Microbiología I

Nombre del trabajo:

Práctica # 6“Identificación de Staphyloccus aureus”

Campus: UVM Coyoacán

Carrera: QFBT

Semestre: 3º Semestre Grupo: 02

Fecha de entrega: 19 de Noviembre de 2013

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Objetivo

Aplicar las pruebas bioquímicas de la coagulasa y catalasa como medios para identificación para la identificación de Staphyloccus aureus.

Hipótesis

Se podrá indentificar Staphyloccos aureus utilizando pruebas bioquímicas como coagulasa y catalasa. Sera positiva a la prueba de catalasa al liberar agua y oxígeno y la de coagulasa formando gránulos blancos.

Introducción

Staphyloccus aureus causa enfermedad mediante la producción de toxina o a través de la invasión directa y la destrucción del tejido. Las manifestaciones clínicas de algunas enfermedades estafilocócicas se deben casi exclusivamente a la actividad de la toxina, intoxicación, mientras que otras afecciones son consecuencia de la proliferación de los microorganismos, la cual da lugar a la formación de abscesos y la destrucción tisular, por ejemplo las infecciones cutáneas, endocarditis, neumonía, empiema, osteomielitis y artritis séptica.2

Los estafilococos pueden producir enfermedad a través de su capacidad para multiplicarse y diseminarse ampliamente en los tejidos y a través de su producción de muchas sustancias extracelulares. Algunas de estas sustancias son enzimas; otras se consideran toxinas, aunque pueden funcionar como enzimas. Muchas de las toxinas están sujetas al control genético de los plásmidos; algunas pueden estar sujetas a control cromosómico y extracromosómico; en el caso de otras no está bien definido el mecanismo de control genético.3

Coagulasa y factor de aglutinaciónS. aureus produce coagulasa, una proteína semejante a una enzima que coagula el plasma oxalado o citratado. La coagulasa se une a la protrombina; en conjunto pueden volverse enzimáticamente activas e iniciar la polimerización de fibrina. La coagulasa puede depositar fibrina en la superficie de los estafilococos, alterando tal vez su ingestión por las células fagocíticas o su destrucción dentro de tales células. La producción de coagulasa se considera sinónimo del potencial patógeno invasor.

Además que actúa en conjunto con una serie de factores sanguíneos para coagular el plasma. La coagulasa contribuye a la formación de paredes de fibrina alrededor de las lesiones estafilocócicas, lo que les ayuda a persistir en los tejidos. Asimismo, la coagulasa provoca depósito de fibrina en la superficie de los estreptococos, lo que ayuda a protegerlos de la fagocitosis o de la destrucción dentro de las células fagociticas.3

CatalasaLos aerobios y los anaerobios facultativos a menudo cuentan con los sistemas metabólicos enumerados más adelante, en tanto por lo común las bacterias anaerobias no lo hacen, se protegen de estos productos por la presencia de superóxido dismutasa.

1) Sistemas de citocromo para el metabolismo de O2.

2) Superóxido dismutasa, que cataliza la siguiente reacción:O− 2 + O2

− + 2H+ → H2O2 + O2

3) Catalasa, que cataliza la siguiente reacción:2H2O2 → 2H2O + O2

Los estafilococos producen catalasa, la cual convierte el peróxido de hidrógeno en agua y oxígeno. La prueba de catalasa diferencia los estafilococos, que son positivos, de los estreptococos, que son negativos.3

Pruebas diagnósticas de laboratorio

Prueba de la catalasaEsta prueba se utiliza para detectar la presencia de enzimas citocromo oxidasa. Se coloca una gota de una solución de peróxido de hidrógeno al 3% en un portaobjetos y se aplica una pequeña cantidad del crecimiento bacteriano en la solución. La formaciónde burbujas (liberación de oxígeno) indica una prueba positiva.3

Prueba de la coagulasaEl plasma de conejo (o humano) citratado diluido 1:5 se mezcla con un volumen igual de caldo de cultivo o del cultivo proveniente de colonias crecidas en agar y se incuba a una temperatura de 37°C. Se incluye como control un tubo de ensayo con plasma mezclado con caldo estéril. Si se forman coágulos en un lapso de 1 a 4 h, la prueba es positiva.3

MétodoPreparación de Medio de Cultivo

Se preparó medio de culivo estafilococos 110, se pusó a ebullición.

Se esterilizó al autoclave por 30 minutos a 121 C.⁰Se pasó a cajas petri y se esperó a que solodifique y se guardo en refrigeración.

Se tomaron muestras realizando un frotis de la cavidad nasales, oreja, piel, garganta, mano, cuello.

Se realizó el sembrado en las cjas, de la siguiente manera. Se empiezó del contorno de la caja de manera circular y posteriormente se realizó un estriado uniforme en la caja.

Se dejó incubar por 48 horas a 37 C.⁰Se realizan observaciones .

Prueba catalasa

Prueba Coagulasa

Prueba en porta objetos

Se transfirió una porción con la asa bacteriologica la colonia aislada en la superficie de un

porta objetos.

Se añadieron 2 gotas de peroxido de hidrogeno al 3%.

Se anotaron las observaciones

Se colocó una gota de agua destilada o

solución salina fisiológica estéril sobre un portaobjetos.

Se emulsionó suavemente utilizando

el asa bacteriologica.

Se colocó una gota de suero junto a la

suspensión bacteriana.

Se inclinó el portaobjetos hacia uno

y otro lado.

Se realizaron las observaciones.

Prueba coagulasa en tubo

Resultados

Resultado obtenido DescripciónEn la figura 1 se obtuvo una colonia abundante que presentó las siguiente características:Coloración: amarillaConsistencia: cremosaMorfología: circularSuperficie: convexaMargen: redondo Esta muestra fue tomada de la nariz.

Medio Estafilococo 110: el color del medio es ámbar claro.

En la figura 2 se observa el crecimiento colonias muy parecidas a las de la figura 1, solo que en menor cantidad.Este resultado se presentó en la mayoría de las muestras tomadas de oreja, piel, garganta, manos y cuello.

Se colocó 1ml de suero sanguineó en un

tubo estéril.

Se añadió 0.5mL de la colonia obtenida. Se mezcló suavente.

Se colocaron los tubos en baño de agua a

37 C. ⁰

Se hicieron las observaciones.

Figura 1 Figura 2

Cuadro 1- Características de la colonia obtenida.

Pruebas BioquímicasPrueba catalasa Observaciones

Se tomó una porción de la colonia amarilla en la figura 3, se observó que al momento de agregar el peróxido de hidrogeno, inmediatamente había la aparición y producción de burbuja de gas habiendo una efervescencia.

Prueba Coagulasa ObservacionesDespués de haber estado en el baño maría.Figura 4, se observa una precipitación blanca con pequeños coágulos blancos en el suero.Se confirmó la prueba de coagulasa en porta objetos y se obtuvo el mismo resultado. Con la formación de pequeños coágulos blancos.

DiscusiónDe la colonia obtenida de la muestra fue tomada de la nariz al compararla con Staphyloccos aureus, cuadro 4, podemos observar las siguientes semejanzas: en su coloración amarilla, la consistencia que presenta la colonia siendo cremosa, morfología circular con una superficie convexa, teniendo un margen redondo, además que Staphyloccos aureus es selectivo en medios Baird Parker Medio, Manitol Salado Agar, o Estafilococo Medio 110. (prescoot).5 Por las características mencionas podemos decir que existe una gran posibilidad que sea Staphyloccos. Además que esta bacteria la podemos encontrar en las mucosas, piel, lesiones, cavidad nasal, brazos, manos, cara, tracto intestinal y en alimentos.2

Colonia obtenida Colonia Comparativa

Medio :Staph 110 Staphyloccos aureusMedio: Staph 110

Figura 3

Figura 4

Cuadro 2- Resultados obtenidos de la prueba catalasa

Cuadro 3- Resultados obtenidos de la prueba coagulasa.

Cuadro 4 - Comparación de la colonia obtenida con S. aureus.

Para poder afirmar de que realmente que sea Staphyloccos aureus, fue necesario realizar pruebas bioquímicas como coagulasa y catalasa, que se presentan en el cuadro 2 y 3.

En la prueba catalasa, al presentar efervescencia la colonia, se dice que es catalasa positiva. Es sucedió porque dicha bacteria contiene una enzima llamada catalasa que es una hemoproteína que se descompone con el peróxido de hidrogeno produciendo una efervescencia que es el desprendimiento de oxígeno y agua. Además la catalasa es importante, ya que la mayoría de las bacterias anaerobias y aerobias descomponen el peróxido de hidrogeno y al acumularse en grandes cantidades mata a las células bacterianas.1 La determinación de presencia o ausencia de catalasa resulta útil en el área de bacteriología, para diferenciar colonias de estreptococos, que son catalasa negativos, de estafilococos o micrococos.En la prueba coagulasa, por los resultados obtenidos de cuadro 3, al obtener coágulos, es positiva. Esto ocurre debido a la composición de la bacteriana que contiene una proteína, que se une al fibrinógeno y lo convierte en fibrina insoluble. Lo que ocurre que Staphyloccus aureus, se agreguen y formen grupos. Es importante señalar que esta prueba funciona in vivo produciendo una barrera en el sitio de la infección estafilocócica. La detección de la proteína constituye la prueba de identificación principal de Staphyloccus aureus. 2

Con los resultados obtenidos de las pruebas bioquímicas podemos afirmar, que efectivamente obtuvimos Staphyloccos aureus, ya que las características de esta bacteria es que son cocos grampositivos, catalasa- positivos dispuestos en cúmulos, y que están caracterizadas por presentar coagulasa. Vemos que por su componente estructural, se adhieren a los tejidos del huésped como la piel y la mucosa.3 La información confirma, ya que las muestras hechas fueron de estas áreas de cuerpo. Las enfermedades que ocasiona S. areus es por las toxinas que la producen. Es de importancia clínica, debido a que causan infecciones como infecciones cutáneas, foliculitis, carbunco, artritis séptica, neumonía2

ConclusiónSe pudó indentificar Staphyloccos aureus por las características que presentó la colonia como su coloración, consistencia y morfología. Además que el medio de cultivo es selectivo para Staphyloccos aureus, al realizar las pruebas bioquímicas como coagulasa y catalasa fueron positivas, si confirmando la bacteria Staphyloccos aureus.

Referencias1. Romero C. R. (2007). Microbiología y Parasitología humana, 3a Edición, Editorial

Panamericana. Pág. 428-429, 432,433-434.2. Murray R.P, Rosenthal K.S. (2009). Microbiología Médica, 6a Edición, Editorial

ELSEVIER MOSBY, Pg. 209-215.3. Jawetz, Melnick y Adelberg (2011), Microbiología médica, 25ª Edición, Editorial Mc

Graw Hill, Pg. 12, 69 154,187-189, 273, 296.4. Recuperado el 18 de Noviembre de 2013:

http://microbelibrary.org/home5. Recuperado el 18 de Noviembre de 2013:

http://britanialab.com.ar/esp/productos/b02/estafilococomedio110.htm