microbiologia - informe 3-coloracione

7/26/2019 Microbiologia - Informe 3-COLORACIONE

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MICROBIOLOGIA FACULTAD DE INGENIERÍA AMBIENTAL Y RECURSOS NATURALES ENERO 2016V

GENERAL

L A B O R A T O R I O D E M I C R O B I O L O G I A G E N E R

A L

OBSERVACION E IDENTIFICACION MICROSCOPICA DE BACTERIAS

EXAMEN DIRECTO Y COLORACION SIMPLE

OBJETIVOS:

Conocer las técnicas de coloración bacteriana Uso correcto de las técnicas de coloración

Conocer las diferentes formas bacterianas

INTRODUCCIÓN:

Los microorganismos, concretamente las bacterias, pueden observarse directamente al

microscopio de campo claro. Sin embargo, debido al bajo contraste entre las células y su

entorno, estos procedimientos se utilizan en ocasiones muy limitadas. La tinción es un

método sencillo para incrementar el contraste entre la célula y su entorno y por lo tanto

contribuye a mejorar la imagen observada.

MARCO TEÓRICO:

Colorantes.- Los colorantes son sustancias de origen química o biológico,generalmente tintes, pigmentos, reactivos u otros compuestos, empleados en lacoloración de tejidos microorganismos para exámenes microscópicos, debiendo teneral menos, un grupo cromóforo que le proporcione la propiedad de teñir.

Origen de obtención de los colorantes:

Colorantes naturales. Los colorantes naturales son básicamente histológicos,

encontrándose entre los empleados con mayor frecuencia, los siguientes: Índigo: Se obtiene de diversas especie de plantas del genero indigófera que

contiene indican, el cual se fermenta para producir el colorante.

Carmín: Se produce, mediante el tratamiento con alumbre y otras sales metálicasa hembras del insecto cochinilla "Coccus castis".

Orceína y Tornasol: Se obtiene mediante el procesamiento industrial de líquenesde los géneros: Le canora tinctoria y Rosella tinctoria.

Hematoxilina: Este colorante se extrae con éter de la madera de un árbol oriundode México y de algunos paises suramericanos denominados Hematoxiliumcampechianum.

Colorantes sintéticos. Se obtiene de la anilina, o es más exactamente del alquitrán dehulla siendo todos derivados del benceno.

Clasificación

Los colorantes se clasifican, teniendo en cuenta si la propiedad tintorial se encuentraen el anión o el catión de su estructura química. Sobre esta base se pueden dividir entres grupos: básicos, ácidos y neutros.

Colorantes básicos: La acción colorante está a cargo del catión, mientras que elanión no tiene esa propiedad, por ejemplo: - cloruro de azul de metileno+.

Colorante ácido: Sucede todo lo contrario, la sustancia colorante esta a cargo del

anión, mientras que el catión no tiene propiedad, por ejemplo: eosinato- de sodio+




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Colorantes neutros: Están formados simultáneamente por soluciones acuosas decolorantes ácido y básicos, donde el precipitado resultante, soluble exclusivamenteen alcohol, constituye el colorante neutro, que tiene la propiedad tintorial de suscomponentes ácidos y básicos, por ejemplo: la giemsa.

Toxicidad de los colorantes. Ventajas y Desventajas.Los colorantes son sustancias tóxicas, por lo tanto el proceso de la tincióngeneralmente resulta letal para los microorganismos, provocando su inmovilización, locual puede significar una ventaja o desventaja para el investigador. Veamos algunosEjemplos:

Al ocasionar la muerte de los microorganismos sometidos al proceso de tinciónse reducen las posibilidades de contaminación para el manipulador.

Los colorantes pueden ser tóxicos para el manipulador, algunos incluso hanresultado cancerigenos por lo que ha habido la necesidad de retirarlos delmercado.

Algunos colorantes solo tienen afecto letal para determinadas especies ogéneros bacterianos, siendo utilizados como constituyentes de medios decultivo selectivo para impedir el desarrollo de microorganismos indeseables yfavorecer el desarrollo de las especies que nos interesa estudiar. Por ejemplo:el verde de malaquita.

Otros se emplean como desinfectantes microbianos, mas que para teñir, confines de microscopia, por sus propiedades bacterianas o bacteriostáticas.

Algunos tipos de colorantes son empleados no para teñir, sino comoindicadores de pH, formando parte de la composición de los medios de cultivo

para indicar los cambios de basicidad o acidez que se vayan produciendo en elmedio como consecuencia de su actividad metabólica. Ejemplo: rojo fenol, azulde bromotimol, etc.

Métodos de coloración

Atendiendo a los objetivos que se persigan, los métodos de coloración se clasifican en:Tinción simple, tinción compuesta y tinción especial.

Tinción simple: En la tinción simple se utiliza un solo colorante con el que se tiñerápidamente el microorganismo, utilizándose fundamentalmente para observar sumorfología y tamaño. Los colorantes empleados con mayor frecuencia para este

tipo de tinción son los siguientes: azul de metileno, violeta cristal y fuscinafenicada, entre otros.

Azul de metileno, cuyo nombre científico es Cloruro de Metiltionina, es un colorante que

se usa para tratar una enfermedad llamada metahemoglobinemia. Es un compuesto

químico heterocíclico aromático con fórmula molecular: C16H18ClN3S.




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Tinción compuesta: En este tipo de tinción, se utiliza más de una sustanciatintórea. Los colorantes se aplican, a la preparación, separados o juntos, formandoparte de una solución. En consecuencia se puede determinar algunascaracterísticas propias de diversos géneros que permiten diferenciarlo de losdemás, por lo que reciben también el nombre de coloraciones diferenciales. Entrelos métodos mas utilizados se encuentran: La coloración de Gram. y la de ZiehlNeelsen.

CUESTIONARIO:

1.

Mencione los factores que afectan toda técnica de coloración.

Algunos de factores que afectan las técnicas de coloración bacteriana son los

siguientes:

El pH del colorante, determina la fijación correcta o no del colorante en la

estructura de los microorganismos.

Concentración del colorante, a mayor concentración mayor será el error en el

proceso, y a menor concentración menor será el error.

Conservación del colorante, este deberá ubicarse siempre en lugares secos,

frescos y oscuros, además de estar adecuadamente encasados y etiquetados.

Técnica de la coloración, el proceso de cada técnica debe ser realizado

correctamente.

Temperatura, se aplica en cada técnica según se precise para la penetración

del colorante en la estructuras bacterianas.

Agentes óxido-reductores

El frotis, si se hizo correctamente.

Tiempo de coloración, luego se agregar el colorante

2.

Describa los componentes de un colorante

Están conformados químicamente por uno o más anillos bencénicos con dos tipos

distintos de grupos radicales.

Grupo radical cromóforo: es responsable de brindar el color a las sustancias y que

usualmente se encuentra cargado positiva o negativamente. Mientras exista mayor

cantidad de grupos cromóforos, dicho colorante poseerá mayor capacidad de

coloración.

Grupo radical auxócromo: no tiene propiedades colorantes pero ayuda a dar

estabilidad a la molécula.

https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Methylene_blue.svg

https://commons.wikimedia.org/wiki/File:Methylene_blue.svg




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3. Indique a que se denomina MORDIENTE, mencione algunos ejemplos.

Mordiente proviene del latín “morderé” que significa morder, apresar y agarrar; que

es lo deseado en las fibras naturales en el campo textil, dando a estas la capacidad de

atrapar las partículas de color.

El mordiente es una sustancia que tiene como misión servir de puente o enlace entre

el tinte y las fibras, permitiendo que las partículas colorantes que poseen las materias

tintóreas queden adheridas a la estructura de las fibras de forma permanente, es decir

con capacidad de resistir a la acción del agua, el rozamiento, la luz solar entre otros

que afectan la perdurabilidad de los colores en las fibras.

Algunos ejemplos de mordiente son: alcohol etílico, ácido crómico, hematoxicilina.

4.

Porqué es importante el colorante y las coloraciones.

La importancia de los colorantes y las coloraciones reside en las funciones que

cumplen en los métodos de observación e identificación de microorganismos, debido a

que estos son transparentes. Los colorantes y las coloraciones nos revelaran en laobservación, las estructuras internas y externas de los microorganismos, por medio de

reacciones químicas especificas

Las coloraciones incrementan el contraste entre la célula y su entorno y por lo tanto

contribuye a mejorar la imagen observada. Las técnicas de tinción con diversos

colorantes facilitan la observación al aumentar notablemente el contraste.

5. Realice esquemas de todo lo observado.

Nombre del microorganismo:

- Criptococcus neorformous

Tipo de colorante:

-

Tinta china

tipo de coloración:

- Tinción negativa – simple indirecta

Muestra :

- Cultivo puro – hongo levaduriforme


- Penicilium

Tipo de colorante:

- Básico


-

Coloración simple – Azul LactofenolMuestra :

- Cultivo puro




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- Célula eucariota, bacilos, diplococos

Tipo de colorante:

- Básico


-

Coloración simple – Azul de MetilenoMuestra :

- Hisopado bucal


- Célula eucariota, diplococos

lanzeolados, bacilos curvos

Tipo de colorante:

- Básico


-

Coloración simple – Azul de MetilenoMuestra :

- Hisopado bucal


- Sarcina, estreptococo

Tipo de colorante:

- Básica


- Coloración simple – Azul de Metileno

Muestra :- Hisopado bucal


- Diplococos

Tipo de colorante:

- Básica



Muestra :

- Hisopado bucal

Nombre del microorganismo:- Célula eucariota, estafilococo ,

diplococo, coco, bacilo

Tipo de colorante:

- Básica



Muestra :

- Hisopado bucal

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