajo. Los utensilios de plstico de


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laboratorio son monmeros orgnicos polimerolarizadas. Hay gran variedad de plsticos,van a tener distintas propiedades fsicas y qumicas (por ejemplo, poliestireno, PVC,polipropileno...).Cuando se utiliza un plstico hay que tener en cuenta el tipo de plsticoque se emplea porque algunos plsticos pueden ser atacados por disolventes orgnicos,por cidos, por bases, adems pocos plsticos pueden superar temperaturas altas.

3. Describa, ilustre y clasifique los siguientes materiales, indicando el uso que se les da enel laboratorio de microbiologa (Sea breve, se le sugiere elaborar un cuadro): a)Portaobjetos b) Cubreobjetos c) Cajas de Petri d) Pipetas graduadas (terminales y noterminales) e) Pipetas Pasteur f) Tubos de ensayo (tipos) g) Matraces (tipos) h) Probetas(tipos) i) Tubos de Durham j) Asas de inoculacin (tipos) k) Mecheros (tipos) l) Estufasbacteriolgicas (tipos) m) Bao bacteriolgico n) Horno Pasteur o) Autoclave p) Jarra deanaerobiosis q) Centrfuga r) Nefelmetro de Mac Farland s) Membranas Millipore t)Cuenta colonias

Nombre Imagen y link de descarga descripcin material

Portaobjetos

www.marienfeld-superior.com

Unportaobjetoses una muy finaplaca de vidrio sobre el cual sedisponen muestras paravisualizarlas en el microscopio.Sus dimensiones tpicas son de 75mm x 166 mm. El objeto aobservar suele disponerse sobreeste instrumento para despussituarse en el microscopio y serobservado. En ocasiones puede

cubrirse la muestra con uncubreobjetos, una fina pieza devidrio.

Vidrio

Cubreobjetos

www.directindustry.es

Un cubreobjetos es una fina hojade material transparente de plantacuadrada (normalmente 20mm x20mm) o rectangular (de 20 mm x40 mm habitualmente). Se colocasobre un objeto que va a serobservado bajo microscopio, el

cual se suele encontrar sobre unportaobjetos. Sirve para: cubrir losobjetos que estn en elportaobjetos que a su vez est enun objeto llamado microscopio o'microscopius' en latn. Tambin esde carcter laboratorico.

Los cubreobjetosusualmente estmanufacturados

de vidrio, por ejemvidrio de silicato

de borosilicato, aun

adems los hay hecde plsticos especiaos. Pueden llegarusarse cubreobjetde cuarzo fundidcuando hace falta

transparencia ultravi, por ej.,
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para microscopafluorescente.

Cajas de Petri

www.drrogeliocalderon.com

La Caja Petrien uninstrumentode laboratorioel cual puede ser

de de cristal o de plstico, su basetiene forma circular y las paredesson de una altura corta,aproximadamente de 1 cm.Tambin tiene una cubierta de lamisma forma pero algo masgrande de dimetro para queencaje como una tapa.Existen diferentes tipos dedimetros de Cajas Petri, en los

laboratorios se utilizan por logeneral los de 10 cm.La CajaPetri se utiliza en los laboratoriosprincipalmente para el cultivo decristales, en los laboratorios debiologase utilizan para el cultivode bacterias o microorganismo.

Vidrio o plstico

Pipetasgraduadas

(terminales yno terminales)

www.acofarma.com

Son utensilios que permiten medirvolmenes. Las hay en dospresentaciones:

a) Pipetas graduada: Es unelemento de vidrio que sirve paradar volmenes exactos, con estapipeta, se pueden medir distintosvolmenes de lquido, ya que llevauna escala graduada. Existen 2tipos de pipetas graduadas:

Terminales: la escala degraduacin termina en lapunta de la pipeta

Subterminales: la escala degraduacin no termina en lapunta de la pipeta.

b) Pipeta volumtrica: Es unelemento de vidrio, que posee unnico valor de medida, por lo que

Vidrio
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slo puede medir un volumen.

Las pipetas graduadas permitenmedir volmenes intermedios,pues estn graduadas, mientras

que las pipetas volumtricas slomiden el volumen que vieneindicado en ellas.

PipetasPasteur

www.wikypedia.com

La pipeta de Pasteur es similar a

un utensilio de gotero,

generalmente formada por un tubo

de vidrio con borde cnico. Sirve

para hacer la transferencia de

pequeas cantidades de lquidos.

Creada por el qumico

francs Louis Pasteur, fue

nombrada en su honor. A

diferencia de otras pipetas, pipetas

esto no proporciona un volumen

dado. Tiene slo abertura inferior

para la entrada de lquido. En su

borde superior, tiene un "globo"

que, cuando se pulsa expulsa el

aire. El extremo inferior se

sumerge en el lquido a ser

transferido y luego soltar el frasco,

el lquido es aspirado en la pipeta 1

. La pipeta de Pasteur se emplea

cuando no se necesita una gran

precisin al transferir el volumen

del lquido.

Vidrio o plastico

Tubos deensayo (tipos)

El tubo de ensayo es partedel material de vidrio de un

laboratorio de qumica. Consiste en

un pequeo tubo cilndrico de

vidrio con un extremo abierto (que

puede poseer una tapa) y el otro

cerrado y redondeado, que se

Vidrio

polipropileno


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utiliza en los laboratorios para

contener pequeas muestras

lquidas o slidas, aunque pueden

tener otras fases, como

realizar reacciones qumicas enpequea escala. Entre ellos est el

exponer a temperatura el mismo

contenedor. Se guardan en un

instrumento

de laboratorio llamado gradilla. Los

tubos de ensayo estn disponibles

en una multitud de tamaos,

comnmente de 1 a 2 cm de ancho

y de 5 a 20 cm de largo. Para eluso sin variaciones extremas de

temperaturas, existen tambin

tubos fabricados

de termoplsticos como

el polipropileno (PP), que suelen

ser de usar y tirar.

Matraces(tipos)

estudiarfarmacia.blogspot.com

Consiste en un recipiente de vidrio

generalmente con base circular o

algo esfrica y un cuello recto yestrecho, que se usa en

laboratorios para medir lquidos o

mezclar soluciones qumicas.

Existen diversos tipos:

Matraz aforado;

Matraz de Erlenmeyer;

Matraz florentino, matraz de

destilacin o baln de destilacin; Matraz de lavado o piseta;

Matraz Schlenk o tubo

Schlenk.

Vidrio

Probetas La probeta es unVidrio
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCLuP-dDBlckCFYHnJgodtQcEvg&url=http%3A%2F%2Festudiarfarmacia.blogspot.com%2F2011%2F05%2Fmatraz-aforado.html&psig=AFQjCNHa2GC-RMPRqTyoooTbG4mHHhjYAQ&ust=1447782865846509https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCLuP-dDBlckCFYHnJgodtQcEvg&url=http%3A%2F%2Festudiarfarmacia.blogspot.com%2F2011%2F05%2Fmatraz-aforado.html&psig=AFQjCNHa2GC-RMPRqTyoooTbG4mHHhjYAQ&ust=1447782865846509


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instrumento volumtrico que

consiste en un cilindro graduado

de vidrio que permite contener

lquidos y sirve para medir

volmenes de forma aproximada.Est formado por un tubo

generalmente transparente de

unos centmetros de dimetro y

tiene una graduacin desde 5 ml

hasta el mximo de la probeta,

indicando distintos volmenes. En

la parte inferior est cerrado y

posee una base que sirve de

apoyo, mientras que la superiorest abierta (permite introducir el

lquido a medir) y suele tener un

pico (permite verter el lquido

medido). Generalmente miden

volmenes de 25 o 50 ml, pero

existen probetas de distintos

tamaos; incluso algunas que

pueden medir un volumen hasta de

2000 ml. Puede estar constituidode vidrio (lo ms comn), o de

plstico. En este ltimo caso puede

ser menos preciso; pero posee

ciertas ventajas, por ejemplo, es

ms difcil romperla, y no es

atacada por el cido

fluorhdrico (cido que no se puede

poner en contacto con el vidrio ya

que se corroe, en cuyo caso la

probeta s lo soporta). Esta

adicionalmente se utiliza para las

mediciones del agua y otros

lquidos. Las probetas suelen ser

graduadas, es decir, llevan

grabada una escala por la parte


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exterior que permite medir un

determinado volumen, aunque sin

mucha exactitud. Cuando se

requiere una mayor precisin se

recurre a otros instrumentos, porejemplo, la pipeta.

Tubos deDurham

http://www.marienfeld-superior.com/

Los tubos de ensayo Durham seutilizan en microbiologa paradeterminar la produccin de gasesde microorganismos. Se colocanestos tubos con la abertura haciaabajo en probetas ms grandes.

Vidrio

Asas deinoculacin

(tipos)

www.wikypedia.com

la asa bacteriolgica o asa de

platino es un instrumento de

laboratorio tipo pinza que consta

de una base que puede estar

hecha de platino, acero, aluminio y

un filamento que puede ser

de nicromo, tungsteno o platino qu

e termina o en un arito de 5 mm o

en punta. Se emplea para

transportar o arrastrar o

trasvasar inculos (pequeo

volumen que

contiene microorganismos en

suspensin) desde la solucin de

trabajo tambin llamada solucin

madre almedio de cultivo (slido

o lquido) o de un medio a otro

(resiembra). Tambin sirve para la

realizacin de frotis. La cantidad de

inculo que se trasvasa viene

determinado por el dimetro del

aro final del filamento, que se

Platino


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encuentra calibrado y normalmente

oscila entre 0,01 y 0,001 ml.

Mecheros(tipos)

www.wikypedia.com

Los mecheros son instrumentos delaboratorio diseados para obtener

una llama calorfica a partir de lacombustin del alcohol o del gas.Los mecheros de alcohol,consisten, en un pequeorecipiente de vidrio de formaredondeada, con el fondo plano,estando provisto por su partesuperior de un pequeo salientecilndrico por donde se enrosca unpequeo tubo metlico de unospocos mm de dimetro a travs del

cual se inserta una mecha cuyoextremo posterior queda encontacto con el alcohol contenidoen el recipiente. Una pequeacapucha cilndrica de metal con elextremo superior redondeado, seutiliza para tapar el mechero y queno se evapore el alcohol.

Metal

Estufasbacteriolgicas

(tipos)

www.ictsl.net

La estufa bacteriolgica es unequipo indispensable en la seccinde bacteriologa, se utilizan a unatemperatura de 37C, para realizarcultivos de bacterias, hongos, auna temperatura igual a la delcuerpo humano. Existen estufasespeciales al vaco, para cultivosde anaerobios. El aire de laestufase elimina mediante unabomba de vaco y se sustituye pornitrgeno; luego ste se elimina y

se sustituye por otro, repitindoseeste procedimiento hasta obteneruna atmsfera pura. La admisinde nitrgeno se regula medianteuna vlvula dosificadora.

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Baobacteriolgico

El bao de Mara es un equipo quese utiliza en el laboratorio para

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https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCJDG-L3ElckCFcLuJgoduL8Kkw&url=http%3A%2F%2Fwww.ictsl.net%2Fproductos%2F01d63694a80f7db0d%2F01d636948a1063d1e.html&psig=AFQjCNFM7Eom91NfqXO1WEoALWGfoSoRBQ&ust=1447783638985157https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCJDG-L3ElckCFcLuJgoduL8Kkw&url=http%3A%2F%2Fwww.ictsl.net%2Fproductos%2F01d63694a80f7db0d%2F01d636948a1063d1e.html&psig=AFQjCNFM7Eom91NfqXO1WEoALWGfoSoRBQ&ust=1447783638985157


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www.medicalexpo.es

realizar pruebas serolgicas yprocedimientos de incubacin,aglutinacin, inactivacin,biomdicos, farmacuticos y hastaindustriales. Por lo general, se

utilizan con agua, pero tambinpermiten trabajar con aceite. Losrangos de temperatura en loscuales normalmente son utilizadosestn entre la temperaturaambientey los 60 C. Tambin se puedenseleccionar temperaturas de 100C, utilizandouna tapa de caractersticasespeciales. Los baos de Marason fabricados con cmaras cuyacapacidad puede seleccionarseentre los 2 y los 30 litros.

Horno Pasteur

www.wikypedia.com

Los hornos de aire caliente,tambin llamados hornos de calorseco, sondispositivos elctricos utilizadospara esterilizacin que formanparte del equipamiento de

laboratorio. El horno utiliza calorseco para esterilizar los objetosque se introducen en l. Engeneral, pueden funcionarcon temperaturas comprendidasentre 50 y 300 C (de 122 a572 F).

Metal

Autoclave

Una autoclave de laboratorio es un

dispositivo que sirve

para esterilizar material delaboratorio. Las autoclaves son

ampliamente utilizadas en

laboratorios, como una medida

elemental de esterilizacin de

material. Aunque cabe notar que,

debido a que el proceso involucra
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCIaJpfvElckCFYg-JgodH3ICWA&url=http%3A%2F%2Fwww.medicalexpo.es%2Ffabricante-medical%2Fbano-laboratorio-bacteriologia-30518.html&psig=AFQjCNEIQmq8oPUlOjuZFR6M0vYQl0rySA&ust=1447783767532712https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCIaJpfvElckCFYg-JgodH3ICWA&url=http%3A%2F%2Fwww.medicalexpo.es%2Ffabricante-medical%2Fbano-laboratorio-bacteriologia-30518.html&psig=AFQjCNEIQmq8oPUlOjuZFR6M0vYQl0rySA&ust=1447783767532712


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www.wikypedia.com

vapor de agua a alta temperatura,

ciertos materiales no pueden ser

esterilizados en autoclave, como el

papel y muchos plsticos (a

excepcin del polipropileno).

Jarra deanaerobiosis

www.analisisavanzados.com

Este aparato sirve paramantener bacterias anaerobias.Tiene unos tubos en donde seconectan a una maquina quesucciona el aire. La tapa tiene uncatalizador para facilitar el proceso.

Centrfuga

La centrfuga es un equipo delaboratorio que generamovimientos de rotacin, tiene el

objetivo de separar loscomponentes que constituyen unasustancia. Hoy en da hay existeuna diversidad de centrifugas quetiene diferentes objetivos,independientemente del tipo deinvestigacin o industria.

Nefelmetrode MacFarland

Un nefelmetro esun instrumento para medirpartculas suspendidas en un

lquido. En microbiologa,los estndares de turbidez deMcFarland se usan comoreferencia en suspensionesbacteriolgicas para saber que elnmero de bacterias por mililitro, oms bien en UFC segn una
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCJHe-5XIlckCFQRjJgodnBIDtA&url=http%3A%2F%2Fwww.analisisavanzados.com%2Findex.php%2Fsistemas-generadores-de-almosferas&psig=AFQjCNHxq5asgZjLmATgBFwoEgJ7EMUJUQ&ust=1447784625354601https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCJHe-5XIlckCFQRjJgodnBIDtA&url=http%3A%2F%2Fwww.analisisavanzados.com%2Findex.php%2Fsistemas-generadores-de-almosferas&psig=AFQjCNHxq5asgZjLmATgBFwoEgJ7EMUJUQ&ust=1447784625354601


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escala que va de 0.5 a 10. Estosestndares son creados al mezclarsoluciones de cloruro de bario al1% con cido sulfrico al 1% envolmenes especficos, para

asegurar la densidad correcta sepuede controlar usandoespectofotometros.

Membranas

Millipore

Son unas membranas que sonutilizadas para realizar filtracin en

los laboratorios de microbiologa.

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Cuentacolonias

articulo.mercadolibre.com.co

Un contador de colonias es uninstrumento utilizado para contarcolonias de bacterias o deotros microorganismos que crecenen una placa de agar. Los primeroscontadores slo eran superficiesiluminadas sobre las que secolocaba la placa, con las coloniasmarcadas con un rotulador en lasuperficie externa de la placamientras el operador realizaba elrecuento manual. Los contadoresms recientes intentan contar lascolonias por va electrnica,mediante la identificacin de reas

individuales de oscuridad y luz, deacuerdo a los umbrales definidospor el usuario, contando los puntosen los que se aprecia contraste, ode modo automtico medianteregistro electrnico tras presionarcon cualquier tipo de marcador
https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCO_mjrDKlckCFYQ2JgodHLIDYg&url=http%3A%2F%2Farticulo.mercadolibre.com.co%2FMCO-417843592-cuenta-colonias-para-laboratorio-marca-scientific-_JM&psig=AFQjCNHnRTmS_l1XZPQHlBQxDZXD0ab_nA&ust=1447785203394374https://www.google.com.co/url?sa=i&rct=j&q=&esrc=s&source=images&cd=&cad=rja&uact=8&ved=0CAYQjB1qFQoTCO_mjrDKlckCFYQ2JgodHLIDYg&url=http%3A%2F%2Farticulo.mercadolibre.com.co%2FMCO-417843592-cuenta-colonias-para-laboratorio-marca-scientific-_JM&psig=AFQjCNHnRTmS_l1XZPQHlBQxDZXD0ab_nA&ust=1447785203394374


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4. Ilustre un Microscopio ptico de campo claro con los nombres de todas sus partes.

5. Enliste detalladamente todas las medidas que se requiere tomar en cuenta para elmanejo correcto y cuidados del microscopio compuesto.

Normas para el uso correcto del microscopio:

-Quitar la funda protectora del microscopio.

-Enchufar el microscopio.

-Colocar en primera instancia el objetivo de menor aumento para lograr un enfoquecorrecto. Este paso en muy importante y se debe realizar siempre, ya que permitir laobservacin de una panormica del preparado histolgico y la ubicacin de reas deinters para su anlisis posterior.

-Subir el condensador utilizando el tornillo correspondiente.

-Colocar la laminilla histolgica sobre la platina, con el cubre-objetos hacia arriba ysujetndola con las pinzas.

-Colocar la lmpara en la posicin correcta y encenderla.

-Enfoque la lmina mirando a travs del ocular y lentamente mueva el tornillomacromtrico.

-Recorra todo el preparado histolgico y haga sus observaciones. Site la lmina en elsitio donde debe seguir observando a mayor aumento.


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-Cambie al objetivo de mediano aumento (10 X) y para lograr el enfoque siga moviendolentamente el t0rmillo macromtrico. Al cambiar de objetivo, la imagen debe estarligeramente enfocada gracias a que la mayora de microscopios son parafocales, es decir,una vez logrado el primer enfoque, al pasar al objetivo de aumento inmediato superior laimagen queda en un foco aproximado y solo se debe realizar un ajuste.

-Realice la observacin y haga sus anotaciones. Determine cul es la estructura que va aobservar a mayor aumento y colquela en el centro del campo.

-Cambie al objetivo de mayor aumento. Si realiz el enfoque de manera correcta con elobjetivo anterior, al colocar el objetivo de mayor aumento la imagen solo se debe enfocargirandonica y lentamenteel tornillo MICROMTRICO. NUNCA se debe utilizar eltornillo macromtrico con los objetivos de mayor aumento, pues al estar ste muy cercadel preparado, se corre el riesgo de partirlo. Si al pasar al objetivo de mayor aumento sepierde el enfoque es recomendable verificar si el cubreobjetos esta hacia arriba. Si lalmina se coloca invertida, no se podr lograr el enfoque con este objetivo. Comiencenuevamente con los enfoques a menores aumentos y repita la operacin desde elprincipio.

-Al lograr el enfoque con el objetivo de mayor aumento debe realizar la observacinmoviendo constantemente el tornillo micromtrico para variar los planos de enfoque. Deigual manera, abra o cierre el diafragma para regular la intensidad de la luz y mejorar elcontraste. Haga sus observaciones.

-Una vez finalizada la observacin, coloque nuevamente el objetivo de menor aumentopara retirar ms fcilmente el preparado histolgico.

-Retire el preparado histolgico y colquelo el porta-lminas.

-Apague la lmpara, desenchufe y coloque el cable alrededor del microscopio, de maneraholgada y sin apretarlo.

-Cubra el microscopio con la funda protectora.

6. Enliste detalladamente todos los pasos que se requiere seguir para enfocar imgenesen un microscopio compuesto.

Enfoque visu al a menor aumento

Se coloca la preparacin centrada en la platina, mirando por fuera, se acerca el objetivode menor aumento a la lmina, girando el tornillo macromtrico hasta que quede a una

distancia ligeramente menor de la distancia de trabajo.Ahora se enfoca girando el tornillo macromtrico hasta ver la imagen del preparado. Unavez obtenida la imagen, complete el enfoque con el tornillo micromtrico o de ajuste fino.Si es necesario, grada la intensidad luminosa ajustando la apertura del diafragma y laaltura del condensador. Evite sobre iluminacin.

Enfoque visu al a mayor aumento


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Una vez observada la preparacin a menor aumento, pase a posicin de trabajo elobjetivo de mayor aumento, girando suavemente el revlver. Para el caso de microscopiocon lentes parafocales, queda enfocado automticamente y se afina el enfoque con eltornillo micromtrico. Si el microscopio posee lentes no parafocales, la lente puedetropezar con la preparacin, entonces levante el objetivo empleando el tornillomacromtrico y proceda a acercar el objetivo a la preparacin 8 menos de 1mm

observando por fuera y no a travs del ocular. Enfoque la imagen con el tornillomicromtrico alejando siempre el objetivo de la preparacin.

Enfoque vis ual con el objet ivo de inm ersin (100X)

Coloque una gota muy pequea de aceite de inmersin sobre la laminilla cubreobjetos (sila preparacin es un extendido fijado, coloque la gota de aceite de inmersin directamentesobre la lmina) y proceda como en el caso anterior, teniendo en cuenta que la distanciade trabajo es menor con el objetivo de inmersin y se requiere mayor intensidad de luz.

Reconocimiento del microscopioGLOSARIO

Microscopio:(del griego micrs, pequeo, y scopo, mirar)1es uninstrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos asimple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Setrata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener unaimagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.

Aumento: El poder de aumento de una lente est determinado por el grado de curvaturade su superficie y la distancia focal. En las lentes convexas mientras mayor sea lacurvatura, menor ser la distancia focal y mayor ser el aumento. Se ha enunciadoanteriormente que el microscopio compuesto aumenta en dos etapas y puesto que unasola lente no es suficiente se deben colocar varias lentes una detrs de la otra,potenciando de esta manera el poder de aumento. El primer juego de lentes, cercano alobjeto en estudio, se denomina objetivo y el segundo juego, cercano al ojo del observadorse denomina ocular (11). Cada sistema de lentes es capaz de producir una imagen
https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio#cite_note-1https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio#cite_note-1https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio#cite_note-1https://es.wikipedia.org/wiki/Microscopio#cite_note-1


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aumentada cuyo valor se enuncia con la letra x, as que 10x significa que la imagen estaumentada 10 veces.

Resolucin: Es la capacidad que tiene un sistema ptico de aislar dos puntos que seencuentran muy prximos entre s, de manera que se puedan ver individualizados uno delotro (14). La riqueza de detalles que puede ser observada al microscopio depende de la

habilidad de este para hacer que los puntos del objeto que estn muy cercanos aparezcanen la imagen como puntos separados. Mientras ms corta sea la distancia entre esospuntos del objeto, ms finos sern los detalles. La distancia entre esos dos puntos seconoce como Lmite de Resolucin, el cual es tambin referido como el Poder deResolucin y puede ser utilizada como un indicador del rendimiento del microscopio. Estose puede comparar vagamente con algunos aspectos de la informtica, el tamao delpixel por ejemplo; mientras ms pequeo sea el tamao, mayor ser la cantidad dedetalles de la imagen digital.

Lmite de resolucin como la distancia mnima que debe existir entre dos puntos paraque sean distinguidos por separado, comprenderemos fcilmente la relacin inversa quese establece entre poder resolutivo y lmite de resolucin: cuanto menor sea la distanciaque debe separar a dos puntos para que se distingan por separado, mayor ser el poderresolutivo necesario para observarlos

Poder resolutivo es la capacidad que tiene un microscopio (o el ojo humano, etc.) depercibir por separado dos puntos pequeos, adyacentes y cercanos. Vale decir, es lacapacidad para percibir detalles. El poder resolutivo aumenta a medida que disminuye ladistancia que separa dichos puntos. Es decir, si dos puntos distan 1cm uno del otro y yolos veo como un solo punto borroso (aparte de necesitar urgente un oculista) tendrmenor poder resolutivo que alguien que los distingue por separado o que distingueperfectamente puntos que distan de 0,5cm entre si.


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PRCTICA No. 2 MTODOS DE SIEMBRA PARTE A

INTRODUCCION: La inoculacin de medios de cultivo para la recuperacin,mantenimiento y/o aislamiento de microorganismos, es un procedimiento fundamental eimportante. Debe tenerse cuidado con las tcnicas de siembra microbiana para evitar enlo posible la contaminacin por otros microorganismos diferentes al deseado.


MTODOS DE SIEMBRA Sembrar: Es el acto de colocar el materialbacteriolgico en el medio de cultivo para promoversu crecimiento y desarrollo, y subsiguientemultiplicacin. El resultado de una siembra se llama:Cultivo

Las siembras pueden ser:

Primarias:cuando el material es inoculado en losmedios por primera vez.

Secundarias: cuando el material a inocularprocede de una siembra primaria.

Los mtodos de siembra son:

Siembra por dilucin

Siembra por estras en superficie

Siembra por estra poragotamiento

Por picadura o puncin

Siembra en TSI

MATERIALES Y MTODOS


Materiales EquiposMuestra contaminadacon microorganismos

Incubadora

Agar nutritivo en cajapetri

Mechero

Asa redondaGradillaVinipel

Marcador de vidrio Reactivos a utilizar:

Reactivo Frmula ConcentracinAgua

peptonada------ 0,1%


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PROCEDIMIENTO:

1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.

2. Coger parte de la muestra y colocarla en el tubo de ensayo que contiene el aguapeptonada. Homogenizar.

3. Dejar 2030 minutos en incubacin los tubos.

4. Realizar un diagrama de aislamiento de colonias, en un circulo de papel (8 cm) paraponerlo debajo de la caja de Petri (Figura 1)

5. Finalizado el tiempo de incubacin tomar el asa redonda y esterilizarla por calor hastaque est est roja, dejar enfriar cerca al mechero.

6. Abrir el tubo con la muestra y tomar una asada.

7. Cerrar el tubo y colocarlo en la gradilla. Teniendo cuidado de que el asa no toque naday de no pasarla por encima del mechero, pero siempre estar cerca de este

8. Abrir la caja de Petri y seguir el esquema para el aislamiento.

9. Terminado la siembra, marcar las cajas en el borde de la base de la caja y envolverlaen papel vinipel.

10. Colocar el tubo y la caja a incubar a 37C. La caja debe estar boca abajo siempre. 11.Desinfectar el rea de trabajo, apagar el mechero y entregar el material

TABLA DE DATOS:

Para esta prctica se sembraron diferentes microorganismos los cuales relacionamos acontinuacin:

- Muestra de piel- Ambiente (1 y 2)- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con alcohol- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con cloro- Frotis Bucal

Para la siembra de la muestra de piel, de las superficies y del frotis bucal se tomaron lascajas petri con el medio de cultivo solido, se marcaron y se sembraron en las mismas lasmuestras tomadas.

Para la siembra de la muestras del ambiente, se coloco la caja dos en el mesn quequeda ubicado a la entrada del laboratorio y la primera caja se coloco en el mesn dondeestbamos realizando las practicas por un tiempo aproximado de una hora.


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Luego todas las cajas petri fueron debidamente tapadas y llevadas a la incubadora a unatemperatura de 37C, por un periodo de 72 horas.

Al regresar al laboratorio despus de las 72 horas obtuvimos los siguientes resultados:

- Caja Petri muestra de piel: Se obtuvo la formacin de 4 colonias, de aspecto

oscuro y muy poco visibles.

Formacin de colonias muestra de piel

- Caja petri ambiente 1 y 2: Se obtuvo la formacin en la caja 1 de 9 colonias y en lacaja 2 de 7 colonias de aspecto oscuro y ms visible en la caja que corresponde alambiente dos. Se puede concluir que en la caja 1 se presento mayor formacin decolonias, debido a que la caja estuvo expuesta en un lugar donde haba personas, por locual la produccin de microorganismos es mayor que en el ambiente dos que no haba

presencia de personas.

Formacin de colonias Ambiente 1 Formacin de colonias Ambiente 2

- Caja petri muestra de superficie sin limpiar y limpia con alcohol: Se obtuvo laformacin de 9 colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y la


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formacin de 1 colonia en la superficie que se limpio con alcohol, se observan colonias deun aspecto oscuro.De esta experiencia podemos concluir que el alcohol es un buen desinfectante.

Formacin de colonias superficie sin limpiar y limpia con alcohol

- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con cloro: Se obtuvo la formacin de 5colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y la formacin de 7 coloniasen la superficie que se limpio con cloro, se observan colonias de un aspecto oscuro.De esta experiencia podemos concluir que el cloro no es un buen desinfectante.

Formacin de colonias superficie sin limpiar y limpia con cloro

- Frotis Bucal: Se observo la formacin de colonias en un numero incontable, de

aspecto esponjoso y color blanco, esto nos indica que en la boca tenemos una grancantidad de microorganismos.


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Formacin de colonias frotis bucal


Este procedimiento se denomina aislamiento de bacterias, debido a que las bacteriaspresentes en una muestra se distribuyen sobre la superficie de un agar, y cada clula sereproduce independientemente hasta formar un conglomerado de bacterias observables asimple vista (colonia bacteriana). De esta manera es posible observar sobre la superficiedel medio, colonias de diferentes caractersticas en cuanto a forma, superficie, borde,forma, color, aspecto y elevacin, lo que indica microscpicamente presencia dediferentes tipos microbianos en la muestra. As se puede estudiar e identificarindependientemente cada especie.

GLOSARIO

Agar Nutritivo: Medio de cultivo utilizado para propsitos generales, para el aislamientode microorganismos poco exigentes en lo que se refiere a requerimientos nutritivos.

Siembra:Sembrar o inocular es introducir artificialmente una porcin de muestra (inculo)en un medio adecuado, con el fin de iniciar un cultivo microbiano, para su desarrollo ymultiplicacin. Una vez sembrado, el medio de cultivo se incuba a una temperaturaadecuada para el crecimiento.

Siembra por estra por agotamiento:Con ste procedimiento se puede conseguir una

buena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio decultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizadase toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medioformando estras.

Siembra por estras en superficie:Se siembra el material en la superficie de el agarinclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asabacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendo


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estras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profundade la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.

Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldosimple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada con

el material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.


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PRCTICA No. 2 MTODOS DE SIEMBRA PARTE B

INTRODUCCION: Los microorganismos tambin pueden ser cultivados en distintos tiposde medios de cultivo tanto lquidos como slidos, en esta parte los estudiantes debernhacer una siembra del microorganismo en medio lquido.







Siembra por dilucin




Siembra en TSI

MATERIALES Y MTODOS


Materiales EquiposMuestra contaminadacon microorganismos

Incubadora

Caldo nutritivo entubo de ensayo

Mechero

Agar nutritivo solido

en tubo de ensayoPipeta de vidrio de

1mlAsa redonda

GradillaVinipel

Marcador de vidrio


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Reactivos a utilizar:

Reactivo Frmula ConcentracinAgua

peptonada------ 0,1%

PROCEDIMIENTO:

1. Desinfectar el rea de trabajo, prender el mechero y preparar el material de trabajo.

2. Coger parte de la muestra y colocarla en el frasco que contiene el agua peptonada.Homogenizar.

3. Dejar 2030 minutos en incubacin .

4. tomar 1 ml de la suspensin y transferirla en el tubo que contiene el medio de cultivo.

5. incubar a 37 por 24 horas, observar el tipo de crecimiento

6. anotar los resultados obtenidos.

Siembra en medio semislido.

De la misma suspensin inicial tomar con un asa recta e introducirla en dicha suspensin,posteriormente siembre por puncin en el medio semislido como indica a continuacin lafigura.

Siembra en medio slido con superficie inclinada

Tomar con asa recta de la misma suspensin inicial (muestra) y proceder a realizar lamisma accin anterior, incubar y observar el crecimiento, a continuacin se ilustra unejemplo.


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Patrones de crecimiento en medios slidos

TABLA DE DATOS:

Para esta prctica se sembr guayaba en descomposicin, el procedimiento realizado fueel siguiente:

En primer lugar se esteriliz el asa a utilizar, se tomo un tubo de ensayo el cual contenael medio de cultivo, con el asa se tomo la muestra de la guayaba y se procedi ainsertarla en el medio de cultivo de manera vertical, posteriormente marcamos el tubo deensayo y lo llevamos a la incubadora a una temperatura de 37C donde se dejo por 72horas.


- Tubo de ensayo sembrado por Kelly: crecieron 2 colonias- Tubo de ensayo sembrado por Diana: crecieron 11 colonias- Tubo de ensayo A (Sembrado por el profesor): No se observo crecimiento decolonias.


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Siembra de la guayaba en descomposicin

Resultados obtenidos: se observa la formacin de 11 colonias, las cuales tienenun aspecto esponjoso y son de color blanco, distribuidas por todo el medio decultivo, unas colonias se observan ms grandes que las otras.


Se espera observar un crecimiento de microorganismos en los medios de cultivoutilizados.

GLOSARIO




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Siembra por estra por agotamiento:Con ste procedimiento se puede conseguir unabuena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio decultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizadase toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medioformando estras.

Siembra por estras en superficie:Se siembra el material en la superficie de el agarinclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asabacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendoestras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profundade la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.

Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldosimple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada conel material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.


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PRCTICA SIEMBRA DE HONGOS

INTRODUCCION: Los hongos son microorganismos eucariticos con condiciones decrecimiento especiales e inters ambiental, pueden ser utilizados a nivel de industria.







Siembra por dilucin




Siembra en TSI

MATERIALES Y MTODOS


Materiales EquiposCajas de petri con

agar PDAIncubadora

Agujas de diseccin,jeringas de insulina o

asa recta

----------------

Hongos de cualquiergnero con

crecimiento no mayora 15 das antes de la

practica (En cajapetri)

------------------



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PROCEDIMIENTO:

1. Tome con la aguja de diseccin o asa un cuadro de la colonia fngica de no msde 5 mm de dimetro, intente tomar de los extremos de la colonia, cuidadosamentecoloque el cuadro en la caja de Petri con agar PDA en el centro de la misma, incubar a

25.TABLA DE DATOS:

Para esta prctica se sembr guayaba en descomposicin, el procedimiento realizado fueel siguiente:

En primer lugar se esteriliz el asa a utilizar, se tomo una caja petri la cual contena elmedio de cultivo, con el asa se tomo la muestra del hongo (Levadura de pan) y seprocedi a insertarla en el medio de cultivo en la manera indicada por el profesor,posteriormente marcamos las cajas petri y lo llevamos a la incubadora a una temperaturade 37C donde se dejo por 72 horas.


- Caja Petri Diana: Se obtuvo la formacin de 9 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.- Caja Petri Hugo: Se obtuvo la formacin de 42 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.- Caja Petri ngela: Se obtuvo la formacin de 13 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.- Caja Petri Kelly: Se obtuvo la formacin de 7 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.

Cajas petri con medios de cultivo Formacin de colonias caja petri Diana


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Formacin de colonias caja petri Hugo Formacin de colonias caja petri ngela


Se espera observar un crecimiento de microorganismos en los medios de cultivo

utilizados.GLOSARIO



Siembra por estra por agotamiento:Con ste procedimiento se puede conseguir unabuena separacin de las colonias y aislarlas fcilmente. Para ello se funde el medio decultivo, se vuelca en caja de Petri y se deja solidificar. Con el asa previamente esterilizadase toma material de un cultivo heterogneo y se descarga sobre la superficie del medioformando estras.

Siembra por estras en superficie:Se siembra el material en la superficie de el agarinclinado en un tubo de ensayo, all se extiende por toda la superficie con el asabacteriolgica, previamente esterilizada y cargada con el material a sembrar, haciendoestras no muy amplias, pero tampoco muy estrechas. Se inicia por la parte ms profundade la superficie inclinada y se termina la estra en la parte ms cerca de la boca del tubo.

Siembra por dilucin: Se toma el tubo de ensayo con medio lquido, como el caldosimple. Se toma el material a diluir y se siembra en el tubo con el uso del asa cargada conel material bacteriolgico, se agita, con movimientos moderados.


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PRCTICA No. 3 TCNICAS DE TINCIN

INTRODUCCION: El tamao de la mayora de las clulas bacterianas es tal que resultandifciles de ver con el microscopio ptico. La principal dificultad es la falta de contrasteentre la clula y el medio que la rodea, y el medio ms simple de aumentar el contraste es

la utilizacin de colorantes. Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentesde clulas o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, talescomo flagelos, esporas, cpsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.

Las clulas generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teirlas,proceso llamado fijacin. Para bacterias, la fijacin por el calor es lo ms corriente,aunque tambin puede fijarse con sustancias qumicas como formaldehido, cidos yalcoholes. Despus de la fijacin, si se aade el colorante, no se producen ulteriorescambios estructurales en el protoplasma. La fijacin se realiza habitualmente en clulasque han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando despus ste con el agente fijador, y

siguiendo inmediatamente el proceso de tincin. La fijacin produce habitualmente elencogimiento de las clulas; la tincin, por el contrario, hace que las clulas aparezcanmayores que lo que son realmente, de manera que las medidas de las clulas que hansido fijadas o teidas no pueden realizarse con mucha precisin. La mayora de loscolorantes son compuestos orgnicos que tienen alguna afinidad especfica por losmateriales celulares. Muchos colorantes utilizados con frecuencia son molculas cargadaspositivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celularescargados negativamente, tales como los cidos nucledos y los polisacridos cidos.Ejemplos de colorantes catinicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina.Otros colorantes son molculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con losconstituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas protenas. Esoscolorantes incluyen la eosina, la fucsina cida y el rojo Congo. Otro grupo de colorantesson sustancias liposolubles; los colorantes de este grupo se combinan con los materialeslipdicos de la clula, usndose a menudo para revelar la localizacin de las gotculas odepsitos de grasa. Un ejemplo de colorante liposoluble es el negro Sudn.



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TCNICAS DE TINCIN

La tincin es un proceso por el cual las molculas deun colorante se absorben a una superficie. El uso decolorantes permite cambiar el color de las clulas delos microorganismos y poder realizar la observacinen microscopio ptico.

tipos de tincin

Simple: el colorante utilizado sirve solo paradenotar la morfologa celular.

Diferencial: el colorante utilizado pone demanifiesto diferencias entre clulas bacterianas oentre partes de una misma clula, estas tcnicasutilizan ms de un colorante o bien ciertosreactivos complementarios para la tincin.

Tincin de Gram1) Las clulas son fijadas por medio del calorsobre un portaobjetos, se tien primero con unasolucin de cristal violeta y son lavadas despuspara quitar el exceso de colorante.

Tincin negativa:Un mtodo sencillo de tincin para bacterias,que adems es un claro caso de cromofobia yque por lo tanto funciona aun cuando losmtodos de tincin positiva fallan, es la tincinnegativa

MATERIALES Y MTODOS


Materiales EquiposLminas Mechero

Laminillas Microscopio pticoAgua destilada estrilAsas bacteriolgicasredonda y asa rectaColonias aisladas de

bacterias paraobservacin de

bacteriasGuantes de ltex


Reactivo Frmula ConcentracinAzul demetileno

------ ------

Cristalvioleta

------ ------

Lugol ------ ------Alcoholcetona

------- ------


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Fucsinabsica osafranina

----------------- -------------

Tinta china ---------- -----------

PROCEDIMIENTO:

1. Coloracin simple

a. En una lmina portaobjetos limpia, colocar una gota del agua destilada estril (trabajocon muestra slida) o una gota del cultivo bacteriano (trabajo con muestra liquida) sobrela misma y con ayuda del asa redonda estril extender la gota de suspensin a un rea nosuperior a dos centmetros cuadrados.

b. Dejar que la preparacin se seque al aire. Fijar con calor, pasando tres veces seguidasa travs de la llama del mechero.

c. Dejar enfriar la lmina. Lo anterior se conoce como la realizacin de un frotis y se hacepara coloraciones donde la muestra debe ser fijada y luego si iniciar las coloracionesrespectivas.

d. Colocar la preparacin sobre una rejilla encima del vertedero.

e. Cubrir la suspensin con algn colorante dado por el profesor, as: i. Cristal violeta: 1minuto ii. Azul de metileno: 5 minutos iii. Fucsina: 1 minuto

f. Terminado el tiempo de coloracin segn el colorante empleado, eliminar el colorantelavando con agua suavemente.

g. Dejar secar y colocar la preparacin en la platina del microscopio y observar con elobjetivo de menor aumento inicialmente hasta llegar al objetivo de 100X

2. Coloracin compuesta

a. Realizar un frotis de la muestra seleccionada

b. Colocar en la rejilla para coloracin y cubrir el frotis con cristal violeta esperando quetranscurra 1 minuto. Lavar con agua el colorante.

c. El segundo colorante es el lugol, el cual se deja por 1 minuto sobre el frotis

d. Realizar la decoloracin con la mezcla alcohol-acetona, por 25 segundos. Lavarinmediatamente con agua.

e. Finalmente adicionar el colorante de contraste, fucsina o safranina, por 30 segundos.Lavar con agua.

f. Escurrir el exceso de agua, dejar secar y montar al microscopio para hacer lasobservaciones respectivas.


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TABLA DE DATOS:

Se observaron las clulas bucales, obteniendo el siguiente registro fotogrfico:

Reactivos utilizados Observacin en microscopio de las clulas

bucales

Observacin en microscopio de las clulas bucalesLa preparacin nos muestra una visin parecida a un mosaico formado por clulas planas,poligonales, ms o menos irregulares; abundan las clulas aisladas, en cuyas caras seperciben los trazos de insercin de unas clulas con otras. Como el material observadoprocede de la capa superficial, capa de descamacin, del epitelio pluriestratificado de lamucosa bucal, son en su mayora clulas muertas o clulas que estn en perodo dedegeneracin. El azul de metileno tie intensamente el ncleo y con menos color elcitoplasma ste presenta un cierto aspecto de alteracin y suele ser algo granuloso.


Se espera observar las morfologas posteriores a la coloracin.GLOSARIO

Tincin: La tincin es un proceso por el cual las molculas de un colorante se absorben auna superficie. El uso de colorantes permite cambiar el color de las clulas de losmicroorganismos y poder realizar la observacin en microscopio ptico. Dado que lasbacterias son casi incoloras, no presentan contraste con el medio en el cual seencuentran suspendidas y no pueden observarse claramente sin algn tratamiento previo.


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Tincin Simple:Se utiliza un solo colorante, por lo que todas las estructuras celulares se

tien con la misma tonalidad (Tinta china, Azul Metileno de Loeffler, Azul de

lactofenol). El Hidrxido de potasio al 10% (solucin de KOH) permite ver elementos de

hongos ya que el KOH digiere parcialmente los componentes proteicos, por ejemplo de la

clula husped, pero no acta sobre los polisacridos de las paredes celulares de loshongos.

Tincin Diferencial:Se utilizan varios colorantes combinados. Las estructuras celulares

se diferencian en funcin de los diferentes colorantes que fijan de acuerdo con su propia

constitucin qumica. Los ejemplos clsicos sera la tincin de GRAM o la de Ziehl-

Neelsen

Tinciones especficas: Se utilizan para incrementar el contraste en las clulasmicrobianas y revelan estructuras particulares, entre las que se incluyen en los flagelos y

las cpsulas.

Tincin negativa: Un mtodo sencillo de tincin para bacterias, que adems es un clarocaso de cromofobia y que por lo tanto funciona aun cuando los mtodos de tincinpositiva fallan, es la tincin negativa. Esto puede ser conseguido simplementeextendiendo la muestra en un portaobjetos y aplicando directamente sobre ella una gotade nigrosina o tinta china y cubriendo luego la muestra humedecida con un cubreobjetos.Luego de esto, los microorganismos pueden ser observados fcilmente por medio demicroscopa en campo claro como inclusiones claras muy bien contrastadas contra elmedio oscuro que las rodea

Tincin Gram: La tincin de Gram es uno de los mtodos de tincin ms importantes enel laboratorio bacteriolgico. Su utilidad en la prctica de referencias a la morfologacelular bacteriana (cocos, bacilos, positivos, negativos, etc.) se basan justamente en latincin de GRAM


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PRCTICA No. 4 OBSERVACION MICROSCOPICA DE HONGOS(Esta prctica no sedesarrollo)

INTRODUCCION: La clula fngica es similar a cualquier organismo eucarionte, aunqueexisten diferencias subcelulares entre la clula de un hongo inferior a la de uno superior.

Cuando se estudian los hongos se pueden observan dos grandes grupos: losalgodonosos, que se conocen con el nombre de mohos y otros que forman coloniashmedas y se conocen como levaduras.


OBSERVACION MICROSCOPICA DEHONGOS

Mtodo

A) Cultivo del mohoObservars las hifas a modo de pequeostubos, sin tabiques de separacin y connumerosos ncleos esparcidos en elcitoplasma comn (hifas sifonadas). En elextremo de algunas hifas aparece unengrosamiento (columnilla) rodeado delesporangio, en cuyo interior se hallan lasesporas..B) Observacin con la lupa binocular

C) Observacin con el microscopio

MATERIALES Y MTODOS


Materiales EquiposCultivo de hongos Microscopio

Lminas portaobjetosLaminillas


Reactivo Frmula ConcentracinAzul delactofenol

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PROCEDIMIENTO:

Colocar en el centro de la lmina portaobjeto una gota de azul de lactofenol, luego tomarcon el asa micolgica previamente estril parte del hongo y resuspenderlo en la gota delcolorante. Colocar luego una laminilla encima de esta preparacin y esperar 3 minutos.Finalizado este tiempo montar al microscopio y observar en 10X y 40X.

TABLA DE DATOS:

Dibujar los resultados


Se espera observar las distintas partes que conforman un hongo.

GLOSARIO

Micologa: es la ciencia que estudia los hongos, estos organismos fueron durante muchotiempo considerados miembros del reino de las plantas.

Micelio: Un micelio fngico es una red de filamentos llamados hifas. El micelio obtienenutrientes (generalmente de materia orgnica en descomposicin) y produce el cuerpofructfero. A menudo, la mayor parte del micelio es subterrneo.

Cuerpo fructfero: El cuerpo fructfero de un hongo es una estructura reproductiva. Unchampin es un organismo tpico de fructificacin de hongos, que se adjunta a un miceliobajo tierra. Un cuerpo fructfero produce esporas.

Esporas. Las esporas estn involucradas en la reproduccin de los hongos. Lanzadas por

el cuerpo fructfero, las esporas de hongos son haploides, es decir, que slo tienen uncromosoma de cada gen (como los gametos humanos). Las esporas pueden germinarcuando golpean el suelo hmedo.


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PRCTICA No. 5 CONTROL DEL CRECIMIENTO BACTERIANO

INTRODUCCION:Los factores fsicos y qumicos tienen un efecto notable sobre la vidade los microorganismos en su medio ambiente natural. Algunos estimulan su desarrolloen tanto que otros lo retardan o lo impiden. El conocimiento del efecto de esosparmetros medio ambientales no solo permiti estudiar los microorganismos bajo

condiciones controladas de laboratorio para favorecer su crecimiento sino que posibilitaprender la forma de controlarlos.


CONTROL DEL CRECIMIENTO

BACTERIANO

Parmetros fsicos y qumicos queafectan el crecimiento y desarrollo

de los microorganismos

Parmetros fsicos

Temperatura

Microorganismos psicrfilos

Mesfilos

Termfilos

Ph

Presin osmtica

Parmetros qumicos

Las fuentes de carbono

Nitrgeno, Azufre y FsforoOxgeno

Agentes antimicrobianos

Espectro de actividad

antimicrobiana

MATERIALES Y MTODOS


Materiales Equipos

Cultivo demicroorganismosGram- Positivo

Estufa

Cultivo demicroorganismosGram- Negativo

Incubadora

Medio de cultivonutritivo en cajas petricon diferentes PHs


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Medio de cultivonutritivo en cajas depetri con diferentesconcentraciones de

NaClMedio de cultivo

nutritivo en cajas depetri

Caldo NutritivoPipetas estriles de 1

y 2 mlVaso de precipitado

de 500 ml


PROCEDIMIENTO:

1. ACCIN DE LA TEMPERATURA Suspender una colonia del microorganismoseleccionado en el caldo nutritivo y dejarlo por media hora para un desarrollo de losmicroorganismos en el medio de cultivo. Luego tomar 0.1 mL del medio y sembrarlo sobreel medio slido del agar nutritivo. Llevar el caldo nutritivo donde se inoculo elmicroorganismo a la estufa y ponerlo a ebullicin por el tiempo dado por el profesor ysembrar como al inicio. Llevar las dos cajas de Petri e incubarlas a 37oC.

2. ACCION DEL pH Dividir la base de las cajas en dos cuadrantes con el marcador devidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante el microorganismo Gram-negativo y en el otro el Grampositivo. Realizar este procedimiento con todas los mediosde diferentes pH.

3. ACCIN DE LA PRESIN OSMTICA Dividir la base de las cajas en dos cuadrantescon el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante elmicroorganismo Gram-negativo y en el otro el Grampositivo.

4. ACCIN DE LA LUZ ULTRAVIOLETA Dividir la base de las cajas en dos cuadrantescon el marcador de vidrio y con el asa redonda sembrar por estras en un cuadrante elmicroorganismo Gram-negativo y en el otro el Grampositivo. Seguidamente tapar la mitadde la caja con papel de aluminio y colocar sobre la otra parte de la caja la luz ultravioletapor 5 y/o 10 minutos, tapar la caja y llevar a incubar.

TABLA DE DATOS:

Para esta prctica se sembraron diferentes microorganismos los cuales relacionamos acontinuacin:

- Muestra de piel- Ambiente (1 y 2)- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con alcohol


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- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con cloro- Frotis Bucal- Guayaba en descomposicin- Hongos

Luego de realizar la siembra, se proedio a llevar las muestras a la incubadora por unperiodo de 72 horas y a una temperatura de 37C.


- Caja Petri muestra de piel: Se obtuvo la formacin de 4 colonias, de aspectooscuro y muy poco visibles.- Caja petri ambiente 1 y 2: Se obtuvo la formacin en la caja 1 de 9 colonias y en lacaja 2 de 7 colonias de aspecto oscuro y ms visible en la caja que corresponde alambiente dos. Se puede concluir que en la caja 1 se presento mayor formacin decolonias, debido a que la caja estuvo expuesta en un lugar donde haba personas, por locual la produccin de microorganismos es mayor que en el ambiente dos que no habapresencia de personas.- Caja petri muestra de superficie sin limpiar y limpia con alcohol: Se obtuvo laformacin de 9 colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y laformacin de 1 colonia en la superficie que se limpio con alcohol, se observan colonias deun aspecto oscuro.- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con cloro: Se obtuvo la formacin de 5colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y la formacin de 7 coloniasen la superficie que se limpio con cloro, se observan colonias de un aspecto oscuro.- Frotis Bucal: Se observo la formacin de colonias en un numero incontable, deaspecto esponjoso y color blanco, esto nos indica que en la boca tenemos una gran

cantidad de microorganismos.- Tubo de ensayo sembrado por Kelly: crecieron 2 colonias- Tubo de ensayo sembrado por Diana: crecieron 11 colonias- Tubo de ensayo A (Sembrado por el profesor): No se observo crecimiento decolonias.- Caja Petri Diana: Se obtuvo la formacin de 9 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.- Caja Petri Hugo: Se obtuvo la formacin de 42 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.- Caja Petri ngela: Se obtuvo la formacin de 13 colonias de aspecto esponjoso y

color blanco.- Caja Petri Kelly: Se obtuvo la formacin de 7 colonias de aspecto esponjoso ycolor blanco.


Analizar el crecimiento bacteriano bajo ciertos parmetro fsicos y qumicos.


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GLOSARIO

Temperatura: la supervivencia de los microorganismos se presenta normalmente en lastemperaturas usuales para el desarrollo de los animales superiores, aunque se da el casode algunas bacterias resistentes a extremos de fro o de calor. Se puede hablar por

consiguiente de una taxonoma microorgnica referida a rangos ptimos de adaptacin ala temperatura.

Microorganismos psicrfilos: adaptados a bajas temperaturas, en trminos generalesse maneja un rango de 0C a 20C como lmites normales para su crecimiento.

Mesfilos: viven en temperaturas moderadas, en un rango de 20C a 40C., losmicroorganismos mesfilos, son los ms comunes. Por ejemplo, la temperatura ptimapara la mayora de las bacterias patgenas se aproxima a los 37C.

Termfilos: soportan altas temperaturas, contemplan como rangos usuales de tolerancia

de 40C. a 80C. y por consiguiente sus endosporas son normalmente resistentes al calory sobreviven a los tratamientos trmicos aplicados a conservas enlatadas aunque nocrecen a las temperaturas normales de almacenamiento.

pH: Normalmente los pH (acidez o alcalinidad de una solucin o medio de crecimiento) derango neutro (6,5 a 7,5) son los ms adecuados para el crecimiento bacteriano y muypocas bacterias soportan pH inferiores a 4.0. Por esta razn el manejo de la acidez es unrecurso para el control microorgnico. Como en el caso de las temperaturas existenalgunas bacterias que soportan niveles extremos de acidez, razn por la cual se Lasdenomina acidfilas. Se conocen bacterias que sobreviven a pH de 1.Los rangos alcalinosgeneralmente inhiben el crecimiento microbiano. En los ensayos de laboratorio para elcultivo de bacterias se requiere neutralizar los cidos que producen las bacterias

mediante sustancias qumicas denominadas tampones. Las sales de fosfato amortiguan laacidez y la mantienen en el rango usual de crecimiento para la mayora de las bacterias(de 6,5 a 7,5) y de paso aportan el fsforo que es un nutriente necesario.

Presin osmtica: Los microorganismos estn formados por un 80-90% de agua y porconsiguiente son fcilmente afectados por soluciones hipertnicas o sea con unaconcentracin de solutos mayor a la de la clula microbiana, razn por la cual esta pierdeagua por el efecto conocido como plasmlisis. Por consiguiente la adicin de sales o deazcar produce una contraccin celular que evita el crecimiento bacteriano.


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PRCTICA No. 6 RECUENTO DE UNIDADES FORMADORAS DE COLONIAS - UFC

INTRODUCCION:Microorganismo aerobio mesfilo son todas las bacterias, levaduras yhongos capaces de desarrollarse en condiciones de aerobiosis a 30C. Es un parmetroque sirve para estimar la flora total, pero sin especificar tipos de microorganismos. Es unode los indicadores ms tiles del estado microbiolgico de un alimento, agua, suelo entre

otros. Tiene un valor limitado como indicador de la presencia de patgenos o sus toxinas.Altos recuentos microbianos se consideran poco aconsejables para la mayor parte de losalimentos.


RECUENTO DE UNIDADESFORMADORAS DE COLONIAS - UFC

En diversos estudios microbiolgicos(como anlisis de alimentos, de agua

de bebida, de productos farmacuticoso del medioambiente entre otros), se

requiere conocer el nmero demicroorganismos presentes en un

material con objeto de determinar sucalidad.

MTODOS

Recuento directo de bacterias almicroscopio

Recuento directo con contadoreselectrnicos

Recuento en filtros de membrana

Mtodos de recuento de bacteriasviables en placa

Recuento en placa por siembra en

profundidad.

Recuento en placa por siembra ensuperficie

MATERIALES Y MTODOS


Materiales Equipos

2 cajas de petriesteriles4 tubos deensayo con agua

peptonada al 0,1%estriles

Incubadora a 35C

4 pipetas de 1 ml ouna pipeta automtica

(1001000 UL)

Balanza

1 frasco de dilucin


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con 90 ml de aguapeptonada al 0,1%

50 ml de agar nutritivopreviamentepreparado y

atemperado a 45 -

48CMarcador de vidrio

Contador de colonias Reactivos a utilizar: N/A

PROCEDIMIENTO:

1. Hacer diluciones de la muestra lquida de acuerdo al tipo de producto.

Si es una muestra contaminada deben realizarse diluciones altas

En muestras procesadas se hacen diluciones bajas

2. Sembrar en profundidad por duplicado 1 mL de cada una de las dilucionesseleccionadas

3. Adicionar de 1520 mL del agar nutritivo a la temperatura adecuada

4. Mezclar inmediatamente el inculo con el medio, con movimientos circulares de laplaca a favor y en contra de las manecillas del reloj, como en ngulo recto. Debe evitarseque el medio impregne la tapa.

5. Dejar solidificar, adicionar una capa sellante de 5 mL sobre la caja y dejar solidificarnuevamente.

6. Una vez solidificado el agar, se vierten las placas e introducen en la incubadora (35Cdurante 72 horas).

7. Sacar de la incubadora y realizar el recuento

8. Lectura: se deben contar las cajas cuyo nmero de colonias est comprendido entre 30y 300 UFC. Es conveniente ir marcando las colonias para evitar volver a contarlas. Hallarla media. El nmero contado se multiplica por el factor de dilucin y los resultados seexpresarn en unidades formadoras de colonia (UFC) por mL o g, dependiendo del tipode alimento de partida.

9. Siempre se informan dos nmeros enteros y el resto en exponente.

TABLA DE DATOS:- Caja Petri muestra de piel: Se obtuvo la formacin de 4 colonias, de aspectooscuro y muy poco visibles.- Caja petri ambiente 1 y 2: Se obtuvo la formacin en la caja 1 de 9 colonias y en lacaja 2 de 7 colonias


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- Caja petri muestra de superficie sin limpiar y limpia con alcohol: Se obtuvo laformacin de 9 colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y laformacin de 1 colonia en la superficie que se limpio con alcohol- Muestra de superficie sin limpiar y limpia con cloro: Se obtuvo la formacin de 5colonias en el rea que corresponde a la superficie sin limpiar y la formacin de 7 colonias

- Frotis Bucal: Se observo la formacin de colonias en un numero incontable- Tubo de ensayo sembrado por Kelly: crecieron 2 colonias- Tubo de ensayo sembrado por Diana: crecieron 11 colonias- Tubo de ensayo A (Sembrado por el profesor): No se observo crecimiento decolonias.- Caja Petri Diana: Se obtuvo la formacin de 9 colonias- Caja Petri Hugo: Se obtuvo la formacin de 42 colonias- Caja Petri ngela: Se obtuvo la formacin de 13 colonias- Caja Petri Kelly: Se obtuvo la formacin de 7 colonias


Se espera obtener el conteo de las colonias formadas.

GLOSARIO

Conteo bacteriano:seala la magnitud de la poblacin total bacteriana. En ese sentidose puede determinar por diversas tcnicas que se basan en algunos de los siguientestipos de medida: cuenta celular (directamente al microscopio o mediante un contadorelectrnico de partculas o indirectamente con la cuenta de colonias), masa celular (enforma directa pesando el contenido celular del nitrgeno o indirectamente por

turbidimetra, proporcional al nmero de clulas) y actividad celular (indirectamenterelacionando el grado de actividad bioqumica al tamao de la poblacin bacteriana)

Contador Coulter: es un aparato utilizado para contar y medir el tamao de partculas ensolucin. Se utiliza principalmente para contar clulas sanguneas en su aplicacin comocontador hematolgico, pero tambin se puede utilizar para bacterias, clulas y partculasvirales.


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Conteo en caja de petri: Mtodo ms usado para contar bacterias. Un caldo decultivo con microorganismos es diluido y posteriormente muestras del mismo sondistribuidas en la caja de petri contenedora de agar. Es de suponerse que cada clula sedividir en sus mltiples alrededores para producir colonias separadas en el agar. Cadaclula es llamada unidad formadora de colonias (UFC).

Conteo por filtracin: Es realizado cuando la cantidad de bacterias es muy pequea,como en casos de lagos y arroyos relativamente puros. En esta tcnica se necesitan almenos 100 mL de agua que atraviesen una membrana delgada de un filtro, con poros tanpequeos que no permitan el paso de bacterias

informe de laboratorio microbiologia

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