AÑO DE LA CONSOLIDACIÓN ECONOMICA Y SOCIAL DEL PERU

UNIVERSIDAD NACIONAL DE HUANCAVELICA

FACULTAD CIENCIAS DE INGENIERIA

E.A.P ZOOTECNIA

TEMA

DETERMINACION DE NITROGENO Y PROTEINA DE INSUMOS

CÁTEDRA

DOCENTE : Ing. Marlene TOMASSINI VIDAL

ALUMNO : RAMIREZ MONTES, Jhonny.

LIZANA HILARIO, Epifanio. QUISPE MULATO, David. RAMOS QUISPE, Vicente

PACO LAZO, Nataly Maria ROCA INGA, Liber

QUICHCA PALOMINO, Raul Gerardo

CICLO : V SECCIÓN : “B”

HUANCAVELICA – PERÚ

2010

ZO

D

CA

E

VA DEDICADO PARA TODOS LOS ALUMNOS DE LA FACULTAD DE CIENCIAS DE INGENIERIA.

INTRODUCCION

La determinación de la cantidad de proteína y nitrógeno presente en alimentos y en

otros compuestos por el método de Kjeldahl es una de las más usadas aunque no la

única. Esta determinación se realizo con insumo o alimento concentrado para conejos

lo cual es la conejina comúnmente conocido, pues para ello tuvimos que utilizar

distintos materiales las cuales son muy importantes y siempre teniendo las

precauciones necesarias dentro del laboratorio y los equipos que se utilizaran, para

poder determinar el porcentaje de nitrógeno tanto como de proteína usamos dos

formulas matemáticas las cuales nos ayudan a determinar después de todos los pasos

seguidos de acuerdo a la guía y al docente quien dirige dicha práctica. El nitrógeno es

el elemento químico que permite diferenciar las proteínas de otros compuestos,

particularmente de grasas y carbohidratos. Sin embargo, la fracción de proteína del

sistema biológico no es la única fuente de nitrógeno ya que puede derivarse también

de pépticos, aminoácidos libres y compuestos nitrogenados de naturaleza no proteica

(generalmente presentes en menor proporción).

A todo este proceso de determinación de la cantidad de proteína, nitrógeno, porcentaje

de materia seca, % de humedad, EE, GRASA, etc. Se le conoce como el análisis

proximal, este análisis se determina para conocer cuánto es la captación del animal en

cuanto a proteína presenta un alimento para lo cual realizamos esta práctica, de

acuerdo a los resultados deduciremos si el alimento es bueno o que requerimientos

más necesitan los animales suministrados con dichos alimentos balanceados.

OBJETIVOS

Determinar el análisis proximal del insumo “conejina” por el método de Kjeldahl.

Conocer cuánto es la variación que el animal necesita en cuanto a proteína que

requiere y que dicho animal presenta en cuanto al alimento que se le

suministra si al tipo de insumo que consume o de acuerdo a la digestibilidad

que tiene.

Conocer si los cálculos realizados por este método de Kjeldahl va ser igual que

presenta un insumo en cuanto a su análisis proximal.

Buscar la manera más fácil de determinar el análisis proximal de insumos que

son muy importantes para el racionamiento a animales de interés económico.

Determinar cuánto es el incremento de proteína en un animal de acuerdo con

este insumo analizado, si hay ventajas o no para suministrar este tipo de

alimento.

MARCO TEORICO

CUANTIFICACIÓN DE NITRÓGENO TOTAL Y DETERMINACIÓN DEL CONTENIDO DE PROTEÍNA EN UN INSUMO PARA ANIMALES

DOMESTICOS

LAS PROTEÍNAS.- son un grupo de biopolímeros constituidos de aminoácidos que

exhiben una amplia gama de estructuras y funciones.

Las proteínas como un grupo de biomoleculas, desempeñan una gran variedad de

funciones, algunas participan en la contracción muscular y sirven para dar soporte

estructural, otras trasportan y almacenan moléculas pequeñas.

Los anticuerpos (moléculas que sirven para como protección inmunológica) son

proteínas al igual que las enzimas (catalizadores biológicos) y algunas hormonas.

Las proteínas pueden llevar a cavo funciones tan diversas por la enorme posibilidad de

combinaciones en la composición y secuencia de aminoácidos.

Las proteínas también se clasifican según su composición, las que se forman solo de

residuos de aminoácidos y no tienen otras biomoleculas son PROTEÍNAS SIMPLES;

no odas las proteínas son solubles en agua, de hecho las proteínas insolubles son

esenciales para dar soporte y mantener la integridad estructural de las células y

organismos.

Método de Kjeldahl

El método de Kjeldahl se basa en la hidrólisis ácida de la materia orgánica de la

muestra por calentamiento con ácido sulfúrico concentrado y sulfato de potasio en

presencia de un catalizador sulfato de cobre. El nitrógeno se reduce en la sal sulfato

de amonio, de la cual se libera con hidróxido de amonio en la forma de amoniaco y se

destila. El destilado se valora con una solución patrón de ácido clorhídrico o sulfúrico.

MATERIAL

5 tubos digestión Kjeldahl con capacidad de 125 ml.

1 matraz de Erlenmeyer

1 matraz volumétrico de 100 ml.

1 mechero de Bunsen.

2 pinzas (nueces).

1 pipeta

1 frasco gotero

1 par de guantes

1 pinzas largas.

1 mortero

1 balanza analítica

5 vasos precipitados

1 espátula

EQUIPO

Aparato digestor Kjeldahl (1 para todo el grupo).

1 aparato destilador büshi 1.

REACTIVOS

Sulfato de cobre

Verde de bromocresol al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

Rojo de metilo al 0.1% diluido en alcohol al 95%.

Ácido bórico al 2%.

Ácido clorhídrico 0.01N (solución valorada).

Hidróxido de sodio al 30%.

Ácido sulfúrico concentrado.

Mezcla catalizadora para la digestión: 2.5 g de dióxido de selenio + 100 g de sulfato de potasio + 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (proporcionada por la coordinación de laboratorios).

MÉTODO

ELABORACION DE REACTIVOS

1.- Mezcla Indicadora.- Prepare por separado los indicadores verde de bromocresol al 0.1% y el rojo de metilo al 0.1% diluidos en alcohol al 95%. Mezcle 10 ml. de verde de bromocresol con 2 ml. de la solución de rojo de metilo en un frasco gotero.

2.- Ácido Bórico al 2%.- Disuelva 10 g de ácido bórico (en cristales) en 500 ml. de agua destilada hirviendo. Después de que se enfríe transfiera la solución a un frasco tapado. Se conserva indefinidamente.

3.- Ácido Clorhídrico 0.01N.- Prepare un litro y valórela con una solución de NaOH de la misma normalidad.

4.- Hidróxido de Sodio al 30%.- Disuelva 150g de perlas de hidróxido de sodio en 350 ml. de agua destilada. Almacene la solución en un frasco ámbar con tapón de vidrio.

5.- H2SO4 concentrado.

6.- Catalizadores para la Digestión.- Mezcle 2.5g de dióxido de selenio (SeO2), 100g de sulfato de potasio (K2SO4) y 20 g de sulfato de cobre pentahidratado (CuSO4 . 5H2O).

PROCEDIMIENTO

DIGESTIÓN

1.- Triturar la muestra conejina en un mortero

2.- Pese exactamente 0.2500g de conejina en la balanza analítica y luego echar al tuvo digestor cuidando que la muestra no se adhiera a las paredes o al cuello del tubo digestor.

3.- Añada 3ml. de H2SO4, aproximadamente 1.0 g de mezcla catalizadora.

4.- Someta a digestión la muestra en el aparato de Kjeldahl, con el tubo digestor usando un temperatura ( ) al inicio rotando los tubos de vez en cuando para asegurarse de que se digiera toda la muestra. La digestión terminará cuando el color de la muestra sea azúl-verde claro. El proceso tomará aproximadamente 120 minutos.

5.- Enfríe el matraz durante unos 4 minutos para que no se endurezca al solidificarse la muestra.

DESTILACIÓN

6.- Encienda la unidad destiladora.

7.- Si es posible ajuste la velocidad de destilación a aproximadamente 5 ml. por minuto

8.- Abra la llave del agua para tener H2O circulando por el refrigerante todo el tiempo.

9.- Añada la muestra a la cámara de ebullición por medio de un embudo (para recuperar las perlas de ebullición) y enjuague el matraz con aproximadamente 5ml. de H2O destilada.

10.- Coloque 1 frasco Erlenmeyer con 10 ml de ácido bórico y 2 gotas de indicador bajo la salida de destilación.

11.- Añada aproximadamente 10 ml. de la solución de NaOH a la cámara de ebullición LENTAMENTE. La mezcla digerida se tornará oscura (azúl-gris o café oscuro). Si no cambia de color añada más NaOH.

12.- Deje un poco de NaOH en la copita superior del destilador.

13.- Colecte aproximadamente 20 ml. del destilado (4-5 minutos). El destilado estará listo para ser titulado cuando se torna verde en el matraz receptor.

14.- Retire el tubo digestor y limpie la unidad destiladora enjuagando la cámara de ebullición varias veces con agua destilada. Cada vez que se añada agua destilada hasta llenar la copita superior de la unidad destiladora para el enjuague deje que ésta hierva primero. Luego abra la llave de la parte que permite salir las muestras hacia fuera de la unidad destiladora. Una vez vacía la parte en donde se procesa la muestra asegúrese de que esté bien vacía. Si queda todavía un poco de agua en el fondo permita que hierva para que se vaya toda hacia esa segunda parte de la unidad destiladora. El siguiente tubo debe estar listo para realizar el mismo proceso.

NOTA: La llavecita de la segunda parte de la unidad destiladora (que conduce la muestra procesada hacia el vasito permanece cerrada (en posición horizontal) durante el procesamiento de la muestra. Sólo se abre cuando se enjuaga el destilador.

TITULACIÓN

15.- Titule la muestra con 0.1N de HCl. Un color violeta indica el punto final de la titulación. Compárese este color con el del blanco. Cada equivalente del HCl usado corresponde a un equivalente de NH3 o a un equivalente de N en la muestra original. El peso del N en mg está dado por miliequivalentes del ácido X 14 (el peso equivalente del N).

RECUPERACIÓN DEL AMONÍACO

Una posible fuente de variación en este método es la pérdida del gas amoníaco o una falla en atrapar el amoníaco en el ácido bórico. Esto puede ocurrir en diferentes pasos del proceso. Una técnica para buscar la recuperación del amoníaco consiste en destilar cantidades conocidas de amoníaco líquido y titularlo con HCl. Se obtendrá otra vez el color púrpura en el ácido bórico.

Mientras se digieren las muestras, se puede destilar una solución de sulfato de amonio. Añada 5, 10 ó 15 ml (mediante una pipeta) de solución de sulfato de amonio a la cámara de ebullición de la unidad destiladora. Enjuáguela después con agua destilada y, si es posible, desionizada. Coloque inmediatamente la punta de la unidad destiladora en 10 ml de ácido bórico + indicador. Colecte aproximadamente 20 ml. de destilado.

Titule la muestra con el HCl estandarizado, registre los ml. de HCl empleados y calcule el peso del nitrógeno en el (NH4)2SO4.

RESULTADOS

Cálculos

Moles de HCl = Moles de NH3 = Moles de N en la muestra

% N = NHCl x Volumen de ácido corregido x 0.0014 g N x 100

gr. de muestra

14 x N x V x 100 x factor% Proteína =--------------------------------- ; factor = 6.25 m x 1000

gastos:

gasto 1 = 5.56 gasto 1 = 9.75 gasto 1 = 10.25 gasto 1 = 7.2 gasto 1 = 6.3

Desarrollo:

% N1 = 5.56 x 0.05 x 0.0014 g N x 100 0.2500

% N1 = 0.15568

% Proteína ( 1 )= 0.15568 x 6.25 = 0.973

% N2 = 9.75 x 0.05 x 0.0014 g N x 100 0.2500% N2 = 0.273

% Proteína (2)= 0.273 x 6.25 = 1.70625

% N3 = 10.25 x 0.05 x 0.0014 g N x 100 0.2500

% N3 = 0.287

% Proteína (3)= 0.287 x 6.25 = 1.79375

% N4 = 7.2 x 0.05 x 0.0014 g N x 100 0.2500

% N4= 0.2016

% Proteína(4) = 0.2016 x 6.25 = 1.26

% N5 = 6.3 x 0.05 x 0.0014 g N x 100 0.2500

% N5 = 0.1764

% Proteína(5) = 0.1764 x 6.25 = 1.1025

Promedio de % N = 0.15568 + 0.273 + 0.287 + 0.2016 + 0.176 = 0.218736 5

Promedio de % de prot = 0.973 + 1.70625 + 1.79375 + 1.26 + 1.1025 = 1.3671 5

En donde:

NHCl = Normalidad del HCl en moles/1000ml (gasto)

Volumen del ácido corregido = (ml. del ácido estandarizado para la muestra) - (ml. de ácido estandarizado para el blanco).

14 = Peso atómico del nitrógeno.

Se utiliza un factor para convertir el porcentaje de N a porciento de proteína

cruda. El porcentaje promedio de N en proteína para la conejina es de

0.218736 y el % de proteína promedio es de 1.3671.

CONCLUCION

BIBLIOGRAFÍA

A.O.A.C. 1980. Association of Official Agricultural Chemists. Official Methods of Analysis. Washington, D.C.

Nielsen, S.S. 1994. Introduction to the Chemical Analysis of Foods. Ed. Jones and Bartlett Publishers. U.S.A. pp 209-212.

Ranganna, S. 1977. Manual of Analysis of Fruit and Vegetable Products. Ed. McGraw-Hill Publishing Co. Ltd. New Delhi.

Yeshajahu P. y Meloan C.E. 1987. Food Analysis. Theory and Practice. 2ª. Ed. AVI U.S.A. pp 753-758.