Prctica 1:El Microscopio ptico.Observacin Microscpica de los Organismos

Tipos de microscopiosTipos de microscopios

Microscopio ptico

Campo luminoso

Campo oscuro

Contraste de fases

Interferencia

Fluorescencia

Polarizacin

Microscopio electrnico

de Transmisin (TEM)

de Barrido (SEM)

Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso

! El campo de observacin se encuentra iluminado; los microorganismos aparecen ms oscuros que el fondo debido a que absorben luz.

! Partes del microscopio ptico.

! Poder de resolucin: capacidad de una lente para mostrar dos objetos muy cercanos como distintos, discretos y separados.

! Apertura Numrica (AN): expresin matemtica que describe la forma en que la luz es concentrada por el condensador y captada por el objetivo. AN = n x sen

n = ndice de refraccin del medio entre las lentes y la muestra (1.0 para el aire; 1.56 para el aceite de inmersin).

= ngulo formado por el eje ptico y los rayos de luz ms externos que son captados por el objetivo

! Amplificacin: La amplificacin de un microscopio es el producto de nmero de aumentos del objetivo por los del ocular. Aumentos tiles: x1000 a x2000

Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso

! Lmite de resolucin (d): distancia ms pequea por la cual dos objetos pueden estar separados y ser todava distinguibles como dos objetos separados." d, depende de la AN y de la longitud de onda de la luz

empleada:

d = / (AN obj + AN cond) = / (2AN)

" Formas de reducir el lmite de resolucin:#Disminuyendo la longitud de onda.#Aumentando la Apertura Numrica.

"El lmite de resolucin mximo que se consigue en los microscopios de campo luminoso se sita en 0.22-0.25 m.

Microscopio de campo luminosoMicroscopio de campo luminoso! rea de campo: dimetro de la parte de la preparacin

que se est viendo al microscopio.! Profundidad de campo: espesor de la preparacin

enfocada en cualquier momento (mayor a pequeos aumentos).

! Distancia focal: es la relacin existente entre la longitud del tubo del microscopio empleado y la amplificacin usada en un momento dado.

DF Longitud del tuboAmplificacion

=

! Distancia de trabajo: espacio existente entre el punto ms bajo del objetivo y el objeto enfocado.

! Caractersticas de los objetivos. Resumen.

Observacin de muestras al microscopio ptico

Epidermis de cebolla Hoja de musgo Pulpa de tomate

Microscopa de campo luminoso

Profase

Anafase

Micrografa de un squash de meristemo apical radical de cebolla teido con orcena mostrando distintas fases de la mitosis.

Metafase

Telofase

Oculares

Portaobjetos cruzado acoplableBrazo

Tubo binocular

Revolver

ObjetivosPlatina portaobjetos

CondensadorMandos movimiento de la platina

Diafragma irisFiltro

Iluminacin por proyeccinBase o pie

Mandos de ajuste fino y grueso

Fotografa del cabezal binocular de un microscopio.

Vista lateral del revolver con los objetivos enroscados

Vista inferior del revolver, pieza donde se enroscan los objetivos de un microscopio.

Fotografa de la platina. Se observan la platina mvil, los tornillos de movimiento de la platina mvil, y los tornillos macro y micromtrico.

Fuente luminosa

Platina mvil

Platina

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Tornillos macro y micromtrico

Objetivos

Condensador

Fotografa lateral de la platina. Se observan la platina mvil, los tornillos de movimiento de la platina mvil, y los tornillos macro y micromtrico.

Fuente luminosa

Platina mvil

Platina

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Tornillos macro y micromtrico

Condensador

Detalle del condensador y la fuente luminosa.

Condensador

Fuente luminosa

Platina

Diafragma iris

Tornillos de movimiento de la platina mvil

Amplificacin en un sistema de dos lentes

Condensador

Objetivo

Ocular

Ojo Muestra

Imagen realformada porel objetivo(invertida)

Imagenvirtual

Re

f

r

a

c

c

i

n

d

e

l

a

l

u

z

a

t

r

a

v

s

d

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y

d

e

l

a

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i

t

e

d

e

i

n

m

e

r

s

i

n

-

1

Lente objetivo

Condensador

PortaobjetosAireAceite

Eje ptico

Rayos de luz refractados

Re

f

r

a

c

c

i

n

d

e

l

a

l

u

z

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t

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a

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s

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e

l

a

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e

y

d

e

l

a

c

e

i

t

e

d

e

i

n

m

e

r

s

i

n

-

2

Lente objetivo

CondensadorPortaobjetos

Cubreobjetossobre la muestra

Eje ptico

Rayos de luz refractados

Aire Aceite

Lente frontal del objetivo

La apertura numrica

Eje ptico

= ngulo que formanel rayo de luz msexterno captado porel objetivo y el ejeptico del mismo.

Fuente de luz

Porta de vidrio

Objetivo delmicroscopio

Lente frontal del objetivo

Determinacin de la apertura numrica

AN = n x sen Ejemplos:Objetivo seco:AN = 1.00 x sen 40AN = 0.64 (1)

Aire, n = 1Aire, n = 1

n = 1.52

= 40 = 58

Aceite, n = 1.52

Porta de vidrio n = 1.52

Aire, n = 1

Poder de resolucin El ojo humano puede separar puntos distantes 0.25 mm 0.25 mm

El microscopio ptico puede separarpuntos de 0.25 m de separacn

0.25 m

El microscopio electrnico puede sepa-rar puntos de una distancia inferior a 5unidades Angstrom.

5 A

Profundidad de campo

10x 1 m

P.c.

7 m 40x 1 m

P.c.

1.3 m

100x 1 m

P.c.

0.5 m

rea de campo

Aspecto del rea de campo de una muestra. Observarcomo a medida que la amplificacin aumenta, el objetotambin lo hace, pero el rea del campo disminuye.

x4

3.5 mm

x10

1,5 mm

x40

0.35 mm

Los objetivos

Aumentos: x 5, x10, x20, x45, x100Apertura Numrica: 0.12, 0.17, 0.54,

0.65, 1.3Longitud del tubo: 160 mmGrosor del cubreobjetos: 0.18 mm

Caractersticas tpicas de los objetivos

ObjetivosSeco de pocos

aumentos(10 x)

Seco de muchosaumentos

(40 x)De inmersin

(100 x)Amplificacin

(con un ocular de 10 x) 100 aumentos 400 aumentos 1000 aumentosDistancia focal 16 mm 4 mm 1.8 mm

Distancia de trabajo 4 - 8 mm 0.2 - 0.6 mm 0.11 - 0.16 mmApertura Numrica 0.25 0.85 1.25

Lmite de resolucin 1.10 m 0.32 m 0.22 mProfundidad de campo 7.0 m 1.3 m 0.5 m

rea de campo 1.5 mm 0.35 mm 0.17 mm

Imagen 1

Portaobjetos

Imagen 2

Gota de agua

Imagen 3

Epidermis

Imagen 4

Epidermis

Imagen 5

Cubreobjetos

Imagen 6

Presionar el cubreobjetos

Clulas epidrmicas de cebolla (Allium sp)

Ncleos

Pared celular

Observacin al microscopio (x40)

Imagen 7

Colorantes

Imagen 8

Verter una gota de colorante en el borde del cubreobjetos

Imagen 9

Con ayuda de una tira de papel de filtro hacer pasarel colorante a travs de la muestra por capilaridad

Imagen 10

Musgo

Gota de agua

Imagen 11

Coger una hojita con las pinzas

Gota de agua

Imagen 12

Colocar la hojita encima de la gota

Imagen 13

Colocar un cubreobjetos y aadir msagua si es necesario

Imagen 14

Pulpa del tomate

Gota de agua

Imagen 15

Pulpa de tomate

Imagen 16

Poner un cubre y presionar ligeramente

Imagen 18

Aadir una gota de colorante

Adsorber con una tira de papel