Instituto de Biotecnologa Biotecnologa Microbiologa

Informe de Laboratorio N 1Microbiota normal y ambiental

Nombres: Allan Felipe Arenas Cataln Prof. Laboratorio: Nicole Trefault Fecha: 22-05-2012

1. INTRODUCCION

La microbiologa es el estudio de los microorganismos, el cual analiza su biologa, su ecologa, su utilizacin en la produccin de bienes agrcolas o industriales y su actividad en la alteracin y deterioro de dichos bienes.14

El cuerpo humano est formado por alrededor de 10 clulas, de las que slo aproximadamente el 10% son humanas, el resto son microorganismos asociados de los cuales la mayora no son patgenos. La microbiota normal puede ser muy abundante en el11

intestino grueso donde se alcanzan niveles de 10 microorganismos por gramo. Se denomina microbiota normal, flora normal o flora nativa al conjunto de microorganismos que viven de forma habitual en un cuerpo sano. Los lugares donde se encuentran pueden ser muy variados y en ellos desarrollan tareas beneficiosas para el ecosistema general del cuerpo. Su participacin normalmente esta en los procesos de digestin de alimentos y de sntesis de vitaminas en el intestino, la produccin del pH cido de la vagina o la proteccin competitiva frente a patgenos.

Por ende en la mayora de los casos, la interaccin entre la microbiota normal y el ser humano es beneficiosa; pero pueden producirse circunstancias en que esto cambie y la microbiota normal se torne patgena oportunista. Esta microbiota puede inducir una respuesta inmune en los tejidos lo que facilita el control de los microrganismo; en algunos casos la microbiota normal es esencial para el desarrollo de los tejidos, ya que, los estos aprenden a soportar y promover en ciertas ocasiones asociaciones con bacterias que resultan favorables. La microbiota transitoria o ambiental es aquella que llega a nuestra piel por el contacto directo con superficies contaminadas o por aerosol. Esta microbiota puede estar constituida por bacterias, virus, parsitos u hongos, causantes en muchos casos de toxicoinfecciones alimentarias como Escherichia coli, Salmonella spp., Shigella spp., Clostridium perfringens, Giardia lamblia, huevos de Taenia, Norovirus, virus de la hepatitis A, as como de otros microorganismos de origen fecal.

Tambin existe la Microbiota ambiental es donde encontramos todos los microorganismos presentes en el ambiente y en todo objeto que nos rodea. (Montao N, Sandoval A. Camargo S, Snchez J)

Objetivos: Practicar pruebas rpidas para la identificacin de cocos Gram positivos y bacilos Gram negativos comunes en muestras ambientales Reconocer alteraciones en los medios de cultivo, por la presencia de productos intermediarios, debido a la accin bacteriana

2. MATERIALES Y METODOS

2.1.MATERIALES

Asas de siembra Pipeta Pasteur Trulas estriles Placas de agar sangre Placas de agar mcConkey Placas de agar para dextrosa Placas de agar corriente Portaobjetos Cubreobjetos Azul de metileno/azul de lactofenol Batera de tincin de Gram Materiales para ensayo de catalasa, coagulasa y reactivo de kovacs Microscopios Aceite de inmersin Xilol, pao de Microscopio

2.2.METODO MICROBIOTA

AMBIENTAL

NORMAL

Se Tom una muestra de queso

Se tom una muestra de oreja

Se realiz el metodo de cultivo de microbiota, en agar mcConkey, sangre, nutritivo y papa dextrosa

Se realiz el metodo de cultivo de microbiota, en agar mcConkey, sangre, nutritivo y papa dextrosa

Se realiz analisis macroscopico

Se realiz analisis macroscopico

Se realiz analisis microscopico, utilizando la tecnica de tincion GRAM

Se realiz analisis microscopico, utilizando la tecnica de tincion GRAM

Se realiz pruebas bioqumicas, a partir de la tincin GRAM

Para Gram positivo se utiliz la prueba bioqumica Catalasa y Coagulasa

Para Gram negativo se tom una colonia aislada para ser luego resuspendida en un caldo corriente y a dicha suspensin se le realizo la prueba de Kovacs

3. RESULTADOS

El sembrado de microbiota ambiental en agar nutritivo y agar sangre, para su identificacin mediante la tincin GRAM, da como resultado luego de cultivar en varias placas que solo en algunas hubo crecimiento bacteriano y por ende se analizaron mediante un anlisis macroscpico (TABLA 1.)

MICROBIOTA AMBIENTAL/ ANALISIS

CRECIMIENTO DE COLONIAS

FORMA

ELEVACION BORDE SUPERFICIE

CARACTERES FISICOS

MUESTRA DE QUESO EN AGAR NUTRITIVO

POCO CRECIMIENTO

CIRCULAR

PLANA

LISO

LISA

COLOR OPACO

MUESTRA DE QUESO EN AGAR SANGRE

PRESENTACION CIRCULAR DE COLONIAS HEMOLISIS

PLANA

LISO

LISA

TRANSPARENTE BRILLANTE

Tabla1: Anlisis de microbiota ambiental extradas de queso, las cuales presenciaron crecimiento luego de ser cultivadas. El anlisis se basa en el crecimiento, forma, elevacin, borde, superficie y caractersticas fsicas de la colonia aislada de cada cultivo.

Luego de realizar el cultivo de microbiota ambiental, se realizo el cultivo de microbiota normal previamente extrada del meato auditivo de la oreja (FIGURA 1) en la cual se pudo observar en algunas placas un crecimiento bacteriano notorio el cual fue llevado al anlisis macroscpico para su eventual observacin.

FIGURA 1: Imagen donde se puede apreciar donde se encuentra el meato auditivo.

MICROBIOTA NORMAL/ ANALISIS

CRECIMIENTO DE COLONIAS

FORMA

ELEVACION

BORDE

SUPERFICIE

CARACTERE S FISICOS

MUESTRA DEL MEATO AUDITIVO (OREJA) EN AGAR NUTRITIVO MUESTRA DEL MEATO AUDITIVO (OREJA) EN AGAR SANGRE

BASTANTE CRECIMIENTO DE COLONIAS

CIRCULAR LEVANTADO

LISO

LISA

BRILLANTE

LEVANTADO BASTANTE CRECIMIENTO DE COLONIAS CIRCULAR LISO LISA OPACA

TABLA 2. Anlisis de microbiota normal extradas del meato auditivo de la oreja, las cuales presenciaron crecimiento luego de ser cultivadas. El anlisis se basa en el crecimiento, forma, elevacin, borde, superficie y caractersticas fsicas de la colonia aislada de cada cultivo.

Posteriormente las colonias extradas de queso y del meato auditivo, se llevaron al anlisis microscpico, el cual se basa en la tincin Gram para su eventual diferenciacin entre Gram positivo y Gram negativo. El primer anlisis fue hecho con la muestra de queso cultivada en agar sangre (FIGURA 2), la cual por el color rosado observado se puede deducir que la colonia es Gram (-).

FIGURA 2: Fotografa del anlisis con microscopia ptica sacada luego de la tincin Gram, en la cual se puede observar la coloracin rosada de estas bacterias, por lo cual se clasifica como Gram (-).

Luego se realizo el segundo anlisis microscpico con tincin Gram de las muestras de queso cultivadas en agar nutritivo (FIGURA 3)

FIGURA 3: Fotografa del anlisis con microscopia ptica sacada luego de la tincin Gram, en la cual se puede observar la coloracin rosada de estas bacterias, por lo cual se clasifica como Gram (-).

El tercer anlisis microscpico fue realizado a partir de la muestra extrada del meato auditivo de la oreja cultivada en agar nutritivo (FIGURA 4), en la cual se puede observar una muestra compleja, ya que se observan bacterias teidas de rosado que las clasificara en Gram (-) pero tambin se encuentran bacterias moradas que se clasificaran en Gram (+). En esta muestra se pudo observar una hemolisis parcial al momento de observar las placas cultivadas.

FIGURA 4: Fotografa del anlisis con microscopia ptica sacada luego de la tincin Gram, en la cual se puede observar bacterias teidas de rosado que corresponden a Gram (-) y bacterias moradas que corresponden Gram (+).

Por ultimo se realizo el anlisis microscpico con tincin Gram para la muestra del meato auditivo de la oreja cultivada en agar sangre (FIGURA 5), tambin se pudo observar que es una muestra compleja, ya que, se observan bacterias teidas de rosado que las clasificara en Gram (-) pero tambin se encuentran bacterias moradas que se clasificaran en Gram (+). En esta muestra no se pudo observar hemolisis al momento de observar las placas cultivadas.

FIGURA 5: Fotografa del anlisis con microscopia ptica sacada luego de la tincin Gram, en la cual se puede observar bacterias teidas de rosado que corresponden a Gram (-) y bacterias moradas que corresponden Gram (+).

Como resultado final luego de los exmenes bioqumicos, se pudo observar que la muestra del meato auditivo (Gram (+)) cultivado en agar nutritivo examinado con la prueba bioqumica Catalasa nos dio positivo; la siguiente muestra del meato auditivo cultivada en agar nutritivo pero ahora con la prueba bioqumica de Coagulasa nos da negativo por ende se puede deducir que hay presencia de un Staphylococcus cualquiera en la muestra del meato auditivo (TABLA 3). La otra muestra de queso como nos da Gram (-) se llev al ensayo de Kovacs que consiste en tomar una colonia aislada y resuspenderla en un tubo con caldo corriente. Para luego utilizar la suspensin para llevarla a dicho ensayo. Este ensayo nos dio negativo por ende se deduce que puede esta muestra de queso puede contener cualquier enterobacteria (TABLA 3).

Muestra

Cultivo

Catalasa

Coagulasa

Kovacs

Meato auditivo (Oreja) Meato auditivo (Oreja) Queso

Agar sangre

+

Agar nutritivo

-

Caldo nutriente

TABLA 3: En esta tabla se puede observar los resultados de las pruebas bioqumicas realizadas para cada muestra.

4. CONCLUSION

Como conclusin se puede destacar que se cumplieron todos los objetivos anteriormente descritos, ya que, se pudo realizar los anlisis macroscpicos y microscpicos de las muestra de microbiota ambiental extradas de queso y microbiota normal extrada del meato auditivo (oreja). De estas muestras se pudo, diferenciar si se tenan bacterias Gram (-) o Gram (+) y analizarlas mediante microscopia ptica. Tambin se pudo observar que hubieron muestras complejas, que al momento de ser analizadas con microscopia ptica se poda ver tanto bacterias Gram (+) como Gram (-), pero esto no influyo al momento de ser clasificadas. En los ltimos aos se ha incrementado la utilizacin de microorganismos en aplicaciones Biotecnolgicas; esto es, en la utilizacin de nuestros conocimientos sobre la biologa molecular y la gentica de los microorganismos para poder dirigir en ellos la produccin de compuestos de inters (frmacos, anticuerpos) y para el desarrollo de tcnicas bioqumicas de diagnstico molecular, por ejemplo.

5. DISCUSION

Las muestras de las placas que mostraron crecimiento se llevaron pruebas bioqumicas para determinar qu tipo de microorganismos son: Oreja cultivada en agar nutritivo: catalasa (+) se puede deducir que es Staphylococcus o Micrococcus Oreja en agar nutritivo: Coagulasa (-) se puede determinar que es un Staphylococcus Queso cultivado en caldo nutriente: Kovacs (-) se puede determinar que hay ausencia de indol, por lo que son cualquier tipo de entero bacterias excepto E.coli

La muestra del meato auditivo (oreja) se determino como muestra compleja, ya que al momento de ser analizada se pueden ver bacterias teidas con Gram (+) y Gram (-), esto pudo suceder por una mala tcnica al momento de practicar la tincin con Gram o alguna contaminacin en los pasos a seguir.

6. BIBLIOGRAFIA

Disponible en http://www.unavarra.es/genmic/microgral/01_morfologia_y_estructura.pdf. Microbiologa clnica. Disponible en http://www.consumer.es/seguridad-alimentaria/sociedad-yconsumo/2003/07/22/7364.php. La importancia del lavado de manos. Disponible en http://www.unavarra.es/genmic/microgral/01_morfologia_y_estructura.pdf Microbiologa clnica. Pg. 3, Introduccin, morfologa y estructura de los microrganismos. Reaccin visceral: Efectos ambientales sobre la Microbiota humana, Salud pblica Mx vol.51 no.4 Cuernavaca July/Aug. 2009 Montao N, Sandoval A. Camargo S, Snchez J. Los microorganismos: Pequeos gigantes. Elementos 77(2010) 15-23