PRUEBA ELISA EN ANIMALES

Carlos Martínez, Daniel Burgos & Paula Méndez BIOLLOGÍA CELULAR & MOLECULAR

Concepción Bailón Aijón

¿Qué es la prueba ELISA?

• ELISA son las siglas por las que se conoce al ensayo por inmunoabsorción ligado a enzimas (en inglés enzyme-linked immunosorbent assay) y se trata de una técnica de laboratorio que permite detectar pequeñas partículas llamadas antígenos destacándolas de otras.

¿Cómo funciona?

• Para poder identificar los antígenos se utilizan moléculas con dos componentes acoplados: un anticuerpo y una enzima, se presentan cambios de color u otros tipos manifestaciones en la prueba como la espectrofotometría.• Sacamos una prueba Elisa de: Orina, Sangre, Placenta,

Leche, Pulmones.

Tipos de ELISA…

• ELISA DIRECTO: Consiste en recoger una muestra a estudiar y ponerla en un pocillo (un recipiente pequeño) en frente de una muestra igual pero contaminada con el germen a estudiar, y otra muestra en la que se sabe que no hay germen. Se aplica el anticuerpo con la enzima en los tres pozos y se compara la muestra a estudio con las otras dos.

• ELISA INDIRECTO: se realiza de forma similar al ELISA directo, pero en este caso se añade primero un anticuerpo sin enzima y después uno con enzima. De esa forma, la señal que emite el enzima es mucho más potente y la prueba es más sensible.

• ELISA SANDWICH: en este caso en los pocillos primero se añade un anticuerpo y después la muestra, para que los antígenos queden ya retenidos en el fondo del pozo. Después se añade el anticuerpo con la enzima. Es la forma más eficaz de realizar la prueba.

• INMUNOFLUORECENCIA INDIRECTA: Estas técnicas utilizan normalmente cultivos celulares infectados con el virus o la bacteria sobre la que se desea comprobar si hay o no anticuerpos en el antígeno . Tras la incubación con el antígeno; si hay anticuerpos se unirán a las células infectadas . La unión se visualiza tras la adición de un conjugado anti-inmunoglobulina y la posterior observación al microscopio de fluorescencia o convencional respectivamente.

EJEMPLO: Utilización del Método de Elisa en la detección directa de antígeno de virus diarrea viral bovina en muestras de suero sanguíneo de bovinos

• La diarrea viral bovina se presenta principalmente como una gastrointeritis acompañada de diarrea suave, ulceras en mucosa oral y nasal, también se presentan abortos en hembras gestantes, el ganado de carne y leche también se ve fuertemente afectado• Del 60% al 80% del ganado presenta anticuerpos haciendo

frente a este agente patológico, y entre el 1% y 2% se encuentran persistentemente afectados.

MOTIVO DEL ARTÍCULO

• Detectar de manera pertinente esa diarrea patológica fácilmente contagiosa, que afecta de manera considerable la productividad y la reproducción del ganado, dejando así grandes déficit en la economía de los dueños• También, el propósito de este estudio fue aplicar la

utilización de un método inmunoenzimático para detectar la presencia de animales PI en planteles lecheros

LOS MATERIALES:

• Se utilizaron: • Nueve predios lecheros • 878 bovinos• Un numero un poco más elevado de pruebas Elisa

(prevención de un posible fallo en las pruebas)

TIPO DE PRUEBA EN LA DETECCIÓN DE ESTA ENFERMEDAD• El diagnóstico definitivo de esta enfermedad se hace

tradicionalmente por es aislamiento e identificación del virus por medio de cultivos celulares, pero debido al tiempo que se demora la prueba y el riesgo de presencia de cepas que dañen o alteren los resultados al ser un número elevado. • La técnica de ELISA para la detección de antígeno viral se basa

en el método sándwich, que combina la acción de un anticuerpo �de captura unido a una fase sólida y de un anticuerpo detector, marcado con un sistema señalizador como es la peroxidasa, la sensibilidad que presenta este método es equivalente a la del aislamiento viral.

LOS MÉTODOS

• Se seleccionó ganado mayor a seis meses, muestreados apartir de su vena yugular. • Se utilizó la prueba ELISA tanto para el análisis serológico

de DVB como para el análisis serológico.• Para la interpretación de los resultados se realizó un cálculo

que consistió en el promedio de la densidad óptica de los duplicados de cada suero problema, a las que se les restó el promedio del control negativo.

RESULTADOS…

• En el caso de la prueba serológica, los valores menores de 30% se consideraron negativos, los que se encontraban entre 30 y 40% se consideraron dudosos y todos aquellos mayores de 40% resultaron positivos. Las muestras dudosas se repitieron para clasificarlas finalmente como positivas o negativas definitivas.• En el caso de la prueba de determinación de antígeno, los

valores menores de 20% se consideraron negativos, los que se encontraban entre 20 y 30% eran dudosos y los mayores de 30% fueron positivos. Del mismo modo que en la prueba serológica las muestras dudosas se repitieron para clasificarlas definitivamente en negativas o positivas.

GRAFICAMENTE…

CONCLUSIÓN

• Se concluyó que el método utilizado permite detectar animales en forma rápida y sencilla, pudiendo utilizarse en gran cantidad de muestras.

• La principal fuente de contagio de los animales susceptibles está en las secreciones y excreciones de los animales infectados persistentes e inmunotolerantes , condición que se produce en la etapa gestacional, específicamente antes de los 120 días de preñez, período en que el sistema inmune del embrión aún no se desarrolla adecuadamente.

• Previniendo este tipo de enfermedades, además de cuidar el bienestar de los animales, se cuida el bolsillo ya que con esto subsanamos gastos e invertimos más en el mejoramiento de la producción pecuario.