virologia cultivo de virus 3/16

VirologíaVirología 3/163/16

Unidad de Capacitación a Unidad de Capacitación a Entidades CivilesEntidades Civiles

Curso Básico de Virología para CivilesCurso Básico de Virología para Civiles

Rough CibernusRough Cibernus

Supervisor: Tte.1: Arturo MartínezSupervisor: Tte.1: Arturo Martínez

2 Z.M. Tegucigalpa 19962 Z.M. Tegucigalpa 1996

Curso Básico de Virología para Civiles

Cultivo de VirusCultivo de Virus


RNA

Cubierta Viral

Nucleo

Cubierta de Proteinas

Human Immunodeficency VirusHuman Immunodeficency Virus

CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS

1.1. ANIMALES EXPERIMENTALESANIMALES EXPERIMENTALES

2.2. TÉCNICAS DE CULTIVO EN EMBRIÓN TÉCNICAS DE CULTIVO EN EMBRIÓN DE POLLO.DE POLLO.

3.3. TÉCNICAS DE CULTIVO CELULARTÉCNICAS DE CULTIVO CELULAR



1.1. ANIMALES EXPERIMENTALESANIMALES EXPERIMENTALES

a) Siempre ha sido importante en virología a) Siempre ha sido importante en virología

b) Es un medio para aislar y desarrollar a muchos de los virusb) Es un medio para aislar y desarrollar a muchos de los virus

c) Pero….. La etica sobre el buen trato hacia los animales ha sido un c) Pero….. La etica sobre el buen trato hacia los animales ha sido un problema (financiamiento, aceptación de artículos en las problema (financiamiento, aceptación de artículos en las publicaciones etc etc)publicaciones etc etc)


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS1. ANIMALES EXPERIMENTALES1. ANIMALES EXPERIMENTALES

d) Solo bajo las siguientes circunstancias:d) Solo bajo las siguientes circunstancias:

i. Virus que no puedan replicarse en embriones de pollo o en cultivos i. Virus que no puedan replicarse en embriones de pollo o en cultivos celulares.celulares.

ii. Para el estudio de la patogénesis de la enfermedad y es aquí donde ii. Para el estudio de la patogénesis de la enfermedad y es aquí donde es de gran utilidad.es de gran utilidad.

iii. En casos de investigaciones epidemiológicas.iii. En casos de investigaciones epidemiológicas.

iv. Para atenuar virus de humanos: Virus de la fiebre amarilla, virus iv. Para atenuar virus de humanos: Virus de la fiebre amarilla, virus Vaccinia.Vaccinia.

v. Para pruebas de seguridad y antigenicidad de vacunas para v. Para pruebas de seguridad y antigenicidad de vacunas para obtener las licencias.obtener las licencias.

vi. Para probar agentes antivirales quimioterapeúticosvi. Para probar agentes antivirales quimioterapeúticos



d) Solo bajo las siguientes circunstancias:d) Solo bajo las siguientes circunstancias:

vii. En la producción de anticuerpos policlonales y monoclonales.vii. En la producción de anticuerpos policlonales y monoclonales.

viii. Son fuente de órganos para los cultivos celulares.viii. Son fuente de órganos para los cultivos celulares.

ix. Son fuente de sangre (eritrocitos y PMN) para muchas pruebas.ix. Son fuente de sangre (eritrocitos y PMN) para muchas pruebas.

EJEMPLOS:EJEMPLOS:

PICORNAVIRUS RABDOVIRUSPICORNAVIRUS RABDOVIRUS

Virus de la Fiebre aftosa Virus de la RabiaVirus de la Fiebre aftosa Virus de la Rabia

RATÓN LACTANTE. RATÓN LACTANTERATÓN LACTANTE. RATÓN LACTANTE



EJEMPLOS:EJEMPLOS:

ADENOVIRUS CANINOADENOVIRUS CANINO

Virus de la Hepatitis Infecciosa Canina (IHC)Virus de la Hepatitis Infecciosa Canina (IHC)

CUYES en altas dosis.CUYES en altas dosis.

PERROS, ZORROS por las vías subcutánea (S/C);PERROS, ZORROS por las vías subcutánea (S/C);

intraperitoneal (I/P);intraperitoneal (I/P);

oral; intravenosa (I/V) oral; intravenosa (I/V)



EJEMPLOS:EJEMPLOS:

CORONAVIRUS CORONAVIRUS

Virus de la Bronquitis Infecciosa Aviaria (BIA)Virus de la Bronquitis Infecciosa Aviaria (BIA)

EMBRIONES DE POLLOEMBRIONES DE POLLO

Gastroenteritis Transmisible del Cerdo ((GET)Gastroenteritis Transmisible del Cerdo ((GET)

LECHONES de lactantes a varios díasLECHONES de lactantes a varios días



EJEMPLOS:EJEMPLOS:

HERPESVIRUS HERPESVIRUS

Virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR)Virus de la Rinotraqueitis Infecciosa Bovina (IBR)

CUYES recién nacidosCUYES recién nacidos

Rinoneumonitis Equina (ER)Rinoneumonitis Equina (ER)

LECHONES de lactantes a varios díasLECHONES de lactantes a varios días

HAMSTERS recién nacidosHAMSTERS recién nacidos



EJEMPLOS:EJEMPLOS:

HERPESVIRUS HERPESVIRUS Virus de la Enfermedad de Aujeszky (VEA)Virus de la Enfermedad de Aujeszky (VEA)CONEJOS; CUYES; RATONES, CABRAS; CABALLOS; PERROS; Y MUCHOS CONEJOS; CUYES; RATONES, CABRAS; CABALLOS; PERROS; Y MUCHOS

ANIMALES MAS LOS MAS SUSCEPTIBLES LOS GATOSANIMALES MAS LOS MAS SUSCEPTIBLES LOS GATOS

ORBIVIRUS.ORBIVIRUS.Virus de la Lengua AzulVirus de la Lengua AzulCORDEROS; RATONES Y HAMSTERS lactantes a varios díasCORDEROS; RATONES Y HAMSTERS lactantes a varios días



EJEMPLOS:EJEMPLOS:

ORTHOMYXOVIRUS ORTHOMYXOVIRUS Virus de la InfluenzaVirus de la InfluenzaPORCINA: RATONES Y HURONES: PORCINA: RATONES Y HURONES: neumoníaneumoníaEQUINA: RATONES Y HURONES: EQUINA: RATONES Y HURONES: neumoníaneumoníaAVIARIA: POLLUELOS, PATOS: AVIARIA: POLLUELOS, PATOS: signos respiratorios y muertesignos respiratorios y muerte

PAPOVAVIRUSPAPOVAVIRUSVirus del Papiloma oral del Conejo: Virus del Papiloma oral del Conejo: CONEJOSCONEJOSVirus del Papiloma de Shope: Virus del Papiloma de Shope: CONEJO COLA DE CONEJO COLA DE

ALGODÓN ALGODÓNVirus del Papiloma Bovino: Virus del Papiloma Bovino: BECERROSBECERROSVirus del Papiloma Genital Porcino: Virus del Papiloma Genital Porcino: CERDOS CERDOS



2. TECNICAS DE CULTIVO EN EMBRION 2. TECNICAS DE CULTIVO EN EMBRION DE POLLO.DE POLLO.


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS2. TECNICAS DE CULTIVO EN EMBRION DE POLLO.2. TECNICAS DE CULTIVO EN EMBRION DE POLLO.

CARACTERISTICAS DEL HUEVO FERTIL:CARACTERISTICAS DEL HUEVO FERTIL:

1. Raza o línea de Gallina de postura (huevo fértil)1. Raza o línea de Gallina de postura (huevo fértil)

a) Plymonth Rocka) Plymonth Rock

b) Rhode Islandb) Rhode Island

c) New Hamshirec) New Hamshire

d) Wyandotted) Wyandotte




2. Huevo fértil2. Huevo fértil

a) Cascaróna) Cascarón

delgadodelgado

¡NO¡ ¡NO¡ malformadomalformado

defectos, defectos,

protuberancias,protuberancias,

ásperoáspero

Al golpear

Resonancia (+) BUENOSResonancia (-) MALOS





b) Tiempo de puestosb) Tiempo de puestos

- Máximo 5 días- Máximo 5 días

- Se almacenan- Se almacenanCAMARA DEAIRE

HACIA ARRIBA A 13°CHUMEDAD 40%



CARACTERISTICAS DEL HUEVO FERTIL:CARACTERISTICAS DEL HUEVO FERTIL:A LAS 3 HORAS DE FERTILIZADO EN ELA LAS 3 HORAS DE FERTILIZADO EN EL

OVIDUCTO LA YEMA PRESENTA ENTRE 2OVIDUCTO LA YEMA PRESENTA ENTRE 2

Y 4 CELULAS, EL DISCO DELGADO Y 4 CELULAS, EL DISCO DELGADO (GASTRULACION)(GASTRULACION)

SE FORMAN DOS CAPAS: SE FORMAN DOS CAPAS:

EXTERNA=ECTODERMOEXTERNA=ECTODERMO

INTERNA=ENDODERMOINTERNA=ENDODERMO

EL BLASTODERMO APARECE COMO UNAEL BLASTODERMO APARECE COMO UNA

MEMBRANA FORMADA POR SEGMENTACIONESMEMBRANA FORMADA POR SEGMENTACIONES

SUCESIVASSUCESIVAS

SE FORMA UNA AREA CENTRAL= “ZONA PELUCIDA” SE FORMA UNA AREA CENTRAL= “ZONA PELUCIDA”

Y BORDES GRUESOS= AREA OPACA”Y BORDES GRUESOS= AREA OPACA”

DE AQUÍ A LA POSTURA= ES AQUÍ DONDE SE DETIENE EL PROCESO DE DIVISIONDE AQUÍ A LA POSTURA= ES AQUÍ DONDE SE DETIENE EL PROCESO DE DIVISION

HACIA ARRIBA DE 16 A 20°CSE INICIA LA INCUBACIONVOLTEO DIARIO





C) SelecciónC) Selección

- Tamaño: UNIFORME- Tamaño: UNIFORME

- Forma: UNIFORME- Forma: UNIFORME

- Peso: 56 a 65g- Peso: 56 a 65g

CAMARA DEAIRE






d) Manejod) Manejo

- Adecuado- Adecuado

- Con mucho cuidado- Con mucho cuidado

- Movimientos bruscos- Movimientos bruscos

la cámara de airela cámara de aire

CAMARA DEAIRE




CONDICIONES DE INCUBACION DEL HUEVO FERTIL:CONDICIONES DE INCUBACION DEL HUEVO FERTIL:1. Colocación con la cámara de aire hacia arriba1. Colocación con la cámara de aire hacia arriba

2. Limpieza: solo mecánica, no Con trapos húmedos ni lavarlos2. Limpieza: solo mecánica, no Con trapos húmedos ni lavarlos

3. Temperatura: 37.7°C +/-13. Temperatura: 37.7°C +/-1

4. Humedad relativa: 50 a 60°C4. Humedad relativa: 50 a 60°C

5. Voltea varias veces al día: de 2 a 8 veces en un ángulo de 45°5. Voltea varias veces al día: de 2 a 8 veces en un ángulo de 45°

6. Ventilación:. Relación optima: O6. Ventilación:. Relación optima: O22 del 21% y CO del 21% y CO22 del 0.5% del 0.5%Curso Básico de Virología para Civiles

Inoculación en huevo Inoculación en huevo embrionadoembrionado

1 embrión 2 cavidad amniótica

3 Yema 4 Albúmina

5 cavidad alantoidea

6 cavidad corioalantoidea

7 M MM MMMMa corioalantoidea

8 cascarón

9 cámara de aire


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSRUTAS DE INOCULACION EN EMBRION DE POLLORUTAS DE INOCULACION EN EMBRION DE POLLO


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSRUTAS DE INOCULACION EN EMBRION DE POLLORUTAS DE INOCULACION EN EMBRION DE POLLO

1. CAVIDAD ALANTOIDEA1. CAVIDAD ALANTOIDEAEdad del embrión: 9 a 11 díasEdad del embrión: 9 a 11 díasVol. 0.1 a 0.2 mlVol. 0.1 a 0.2 ml

VIRUS: VIRUS: Virus de la Enfermedad de NewcastleVirus de la Enfermedad de Newcastle Virus de la Bronquitis InfecciosaVirus de la Bronquitis Infecciosa Virus de InfluenzaVirus de Influenza Virus de las PaperasVirus de las Paperas Virus de la Encefalitis Equina del OesteVirus de la Encefalitis Equina del Oeste

Virus de la Encefalitis Equina del EesteVirus de la Encefalitis Equina del Eeste Virus de la Encefalitis Equina de VenezuelaVirus de la Encefalitis Equina de Venezuela

EFECTO:EFECTO: Muerte embrionaria Muerte embrionaria


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSRUTAS DE INOCULACION EN RUTAS DE INOCULACION EN

EMBRION DE POLLOEMBRION DE POLLO

2. CAVIDAD AMNIOTICA2. CAVIDAD AMNIOTICAEdad del embrión: 7 a 10 díasEdad del embrión: 7 a 10 díasVol. 0.1 a 0.2 mlVol. 0.1 a 0.2 ml

VIRUS: VIRUS: Virus de la Enfermedad de Virus de la Enfermedad de NewcastleNewcastle

Virus de la Bronquitis Virus de la Bronquitis InfecciosaInfecciosa

Virus de InfluenzaVirus de Influenza Virus de las PaperasVirus de las Paperas Virus de la Encefalitis Virus de la Encefalitis

Equina del OesteEquina del Oeste Virus de la Encefalitis Virus de la Encefalitis Equina del EsteEquina del Este

Virus de la Encefalitis Virus de la Encefalitis Equina de VenezuelaEquina de Venezuela

EFECTO:EFECTO: Muerte embrionaria Muerte embrionaria Curso Básico de Virología para Civiles

CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSRUTAS DE INOCULACION RUTAS DE INOCULACION

EN EMBRION DE EN EMBRION DE POLLOPOLLO

3. MEMBRANA 3. MEMBRANA CORIOALANTOIDEACORIOALANTOIDEAEdad del embrión: 11 Edad del embrión: 11 a 13 díasa 13 díasVol. 0.1 a 0.5 mlVol. 0.1 a 0.5 ml

VIRUS: VIRUS: Virus de la Virus de la Enfermedad de Enfermedad de AujeszkyAujeszky

Virus de la Virus de la Laringotraquetis Laringotraquetis InfecciosaInfecciosa

Virus de la Virus de la Viruela aviariaViruela aviaria

EFECTO:EFECTO: Pústulas en la Pústulas en la membranamembrana


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSRUTAS DE RUTAS DE INOCULACION INOCULACION

EN EMBRION DE EN EMBRION DE POLLOPOLLO

4. CAVIDAD O SACO 4. CAVIDAD O SACO VITELINOVITELINOEdad del Edad del embrión: 6 a 8 embrión: 6 a 8 díasdíasVol. 0.1 a 1.0 mlVol. 0.1 a 1.0 ml

BACTERIA: BACTERIA: ChlamidiasChlamidias

RickettsiasRickettsiasEFECTO:EFECTO: Muerte Muerte

embrionariaembrionariaCurso Básico de Virología para Civiles


3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR

El termino de El termino de “cultivo de tejidos”“cultivo de tejidos” es hoy en día sinonimo es hoy en día sinonimo de de “cultivo celular”“cultivo celular”..

Es el crecimiento y mantenimiento del tejido o células Es el crecimiento y mantenimiento del tejido o células vivas vivas ““in vitroin vitro””..


CCultivo celularultivo celular::

TTipos de cultivo celularipos de cultivo celular Cultivo celular primarioCultivo celular primario Cultivo celular secundarioCultivo celular secundario Cultivo células diploidesCultivo células diploides Establecimiento de línea celularEstablecimiento de línea celular Origen del cultivo celularOrigen del cultivo celular humanhumanosos animalanimaleess


Tipos de clasificación del cultivo celular

Estacionario

Rotatorio

Suspensión

Perfunsión

Explante o cultivo de órganos


MonoMonocapa de cultivo capa de cultivo celularcelular

Células epiteliales

Células fibroblásticasCurso Básico de Virología para Civiles

CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR

Los Los “Cultivos de organos”“Cultivos de organos” es el mantenimiento de piezas es el mantenimiento de piezas de tejidos organizados (explantes traqueales de tejidos organizados (explantes traqueales membrana sinovial) membrana sinovial) in vitroin vitro. .

Esta técnica es muy útil para el aislamiento de Esta técnica es muy útil para el aislamiento de infecciones persistentes tales como el virus de la infecciones persistentes tales como el virus de la Artritis-Encefalitis-Caprina (Retroviridae:Artritis-Encefalitis-Caprina (Retroviridae: Género:Género:Lentivirus):Lentivirus): Co-cultivos de leucocitos o PMN Co-cultivos de leucocitos o PMN de la sangre o la leche con células de la membrana de la sangre o la leche con células de la membrana sinovial.sinovial.

O explantes traqueales como los O explantes traqueales como los CoronavirusCoronavirusCurso Básico de Virología para Civiles

CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR3. TECNICAS DE CULTIVO CELULAR

Los Los “Cultivos de tejidos”“Cultivos de tejidos” es el mantenimiento de piezas de es el mantenimiento de piezas de tejidos desorganizados embebidos en coagulos y tejidos desorganizados embebidos en coagulos y plasma plasma in vitroin vitro. .

A partir de estos cultivos, las células en forma individual A partir de estos cultivos, las células en forma individual se pegaban en el fondo del cristal o plástico y se pegaban en el fondo del cristal o plástico y empezaban a desarrollarse hasta formar un empezaban a desarrollarse hasta formar un monoestrato celular.monoestrato celular.

Hoy en día es una técnica obsoleta. Hoy en día es una técnica obsoleta. Curso Básico de Virología para Civiles

CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUS3. TECNICAS DE CULTIVO 3. TECNICAS DE CULTIVO

CELULARCELULAR

Los Los “Cultivos de células”“Cultivos de células” es el es el mantenimiento de células mantenimiento de células in vitroin vitro. .

Es un tejido disociado en una suspensión Es un tejido disociado en una suspensión de células en forma individual, por un de células en forma individual, por un tratamiento enzimático como lo es la tratamiento enzimático como lo es la TRIPSINATRIPSINA

Las células se lavan con medio de cultivo Las células se lavan con medio de cultivo celular; se cuentan y se mantienen en celular; se cuentan y se mantienen en ese medio para células.ese medio para células.

Se colocan en botellas de vidrio o de Se colocan en botellas de vidrio o de plástico y estas se pegaban en el plástico y estas se pegaban en el fondo y empiezan a desarrollarse fondo y empiezan a desarrollarse hasta formar un monoestrato celular.hasta formar un monoestrato celular.


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSMedio de cultivo celular para Medio de cultivo celular para

crecimiento:crecimiento:

Nutrientes requeridos para el crecimiento celular. Nutrientes requeridos para el crecimiento celular.

1.1. Es una solución salina isotónica Es una solución salina isotónica

2.2. Glucosa Glucosa

3.3. Vitaminas, coenzimas; aminoácidos Vitaminas, coenzimas; aminoácidos

4.4. Sol. “bufferada” a pH 7.2 a 7.4 o con Sol. “bufferada” a pH 7.2 a 7.4 o con bicarbonato, ambos buffer a base de fosfatos bicarbonato, ambos buffer a base de fosfatos pueden sustituirse con pueden sustituirse con HEPESHEPES: ácido N-2-: ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N´-2-etanosulfonico ó hidroxietilpiperazina-N´-2-etanosulfonico ó TESTES ácido N-tris-(hidroximetil)metil-2-ácido N-tris-(hidroximetil)metil-2-aminometanosulfonico; proven mejor estabilidad aminometanosulfonico; proven mejor estabilidad

del pH y reducen lo requerimentos de COdel pH y reducen lo requerimentos de CO22. .

5.5. Además contiene antibioticos para inhibir el Además contiene antibioticos para inhibir el crecimiento bacterianocrecimiento bacteriano

6.6. Suero fetal bovino máximo Suero fetal bovino máximo 10 %.10 %.


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSMedio de cultivo celular para mantenimiento:Medio de cultivo celular para mantenimiento:

El medio contiene los nutrientes requeridos para el El medio contiene los nutrientes requeridos para el crecimiento celular. crecimiento celular.

1.1. Es una solución salina isotónica Es una solución salina isotónica

2.2. Glucosa Glucosa

3.3. Vitaminas, coenzimas; aminoacidos Vitaminas, coenzimas; aminoacidos

4.4. Sol. tamponada o “bufferada” a pH 7.2 a 7.4 o un Sol. tamponada o “bufferada” a pH 7.2 a 7.4 o un sistema tamponado con bicarbonato, ambos buffer a sistema tamponado con bicarbonato, ambos buffer a base de fosfatos pueden sustituirse con base de fosfatos pueden sustituirse con HEPESHEPES: ácido N-: ácido N-2-hidroxietilpiperazina-N´-2-etanosulfonico ó 2-hidroxietilpiperazina-N´-2-etanosulfonico ó TESTES ácido ácido N-tris-(hidroximetil)metil-2-aminometanosulfonico; N-tris-(hidroximetil)metil-2-aminometanosulfonico; prooven mejor estabilidad del pH y reducen lo prooven mejor estabilidad del pH y reducen lo

requerimentos de COrequerimentos de CO22. .

5.5. Además contiene antibioticos para inhibir el crecimiento Además contiene antibioticos para inhibir el crecimiento bacterianobacteriano

6.6. Suero fetal bovino al Suero fetal bovino al 2 al 5 %.2 al 5 %.


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSCultivo celular primario:Cultivo celular primario:

1.1. Tejidos de fetos o de jóvenes se Tejidos de fetos o de jóvenes se colectan asépticamente.colectan asépticamente.

A)A) Riñón de mono verdeRiñón de mono verdeB)B) Riñón de embrión humanoRiñón de embrión humanoC)C) Tejido amnióticoTejido amnióticoD)D) Embriones de ratón, pollo Embriones de ratón, pollo

2. Células epiteliales y fibroblastos2. Células epiteliales y fibroblastos

3. Se parten en pequeñas piezas de cerca de 3. Se parten en pequeñas piezas de cerca de 2 mm3. 2 mm3.

4. Se incuba en presencia de tripsina durante 4. Se incuba en presencia de tripsina durante 30 minutos.30 minutos.

5. Se produce una suspensión de células.5. Se produce una suspensión de células.

6. Se centrifuga a baja velocidad para 6. Se centrifuga a baja velocidad para remover el exceso de tripsina.remover el exceso de tripsina.

7. Se suspenden en medio de cultivo celular,7. Se suspenden en medio de cultivo celular,8. Se incuban a 37°C en tubos con tapan 8. Se incuban a 37°C en tubos con tapan

9. Durante varios días de forma un capa 9. Durante varios días de forma un capa continua ó confluente continua ó confluente

10. Solo se mantienen durante 5 a 10 10. Solo se mantienen durante 5 a 10 generacionesgeneraciones Curso Básico de Virología para Civiles


Cultivo celular primario:Cultivo celular primario:

1.1. Tejidos de fetos o de jóvenes se Tejidos de fetos o de jóvenes se colectan asépticamente.colectan asépticamente.

A)A) Riñón de mono verdeRiñón de mono verdeB)B) Riñón de embrión humanoRiñón de embrión humanoC)C) Tejido amnióticoTejido amnióticoD)D) Embriones de ratón, pollo Embriones de ratón, pollo

2. Células epiteliales y fibroblastos2. Células epiteliales y fibroblastos3. Se parten en pequeñas piezas de cerca de 3. Se parten en pequeñas piezas de cerca de

2 mm3. 2 mm3. 4. Se incuba en presencia de tripsina durante 4. Se incuba en presencia de tripsina durante

30 minutos.30 minutos.5. Se produce una suspensión de células.5. Se produce una suspensión de células.6. Se centrifuga a baja velocidad para 6. Se centrifuga a baja velocidad para

remover el exceso de tripsina.remover el exceso de tripsina.7. Se suspenden en medio de cultivo celular,7. Se suspenden en medio de cultivo celular,8. Se incuban a 37°C en tubos con tapan de 8. Se incuban a 37°C en tubos con tapan de

vaquelita o de plástico.vaquelita o de plástico.9. Durante varios días de forma un capa 9. Durante varios días de forma un capa

continua ó confluente continua ó confluente 10. Solo se mantienen durante 5 a 10 10. Solo se mantienen durante 5 a 10

generacionesgeneraciones11. Se utilizan mucho para la elaboración de 11. Se utilizan mucho para la elaboración de

vacunasvacunas


CULTIVO DE LOS VIRUSCULTIVO DE LOS VIRUSCultivo de células diploides:Cultivo de células diploides:

1. Células de los mismos tejidos de 1. Células de los mismos tejidos de fetos o de jóvenes.fetos o de jóvenes.

A)A) Riñón de embrión humanoRiñón de embrión humanoB)B) Tejido amnióticoTejido amnióticoC)C) Embriones de ratón, pollo Embriones de ratón, pollo

2. Células de tipo fibroblástico y 2. Células de tipo fibroblástico y epitelialesepiteliales

3. Solo se mantienen durante 100 3. Solo se mantienen durante 100 generacionesgeneraciones

4. Se utilizan mucho para la 4. Se utilizan mucho para la elaboración de vacunas o para elaboración de vacunas o para estudios experimentalesestudios experimentales

5. Se almacenan en Nitrógeno 5. Se almacenan en Nitrógeno liquido a -70 a -196°Cliquido a -70 a -196°C



Cultivo de líneas celulares Cultivo de líneas celulares continuas:continuas:

1. Células inmortales originadas de 1. Células inmortales originadas de células cancerigenas o bien células cancerigenas o bien transformadastransformadas

A)A) Riñón de embrión humanoRiñón de embrión humanoB)B) Tejido amnióticoTejido amnióticoC)C) Embriones de ratón, pollo Embriones de ratón, pollo

2. Son células epiteliales de origen tanto 2. Son células epiteliales de origen tanto del ectodermo como del del ectodermo como del endodermo indiferenciablesendodermo indiferenciables

3. Son células fibroblásticas de origen 3. Son células fibroblásticas de origen mesodérmico indiferenciablesmesodérmico indiferenciables

4. Se almacenan en Nitrógeno liquido a -4. Se almacenan en Nitrógeno liquido a -70 a -196°C70 a -196°C


Cultivo de líneas celulares continuasCultivo de líneas celulares continuas


Efecto citopáticoEfecto citopáticoCélulas

normales RhMK cell

s

- 2HEpcells

Infección con poliovirus


Cultivo de líneas celulares continuasCultivo de líneas celulares continuas


HemadsoHemadsoción:ción:

Eritrocitos de cuye adsorbidos en células de riñón infectadas con virus de las paperas


TIPOS DE CULTIVOS CELULARESTIPOS DE CULTIVOS CELULARESLíneas celulares continuas: Líneas celulares continuas: Cell Culture Collection Committe, CCCCCell Culture Collection Committe, CCCC

LINEA CELULARLINEA CELULAR ESPECIE ORIGENESPECIE ORIGEN TEJIDO ORIGENTEJIDO ORIGEN MORFOLOGIAMORFOLOGIA

HeLaHeLa HUMANAHUMANA CARCINOMA CERVIXCARCINOMA CERVIX EPITELIALEPITELIAL

DETROIT-6DETROIT-6 HUMANAHUMANA MEDULA OSEA ESTERNALMEDULA OSEA ESTERNAL EPITELIALEPITELIAL

L-132L-132 HUMANAHUMANA PULMON EMBRIONARIOPULMON EMBRIONARIO EPITELIALEPITELIAL

KBKB HUMANAHUMANA CARCINOMA ORALCARCINOMA ORAL EPITELIALEPITELIAL

AV3AV3 HUMANAHUMANA AMNIONAMNION EPITELIALEPITELIAL

Hep-2Hep-2 HUMANAHUMANA CARCINOMA LARINGECARCINOMA LARINGE EPITELIALEPITELIAL

CHOCHO HAMSTER CHINOHAMSTER CHINO PULMON, OVARIOPULMON, OVARIO FIBROBLASTOFIBROBLASTO

B14-FAF-G3B14-FAF-G3 HAMSTER CHINOHAMSTER CHINO RIÑONRIÑON FIBROBLASTOFIBROBLASTO

NCTC, Clona 2555NCTC, Clona 2555 RATONRATON TEJIDO CONECTIVOTEJIDO CONECTIVO FIBROBLASTOFIBROBLASTO

CCRF-S-180IICCRF-S-180II RATONRATON SARCOMA 180SARCOMA 180 FIBROBLASTOFIBROBLASTO

BHK-21BHK-21 HAMSTERHAMSTER RIÑONRIÑON FIBROBLASTOFIBROBLASTO


Cuerpos de inclusiónCuerpos de inclusión


Cultivo de líneas celulares continuasCultivo de líneas celulares continuasEFECTO CITOPATICO POR INFECCION VIRAL: ECP

INFECCIÓN POR UN ENTEROVIRUS EN UNA LINEA CONTINUA DE CÉLULAS EMBRIONARIAS DE PULMÓN HUMANO (HEL): Áreas de células redondeadas, “secas” entre islotes de células normales (ver flecha)



INFECCION POR HERPES SIMPLEX TIPO 2 EN CELULAS RENALES: Células en contraste de fase en donde las células afectadas (ver

flecha) están agrupadas y refráctilesCurso Básico de Virología para Civiles

Cultivo celular de líneas celulares Cultivo celular de líneas celulares continuascontinuas

EFECTO CITOPATICO POR INFECCION VIRAL: ECP

CELULAS INFECTADAS CON EL VIRUS SINCITIAL RESPIRATORIO. En la línea continua de células epiteliales humanas



CELULAS INFECTADAS CON EL VIRUS SICITIAL RESPIRATORIO. (A MAYOR AUMENTO). En la línea continua de células epiteliales humanas. Se observan células gigantes multinucleadas



INFECCION CON EL VIRUS HVI-1 EN LA LINEA DE LINFOCITOS HUMANOS.Células gigantes multinucleadas, además de espacios sin células.


Efecto de los virus sobre los cultivosEfecto de los virus sobre los cultivos celularescelulares

VIRUSVIRUS EFECTOEFECTO

EFECTO CITOPATICOEFECTO CITOPATICO

PicornavirusPicornavirus Células redondeadas, muerte y destrucción Células redondeadas, muerte y destrucción de la monocapa celularde la monocapa celular

HerpesvirusHerpesvirus Englobamiento celular, mas con el tipo 2 Englobamiento celular, mas con el tipo 2 que con el tipo 1que con el tipo 1

AdenovirusAdenovirus Agrupación de células redondeadas Agrupación de células redondeadas parecidos a racimos de uvasparecidos a racimos de uvas

ParamyxovirusParamyxovirus Células gigantes multinucledas SINCITIOS Células gigantes multinucledas SINCITIOS (fusión celular)(fusión celular)

NO EFECTO CITOPATICONO EFECTO CITOPATICO

OrthomyxovirusOrthomyxovirus Células afectadas capaces de adsorber a Células afectadas capaces de adsorber a los eritrocitos HEMOADSORCIONlos eritrocitos HEMOADSORCION

TogavirusTogavirus Interferencia viral, previene ECP de otros Interferencia viral, previene ECP de otros virusvirus

RhinovirusRhinovirus Interferencia viral, previene ECP de otros Interferencia viral, previene ECP de otros virus tales como ECHOvirusvirus tales como ECHOvirus


Usos del cultivo celular

Diagnóstico

Producción de Antígenos

Producción de biológicos

Producción de anticuerpos monoclonales


Anticuerpos monoclonales


virologia cultivo de virus 3/16

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