practica de parasitos

UNIVERSIDAD NACIONAL HERMILIO VALDIZAN DE HUANUCOE.A.P.DE INGENIERIA AGROINDUSTRIAL

MANUAL DE PRACTICAS: MICROBIOLOGIA DE ALIMENTOS

PRACTICA N°

ATLAS DE PARASITOS PARA INVESTIGACIÓN DE HUEVOS DE HELMINTOS Y PROTOZOARIOS

I. INTRODUCCION

II. FUNDAMENTO TEORICO

III. MATERIALES Y METODOS

a. Materiales

b. Métodos

Procedimientos de toma de muestra

- Se eligió en forma aleatoria el campo de cultivo, se anotó el tipo y número de verduras

de la muestra

- Se eligieron las muestras teniendo en cuenta la procedencia o adquisición.

- Cada producto, fue colocado en una bolsa de polietileno, siempre con los datos y así

llevado al laboratorio.

Obtención del agua del lavado

El agua del lavado de las verduras se obtuvo de la siguiente manera:

- Se pesan 100 gr de verdura. Cada unidad es remojada en 500 ml de agua destilada.

- Se procedió a separar en dos trozando la parte comestible entre tallos, hojas,

tubérculos

- Se procede a lavar las verduras con ayuda de una escobilla.

- Se separa el agua del lavado en dos partes de 250 ml cada una, para ser utilizada en

los métodos de concentración por sedimentación en tubo y concentración por

flotación membrana filtrante respectivamente.



- Se deja en reposo el agua de lavado por 30 minutos, con el fin de permitir que los

quistes adheridos a la tierra se aflojen y queden separados.

Figura 1. Muestras de Rabanito y Culantro.

Figura 02. Muestra de Cebolla china Figura 09.Muestra de Apio



Método de sedimentación

Después de los 30 minutos de reposo, se elimina las ¾ partes del agua del lavado,

teniendo cuidado de no perder el sedimento, debido a que los quistes, huevos y larvas se

depositan en el sedimento, por ser más pesados que el agua.

- El sedimento se coloca en tubos de centrifuga de 115 x 30 mm luego se realiza una

suspensión con agua destilada y se centrifuga a 2000 rpm x 2 minutos, con el fin de

lavar el sedimentación.

- Se descarta el sobrenadante y se realiza el lavado del sedimento las veces que sean

necesarias, hasta obtener un sobrenadante claro.

- Se descarta el ultimo sobrenadante y se adiciona NaoH al 2%, solución salina, y agua

destilada.

- Se agita el sedimento en el tubo y centrifuga a 2000 rpm x 2 minutos.

- Se deja en reposo y con la ayuda de una pipeta se extrae el sedimento para la

observación microscópica con objetivos de 10X y de 40X

- Añadimos una dos gotas de muestra a agregamos una gota de solución de lugol se

coloca en 10 laminas portaobjeto colocando una laminilla cubre objeto y observamos

en el microscopio.

- Se aplicó la fórmula del contaje de huevos por campo y por gramo de la muestra (INS

2008).

Criterios de muestreo de agua

Se eligieron las zonas o puntos de muestreo manual de acuerdo a las recomendaciones

de la APHA, EPA para aguas residuales, se realizo un reconocimiento previo de la

zona, vías de acceso para la toma de muestra y las estaciones de muestreo teniendo

en cuenta el caudal del vertimiento y el volumen del cuerpo para componer la muestra

final. El procedimiento consistió en tomar por un periodo de seis meses porciones de

muestras seleccionadas del lugar de extracción que puntualmente fue la

desembocadura de la matriz de principal de riego de los campos de cultivos del Fundo-

Bocanegra,y se obtuvieron 4 muestras de agua vertimientos domésticosque son

usados para el riego de sus cultivos. Se emplearon los hisopos de gasa, (los cuales no

afectan la composición del agua extraída, es fácil de limpiar, fácil de transferir el



contenido del muestreado al envase) que son colectados, transcurridos las 24 hs de

colocado el hisopo. En cada punto o zona de muestreo se midió la temperatura y el pH.

Procedimiento de Análisis cualitativo

Después de las 24 horas de reposo, se colecta los hisopos de gasa con las partes del

agua contenidas en ella, teniendo cuidados de no perder parte de agua, debido a que por

el caudal del agua los quistes, huevos y larvas se han adherido a los tejidos de la gasa.

- La gasa se coloca en bickers de 1 lt, luego se realiza cortes al hisopo de gasa.

- Se agita cada corte con solución salina con el fin de lavar los tejidos y obtener un

sobrenadante.

- Distribuir el volumen total de la muestra en tubos de centrifuga. Los tubos deben ser,

preferentemente de polietileno y con 250 ml de capacidad.

- Centrifugar a 2400 rpm durante 5 minutos

- Decantar el sobrenadante, teniendo cuidado de no desprender el sedimento.

- Lavar el sedimento, adicionarle 3 a 4 ml de agua a cada tubo y luego homogenizar,

completar el volumen del tubo con agua destilada y centrifugar. Repetir este pasó para

obtener un sobrenadante claro.

- Se deja en reposo y con la ayuda de una pipeta se extrae el sedimento y la película

superficial colocar enlaminas para la observación microscópica con objetivos de 10X

y de 40X en 10 laminas portaobjetos.

- Añadimos una dos gotas de muestra a agregamos una gota de solución de lugol y

otra sin colorear lo cual facilita la diferenciación entre enteroparásitos y otros

microorganismos entre diversos estadios evolutivos de nematodes de vida libre y

algas microscópicas con morfología semejante y que igualmente se tiñen con lugol.

se coloca en lamina portaobjeto colocando una laminilla cubreobjeto y observamos en

el microscopio el grupo de laminas

IV. RESULTADOS Y DISCUSIONES

V. CONCLUSIONES

VI. RECOMENDACIONES



VII. REVISION BIBLIOGRAFICA

El análisis parasitológico se realizará por la técnica de Groenen WHO 1969 (33), modificado 1972 y el método de Cadwell y Cadwell modificado.

Detección de parásitos en muestras de agua.

AGUA

PARASITOS OBSERVACION MICROSCOPICA

SEDIMENTACION

HELMINTOS

A.lumbric.

H.nana

H.diminuta

T.trich. 1

Strongyloidessp. 1

toxoascaris

PROTOZOARIOS:

G.lamblia 1

B.hominis 1

E.nana 2

Entamoebasp. 1

TOTAL 7



Es necesario destacar que los mecanismos de transmisión más frecuente con los parásitos

intestinales es por la contaminación fecal y el agua como vehículo de transporte.

Entre otros helmintos que requieren de hospedador intermediario; y el ganado son hospedador

definitivo se encontró ( 2 )en muestras de tierra, y Toxocarasp el hombre es el hospedador

intermediario, se encontró en muestras de vegetales.

Es importante conocer la distribución de A.lumbricoides porque la hembra adulta, puede vivir

en su huésped hasta 2 años, el rango de fecundidad es de 134,000 a 360,000 huevos por día

por un período de 300 días (36)

Entamoeba sp. Entamoeba sp.

Entamoeba sp Ascaris sp,

Toxocara sp,



Estrongyloides sp.



Dermatofito y E.nana. Huevo de Ascaris

Dermatofito Huevo E. nana

Huevo paramecium Dermatofito



Artropodo

Dermatofito Toxocara

Larva Oruga



Boca de Strongyloides Huevo Toxocara

Artropodo Huevo Helminto

Huevo Helminto Strongyloides sp



Strongyloides sp. Entamoeba sp..

Huevo Helminto. AVL.

Huevo Ascaris sp. Flagelado



Huevos de áscaris y fasciola Quiste de Paragonimus

Quiste de Giardia sp Pulmon Necrosado por paragonimus

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