[footnoteRef:1] [1: ]

Inmovilizacin de enzimas

Buitrn L.; Campozano V.; Gualn I.*BIOTECNOLOGA AGROINDUSTRIAL IIGrupo: 2*Escuela Politcnica Nacional, Facultad de Ingeniera Qumica y AgroindustriaQuito, Ecuador e-mail: lucia.buitron@epn.edu.ec, vania.campozano@epn.edu.ec, ines.gualan@epn.edu.ec

Resumen: El proceso de inmovilizacin de enzimas, es una estrategia que facilita la obtencin de enzimas insolubles reteniendo su actividad cataltica para poder ser utilizada y reducir los costos de produccin de estas enzimas. En la prctica se tuvo como objetivo inmovilizar papana, teniendo como mtodo, la Cromatografa de Gel. Para ello se utiliz una columna con gel de Sepharosa como fase estacionaria y tampn fosfato. Tambin se utiliz BApNA p para visualizar la existencia de protena retenida en la columna. Las muestras obtenidas cada 3 minutos se analizaron tomando como medida 280nm, para el primer conjunto de datos y 400 nm para las muestras que reaccionaron con BApNA, para determinar la actividad cataltica de la protena. Con los datos obtenidos se realiz un cromatograma para determinar la inmovilizacin y retencin de la actividad enzimtica. Palabras clave: Cataltica, Inmovilizacin, BApNA, cromatograma.

Abstract: The enzyme immobilization process , is a strategy that facilitates obtaining insoluble enzyme retaining its catalytic activity to be used and reduce the production costs of these enzymes . In practice it aimed immobilizing papain , with the method, Gel Chromatography . For this a column with Sepharose gel as stationary phase and phosphate buffer was used . BApNA p is also used to visualize the existence of protein retained in the column. The samples obtained were analyzed every 3 minutes as measured 280nm , for the first dataset and 400 nm for samples BApNA reacted , to determine the catalytic activity of the protein. With the data obtained a chromatogram was performed to determine the immobilization and retention of enzyme activit .Keywords : Catalytic , Immobilization , BApNA , chromatogram.1. MATERIALES Y METODOLOGA

Para la prctica se inici con preparar la columna, en primer lugar se tomaron 100mL.de gel de Sepharosa suspendido en etanol. Utilizando un sistema de filtracin de vaco se lav el gel con agua destilada con agitacin constante por 10 minutos, posteriormente se sigui lavando con tampn fosfato 50 mM y se dej reposar. Una vez limpio el gel se coloc lentamente el gel en la columna, evitando que se compacte. Se dej reposar por 30 minutos y coloc el resto del gel y finalmente se sell la columna. Para la inmovilizacin de la enzima se dej pasar el tampn por la columna hasta eliminar residuos de otras enzimas para luego alimentar con la papana, al mismo tiempo se debe tomar muestras 30 muestras, una cada 30 segundos. Al terminarse la enzima, se alimenta la columna con BApNA 15mg/mL, la cual al reaccionar con la papana retenida en el gel, cambiar de coloracin. Para poder reutilizar la sepharosa, lavar con tampn fosfato.

Finalmente llevan las muestras a analizar con el espectrofotmetro para determinar la absorbancia de cada una de las muestras. Algunas muestras al encontrarse muy concentradas, se disolvieron para poder medir la absrvancia a 400nM.