bioquimica trabajo de investigaciÓn - ii y

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

UNIVERSIDAD NACIONAL DE TRUJILLO

FACULTAD DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

ESCUELA ACADÉMICO PROFESIONAL DE FARMACIA Y BIOQUÍMICA

TRABAJO DE INVESTIGACIÓN - II

“VALIDACIÓN DEL PROCESO DE ESTERILIZACIÓN POR CALOR

HÚMEDO DE SOLUCIÓN ISOTÓNICA INYECTABLE CLORURO DE SODIO

0,9% x 1 000 mL, LIMA. SEPTIEMBRE-NOVIEMBRE DEL 2007”

PARA OPTAR EL GRADO ACADÉMICO DE:

BACHILLER EN FARMACIA Y BIOQUÍMICA

AUTOR:

VILLEGAS CAMPOS, Juan José

ASESOR:

Dr. PIMINCHUMO CARRANZA, Ramón

COASESOR:

Q.F. ROJAS LEIVA, Roy Edson

TRUJILLO – PERÚ

2008

Biblioteca Digital - Dirección de Sistemas de Informática y Comunicación

Esta obra ha sido publicada bajo la licencia Creative Commons Reconocimiento-No Comercial-Compartir bajola misma licencia 2.5 Perú. Para ver una copia de dicha licencia, visite http://creativecommons.org/licences/by-nc-sa/2.5/pe/

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

JURADO EVALUADOR

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

Mg. MIRANDA LEIVA, Manuel.

PRESIDENTE

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ __ _ _ _ _ _ _

Dr. PIMINCHUMO CARRANZA, Ramón.

MIEMBRO

_ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _ _

Mg. GAMARRA SÁNCHEZ, César.

MIEMBRO



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

AGRADECIEMIENTOS

Especialmente a mis padres:

CAMPOS TERÁN, Victoria

VILLEGAS SALAZAR, Leoncio

Por el apoyo incondicional que me brindan, en cada una de los pasos que doy hacia mi

formación profesional y hacia el camino de la excelencia.

A toda mi familia, por la ser la base principal en este largo camino.

Agradezco infinitamente por su valioso apoyo y asesoramiento, los cuales fueron

fundamentales para la realización del presente trabajo de investigación.

Gracias: Q.F. ROJAS LEIVA, Roy

Ing. ESQUIVEZ, Eduardo

Dr. PIMINCHUMO CARRANZA, Ramón

A mis compañeros y amigos de la universidad, que luego de haber compartido muchos

momentos maravillosos tanto en las aulas como fuera de ellas logramos construir

grandes lazos de hermandad y unión. Es por esto que siempre los tendré en mente y

corazón.

A mis amigos con los que hemos crecido juntos y han sido testigos de los esfuerzos

realizados por lograr las metas propuestas.

Al laboratorio B Braun Medical Perú S.A. por haberme dado la oportunidad de realizar

mis practicas preprofesionales en el departamento de Producción.

Dedicado a mis hermanos:

Sara, Rodrigo, Fernando y Paolo.

Juan José



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ÍNDICE

ABSTRACT……………………………………………………………………. i

RESUMEN………………………………………………………………………ii

INTRODUCCIÓN……………………………………………………………. 1

MATERIAL Y METODO……………………………………………………. 6

RESULTADOS………………………………………………………………... 18

DISCUSION…………………………………………………………………… 37

CONCLUSIONES…………………………………………………………….. 42

REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS………………………………………. 43

ANEXOS



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

i

ABSTRACT

The purpose of the present work is to determine the sterility assurance level (SAL) of

the cycle of sterilization and to verify the good functioning of the autoclave, in the

specified conditions.

This descriptive study, conducted over a period of eight weeks, which consisted of the

Installation Qualification (IQ), was verify the facilities or the components involved in

the operation autoclave. The Operation Qualification (OQ) consisted of three tests in

camera without product load, in order to verify the proper functioning of the autoclave,

according to the manufacturer's specifications. In the Performance Qualification (PQ)

were three tests in camera with product load and served to identify colder points or

slow to reach the required temperature and finally three tests of defiance, using

biological indicators (BIs), with the aim of determining who succeeds in logarithmic

units reduce the sterilization cycle under the autoclave conditions and with the product

being studied.

Being obtained that the diversion maximum of the average temperatures are found

below 2,5 ° C, the heat penetration (F105 ° C) is bigger than 105, 05 minutes, except the

sensor 6 in the third test is 104,7. However, microbial growth was not observed for this

one and other points, which makes valid runs.

According to the studies of bioburden a SAL of 10-6 excels itself.

Concluding that the sterilization process for humid heat of the product in study provides

the requirements and destroys the microorganisms to allowed limits.

According to the studies of bioburden a SAL of 10-6 excels itself.

Keywords: Autoclave, Termocupla, Sterilization, Biological Indicator, Bioburden.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ii

RESUMEN

La finalidad del presente trabajo es determinar el nivel de aseguramiento de esterilidad

(SAL) del ciclo de esterilización y comprobar el buen funcionamiento de la autoclave,

en las condiciones especificadas.

Este estudio descriptivo, realizado en un periodo de ocho semanas, constó de la

Calificación de Instalación (IQ), donde se verificó las instalaciones o los componentes

que intervienen en el funcionamiento de la autoclave. La Calificación de Operación

(OQ) que constó de tres pruebas en cámara sin carga de producto, con la finalidad de

verificar el adecuado funcionamiento de la autoclave, de acuerdo a las especificaciones

del fabricante. En la Calificación de Desempeño (DQ) se hicieron tres pruebas en

cámara con carga de producto y sirvió para determinar los puntos más fríos o lentos en

alcanzar la temperatura requerida y finalmente tres pruebas de desafío, utilizando

indicadores biológicos (IBs), con el objetivo de determinar las unidades logarítmicas

que logra reducir el ciclo de esterilización bajo las condiciones de la autoclave y con el

producto en estudio.

De lo cual obtuvimos que la desviación máxima de las temperaturas promedios hallados

están por debajo de 2,5 °C, la penetración de calor (F105 °C) es mayor a 105, 05 minutos,

excepto el sensor 6 en la tercera corrida es 104,7. Sin embargo, no se observó

crecimiento microbiano para este y los demás puntos, lo cual hace validas las corridas.

Según los estudios de biocarga se supera un SAL de 10-6.

Concluyéndose que el proceso de esterilización por calor húmedo del producto en

estudio cumple con los requerimientos y destruye los microorganismos a limites

permitidos.

Palabras claves: Autoclave, Termocupla, Esterilización, Indicador biológico, Biocarga.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

1

INTRODUCCIÓN

El objetivo en la producción de formas farmacéuticas estériles es fabricar productos

libres de microorganismos capaces de reproducirse en el propio producto o después de

su administración a un paciente. Para lograr este objetivo la fabricación de soluciones

parenterales es típicamente acompañada de una esterilización terminal o mediante

procesamiento aséptico en todas o algunas de sus fases, sin embargo ambos tienen

diferencias tales como los ambientes en donde se realizan actividades de preparación,

filtración, envasado, etc. 1, 2, 3

Los productos a esterilizarse terminalmente requieren ambientes calificados, de tal

modo que se adapten y mantengan de forma conveniente a las operaciones que han de

realizarse. Es así que la preparación debe hacerse por lo menos en un área grado D, a fin

de dar bajo riesgo de contaminación, adecuado para la filtración y esterilización. En

caso de riesgo a contaminación microbiana se considera una sala grado C y el llenado

debe hacerse por lo menos en un entorno Grado C. Si el producto será para uso

parenteral o se encuentra en riesgo inusual de contaminación del entorno, este debe

hacerse en un grado A (flujo laminar) con al menos un grado C de fondo. 2, 4, 5,6

Por filtración aséptica, los componentes después del lavado deben ser manejados por lo

menos en un ambiente grado D, pero cuando se parte de materiales y componentes

estériles, a no ser sometidos a esterilización o filtración, debe hacerse en un entorno

grado B. Las soluciones que se filtran con carácter estéril durante el proceso deben

hacerse en entorno grado C, y si no se filtran, el procesamiento aséptico de materiales y

productos deben hacerse en un ambiente grado A con entorno grado B. 2, 4, 6



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

2

Independientemente del método utilizado para lograr la esterilidad de un producto, es

indiscutible la importancia que tiene el equipamiento empleado en este proceso,

ocupando un lugar fundamental las autoclaves ó esterilizadores. En el presente trabajo

se trata de una autoclave que usa un sistema de dispersión de agua en cascada, la cual

esta diseñada especialmente para esterilizar líquidos en contenedores 100% sellados y

para garantizar una forma perfecta después de esterilizar, así como por motivos de

seguridad, el esterilizador trabaja con presión de apoyo. Por esto la calificación de los

equipos involucrados y la validación de los procesos ejecutados en ellos, son de sumo

interés para garantizar la calidad y seguridad de los productos farmacéuticos. 1, 7, 8

La validación es parte esencial de las Buenas Prácticas de Fabricación (BPF), elemento

fundamental del programa de Aseguramiento de Calidad, asociado a un proceso en

particular, permitiendo asegurar, por una parte, la fiabilidad y reproducibilidad del

proceso empleado en la manufactura, así como en el control de un medicamento, y por

otra parte, la obtención de la calidad definida para ese medicamento. Para implementar

una validación es necesario que las diferentes áreas de un laboratorio trabajen en

conjunto, con la colaboración del personal debidamente capacitado, y en donde la

dirección por parte de un Químico Farmacéutico es fundamental. 6, 9,10, 11, 12

Las regulaciones nacionales e internacionales establecen que todos los procesos críticos

deben ser validados, haciendo marcado énfasis en los procesos de esterilización. Es así

que las autoclaves modernas son diseñadas y fabricadas bajo estrictas normas y cuentan

además de los dispositivos de seguridad y de otras características que aseguran la

fiabilidad de los procesos, con un sistema de control completamente automatizado que

se ocupa no sólo de la ejecución de todas y cada una de las etapas de un ciclo de

esterilización, sino también de la verificación de las condiciones de operación para

evitar daños en el equipo, en el proceso e incluso en el operador. 1, 2, 6, 8, 13



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

3

Una particularidad importante es que estos sistemas de control permiten el registro, en

papel o en formato electrónico, de todos los parámetros de los ciclos ejecutados, lo cual

además de ser un requisito exigido por las regulaciones y las Buenas Prácticas de

Manufactura, permite la detección de posibles condiciones de fallo, aún antes de que

ocurran.1, 7, 13

La validación de un proceso de esterilización tiene la finalidad de demostrar que el

proceso es reproducible, fiable y que garantiza los resultados previstos. Es así que antes

de que se adopte un proceso de esterilización, deberá demostrarse su idoneidad para el

producto y su eficacia para lograr las condiciones deseadas de esterilización mediante

medios físicos e indicadores biológicos (IBs) cuando sea pertinente. Así señala la nueva

norma ISO 17665-1:2006, que reemplaza a la ISO 11134: 1994, así mismo nos indica

que se deben realizar tres veces consecutivas las pruebas a realizarse y en líneas

generales no se hace evidente cambios drásticos en la norma actual.14, 15, 16

El método que se utilizó para el desarrollo del trabajo es el de la combinación de

Biocarga e IBs, el cual es utilizado cuando el fabricante desea un proceso de

esterilización que demuestre la inactivación de gran número de microorganismos (IBs)

que se saben resistentes al proceso. Además se requiere datos de la Biocarga del

producto; y es usado para esterilización terminal de productos parenterales, aunque cabe

señalar también que puede ser usado para dispositivos médicos esterilizados con oxido

de etileno. Los IBs, son preparados de microorganismos específicos resistentes a un

proceso dado de esterilización, característicos por sus valores D y Z. 14, 15, 17, 18

Los microorganismos ampliamente reconocidos como IBs adecuados son las bacterias

formadoras de esporas, debido a que estos son mucho más resientes que la microflora

normal frente a la mayoría de procesos de esterilización, excepto en los que emplean

radiaciones ionizantes . Cada IB generalmente tiene una población de más 106,



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

4

empleándose en procesos que dan como resultado un producto estéril en su empaque o

envase final, al igual que en la esterilización de equipos, materiales y componentes que

se utilicen en procesos asépticos. 14, 16, 18

Se conoce como Validación Biológica a los estudios de penetración del calor en la carga

usando IBs para demostrar que el proceso está en condiciones de destruir los

microorganismos en cuestión. Los IBs deben situarse dentro de los mismos envases en

los que se han colocado las sondas térmicas (termocuplas) o en su inmediata proximidad

y en el punto más frío o lento en alcanzar la temperatura especificada. Además de la

destrucción de los microorganismos, los IBs pueden contener un colorante para indicar

si hubo crecimiento positivo o negativo después de la incubación.14, 15, 17, 19

En el desarrollo de un trabajo de validación para un proceso de esterilización sólo

deben usarse los IBs ampliamente reconocidos en la monografía específica. Esto

garantizará que el IB seleccionado represente un desafío mayor que la biocarga presente

en el producto. Para un proceso de esterilización a 121 °C por 15 minutos, se utilizan

esporas de cepas adecuadas de Bacillus stearothermophilus que están disponibles

comercialmente como IBs; también son utilizados otros como, Clostridium sporogenes,

Bacillus coagulans y Bacillus subtilis. Siendo este último utilizado para monitorear

procesos a temperaturas bajas, por lo cual son de elección en estos casos. 14, 20

El valor de F0 viene a ser la letalidad de un proceso de esterilización, expresado en

términos de tiempo equivalente en minutos a una temperatura de 121 °C con un valor

Z= 10 °C, para eliminar un numero especifico de microorganismos, pero esto puede ser

extrapolable según sea necesario. En un proceso a 121 °C generalmente se calcula la

letalidad (F acumulado) solamente en la fase de esterilización, pero en casos que se

requieren temperaturas menores se recomienda tener en cuenta las etapas de

calentamiento y enfriamiento para procesar los datos correspondientes. 15, 18, 19



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

5

Por lo expuesto anteriormente, los objetivos que se pretende alcanzar son:

OBJETIVO GENERAL:

Validar el proceso de esterilización por calor húmedo de solución isotónica inyectable

cloruro de sodio 0,9 % x 1 000 mL, asegurando y documentando que el proceso es

eficaz, reproducible y garantiza la destrucción de microorganismos a límites permitidos.

OBJETIVOS ESPECIFICOS:

1. Utilizar un Registrador de temperatura multicanal con sensores calibrados para

poder registrar las temperaturas en los diferentes puntos de distribución.

1. Comprobar el buen funcionamiento de la autoclave, realizando tres pruebas de

distribución de calor en vacío (cámara sin carga de producto).

2. Determinar los puntos más fríos o lentos en alcanzar la temperatura requerida,

mediante tres pruebas de distribución de calor con carga de producto.

3. Determinar las unidades logarítmicas de población microbiana que logra reducir el

ciclo de esterilización, realizando tres pruebas con carga de producto y colocando

los IBs en los puntos más fríos o lentos en alcanzar la temperatura requerida.

4. Contribuir con el conocimiento de la interpretación e importancia de las

validaciones en la Industria Farmacéutica.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

6

II. MATERIAL Y MÉTODO

1. MATERIAL Y EQUIPOS:

1.1 HUMANO:

a. Mantenimiento: Responsable de la verificación de la instalación y registro

de los resultados obtenidos siguiendo el protocolo.

b.Operador de la máquina: Maneja la autoclave y colabora en la obtención de

los datos durante las verificaciones y calificaciones realizadas.

c. Jefe de validaciones: Verifica los resultados obtenidos y elabora el reporte

de validación así como las desviaciones y conclusiones encontradas.

d.Aseguramiento de la Calidad: Revisa y aprueba el protocolo / reporte de

validación.

e. Practicante de producción: Esta presente en todas las etapas de la validación

verificando que se cumplan con lo programado, recolecta los datos, los

interpreta y coordina con el Jefe de validaciones.

1.2 INBICADORES BIOLOGICOS:

a. Microorganismo : B. subtilis

b. Marca : Steril Amp II “5230”

c. Lote : SASU - 244

d. Cepa ATCC # : 35021

e. Población : 1.4 x 106 esporas

f. Valor D : 14,7 minutos

g. Valor Z : 9,8 ºC



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

7

1.3 CRONOMETRO:

a. Marca : Casio

b. Alcance : 24 horas

c. División : Horas, minutos y segundos.

1.4 REGISTRADOR DE TEMPERATURA MULTICANAL:

a. Marca : Digísense (Singapur)

b. Modelo : 69200-00

c. Nº serie : 326654

d. Resolución : 0,1 ºC

e. Rango de lectura : 0 ºC – 150 ºC

f. Sensores : Tipo T

1.5 AUTOCLVE:

a. Modelo : SWS-18.13.51/2F

b. Diseño : Horizontal de dos puertas

c. Código : A-4000

d. Fabricante : SBM (Scholler-

Bleckmann izintechnik), Austria. 2001

e. Nº de serie : 051-D0444

f. Volumen de la cámara : 27 000 L

g. Material interno de la cámara : Acero inoxidable 316 L

h. Medio de esterilización : Agua en aspersión

i. Registro de temperatura y tiempo : Electrónico (computadora)

1.6 OTROS:

a. Conches de la autoclave

b. Producto en proceso



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

8

2. MÉTODO: Combinación de Biocarga e IBs

2.1. Especificaciones del proceso de esterilización:

En general, las preparaciones destinadas a la vía parenteral se esterilizan en

autoclave a una temperatura de 121 ºC durante 30 minutos.

En el caso nuestro son como siguen:

a. Temperatura : 105 ºC

b. Tiempo : 55 minutos

c. Presión : 1 bar

2.2. Selección del Indicador Biológico (IB):

El microorganismo de ensayo elegido para la validación del proceso es

Bacillus subtilis obedece que a pesar de su resistencia a altas temperaturas,

puede ser inactivado a una temperatura de 105 °C (temperatura baja a

comparación de las temperaturas generalmente empleadas en la

esterilización), esto hace descartar otras opciones y además de ser un IB

ampliamente reconocido en la Monografía del mismo y recomendado para

procesos de esterilización por calor húmedo. 4, 19

2.3. Fases del ciclo de trabajo automático:

Encender la autoclave a “DISPUESTO A FUNCIONAR” y correr el

programa. NO deben activarse alarmas y el programa corre automáticamente

por todos los pasos hasta “PROGRAM END”:



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

9

LLENAR: La cámara se llena con agua recirculante hasta alcanzar el nivel

programado (86 %) y automáticamente cambia al siguiente paso

“CALENTAR”

CALENTAR: La cámara calienta hasta alcanzar la temperatura programada

(105 °C) y presión 1 bar.; automáticamente cambia al siguiente paso

“ESTERILIZAR”

ESTERILIZAR: La cámara mantiene el rango de temperatura programado

durante el tiempo establecido (55 min) y luego automáticamente cambia al

paso “ENFRIAR”

ENFRIAR: La temperatura baja hasta el valor programado (104 °C) y

automáticamente cambia al siguiente paso “ENFRIAR”

ENFRIAR: La temperatura baja hasta el valor programado (58 °C) y

automáticamente cambia al siguiente paso “EVACUAR ARRIBA”

EVACUAR ARRIBA: La cámara libera presión hasta el valor

predeterminado (0,300 bar) y automáticamente cambia al siguiente paso

“DRENAJE DEPÓSITO”

DRENAJE DEPÓSITO: El agua de la cámara es transferida al tanque

depósito hasta que el nivel en la cámara llegue al valor predeterminado (42%)

y automáticamente cambia al siguiente paso “PURGAR”

PURGAR: La cámara elimina presión hasta al valor establecido (0,070 bar) y

cambia automáticamente a “PROGRAM END”

2.4. Controles para monitorear el ciclo de esterilización:

Todo el sistema de control del autoclave es realizado por la computadora, es

decir el sensor de presión y los sensores de temperatura, para determinar la



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

10

temperatura mínima y el timer están conectados al programa de la

computadora lo que permite que el ciclo se ejecute de manera secuencial.

Cabe mencionar que si esto no sucede, se activan las alarmas del programa.

Para las pruebas a realizarse, se utilizarán adicionalmente el Registrador de

temperatura multicanal con sus termocuplas calibradas, indicadores

biológicos y un cronometro calibrado.

2.5. CALIFICACION DE INSTALACION:

FINALIDAD: Asegurar que los instrumentos propios de la autoclave y los que se

van a utilizar para el registro de los datos estén en las condiciones adecuadas antes

y después de la validación.

Verificar los sistemas de apoyo crítico y las principales instalaciones o los

componentes que intervienen en el funcionamiento de la autoclave.

CALIBRACIONES:

a. Calibración de las termocuplas:

Procedimiento: La operación consistió en comparar las termocuplas en examen

con un instrumento calibrado y certificado que sirvió de referencia, operando

en las mismas condiciones en que las termocuplas en examen realizan su

función critica.

Criterios de aceptabilidad: Las termocuplas son aceptables si la desviación de la

temperatura no excede ± 2,5 ºC, comparado con la de referencia. 10

b. Calibración del registrador de temperatura multicanal:

Procedimiento: Consistió en comparar el instrumento en examen con un

instrumento calibrado y certificado que sirvió de referencia, operando en las

mismas condiciones en que el instrumento en examen realiza su función critica.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

11

Criterios de aceptabilidad: El Instrumento es aceptado si la desviación de la

temperatura no excede ± 1 ºC comparado con el de referencia.

c. Calibración de manómetros:

Procedimiento: Se realizó de manera similar que en los casos anteriores.

Criterios de aceptabilidad: El Instrumento es aceptado si la desviación de la

presión no excede 5% comparado con el de referencia.

SISTEMAS DE APOYO CRÍTICO E INSTALACIONES:

a. Verificación del suministro de agua purificada:

Visualmente se realizó una inspección del correcto flujo de agua purificada

proveniente directamente del sistema de osmosis inversa de planta.

b. Verificación del suministro de agua de enfriamiento:

Se verificó el aporte de agua proporcionado por la torre de planta.

c. Verificación del suministro de vapor:

Se verificó visualmente el aporte adecuado de vapor por parte del caldero de

planta, el cual debe mantener una presión entre 5 bares a 8 bares.

d. Verificación del suministro de aire comprimido:

Se inspeccionó el suministro de aire comprimido por parte del compresor de

planta, en este caso la presión a mantener debe estar entre 6 bares a 8 bares.

e. Verificación del sistema computarizado:

Se verificó el correcto ingreso del usuario al sistema y el buen registro de las

etapas señaladas para el proceso, y la impresión del reporte correspondiente.

f. Verificación del suministro de corriente eléctrica:

De acuerdo a los requerimientos del equipo: voltaje (220 v), fases, frecuencia,

línea a tierra, etc.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

12

g. Verificación de duración del ciclo de esterilización:

Finalidad: Comprobar que el tiempo controlado por el sistema de control es el

verdadero.

Procedimiento: Se inició el cronómetro al momento que el programa cambió

automáticamente a “ESTERILIZAR” y se detuvo el control al momento que el

programa cambia automáticamente a “ENFRIAR”

Criterio de aceptación: La diferencia es menor a 3 %, otras bibliografías más

rigurosas consideran ±1 %. 18

Nota: Los tiempos fueron tomados de las tres corridas de distribución de

temperatura con carga de producto (DQ).

h. Verificación del funcionamiento de alarmas:

Se probó el funcionamiento de los mecanismos de alarma, simulando

situaciones fuera de control durante el funcionamiento de la autoclave.

2.6. CALIFICACION DE OPERACIÓN:

PRUEBA: Distribución de temperatura en cámara sin carga de producto.

FINALIDAD: Asegurar que la distribución de temperatura en la cámara vacía está

dentro de los límites.

PROCEDIMIENTO:

Se hizo la distribución de seis niveles (esteripales) vacíos de forma homogénea.

Se instaló el registrador de temperatura con sus termocuplas calibradas que se

identificaron mediante números (Fig. Nº 1).

Una vez instalados todos las termocuplas se cerró la puerta de entrada mediante

el sistema de cómputo, verificándose siempre que la empaquetadura estuviera

bien ubicada.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

13

Una vez cerrada la puerta se programó el proceso de esterilización, que

permitió CALENTAR a 105 ºC por 30 minutos y ENFRIAR a menos de 58 ºC.

Acabado el proceso se abrió la puerta de salida, luego se esperó que las

termocuplas y la autoclave se enfríen.

Se completaron tres corridas Consecutivas.

DISTRIBUCION DE TERMOCUPLAS:

Nivel 6 Nivel 5 Nivel 4 Nivel 3 Nivel 2 Nivel 1

Fig. Nº 1.

CRITERIOS DE ACEPTACIÓN:

La temperatura en los puntos evaluados de la cámara no debe ser mayor a ± 1

°C de la temperatura media en cada instante de registro. Es inaceptable si la

mencionada diferencia supera ± 2,5 °C. 14, 20

Las temperaturas deben estar sobre 105 °C durante la fase de esterilización

Puerta de carga Puerta de descarga

1

2

3

4

6

7

8

9

10

11

5



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

14

2.7. CALIFICACION DE DESEMPEÑO:

PRUEBA: Distribución de temperatura en cámara con carga de producto

FINALIDAD: Determinar los puntos más fríos o lentos en alcanzar la temperatura

requerida, y demostrar que la distribución de la temperatura es uniforme y estable

en la carga de producto.

PROCEDIMIENTO:

Se colocó en la cámara seis coches de seis niveles cada uno, con el producto.


identificaron mediante números (Fig. Nº 2).

Una vez instaladas todas las termocuplas se cerró la puerta de entrada mediante

el sistema de cómputo, verificándose siempre que la empaquetadura estuviera

bien ubicada.



Acabado el proceso, se abrió la puerta de salida, quitándose las termocuplas

cuidadosamente y se sacó uno a uno los coches con producto.

Finalmente se completó tres corridas, y se determinó los puntos fríos.

DISTRIBUCIÓN DE TERMOCUPLAS:

Coche 6 Coche 5 Coche 4 Coche 3 Coche 2 Coche 1

Fig. Nº 2.


2

3

4

5

6

7

8

9

10

11



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

15


La uniformidad de la temperatura se considera muy aceptable si la diferencia

de la temperatura media de la cámara, una vez que se ha alcanzado la

temperatura de esterilización, es inferior a ± 1 ºC (es decir de la temperatura

promedio, siempre que no baje de la temperatura especificada). Es inaceptable

cuando la mencionada diferencia supera ± 2,5 ºC. 14, 20

Las temperaturas deben estar sobre 105 °C durante la fase de esterilización y en

las pruebas sucesivas no se debe variar los puntos más fríos o lentos en alcanzar

la temperatura.

PRUEBA: Desafío microbiológico y determinación de la letalidad

FINALIDAD: Determinar el número de logaritmos de población microbiana que

logra reducir el ciclo de esterilización y verificar si hay crecimiento bacteriano en

cada una de las ampollas bioindicadoras, luego de la incubación respectiva

PROCEDIMIENTO:

Se colocó en la cámara seis coches de seis niveles cada uno con el producto.


identificaron mediante números.

Se colocaron las ampollas bioindicadoras en frascos llenados con agua para

inyección, ubicándolas en diferentes lugares de acuerdo a los puntos más fríos o

más lentos en alcanzar la temperatura, determinados en la prueba de

distribución de temperatura con carga de producto.

Luego se ubicó las termocuplas, dentro de los frascos con ampollas

bioindicadoras y en los puntos fijados, conforme fueron ingresando los coches.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

16

Una vez instaladas todas las termocuplas se cerró la puerta de entrada mediante

el sistema de cómputo, verificándose siempre que la empaquetadura esté bien

ubicada.



Una vez acabado el proceso, se abrió la puerta de salida, quitandose las

termocuplas cuidadosamente y se sacó uno a uno los coches con producto.

Se rescataron las ampollas, y se rotularon para llevarlas a incubación por un

periodo de 72 horas y a un rango de temperatura de 35 ºC – 37 ºC, según

certificado.

Los cálculos de F105 alcanzados se obtuvieron utilizando la siguiente fórmula:

Donde:

F105: Minutos equivalentes a 105 °C con un valor Z de 9,8 °C

t : Intervalo de tiempo del registro de temperatura expresado en minutos

T1: Temperatura elegida para el proceso (105 °C)

T2: Temperatura del sensor al momento del registro

Z : 9,8 °C para el microorganismo Bacillus subtilis “5230” (ATCC 35021).

Valor tomado del certificado.

Se completaron tres corridas consecutivas.


En lo que respecta a las ampollas bioindicadoras, estas son aceptables si pasado

el tiempo de incubación mantiene su coloración o no viran a color amarillo ni

forman precipitado (trasparentes).

Z

TT

tF12

10.105



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

17

Las temperaturas deben estar sobre 105 ºC en la fase de esterilización.

El valor F105 acumulado mínimo suficiente para reducir mínimo 7,146

unidades logaritmos de la población del IB o llegar a una probabilidad igual o

menor a una unidad no estéril en un millón de las mismas. 4, 10, 18

ESTUDIOS DE BIOCARGA

FINALIDAD: Constatar la carga microbiana que tiene el producto antes de ser

esterilizado y determinar si esta es eliminada a limites permitidos.

PROCEDIMIENTO:

Se tomó una data de estudios de biocarga del producto en estudio y se hizo los

cálculos necesarios para evaluar la probabilidad de supervivencia.

Se contrastaron los datos de estudios de biocarga con los de IBs.

CRIETERIOS DE ACEPTACION:

El proceso permite llegar a la probabilidad igual o menor a una unidad no

estéril en un millón. 4, 10 , 18



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

18

II. RESULTADOS

1. CALIFICACION DE INSTALACIÓN (IQ):

CALIBRACIONES:

Cuadro Nº 1

INSTRUMENTO (AUTOCLAVE)

CALIBRACIÓN

C/ NC

Manómetro MFP-1166

Ubicado en la línea de ingreso de agua de osmosis

Calibrado por: Metroil S.A.C.

Fecha de calibración: 2007-07-05

Próxima calibración: Julio 2008

Certificado Nº : CFP-414-2007

C

Manómetro PI 100

Ubicado en la cámara de la autoclave



Próxima calibración: Junio 2008


C

Manómetro PI 153

Ubicado en la línea de aire comprimido





C

Manómetro PI 152

Ubicado en la línea de vapor



Próxima calibración: Julio 2008

Certificado Nº : CFP- 412 - 2007

C

Manómetro PI 192

Ubicado en la línea de enfriamiento




Certificado Nº : CFP -386 - 2007

C

Termómetro TI 174

Ubicado en el intercambiador de calor




Certificado Nº : CT-406-2007

C

Termómetro TI 191

Ubicado a la salida de la bomba de recirculación





C

Nota:

C: Conforme

NC: No conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

19

INSTRUMENTO (AUTOCLAVE)

CALIBRACIÓN

C/

NC

Termómetro TI 192

Ubicado en la línea de enfriamiento





C

Sensor de temperatura TT 101

Ubicación: botella R101 - cámara del

autoclave

Calibrado por: Corporación Infarmasa S.A.



Certificado Nº : GSC/C-001-2007

C



autoclave





C



autoclave





C


Ubicación: frasco R104 - cámara del

autoclave





C



autoclave





C



autoclave





Nota:

C: Conforme

NC: No conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

20

Nota:

C: Conforme

NC: No conforme

SISTEMAS DE APOYO CRÍTICO E INSTALACIONES:

a. Verificación del suministro de agua purificada:

Cuadro Nº 2

DESCRIPCIÓN VERIFICACIÓN RESULTADO

Presión (MPF-1166): 2 a 5 bares

Línea ingreso de agua de osmosis

3,2

Conforme

Ductos con fugas No Conforme

Estabilizador de presión Si Conforme

EQUIPO DE MEDICIÓN

CALIBRACIÓN

C/

NC

Termómetro digital multicanal y

sensores

Calibrado por : Corporación Infarmasa S.A



Certificado Nº : T 002-07

C

Cronometro

Calibrado por : Metroil S.A.C



Certificado Nº : CT’s-037-2007

C



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

21

b. Verificación del suministro de agua de enfriamiento:

Cuadro Nº 3


Presión (PI 192): 2 a 5 bar

Intercambiador de calor

2,8 bar

Conforme

Estabilizador de presión si Conforme

c. Verificación del suministro de vapor:

Cuadro Nº 4


Presión (PI 152): 5 a 8 bar 6,4 bar Conforme


d. Verificación del suministro de aire comprimido:

Cuadro Nº 5


Filtro de aire 0,22 µm si Conforme

Presión (PI 153): 6 a 8 bar 7,7 bar Conforme




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

22

e. Verificación del sistema computarizado:

Cuadro Nº 6


Ingreso mediante password si Conforme

Impresión de reporte si Conforme

Hardware

Hardware

Monitor

Conforme

Conforme

Teclado

Transformador

Batería

Impresora

Alarma de emergencia

UPS

Software Numeración o código

especificado

Conforme

f. Verificación del suministro de corriente eléctrica:

Cuadro Nº 7


Voltaje 220 v Conforme

Fases 3 Conforme

Frecuencia 60 Hz Conforme

Estabilizador si Conforme

Línea a tierra Si Conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

23

g. Verificación de duración del Ciclo de Esterilización:

Cuadro Nº 8

Programa Cronometro Diferencia % Resultado

55,00 minutos 54,58 minutos 2 segundos O,76 % C

55,00 minutos 54,59 minutos 1 segundo 0,75 % C

55,00 minutos 54,59 minutos 1 segundo 0,75 % C

h. Verificación del funcionamiento de alarmas:

Cuadro Nº 9

Descripción

Activado

Desactivado

Resultado

Alarma pulsador de emergencia + +/- C

Pulsador de emergencia (lado de carga) + +/- C

Pulsador de emergencia ( lado de descarga) + +/- C

Alarma caída de presión en la junta de la

puerta de carga

+

+/-

C

Alarma caída de presión en la junta de la

puerta de descarga

+

+/-

C

Alarma falta de vapor industrial + +/- C

Alarma falta de aire de instrumentación + +/- C

Alarma Y198 puente móvil descarga arriba + +/- C

Alarma Y199 puente móvil descarga abajo + +/- C

Nota:

C: Conforme

NC: No conforme



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

24

CALIFICACIÓN DE OPERACION (OQ):

PRUEBA: Distribución de temperatura en cámara sin carga de producto

Primera corrida: Cuadro Nº 10

Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,5 107,2 107,5 107,5 107,9 107,4 107,6 107,5 107,0 107,2 107,5 107,5

T° Máxima 106,9 107,6 107,9 107,8 108,2 107,7 108,3 107,8 107,3 107,5 107,8 107,8

T° Minima 105,7 107,0 107,2 107,2 107,6 107,2 107,1 107,3 106,7 106,9 107,3 107,3

DTT 1,2 0,6 0,7 0,6 0,6 0,5 1,2 0,5 0,6 0,6 0,5 0,5

DTT: Diferencia entre las temperaturas máxima y mínima registradas en una posición

Desv. Máx. Autoclave: Máxima diferencia entre la temperatura promedio de la cámara de la autoclave y la temperatura de cada sensor

DTE: Diferencia entre las temperaturas máxima y mínima dentro de la cámara en el momento del registro

Máximos

Desv. Máx. Autoclave 0,6

DTE 1,0



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

25


Segunda corrida: Cuadro Nº 11

Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,4 107,0 107,1 107,1 107,5 107,3 107,5 107,4 106,9 107,0 107,2 107,6

T° Máxima 106,9 107,2 107,3 107,3 107,8 107,6 107,6 107,7 107,4 107,3 107,5 107,9

T° Minima 105,5 106,8 107,0 106,9 107,4 107,1 107,3 107,2 106,7 106,8 106,9 107,4

DTT 1,4 0,4 0,3 0,4 0,4 0,5 0,3 0,5 0,7 0,5 0,6 0,5




Máximos


DTE 0,9



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

26


Tercera corrida: Cuadro Nº 12

Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

1

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,6 107,3 106,9 106,6 107,6 107,5 107,5 107,6 107,4 107,1 107,6 107,2

T° Máxima 107,0 107,7 107,3 106,9 107,9 107,8 107,8 107,9 107,7 107,4 107,9 107,8

T° Minima 105,7 107,1 106,6 106,3 107,4 107,2 107,4 107,4 107,2 106,9 107,3 106,6

DTT 1,3 0,6 0,3 0,6 0,5 0,6 0,4 0,5 0,5 0,5 0,6 1,2




Máximos


DTE 1,3



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

27

CALIFICACIÓN DE DESEMPEÑO (DQ):

PRUEBA: Distribución de temperatura en cámara con carga de producto (Puntos fríos)

Primera corrida: Cuadro Nº 13

Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,2 106,5 106,6 107,0 106,5 106,9 106,7 107,0 106,3 106,6 106,8

T° Máxima 106,6 106,8 107,1 107,3 106,8 107,3 107,2 107,3 106,6 106,9 107,1

T° Minima 105,6 106,1 106,3 106,7 106,2 106,5 106,4 106,6 106,0 106,3 106,5

DTT 1,0 0,7 0,8 0,6 0,6 0,8 0,8 0,7 0,6 0,6 0,6

Máximos


DTE máximo 0,9

Autoclave Vs Sensor 1,4


Desv. Máx. Autoclave: Máxima diferencia entre la temperatura promedio de la cámara de la autoclave y la temperatura de cada sensor.




BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

28


Segunda corrida: Cuadro Nº 14

Máximos


DTE máximo 0,9





Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,2 106,6 106,8 107,1 106,7 106,8 107,0 107,0 106,6 106,8 107,0

T° Máxima 106,6 107,0 107,2 107,5 107,2 107,3 107,4 107,7 106,9 107,1 107,4

T° Minima 105,6 106,3 106,6 106,9 106,3 106,4 106,7 106,7 106,3 106,5 106,7

DTT 1,0 0,7 0,6 0,6 0,9 0,9 0,7 1,0 0,6 0,6 0,7



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

29


Tercera corrida: Cuadro Nº 15

Sensor

Parámetro

T°

Autoclave

2

3

4

5

6

7

8

9

10

11

T° Promedio 106,2 106,8 106,8 107,2 106,9 107,0 106,9 107,1 106,8 106,6 106,9

T° Máxima 106,6 107,1 107,2 107,6 107,3 107,3 107,3 107,4 107,2 107,2 107,3

T° Minima 105,7 106,5 106,5 106,9 106,6 106,7 106,5 106,7 106,4 106,2 106,5

DTT 0,7 0,6 0,7 0,7 0,7 0,6 0,8 0,7 0,8 1,0 0,8

Máximos


DTE máximo 0,9







BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

30

UBICACIÓN DE LOS PUNTOS FRIOS:

Coche 6 Coche 5 Coche 4 Coche 3 Coche 2 Coche 1

Fig. Nº 3

Sensor 2 : Adelante, extremo superior izquierdo del coche 6

Sensor 3 : Adelante, extremo inferior derecho del coche 6

Sensor 4 : Adelante, parte central del coche 5

Sensor 5 : Atrás, parte central inferior del coche 5


Sensor 7 : Atrás, extremo inferior derecho del coche 4

Sensor 8 : Adelante, extremo inferior izquierdo del coche 3


Sensor 10: Adelante, parte inferior central del coche 2

Sensor 11: Adelante, parte superior central del coche 1


4 5

3

2

6

7

8

9

10

11

Punto frío



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

31

PRUEBA: Desafío microbiológico y determinación de la letalidad (“Validación

Biológica”)

INDICADORES BIOLOGICOS: Ver Fig. A1(anexo 3)

Cuadro Nº 16

COLORACION

CRECIMIENTO

CONTROL (+)

Amarillo

Si

PRIMERA CORRIDA:

Rojo-Transparente

No

SEGUNDA CORRIDA:

Rojo-Transparente

No

TERCERA CORRIDA:

Rojo-Transparente

No

Temperatura = 35 a 37 ºC por 48 h.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

32

CALCULO TEORICO DEL F105 °C PARA LA REDUCCIÓN DEL

MICROORGANISMO DEL IB:

Datos:

Concentración inicial: 1,4 x 106

Valor D: 14,7

Concentración final: 1 x 10-1

Desarrollo:

Log 10 1,4 x 106 = 6,146

Cada IB tiene 6,146 Log de esporas:

F105 °C = D x Log10 Concentración inicial

F105 °C = 14,7 x 6,146

F105 °C = 90,35 minutos

Entonces, a 105 °C por 90,35 minutos podríamos tener en promedio una espora

sobreviviente por IB. Además con una probabilidad de que 63% de los IBS sean

positivos según gráfica Nº A1 (anexo2).

Por lo cual reducimos un logaritmo adicional:

F105 °C = 14,7 x 7,146

F105 °C = 105,05 minutos

Con esto llegamos a una probabilidad de que 10% de los IBs darían positivos según

gráfica Nº A1 (anexo2)



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

33

F105 °C ACUMULADO EN CADA SENSOR:

Cuadro Nº 17

Sensor 1° Corrida 2° Corrida 3° Corrida

2 116,7 115,2 117,9

3 109,1 116,2 121,2

4 130,6 127,5 125,6

5 129,8 115,3 114,0

6 117,3 115,3 104,7

7 122,3 116,9 112,4

8 127,5 128,2 128,9

9 132,0 114,5 113,7

10 116,5 113,1 107,4

11 130,5 119,3 130,7

TEMPERATURAS DE LAS CORRIDAS DE DESAFIO MICROBIOLOGICO:

Cuadro Nº 18

T° Mínima T° Promedio T° Máxima Desv. Estándar

1° Corrida 105,7 106,9 107,4 0,149683541

2° Corrida 106,2 106,8 107,5 0,188651744

3° Corrida 105,4 106,8 107,6 0,255641731



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

34

ESTUDIOS DE BICARGA

MEDIOS:

Tioglicolato (TSA), lote: E20/ 07A.

Caldo casoy (SDA), lote: E20/ 07S.

PRODUCTO: Cloruro de sodio 0,9% x 1000 mL

LOTE: 00712697

Cuadro Nº 19

TSA (UFC/ 100 mL) SDA (UFC/ 100 mL)

Agua de preparación 33 0

Muestra 1 10-7 0-0

Muestra 2 11-11 0-0

LOTE: 00712797

Cuadro Nº 20



Muestra 1 5-1 0-0

Muestra 2 1-1 0-0

Muestra 3 1-0 0-0

LOTE: 00712887

Cuadro Nº 21



Muestra 7-1 1-0



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

35

LOTE: 00712898

Cuadro Nº 22

TSA(UFC/ 100 mL) SDA(UFC/ 100 mL)


Muestra 0-0 0-0

LOTE: 00712908

Cuadro Nº 23



Muestra 0-0 0-0

LOTE: 00812918

Cuadro Nº 24



Muestra 1 1-0 0-0

Muestra 2 0-1 0-0

Muestra 3 0-0 0-0

Como podemos observar en los cuadros anteriores para los lotes en estudio, tenemos

una carga máxima de 11 UFC para el producto, entonces decimos:

Log 10 11 = 1,0414

Entonces tenemos 1,0414 unidades logaritmicas de biocarga, por lo cual necesitamos

disminuir 6,0414 logaritmos adicionales para llegar a un SAL de 10-6, es decir tener una

probabilidad de una unidad no estéril en un millón. Es decir tenemos que llegar a



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

36

reducir 7,0414 logaritmos para llegar a los parámetros requeridos, ver gráfica Nº A1

(anexo 2).

Asumiendo el valor D de los IBs decimos (“Peor caso”):

F105 °C = D x (Log10 B- Log10 A)

F105 °C = D x (Log10 11- Log10 10-6)

F105 °C = 14,7 x (1,0414 + 6)

F105 °C = 103,51 minutos

RESUMEN GENERAL DE LOS RESULTADOS

Cuadro Nº 25

PARAMETROS ACEPTABILIDAD RESULTADOS

Calibraciones e instalaciones Vigencia y ubicación Cumple

Desviación máxima de los promedios

hallados durante la esterilización

∆ T° no mayor a 2,5 °C Cumple

Penetración de calor F105 °C mayor a 105,5

min.

Cumple

Desafío microbiológico No crecimiento Cumple

SAL ≤ 10-6 Cumple



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

37

IV. DISCUSIÓN

La calificación de instalación (IQ) la iniciamos verificando la calibración de los

instrumentos de control tanto propios y no propios de la autoclave (cuadro Nº 1), para

esto hicimos un listado de los mencionados por ser calibrados de ser el caso o verificar

la fecha de vigencia, esto mediante certificados de calibración (ver anexo 1), así nos

aseguramos que nuestras mediciones estén dentro de lo requerido durante y después del

trabajo de validación programado. 10, 11

Una vez conformes los instrumentos de control, verificamos que los sistemas de apoyo

crítico estén dentro de lo especificado, tanto en ubicación como en funcionamiento. El

suministro de agua (cuadro Nº 2), se comprobó que es obtenida de la línea de osmosis,

la tubería no presentó fugas u obstrucciones, contando con estabilizador de presión y el

manómetro para evidenciar la presión con la que ingresa el agua, tomándose un valor de

3,2 bares (2 a 5 bares) dando la conformidad del caso.

El agua de enfriamiento es proporcionada por la torre de planta, cabe mencionar que

esta agua no tiene contacto directo con el producto debido a que solo ayuda al

enfriamiento del agua osmotizada mediante un sistema intercambiador de calor, la

presión con la que ingreso fue de 2,8 bares lo cual esta dentro de lo establecido por el

fabricante (2 a 5 bares), así mismo se verificó la presencia del estabilizador de presión

(cuadro Nº 3).

El vapor es suministrado por el caldero de planta, el cual llega a la autoclave con una

presión de 6,4 bares; estando dentro del rango (5 a 8 bares), contando también con un

estabilizador de presión y asegurando así el adecuado aporte de vapor para el

calentamiento del agua de aspersión (cuadro Nº 4).



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

38

La alimentación de aire comprimido lo hace el compresor de planta, atravesando unas

tuberías y antes de su ingreso pasa por un filtro de 0,22 µm., comprobándose mediante

inspección visual, cabe señalara que este filtro es protegido mediante un sistema de

carcaza de acero inoxidable. El ingreso de aire debe estar entre 6 a 8 bares, dando la

conformidad un valor de 7,7 bares y cabe mencionar que el manómetro implicado (PI

153) cuanta con estabilizador (cuadro Nº 5).

La instalación y el adecuado funcionamiento del sistema computarizado se verificó

mediante el correcto ingreso del usuario al sistema mediante una clave personal, la cual

da confiabilidad y seguridad de los datos, se observó el adecuado registro de las etapas y

especificaciones del proceso por la impresión del reporte correspondiente. Se hizo una

revisión del sistema hardware: Como son el monitor, teclado, transformador, batería,

impresora, UPS, entre otros. Encontrándose instaladas y en funcionamiento las partes en

mención, de acuerdo a las especificaciones del fabricante. El software instalado se

verifico entrando al menú (F3) donde se observó los códigos del software,

comparándolas con las del fabricante y siendo así se da la conformidad. Los códigos no

se mencionan por ser de carácter privado para la empresa (cuadro Nº 6).

En lo que es el suministro de corriente eléctrica comprobamos que esta adaptado para

220 v, contando con cableado en tres fases, a una frecuencia de 60 Hz, tiene instalado

un estabilizador y línea a tierra, para dar seguridad en caso de sobrecargas eléctricas.

Estos parámetros son conformes teniendo en cuenta las condiciones eléctricas de

nuestro país. Estas pueden variar de acuerdo al país donde se encuentre (cuadro Nº 7).

Se verificó que el tiempo que indica el sistema de la autoclave sea el verdadero,

notándose que en ninguno de las tres casos supera el 1% de diferencia, de lo cual

decimos que las mediciones son verdaderas (cuadro Nº 8).2



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

39

Las alarmas principales son verificadas mediante simulaciones, dando la conformidad

de las mencionadas, al ser activadas y desactivadas. Esto nos asegura que el proceso

marche de forma adecuada y segura (cuadro Nº 9).10

La calificación de operación (OQ), consistió en tres pruebas de distribución de calor en

cámara sin carga de producto, en la primera (cuadro Nº 10) se obtuvo que la mayor

diferencia entre las temperaturas máxima y mínima registradas en una posición (DTT)

fue de 1,2 °C, sensores insertados junto al de la cámara y en la posición 6; la máxima

diferencia entre la temperatura promedio de la cámara de la autoclave y la temperatura

de cada sensor de validación (Desv. máx. de la autoclave) fue de 0,6 °C (expresado en

valor absoluto), lo cual esta dentro del criterio de aceptación establecido, que es ± 2,5

ºC y la diferencia entre las temperaturas máxima y mínima dentro de la cámara en el

momento del registro (DTE) fue de 1 °C . En la segunda (cuadro Nº 11) tenemos un

DTT máximo de 1,4 °C para el sensor de la cámara. La desviación máxima de la

autoclave fue de 0,6 °C y la DTE de 0,9 °C Para la tercera (cuadro Nº 12) se obtuvo

una DTT máxima de 1,3 °C para la posición de la cámara, la desviación máxima fue de

0,9 °C y la DTE de1,3. En general las desviaciones no superan los ± 2,5 °C y las

temperaturas de esterilización superaron los 105 °C, lo cual indica el buen

funcionamiento de la autoclave y se da conformidad a la calificación. 10, 11

La Calificación de Desempeño (DQ) constó de tres pruebas para determinar los puntos

fríos o lentos en alcanzar la temperatura requerida, de lo cual se encontró que los

puntos 2, 3, 6, 7,10 y 11; son los mas lentos en alcanzar la temperatura de 105 °C

(figura Nº 3). La uniformidad de temperatura es aceptable porque en todos los casos las

desviaciones son menores a ± 2,5 °C y las temperaturas en la fase de esterilización

estuvieron sobre 105 °C (cuadros Nº 13, 14 y 15). De esta forma se comprueba que la

autoclave cumple con las especificaciones. 2, 10, 11



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

40

En los puntos antes hallados se ubicaron los IBs para determinar la eficacia del proceso,

observándose que no hay crecimiento microbiano en ninguna de las 18 ampollas

bioindicadoras de las tres corridas realizadas (cuadro Nº 16), lo cual nos indica que el

proceso eliminó a los microorganismos en estudio. Por otro lado se hace el cálculo de

letalidad (F105 °C), según datos del certificado del IB (anexo 3), determinándose que el

mínimo valor aceptable es de 105,05 minutos equivalentes teóricos para la eliminación

de las bacterias formadoras de esporas del IB. De la data obtenida tenemos que todas

superan dicho valor, excepto en el caso de la termocupla 6 durante la tercera corrida,

que tiene un valor de 104,7. Pero contrastando los resultados de las ampollas

bioindicadoras, donde se evidenció que no hubo crecimiento microbiano, es decir no

hubo cambio en la coloración ni precipitado; consideramos valida la corrida. Además

las termocuplas próximos a 6 (5 y 7) no mostraron dificultades y sus valores de F105 °C

superaron fácilmente el valor esperado (cuadro Nº 17). 4, 5, 10, 19, 20

Parte de la Validación Biológica son los estudios de Biocarga (cuadros Nº 19, 20, 21,

22, 23 y 24), en los cuales se encontró que el producto en estudio antes de ser

esterilizado presentó una carga máxima de 11 UFC (cuadro Nº 2), entonces haciendo

los cálculos necesarios, tenemos que reducir 7,0414 logaritmos de población microbiana

para llegar a un SAL de 10-6, es decir a la probabilidad de que haya una unidad no

estéril en un millón de las mismas. Esto contrastado con la data de los IBs, en los cuales

se logra reducir 7,146 logaritmos, pues nos hace evidenciar que realmente logramos

reducir la carga microbiana y llegamos a un SAL de menos de una unidad no estéril en

un millón de las mismas.4, 10, 11, 18, 20

Cabe señalar que las temperaturas en las tres corridas estuvieron sobre 105 °C, con

desviaciones estándar muy aceptables, las cuales nos indican que la dispersión de datos



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

41

respecto a la media aritmética es cercana, por lo que decimos que la autoclave está

dentro de los parámetros especificados (cuadro Nº 18).

Utilizando un artificio y teniendo en cuenta el “peor caso”, tomamos el valor D de los

IBs y extrapolamos el F105 °C = 103,51 minutos, como mínimo para reducir a la carga

microbiana del producto a los limites esperados, y como se pudo evidenciar todos los

valores de las pruebas superan ampliamente este valor. 19

Finalmente como se puede evidenciar en el Cuadro Nº 25, se cumplen con los

requerimientos actualmente aceptados por las entidades ampliamente reconocidas,

asegurando la calidad específica del producto para beneficio del paciente o consumidor

y para evitar posibles fallas, que conlleva a disminuir costos debido a las mencionadas.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

42

V. CONCLUSIONES:

De acuerdo a los resultados obtenidos y a lo desarrollado podemos concluir que:

1. Se validó el proceso de esterilización por calor húmedo del producto, asegurando y

documentando que el proceso es eficaz, reproducible.

2. Mediante un Registrador de temperatura multicanal se colectaron todas las

temperaturas de los ciclos.

3. Todas las temperaturas estuvieron sobre 105 °C en la fase de esterilización.

4. Las desviaciones de las temperaturas promedios hallados no exceden a ±2,5 °C

5. Se determinó los puntos más fríos o lentos en alcanzar la temperatura requerida

mediante tres pruebas en cámara con carga de producto.

6. El proceso logra reducir 7,146 unidades logaritmicas de población microbiana para

los IBs.

7. No hubo crecimiento microbiano en los IBs.

8. El SAL obtenido es menor 10-6, lo cual garantiza la eficacia del proceso.

9. Se interpretaron los resultados y la importancia de la Validación del proceso de

esterilización en la manufactura de productos esterilizados en su envase final.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

43

VI. REFERENCIAS BIBLIOGRÁFICAS:

1. Agencia Española de Medicamentos y Productos sanitarios, Guía de Normas de

Correcta Fabricación de la Unión Europea. Capítulo 3: “LOCALES Y

EQUIPO”. [sede Web]. España; 2003. [Actualizada en 2007, acceso noviembre

de 2007]. Disponible en: http://www.agemed.es

2. Lewis, R.: “PRACTICAL GUIDE TO AUTOCLAVE VALIDATION” [sede

Web]. Pharmaceutical Engineering. E.E.U.U; July- August; 2002. [acceso

noviembre de 2007]. Disponible en: www.oregonlive.com

3. Vila, J.: “TECNOLOGÍA FARMACÉUTICA” Vol. II. 1ª ed. Ed. Síntesis, S.A.

España.1997; 566, 5587

4. USP30-NF25.: “FARMACOPEA DE LOS ESTADOS UNIDOS DE

AMÉRICA” Tomo 1. Edición anual en español. 2007; 450,451.

5. Villalobos, S. “COMPARACIÓN ENTRE RESULTADOS DEL PROCESO DE

ESTERILIZACIÓN CON DOS INDICADORES BIOLOGICOS”. [sede Web].

2001. [acceso noviembre de 2007]. Disponible en:

www.imss.gob.mx/NR/rdonlyres/797FBD7E-C7FE-4B0A-8CE2-

EE6BEF36EFE0/0/3_143146.pdf

6. Gómez, A.: “ESTABILIDAD Y VALIDACION EN INDUSTRIA

FARMACEUTICA Y EN PRODUCTOS NATURALES”. Ed. Cosmética

Farmacia. Perú. Enero 2008.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

44

7. Padrón, J.; Reyes, M.; Gandolff, C. “VALIDACIÓN DE CICLOS DE

ESTERILIZACIÓN EN UTOCLAVES”. [sede Web]. Grupo Nacional de

Validación - Instituto Finlay. Memorias del V congreso de la Sociedad cubana

de Bioingeniería. La Habana (Cuba) Junio 10 al 13 del 2003. [acceso octubre de

2007]. Disponible en: http://www.finlay.sld.cu

8. Guía de Buenas Practicas de Fabricación para los Medicamentos. anexos,

Convención de Inspección Farmacéutica (PIC). Abril 2007

9. Schoeller-Bleckmann Sterilization technology. [sede Web]. (SBM). [acceso

noviembre de 2007]. Austria; 2007. Disponible en:

www.sbm-a.at/cms/index.php?es_vacuum_process - 12k

10. AEFI. “VALIDACION DE PROCESOS DE PRODUCCION – FORMAS

ESTERILES”. Monografía AEFI.1ª ed. España.1999; 115-125

11. Parenteral Drug Association (PDA), INC.: “VALIDATION OF STEAM

STERILIZATION CYCLES”. Ed. PDA. Technical Monograph Nº 1. E.E.U.U.

1978; iii, 11.

12. Gonzáles, C.: “Validación Retrospectiva y Control Estadístico de Procesos en la

Industria Farmacéutica” .Universidad de Chile. Facultad de Ciencias Químicas y

Farmacéuticas. Chile. 2005; 1, 2.



http://www.sbm-a.at/cms/index.php?es_vacuum_process

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

45

13. ANSI/AAMI/ISO 17665-1: 2006. Sterilization of health care products-Moist

heat- Part1: Requirements for the development, validation and routine control of

a sterilization process for medical devices. [sede Web]. 2007. [acceso octubre de

2007]. Disponible en: http://www.cemag.us/ articles.asp?pid=709

14. Agencia Española de Medicamentos y Productos sanitarios, anexo 15

“CUALIFICAACIÒN Y VALIDACIÒN”. [sede Web]. España. Disponible en :

www.agemed.es/actividad/sgInspeccion/docs/28-anexo15.pdf

15. Dirección General De Medicamentos Insumos y Drogas (DIGEMID). :

“MANUAL DE BUENAS PRACTICAS DE MANUFACTURA DE

PRODUCTOS FARMACETICOS”. Aprobado bajo Resolución Ministerial Nº

055-99. SA/DM. Perú. 1999; 26, 78.

16. Laboratorios Masstech S.A. [sede Web]. MEXICO.2007. [acceso noviembre de

2007]. Disponible en: http://www.masstech.com.mx/5_validacion.php

17. Agencia Española de Medicamentos y Productos sanitarios, Revisión del anexo

1 de la Guía de Normas de Correcta Fabricación de la Unión Europea. Anexo1:

“FABRICACIÓN DE MEDICAMENTOS ESTÉRILES”. [sede Web]. 2003.

[acceso noviembre de 2007]. Disponible en:

http://www.agemed.es/actividad/sgInspeccion/docs/anexo1-revision2003.pdf

18. Gennaro, A.: “REMINGTON – FARMACIA”. Tomo 1. 20ª ed. Ed. Médica

Panamericana. Argentina. 2003; 875, 884



http://www.masstech.com.mx/5_validacion.php

BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

46

19. Krushefski,G. SGM. Biotech, INC. Biological Indicador Specialists. [sede Web]

01 de Marzo de 2007. [acceso noviembre de 2007]. Disponible en:

www.sgmbiotech.com

20. BP-2007-commission.: “BRITISH PHARMACOPOEIA”. Volume IV. England.

2007. Appendix XVIII; A411, A412.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ANEXOS



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ANEXO 1



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ANEXO 2

Gráfica Nº A1



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA

ANEXO 3

Indicadores biológicos luego de 72 horas de incubación (35 ºC a 37 ºC)

Fig. A1.



BIBLIO

TECA D

E FARMACIA

Y B

IOQUIM

ICA



bioquimica trabajo de investigaciÓn - ii y

Documents