Lic. David BarrosoLic. Rhaider BaptistaLic. MsSc. Zulitza Pimentel

DefinicinEs una tcnica que combina la especificidad de los anticuerpos con la sensibilidad de un ensayo enzimtico. Esta tcnica es utilizada para medir tanto antgenos como anticuerpos, de manera cualitativa, semicuantitativa y cuantitativa.

Fases de la respuesta inmuno humoral

Tipos de ELISA1.- Anticuerpos Marcados

ELISA Directo ELISA Indirecto ELISA Sndwich1.- Antgeno Marcado

ELISA Competitivo

ANTIGENO ESPECIFICO FIJADOAL FONDO DEL POZOANTICUERPOS CONTRA ANTIGENO PRESENTE EN LA MUESTRAANTICUERPOS CONTRA INMUNOGLOBULINA HUMANA ACOPLADO CON PEROXIDASAH2O2Oxidacin de TMBH2SO4H2O2 y Substrato TMBELISA INDIRECTO LavadoBufferLectura de 450 a 620nm1 HORA TA15 Minutos TA30 Minutos TALavadoBufferSTOP

Anticuerpo Especifico dirigidoContra el Antigeno a Determinar antigeno presente en la muestraAnticuerpos marcados con peroxidasaH2O2Oxidacin de OPDH2SO4H2O2 y Substrato TMBELISA DE CAPTURALavadotampn PETLectura a 450 a 6201 HORA TA15 Minutos TA15 Minutos TALavadotampn PET

Anticuerpo espeficico, fijado al fondo del pocilloAntgeno de la muestra del paciente y antgeno conjugado a peroxidasa (comercial)H2O2 y Substrato H2O2Oxidacin de TMBELISA COMPETITIVOH2SO4STOP

Anticuerpo espeficico, fijado al fondo del pocilloAntgeno de la muestra del paciente y antgeno conjugado a peroxidasa (comercial)H2O2 y Substrato H2O2Oxidacin de TMBELISA COMPETITIVOH2SO4STOP

Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica

AnticuerposMonoclonalesPoliclonalesPptidos sintticosAntgenos recombinantes

Produccin de anticuerpos policlonalesExtraccin del sueroPurificacin

Diferencias entre Monoclonales y Policlonales

EspecificacionesPoliclonalesMonoclonalesEpitopes que reconocenVariosnicoEspecificidadVariableNo variableRendimientoVariable segn la especieBaja en tejidosAlta en lquido ascticoCostoBajoAlto

Antgeno Completo

Extracto total

Fraccin purificada

Pptido sinttico

Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica

Materiales de la fase slida

Sistemas de LavadosComponentes

Cantidad

Nmero de ciclos

Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica

Sistema de revelado Ags - Acs

Enzimas

SustratosCompuestos solubles

Fcil de manipular

No resulten txicos

Bajo costo

Elementos del ELISAFase slidaEnzimasLavadosSustratosRevelador de la actividad enzimatica

Revelador de la actividad enzimtica cido Sulfrico 0,5N 1N 2N

cidos fuertes

Bases fuertes

Mezclar bien los pocillosFactores que afectan la colorimetraTemperaturaTiempoExposicin a la luz

Lectura de los resultadosLector de placas de ELISAD.O.

Calculo e Interpretacin de los resultados Calculo de la media de los controles

Calculo del Cut off

Resultado (D.O./C-off)

Interpretacin de los resultados

*************************