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Actualización en toma de muestra para prestaciones asociadas a Virología.

Mayo 2015

M. Judith Mora R.

Jefe Subdepto.Enfermedades ViralesISP

Laboratorio Nacional de Referencia y cumple acciones de vigilancia establecidas en el Reglamento sobre Notificación de Enf. Transmisibles de Declaración Obligatoria :

Exámenes por Algoritmos Diagnósticos

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REQUISITOS DE LA MUESTRA¿Dónde encontrar información?

1. Ingresar a la página web www.ispch.cl2. Ingresar palabra clave (Ej: VIH) en la Pestaña Productos y Servicios

/Prestaciones.

TIPO DE TUBO:

Suero o plasmaTubo plástico tipo Khan estéril con tapa de 5 mL o similar(tubo propileno 12x75 mm).

Toda muestra debe venir acompañada con formulario (vigente) de envíode muestra http://formularios.ispch.cl

REQUISITOS DE LA MUESTRA

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RABIA• Sd neurológico agudo

(encefalitis ) que progresa a coma , insuficiencia respiratoria y muerte. Pacientes con antecedentes contacto con animal sospechoso.

• Vigilancia Virus Rábico:

Diagnóstico en animales sospechosos: murciélagos, perros, gatos.

•Caracterización antigénica y genética para determinar variantes virales circulantes.

• Diagnóstico de Rabia en humanos: Casos de encefalitis con sospecha de rabia.

• Estudio de inmunidad: Mascotas que viajan a la comunidad europea, único laboratorio autorizado en Sudamérica.

.

NOMBRE DE LA PRESTACIÓN

TIPO DE MUESTRA REQUISITOS PREVIOS

VOLUMEN MUESTRA ADULTO PEDIATRICO

ALMACENAMIENTOTRANSPORTE

PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES)

DESCRIPCION DE PRESTACION

INMUNIDAD PARA RABIA ESTUDIO

Sangre s/anticoagulante, o suero en un tubo plástico estéril con tapa rosca o tapón de goma.En caso de sospecha de rabia humana (*)

30 días después de la vacunación antirrábica.

2 ml de sangre o 1 ml suero

<8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.

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Detección de Acantirrábicos neutralizantes por la tecnica de inhibición de focos fluorescentes (RIFFT)

VIRUS RABICO VIGILANCIA

Animal

En caso de sospecha de rabia humana (*)

Sospecha de rabia.(recepción 24 hrs.)

No Aplica 5

Detección de Ag rábico por la técnica de inmunofluorescenciadirecta

* Ver siguiente tabla

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Muestras para diagnóstico en caso sospecha de encefalitis rábica en humanos

Muestras antemortem (anticuerpos, antígeno y ácidos nucleícos)

Muestras postmorten (antígeno y ácidos nucleícos)

Biopsia: cerebro: Corteza cerebral, Cuerpo calloso, Cerebelo, Médula espinal

MUESTRA CONDICIONES DE ENVIO TECNICA DETECCION FRECUENCIA

Suero (3 ml) 4ºC /-20ºC RIFFT Anticuerpos2 veces por semana

LCR(1 a 2 ml) 4ºC /-20ºC°

RIFFT Anticuerpos 2 veces por semanaRT-PCR Nested Ácidos nucleicos

Saliva (1-2ml) Congelada-20ºC RT-PCR Nested Ácidos nucleicos Diariamente

Biopsia nuca Folículo piloso Congelada-20ºC IFD

RT-PCR NestedAntígenoÁcidos nucleicos

2 veces por semana

Virus Entéricos• Vigilancia PFA

Apoyo a erradicación del virus PolioÚltimo caso en América 1991 (Perú)

• Meningitis Viral Estudio brotes

Diarreas agudas con diferentes etiologías:• Vigilancia Rotavirus

Hospitales centinelas (V, VIII, RM) MINSAL-OPS

• Vigilancia Gastroenteritis virales (Norovirus, ADV, Astrovirus, Rotavirus):– Centinelas ambulatorios– Estudio Brotes

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Nombre exámen / Prestación

Método Tipo de muestra Requisitos previosVolumen de muestra

Transporte y conservación

Plazo de respuesta en días hábiles

Aislamiento de Enterovirus

Aislamiento en cultivos celulares

Deposición: envase estéril, tapa rosca. sin medio de transporteLCR: envase estéril, tapa rosca.Liq.pericárdico:envase estéril tapa rosca

0-5 días de evolución

Deposición: 1 cuch. de téLCR o LíqPericard: 1 ml ped2 ml adulto

Congelar (-18º a -20ºC) o refrigerar (2º a 8ºC) con envioinmediato

15

Vigilancia Poliovirus(sospechosos PFA)

Aislamiento en cultivos celulares

Deposición sin medio de transporte en envase estéril tapa rosca

0-14 días de evolución

10 grs. (1 cuch. de té)

15

Vigilancia Rotavirus (Centros Centinelas)

Técnicas Serológicas Inmunoenzimáticasytipificación

0-5 días de evolución en niños, hasta 5 años de edad, hospitalizados

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Vigilancia de Virus Gastroentericos: Adenovirus entéricos, Astrovirus, Norovirus y otros

Inmunoquímica y RT-PCR

• 0-3 días de evolución en niños menores 5 años :Centinelas ambulatorios

• **5 a 10 muestras por Brote notificado)

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• Vigilancia Virus Respiratorios : ADV, VRS, PI , Metapneumovirus) e Influenza A y B– IRAG complicación frecuente de la

Influenza– Red Lab. Hosp. Centinelas IFI– Red Lab. Regionales PCR – Centro Nacional Influenza para OMS

Aislamientos Recepción hasta 12:00 hrs por tipo procesamiento

Virus Respiratorios

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Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos previos Transporte y conservación

Plazo de respuesta

en días hábiles

Aislamiento de Influenza A y B

Aislamiento en cultivos celulares

a) Gargarismo b) Aspirado ANF c) Tórula con secreción NF d) Biopsia tejidos

Máximo 3 días de evolución

Medio transporte viral Hanks´s 0,5% gelatina+antibiótico en frío c/refrigerantes T° 2 – 8 C

15

Aislamiento Virus Respiratorio Sincicial , Adenovirus, Parainfluenza

a) ANF b) Tórulasecreción NF

c) Biopsia tejidosd )ADV: Tórula

secreciónconjuntival

Hasta 5 días de evolución 15

PCR para Influenza A, B PCR

Aspirado nasofaríngeo o tórula secreción nasofaríngea o biopsia pulmón

Hasta 3 días desde inicio de los síntomas

5

InmunofluorescenciaIndirecta para Virus Influenza A, B

Inmunofluorescencia

Frotis fijado Aspirado NF

Hasta 3 días de evolución Otros VR :Hasta 5 días de evolución

En frío con refrigerantes. T° 2-8°C

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• Vigilancia Integrada Sarampión-Rubéola:• Pacientes con exantema macular que puede ser

acompañado de fiebre, conjuntivitis, artralgia, linfoadenopatías , etc

• SRC malformaciones congénitas (1er trimestre embarazo)

Recomendaciones:– Muestra para aislamiento. Ideal: Aspirado

Nasofaríngeo– En su defecto, orina: mínimo 50 ml.Enviar siempre junto a la muestra de suero y FORMULARIO.

Virus Exantemáticos

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Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos

previos

Volumen de muestra pediátrica

Volumen de muestra adulto

Transporte y conservación

Plazo de

respuesta en días

hábiles

Vigilancia Sarampión Rubeola

ELISA, IF, aislamiento, RT-PCR (según algoritmo ISP)

Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca.

Muestra respiratoriaANF (Orina como segunda opción)

Enviar muestras conformulario de vigilancia con la totalidad de los antecedentes solicitados

1 ml suero. ANF en medio de transporte viral o 50 ml orina

2 ml suero. ANF en medio de transporte viral o 50 ml orina

Aspirado con medio de transporte viral Hanks´s con 0,5% gelatina mas antibiótico. Enviar con unidades refrigerantes Tº 2-8ºC.

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Estudio Inmunidad Sarampión

Inmunofluorescencia(IF) (IgG)

Suero extraído en forma estéril enviar en tubo estéril tapa rosca

No tiene 1 ml 2 mlEn frío Tº 2-8ºC. Con unidades refrigerantes

4

Vigilancia Síndrome Rubeola Congénita.

ELISA IgM(algoritmo ISP)

Recién nacidos < 1 año

1 ml de suero 10

VIH• Diagnóstico de Infección

causada por VIH: Laboratorios: TamizajeISP: Confirmación de muestras reactivas al tamizaje en el país

Diagnóstico SIDA pediátrico (< 2 años)Recepción lu a Ju por tipo

procesamiento

• Estudios Genotipificación, FRVIH

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NOMBRE DE LA PRESTACIÓN ENSAYOS TIPO DE MUESTRA REQUISITOS

PREVIOSVOLUMEN MUESTRA

CRITERIO DE ACEPTACION, ALMACENAMIENTO-TRANSPORTE

PLAZO DE RESPUESTA (DIAS HABILES)

DOCUMENTO REQUERIDO

VIH ADULTO CONFIRMACION

Determinación de Ag HIVAc IgG anti HIV

Ácidos nucleicos:provirus y RNA de HIV

* Suero o plasma (Técnicas serológicas)* Sangre con anticoagulante EDTA (téc. moleculares)

Muestra doblementereactiva al tamizaje de VIH

Técnicas serológicas: 1 mlTécnicas moleculares: 4 ml

Suero o plasma: En frío Tº2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes.

Sangre con anticoagulante: Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 hrs desde la extracción. 12 días,

(94,6% año 2014)

Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH

VIH PEDIATRICO CONFIRMACION

Detección de Antígeno-anticuerpo virus VIH, Ag P24, virus VIH (PCR , RNA)

Sangre con anticoagulante EDTA

En > 2 años asolicitud. En <2 años, hijos de madres VIH (+), protocolo diagnóstico de sida pediátrico (Resolución Minsal).

4 ml

Temperatura ambiente (15-25 ºC) no más de 48 horas desde la extracción.

Formulario de envío de muestra para Confirmación de VIH pediátrico

FORMULARIOS

Clave adulta y definitiva de niños:Inicial del primer nombre y de los dos apellidos: MCVSi no tiene segundo apellido: MC#Si uno de los apellidos es compuesto como San Martín Perez : MSPFecha de nacimiento con el formato dd/mm/aa: 230569Tres últimos dígitos del RUT y dígito verificador: 698-KSi es extranjero reemplazar por :ABC-D

Cuando no se dispone de la clave definitiva del niño: se completa el cuadro de recién nacidoRN/ Iniciales de la madre + Fecha nacimiento del niño RN/MGV 200315

La clave materna nos ayuda a realizar la trazabilidad de las muestras de los pediátricos recibidas durante el protocolo diagnóstico.

Siempre: Solicitar CI al tomar muestra para verificar clave

Desde 06-10-2014, Ordinario 01729, se debe informar Nº de RUT enformularios de envío de muestras para confirmación VIH. Con el fin demejorar trazabilidad y calidad de registros referentes a VIH.

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• Vigilancia HTLV I/II (Virus linfotrópico de células T humano) Confirmar muestras reactivas en tamizaje bancos de sangre y casos sospecha de Leucemia de Células T del Adulto (ATL) y Paraparesia Espástica Tropical (TSP/HAM)

• Diagnóstico y estudios Virus Papiloma Humano:Los VPH puede causar verrugas genitales y ciertos cánceres (CaCu).

• Estudio brotes Parotiditis: infección aguda con aumento volumen glándula parótida.

CELLULARRECEPTOR

gp46

95 kd

p14

HTLV-I

Tax (p40), Rex (p27,p21)

HTLV-

Virus Oncogénicos, otros

Nombre exámen / Prestación

Método Tipo de muestra Requisitos previos

Volumen de muestra pediátrica

Volumen de muestra adulto

Transporte y conservación

Plazo de respuesta

en días hábiles

Confirmación HTLV I/II

ELISA , IF, PCR (según algoritmo)

Sangre con anticoagulante (EDTA o citrato)

Muestra Doblemente reactiva y casos de sospecha de Leucemia de células T del Adulto y ParaparesiaEspástica Tropical*

3ml 5 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes. *No más de 4 ds. desde extracción a la recepción en laboratorio

15

Estudio de Brotes de Parotiditis

Serología, PCR

Suero o plasma y Orina en tubo estéril

Sólo estudio de brote según circular MINSAL

1 ml suero y 3 ml de orina

3 ml suero y 3 ml de

orina7

Virus Papiloma Humano (VPH)

PCR

Tórula de lesión o raspado de zona sospechosa de infección genital / Biopsias de tejidos / condiloma ; tubo estéril tapa rosca con medio de transporte.

Sospecha de infección viral *

10

10

Virus HepáticosDetección hepatitis virales: HBsAg, VHC:Hepatitis que pueden evolucionar a cronicidad, cirrosis y carcinoma hepático.Confirmación Muestras reactivas al tamizaje

Estudio de brotes Hepatitis A:(3 a 5 casos).Hepatitis de transmisión entérica, no desarrollan infección crónica.

Nombre exámen / Prestación

Método Tipo de muestra Requisitos previos

Volumen de muestra pediátrica

Volumen de muestra adulto

Transporte y conservación

Plazo de respuesta en días hábiles

Confirmación Antígeno de Superficie Hepatitis B

ELISA, neutralización (según algoritmo ISP)

Suero o plasma en tubo estéril tapa rosca o de goma

Muestra con tamizajedoblemente reactivo a HBsAg

1 ml 3 ml

En frío Tº 2-8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

15

Confirmación de Virus Hepatitis C

ELISA, RT-PCR, Inmunoblot(según Algoritmo)

Plasma extraídocon anticoagulante (EDTA) . En tubo estéril tapa rosca o de goma

Muestra Doblemente reactiva a Ac-VHC.

1 ml de plasma

3 ml plasma 15

Vigilanciabrotes de Hepatitis A

ELISA (IgM) Suero en tubo estéril tapa rosca .

0-10 días desde inicio los síntomas

1 ml de suero

3 ml suero 7

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Virus Enf. Emergentes: Hantavirus

Enf. Febril que puede producir SCPH compromiso respiratorio y evolucionar a shock y muerte. Transmitido por O. longicaudatus

• Virus Dengue : Enf febril aguda con cefalea, mialgias, erupción , etc transmitida por Aedes aegyptiVigilancia y casos importados

• Chikungunya: enfermedad febril con artritis y artralgias, transmitidas por el mosquito del dengue.

• Virus Nilo Occidental : Enf febril con manifestaciones neurológicas como cefalea a encefalitis. El vector mosquitos (Culex pipiens), se mantiene en la naturaleza mediante un ciclo de transmisión mosquito-ave-mosquito

Nombre exámen / Prestación Método Tipo de muestra Requisitos

previos

Volumen de muestra pediátrica

Volumen de muestra adulto

Transporte y conservación

Plazo respues

ta dshábiles

Vigilancia Infección por Hantavirus

ELISA, RT-PCR (según algoritmo del ISP)

a)Sangre con EDTA (tubo tapa lila) y Sangre sin anticoagulante (tubo tapa roja)

b)Tejido de pulmón en tubo estéril tapa rosca, sin presevantes.(punción cardiaca)

Caso sospechoso(recepcion 24 hrs.)

3 ml de sangre

5 ml sangre

En frío Tº<8ºC. Enviar con unidades refrigerantes

3

Vigilancia Dengue / Fiebre Amarilla

* ELISA *Aislamiento/ PCR(según algoritmo del ISP)

Suero extraído en forma estéril. En tubo estéril tapa rosca .

Con 6 o más días de evolución.

IdentificaciònBrote muestra dentro de los 3 primeros días de evolución

2 ml 3 ml 10

Vigilancia Virus del Nilo Occidental

Técnicas Serológicas ELISA

LCR y Suero en tubo estéril tapa rosca .

> a 8 días de evolución.

1 ml suero y 1 ml de LCR

3 ml suero y 2 ml de LCR

10

12

Factores a revisar:• Demora en envío de las muestras desde laboratorio• Cumplir indicaciones de envío (BS, envase, Tº, uso

refrigerantes). • Volumen de muestra solicitado , 1 tubo por muestra• Formulario indicado y vigente• Completar antecedentes del formulario: F. Obt Mtra, F.Inicio

síntomas, Tecn Tamizaje/Absorbancias, Vacunas, Correo @ de responsable envío, - Etc.

• Identificación correcta del paciente • Diferencias entre el código del tubo y del antecedente. • Estafeta Acreditado: El retiro de resultado no siempre es

periódico Inscribir laboratorios plataforma On-line Formularios Registro de datos solicitados en formulario on-line (c/clave

asignada para laboratorios (SURVIH para lab. públicos). Imprimir el formulario y adjuntarlo a la muestra enviada al

ISP (se genera un N° solicitud) Acceso Rd

Gracias