CHAGASCREEN

Q.F.B. Ivan Rivas Morales

Enfermedad de CHAGAS

Agente causal:

Tripanosoma cruzi

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Enfermedad de CHAGASVector: CHINCHES REDVIDAS GENERO: TRIATOMA SP

Insecto hematfago que vive en rincones (casas de adobe, madera, pisos de madera, techos de paja etc..) de lugares inadecuadamente aseados.

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Enfermedad de CHAGASCENTRO Y SUDAMRICA: 8 - 11 MILLONES DE INFECTADOS.

50% EN BRASIL

4

Diagnstico de CHAGASFase aguda Microscopia Cultivos en agar sangre Aglutinacin directa ELISA Fase crnica Fijacin de complemento Ltex Inmunofluorescencia

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CHAGASCREEN

Ensayo inmuno enzimtico para la determinacin de anticuerpos anti Tripanosoma cruzi.

6

Fundamento

ELISA indirecta Deteccin simultnea de anticuerpos anti antgenos citoplasmticos y de membrana de T. cruzi7

Componentes del equipo 8

Microplaca sensibilizada con Ag citoplasmtico y de membrana de Tripanosoma cruzi. Conjugado: Anticuerpos Anti - IgG Humana con peroxidasa. Revelador A (perxido de hidrgeno) Revelador B (T.M.B.) Diluyente de muestra Control positivo y negativo Solucin de lavado Solucin de paro

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Distribucin en la placa1 A B C D E F G H10

2

3

4

5

Blk C. NEG C. NEG C. NEG C. POS C. POS M M

ProcedimientoDistribuir 200 l del diluyente de las muestras. Distribuir 10 l de los Controles y Muestras. Mezclar por 10seg e Incubar 30 min. a 37C. Realizar 5 Lavados con 300 l de la solucin de lavado.11

1 A B C D E F G H Blk C. NEG C. NEG C. NEG C. POS C. POS M M

2

Aadir 60 l de Conjugado a cada pocillo. Mezclar por 10seg e Incubar 30 min. a 37C. Realizar 5 Lavados con 300 l de la solucin de lavado.

1 A B C D E F G H

2

3

4

5

12

Aadir 50 l de Revelador A y B a cada pocillo. Mezclar por 10seg e Incubar 30 min. a TA en oscuridad.

1 A B C D E F G H

2

3

4

5

13

1 A

2

3

4

50 l de Solucin de paro a cada pocillo.

B C D

Mezclar por 10 seg., y leer a

E F G H

450/620nm.

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Validacin Negativo: D.O. menor o igual a 0.150 Validar con mnimo 2

Positivo: D.O. mayor o igual a 0.600

Si una o ambas condiciones no se cumplen repetir la corrida

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Clculos

Media del C. Neg. VC = Valor de Corte

VC= Media de los C. Negativos + 0.200 Zona de Indeterminacin: VC 10%

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Interpretacin de resultados

Muestras cuya DO. sean menores al limite inferior de la zona

de indeterminacin se consideran Negativas. Muestras cuya DO. se encuentre dentro de la zona gris se

consideran Indeterminadas. VC

10%

Muestras cuya DO. sean mayores al limite superior de la zona

de indeterminacin se consideran Positivas.

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Interpretacin de resultados

+10% -10%

VC

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Desempeo

SENSIBILIDAD ESPECIFICIDAD

100 %. 99.8 %

Resultados de Evaluacin del Centro Nacional de la Transfusin Sangunea Mxico Reactivo Considerado como Adecuado para su uso como prueba de Escrutinio en Bancos de Sangre19