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ELISA
WESTERN BLOT
Aspectos Prácticos
ELISA
PRINCIPIOS BÁSICOS
Acoplar una enzima a un anticuerpono altera su capacidad de combinarcon el antígeno específico.
El uso de un segundo anticuerpoconjugado con una enzima aumenta lasensibilidad de la prueba.
ELISA–enzyme linked inmunosobent assay
(inmunoensayo enzimático)
Es una prueba de alta sensibilidad.
Los resultados son cuantitativos.
Los reactivos son estables y menos tóxicos.
El costo es económico.
Se pueden procesar grandes números de
sueros en cada ensayo.
Fundamento de la Técnica de ELISA
Fase SólidaAntígeno- Anticuerpo
Ag-Ac-EnzimaEnzima unida al anticuerpo o antígeno
Sustrato
Producto ColoreadoLectura en lector de ELISA
Prueba de ELISA
Control Positivo
Control Negativo
Prueba de ELISA para descarte de Leishmaniasis Visceral
Prueba de ELISA
Cont.
Positivo
Cont.
Negativo
Los métodos de ELISA se dividen en 2 Tipos:
ELISA Competitivo.
ELISA No Competitivo donde tenemos:
ELISA Directo
ELISA Indirecto
Lavador de Placas de ELISA
Lector de ELISA
APLICACIONES DE LA ELISA
Detección de Antígenos o Anticuerpos: Parásitos,
hongos, bacterias y virus.
Detección de Autoanticuerpos: IgG (factor
reumatoideo, DNA, proteínas del núcleo.
Medición de Hormonas: Progesterona, estrógenos,
cortisol, insulina, testosterona, gonadotropina
coriónica humana, TSH.
Detección de Antígenos Tumorales: Antígeno
prostático, alfa-fetoproteína, antígeno del ovario,
antígeno carcinoembrionario.
WESTERN BLOT
Separación de proteínas y demostración de su
reactividad con anticuerpos.
La prueba es altamente específica.
Permite el análisis de la respuesta de Ac con mezclas
complejas de proteínas.
Permite la confirmación del VIH.
Permite identificar Ag inmuno-dominantes (vacunas)
Cámara de Electroforesis
Colocación de la muestra
Electroforesis
Tinción de Coomassie blue
Cámara de Transferencia
Gel de
corrida sin
teñir
Papel de
Nitrocelulosa
Western blot
Polo -
Polo +
Western blot
Examen de VIH
1. Historia clínica, signos, síntomas
2. Serología
Positivo Negativo
ELISA
Western blot
Ac contra proteínas del VIH (120, 40, 24)
Ac contra otras proteínas.
Confirmatorio No Confirmatorio
Resultado
APLICACIONES DEL WESTERN BLOT
Investigación: Es una de las técnicas más usadas en el estudio de
la biología molecular
Permite identificar antígenos inmuno-dominates para vacunas.
Estudiar perfil de citocinas en modelos experimentales.
Diagnóstico:
Prueba confirmatoria de VIH
Se emplea como prueba definitiva de la encefalopatía espongiforme
bovina, comúnmente llamada “enfermedad de las vacas locas”
En algunos casos se usa como prueba diagnóstica para la
Enfermedad de Lyme.
Comparación entre la ELISA y el Western Blot
ELISA Western Blot
Es una prueba altamente
sensible.
Es una prueba altamente
específica.
Resultados Cuantitativos Resultados no cuantificables.
Se pueden procesar
grandes números de
muestras en cada
ensayo (placa).
Se utiliza una tira de
nitrocelulosa por muestra.
Costo económico. Costo mayor.
