GRUPO: LOS RENOVADORES INFORMES PRCTICAS DE LABORATORIO BOGOT (3 DIAS)

INTRODUCCION El laboratorio de microbiologa constituye un medio de trabajo el cual est diseado para la investigacin o el anlisis de diferentes tipos de muestras por parte del personal de laboratorio, puede representar un riesgo potencial de adquirir enfermedades infecciosas. En los informes publicados hasta hoy por el CDC Centro de Control y Prevencin de Enfermedades se describen algunos casos que se han presentado en diferentes laboratorios del mundo, principalmente por el descuido de personal del laboratorio o por la utilizacin de tcnicas inadecuadas en la manipulacin de materiales infecciosos, se abarcar los riesgos y prevenciones que debemos tomar para iniciar las prcticas de laboratorio

Para la observacin de los microorganismos es necesario utilizar el microscopio ptico que aumenta la imagen de los objetos que no son visibles a simple vista. El microscopio es un equipo que nos permite distinguir la morfologa, organeros, colores y dems estructuras de algunos microorganismos, aunque no a un nivel de clasificacin taxonmica especfica, nos permite explorar ms de cerca el maravilloso mundo de lo diminuto y hacer uso de esto, para reconocer los organismos indicadores en los diferentes ecosistemas y sistemas contaminados. El microscopio adems de aumentar la imagen de los objetos y hacer evidentes muchas cosas que a simple vista no notaramos, sirve para hacer mediciones de objetos y observaciones con un mayor detalle

El da lunes 24 de octubre ingresamos al CENTRO DE GESTION INDUSTRIAL SENA a las 7:00 am, en compaa de la instructora CINTYA COLEY y de la Microbiloga encargada del laboratorio NOHORA VALENCIA, quien nos ense las instalaciones del centro y nos do las debidas indicaciones de bioseguridad para ingresar al laboratorio. Los diferentes procedimientos que se llevaron a cabo el primer da de laboratorio, fue el reconocimiento de los equipos de la rea como el autoclave, cheiker, cuentas colonias, cmara de flujo laminar, incubadora, etc. Estos son los procedimientos que se realizan en las aulas de clases.

AUTOCLAVE: Es un recipiente metlico de paredes gruesas con un cierre hermtico que permite trabajar a alta presin para realizar una reaccin industrial, una coccin o una esterilizacin con vapor de agua. Su construccin debe ser tal que resista la presin y temperatura desarrollada en su interior. La presin elevada permite que el agua alcance temperaturas superiores a su punto de ebullicin. La temperatura y el vapor actuando conjuntamente producen la coagulacin de las protenas de los microorganismos, entre ellas las esenciales para la vida y la reproduccin de estos, llevando as a su destruccin.

CHEIKER: CUENTAS COLONIAS: Este equipo es esencial en los laboratorios clnicos, especialmente para el conteo de colonias en microbiologa y bacteriologa

Caractersticas: Lupa ecualizadle incorporada a 7.5 optaras Escala milimtrica, simtrica Control electrnico para intensidad de luz Utilizacin cajas Petri hasta 11 cms.

El equipo consta de las siguientes partes. Pulsador izquierdo, de conteo Pulsador derecho de borrar Pantalla de visualizacin digital de conteo Pantalla milimtrica, simtrica Lupa incorporada ecualizadle

CMARA DE FLUJO LAMINAR: Una cabina de flujo laminar, cmara de flujo laminar o campana de flujo laminar es un receptculo en forma generalmente prismtica con una nica cara libre (la frontal) que da acceso al interior, donde se localiza la superficie de trabajo, que normalmente permanece limpia y estril.

INCUBADORA: Se denomina incubadora a dispositivos de diferente tipo que tienen la funcin comn de crear un ambiente con la humedad y temperatura adecuadas para el crecimiento o reproduccin de seres vivos.

Todo esto lleva a que se haga necesario para el entendimiento por parte del aprendiz de Ingeniera Ambiental y Sanitaria, un modelo detallado de las distintas experiencias propuestas para las prcticas de Laboratorio y de esta forma llevar de manera ordenada los conocimientos que le sern necesarios para el desarrollo tanto de la asignatura como de la carrera. Es esencial para el desarrollo de la asignatura la observacin y experimentacin por parte de los aprendices, adems de que todo lo estipulado sea totalmente comprendido. De esto se desprende importancia de adquirir los conocimientos qumicos esenciales son las bases que ayudaran al aprendiz su evolucin investigativa y obtener los conocimientos que son fundamento por supervisor del personal, y por ltimo, del propio personal del laboratorio.

LUNES 24 LABORATORIO ELENMEYER: El matraz o frasco de Erlenmeyer es un frasco transparente de forma cnica con una abertura en el extremo angosto, generalmente prolongado con un cuello cilndrico, que suele incluir algunas marcas. Por su forma es til para realizar mezclas por agitacin y para la evaporacin controlada de lquidos; adems, su abertura estrecha permite la utilizacin de tapones. El matraz de Erlenmeyer no se suele utilizar para la medicin de lquidos ya que sus medidas son imprecisas 1861.

VIDRIO DE RELOJ: Es una lmina de vidrio en forma circular cncava-convexa. Se llama as por su parecido con el vidrio de los antiguos relojes de bolsillo. Se utiliza en qumica para evaporar lquidos, pesar productos slidos o como cubierta de vasos de precipitados, y contener sustancias parcialmente corrosivas. Su utilidad ms frecuente es pesar muestras slidas; aunque tambin es utilizado para pesar muestras hmedas despus de hacer la filtracin, es decir, despus de haber filtrado el lquido y quedar solo la muestra slida.

El vidrio reloj se utiliza tambin en ocasiones como tapa de un vaso de precipitados, fundamentalmente para evitar la entrada de polvo, ya que al no ser un cierre hermtico se permite el intercambio de gases.

PROBETA O CILINDRO GRADUABLE: Es un instrumento volumtrico, que permite medir volmenes considerables con un ligero grado de inexactitud. Sirve para contener lquidos. Est formado por un tubo generalmente transparente de unos centmetros de dimetro, y tiene una graduacin (una serie de marcas grabadas) desde 0 ml (hasta el mximo de la probeta) indicando distintos volmenes. En la parte inferior est cerrado y posee una base que sirve de apoyo, mientras que la superior est abierta (permite introducir el lquido a medir) y suele tener un pico (permite verter el lquido medido). Generalmente miden volmenes de 25 50 ml, pero existen probetas de distintos tamaos; incluso algunas que pueden medir un volumen hasta de 2000 ml.

MAYA DE ASBESTO: Es una tela de alambre de forma cuadrangular con la parte central recubierta de asbesto, con el objeto de lograr una mejor distribucin del calor. Se utiliza para sostener utensilios que se van a someter a un calentamiento y con ayuda de este utensilio el calentamiento se hace uniforme.

VASO PRECIPITADO:

Es un recipiente cilndrico de vidrio fino que se utiliza muy comnmente en el laboratorio, sobre todo, para preparar o calentar sustancias y traspasar lquidos. Son cilndricos con un fondo plano; se les encuentra de varias capacidades, desde 1 ml hasta de varios litros. Normalmente son de vidrio o de goma aqullos cuyo objetivo es contener gases o lquidos. Tienen componentes de tefln u otros materiales resistentes a la corrosin. Suelen estar graduados, pero esta graduacin es inexacta por la misma naturaleza del artefacto; su forma regular facilita que pequeas variaciones en la temperatura o incluso en el vertido pasen desapercibidas en la graduacin. Es recomendable no utilizarlo para medir volmenes de sustancias, ya que es un material que se somete a cambios bruscos de temperatura, lo que lo descalibra y en consecuencia nos entrega una medida errnea de la sustancia.

UN AGITADOR: Es un instrumento, usado en los laboratorios de qumica, consiste en una varilla regularmente de vidrio que sirve para mezclar o revolver por medio de la agitacin de algunas sustancias.

Tambin sirve para introducir sustancias lquidas de alta reaccin por medio de escurrimiento y evitar accidentes. Existen diferentes tipos de agitadores dependiendo de la aplicacin pueden ser con parrilla o simples, y de diferentes velocidades.

TRPODE: Es un aparato de tres partes que permite estabilizar un objeto. Se usa para evitar el movimiento propio del objeto. En Qumica y en laboratorios, se utiliza cuando no se tiene el soporte universal para sostener objetos con firmeza. Es ampliamente utilizado en varios experimentos. La finalidad que cumple en el laboratorio es solo una, ya que su principal uso es como herramienta de sostn a fin de evitar el movimiento. Sobre la plataforma del trpode se coloca una malla metlica para que la llama no d directamente sobre el vidrio y se difunda mejor el calor.

FILTRO: Es un elemento que discrimina una determinada frecuencia o gama de frecuencias de una seal elctrica que pasa a travs de l, pudiendo modificar tanto su amplitud como su fase.

MECHERO: Es un instrumento utilizado en laboratorios cientficos para calentar o esterilizar muestras o reactivos qumicos.

TUBO DE ENSAYO. Tuvo cilndrico pequeo utilizado en la contencin de muestras lquidas

CAJAS PETRI: Es un recipiente redondo, de cristal o plstico, con una cubierta de la misma forma que la placa, pero algo ms grande de dimetro, para que se pueda colocar encima y cerrar el recipiente, aunque no de forma hermtica. Es parte de la coleccin conocida como material de vidrio.

MICROSCOPIO: Es un instrumento que permite observar objetos que son demasiado pequeos para ser vistos a simple vista. El tipo ms comn y el primero que se invent es el microscopio ptico. Se trata de un instrumento ptico que contiene dos o ms lentes que permiten obtener una imagen aumentada del objeto y que funciona por refraccin.

PROCEDIMIENTO: Se mide 80cm de agua desmineralizada en un tubo de ensayo y se deposito en el enmeleyer seguidamente se peso 1.6 mg de agar nutritivo sobre un vidrio de reloj Se calienta sobre el mechero el agua a un trmino medio, inmediatamente se utilizo agar nutritivo, agitando hasta obtener la

mezcla deseada luego se baja el mechero y se procede a taparse el enmeleyer con papel craf, sellando con cinta adhesiva para ser llevado a esterilizar al autoclave durante 15 minutos

rea de esterilizacin En la caja de petri se realizo muestra de cabello, uas, frotis de garganta y una moneda, fue con el fin de identificar los diferentes microorganismos presentes en nuestro cuerpo y en el medio ambiente. La caja de Petri se dividi en 4 secciones bien marcada y la operacin fue realizada cerca al mechero ya que si no se hacia el agar se contaminaba, despus se lleva a la incubadora para inocular los microorganismos En 4 cajas de petri se adicionaron debidamente proporcionado el agar nutritivo, posteriormente retirado de la autoclave donde se solidificaron luego en las cajas petri teniendo la debida precaucin de no contaminarlas, fueron envueltos en papel craf marcadas debidamente para luego ser llevadas a la incubadora donde reposaron los cultivos por 48 horas.

OBSERVACIN EN EL MICROSCOPIO: Identificando las partes del microscopio se hizo el siguiente anlisis: Observamos una letra impresa de tamao pequeo en los poderes de aumento: 4x, 10x y 40x y 100x. Se observo el papel milimetrado donde se pudo detallar de forma precisa la cantidad de cuadros observados fueron 4mml y se utilizo una frmula para hallar el dimetro del rea del campo visual al 4x, 10x, 40x y 100x Donde los nmeros indicaran el poder de aumento y la equis (x) el tamao de objeto. FORMULA:

4x ACV ACV 31416. ( ACV ACV A 31416. (4) 12.5 mm

10x D1 4mm 4mm. 0.4 1.6m D2 A- CV 10x ACV ACV 40x D1 4mm 0, 4 ACV 40x ACV 2.01

DIA 2:

ANALISIS DE AGUA: OXIGENO DISUELTO: OD: Es la medida del oxgeno disuelto en el agua, expresado normalmente en ppm (partes por milln). La solubilidad del oxgeno en el agua depende de la temperatura: a mayor temperatura menos oxgeno se disuelve. La cantidad de oxgeno disuelto en agua para un cierto tiempo, expresado en ppm o mgL. ... Ver definicin Factor que indica la potencialidad de respiracin de los organismos acuticos. Su disminucin (ausencia de oxgeno) promueve procesos anaerobios, anulndose la probabilidad de actividades de fauna ictcola y otros seres acuticos.

Se podra decir que en todo lquido hay oxgeno disuelto en mayor o menor cantidad. El agua por ejemplo contiene a una temperatura de 20 C y una presin atmosfrica de 1013 mbar en estado saturado aproximadamente 9 mg/l de oxgeno. El etanol puede contener hasta 40 mg/l y la glicerina slo 2 mg/l. Todo lquido absorbe oxgeno hasta que la presin parcial de oxgeno existente tanto en dicho lquido como en la fase gaseosa en contacto con ste alcance un equilibrio. La concentracin actual de oxgeno depende de un nmero de factores, tales como temperatura, presin atmosfrica, consumo de oxgeno ocasionado por la biodegradacin de microorganismos o la produccin de oxgeno por algas. 1. 2. 3. 4. 5. Agregar 1ml de MnSO4 Agregar 1 ml de lcali-yoduro-azida(KOH KI NaNH2) Agitar 5 minutos Dejar en reposo 5 minutos Agregar 1 ml de acido sulfrico (H2SO4).Agitar todo hasta que quede completamente liquidoy desaparezca el slido. 6. Llenar el vaco de la bureta con un tiosulfato de sodio (NO2S2O3)

7. Utilizar un bioindicador llamado almidn del cual se deben agregar unas gotas de este en el erlemeyerhasta que la sustancia quede de color azul violeta. ALCALINIDAD:

ESCALA DEL PH:

14 (Bsico fucsia-hidrxido)

Rosado plido

7 neutro

0 acido (transparente)

COLORES DEL PAPEL INDICADOR: -BASICO: AZUL -NEUTRO: VERDE AMARILLO-NARANJA -ACIDO: ROSADO

-PH-CHIMETRO:

El pH-metro es un sensor utilizado en el mtodo electroqumico para medir el pH de una disolucin. La determinacin de pH consiste en medir el potencial que se desarrolla a travs de una fina membrana de vidrio que separa dos soluciones con diferente concentracin de protones. En consecuencia se conoce muy bien la sensibilidad y la selectividad de las membranas de vidrio delante el pH. Una celda para la medida de pH consiste en un par de electrodos, uno de calomel ( mercurio, cloruro de mercurio) y otro de vidrio, sumergidos en la disolucin de la que queremos medir el pH. La varita de soporte del electrodo es de vidrio comn y no es conductor, mientras que el bulbo sensible, que es el extremo sensible del electrodo, est formado por un vidrio polarizable (vidrio sensible de pH). Se llena el bulbo con la solucin de cido clorhdrico 0.1N saturado con cloruro de plata. El voltaje en el interior del bulbo es constante, porque se mantiene su pH constante (pH 7) de manera que la diferencia de potencial solo depende del pH del medio externo. El alambre que se sumerge al interior (normalmente Ag/AgCl) permite conducir este potencial hasta un amplificador.

CALIBRADO:

Como los electrodos de vidrio de pH mesuran la concentracin de H+ relativa a sus referencias, tienen que ser calibrados peridicamente para asegurar la precisin. Por eso se utilizan buffers de calibraje (disoluciones reguladoras de pH conocido)

SUGERENCIAS: Para que un acido se vuelva neutro se le debe agregar una base. Para que una base se vuelva acido se le agrega un acido Por ejemplo el hidrxido de calcio. 1. Adicionar fenolftalena: -un acido es transparente -un neutro es rosado plido -un bsico es fucsia

PUREZA: Significa que, de una muestra de determinado reactivo, solo cierto porcentaje es el reactivo puro mientras que el resto son impurezas. Por ejemplo una muestra de Cu de 80% de pureza significa que tan

solo 80 de cada 100 gramos de dicha muestra contienen cobre puro, los otros 20 gramos son de impureza. 1. Agregar 25 ml de agua potable 2. Hidrxido de sodio NaOH hasta el pH bsico es decir hasta que el papel nos quede de color azul violeta 3. Agregar indicadores: murexida, NET.: Negro adicionar 3 gotas

AGUA POTABLE : EDTA: Acido etilendiamino tetra actico -Con 1 ml de buffer de pH 10 -CaHMg: Rosado azul -Ca: morado a fucsia

PROCEDIMIENTO: 1. Agregar 1 ml de manganeso al agua potable., luego se le adiciona 1 ml de lcali-yoduro-azida. RTA: la solucin queda de color amarillo. 2. Se le agrega acido sulfrico, hasta que todas las burbujas se disuelvan. 3. Agregar en la bureta tiosulfato de sodio 4. Luego se le adiciona 50 ml de almidn hasta que la sustancia resulte con el color azul violeta 5. Luego goteamos la sustancia resultante con el lcali-yoduroazida hasta que la sustancia quede incoloro. -volumen 1: 4.2 ml -volumen 2: 6.3 ml

ACIDEZ Y ALCALINIDAD: La acidez de una sustancia es el grado en el que es cida. El concepto complementario es la basicidad. La escala ms comn para cuantificar la acidez o la basicidad es el pH, que slo es aplicable para disolucin acuosa. Sin embargo, fuera de disoluciones acuosas tambin es posible determinar y cuantificar la acidez de diferentes sustancias. Se puede comparar, por ejemplo, la acidez de los gases dixido de carbono (CO2, cido), trixido de azufre (SO3, cido ms fuerte) y di nitrgeno (N2, neutro).

Alcalinidad: capacidad que tiene una sustancia para neutrar su acidez. Si el agua es alcalina se debe agregar una sustancia para su acidez. Proceso de la prctica: 1. Determinar el PH. Medir el PH 2. Verificar: si el PH es menor de 5 hay alcalinidad. Si el PH es menor que 4 se agrega 3 gotas de naranja de metilo y se titula NAOH (hidrxido de sodio).se cambia de rojo a naranja. Si el H es mayor que 4 se agrega 3 gotas de fenolftalena y se titula con NAOH (hidrxido de sodio).se cambia de incoloro a rosado fuerte. 3. Acidez: Si el PH es menor 8,5 se agrega tres gotas de naranja de metilo y se titula H2SO4. Si el PH es mayor 6 pasa de naranja a rojo. Si el PH es mayor 8,5 aplicar tres gotas de fenolftalena H2SO4 en este caso pasa de rosado fuerte a incoloro. PROCEDIMIENTO 1. Pesamos 4grs de carbonato de sodio con el vidrio de reloj.

2. Medimos 10ml de agua destilada en la probeta, y agregamos el agua destilada al vaso de precipitado y le adicionamos 0,4grs de carbonato de sodio, luego lo agitamos hasta disolver bien el reactivo. 3. Se mide con el PH metro y obtuvimos 10,9 de PH de acides. Despus de obtener el resultado le adicionamos tres gotas de fenolftalena y obtuvimos un color rosado fuerte. 4. Titulamos con H2SO4 para su cambio de color que es incoloro. 5. Se calibro con 17ml de H2SO4 para obtener de fucsia incoloro con un PH 7,3 y con un volumen 16 ml de H2SO4. a

6. Le agregamos 3 gotas de naranja de metilo y lo titulamos con H2SO4 y obtenemos el color rojo. DUREZA: Para saber si hay presentes iones de calcios y magnesio en las muestras de agua. En qumica, se denomina dureza del agua a la concentracin de compuestos minerales que hay en una determinada cantidad de agua, en particular sales de magnesio y calcio. Son stas las causantes de la dureza del agua, y el grado de dureza es directamente proporcional a la concentracin de sales alcalinas. Se calcula, genricamente, a partir de la suma de las concentraciones de calcio y magnesio existentes (miligramos) por cada litro de agua; que puede ser expresado en concentraciones de CaCO3.

TIPOS DE DUREZA. La dureza del agua tiene una distincin compartida entre dureza temporal (o de carbonatos) y dureza permanente generalmente de sulfatos (o de no-carbonatos).

Dureza temporal La dureza temporal se produce por carbonatos y puede ser eliminada al hervir el agua o por la adicin del hidrxido de calcio (Ca (OH)2).

El carbonato de calcio es menos soluble en agua caliente que en agua fra, as que hervir (que contribuye a la formacin de carbonato) se precipitar el bicarbonato de calcio fuera de la solucin, dejando el agua menos dura. Los carbonatos pueden precipitar cuando la concentracin de cido carbnico disminuye, con lo que la dureza temporal disminuye, y si el cido carbnico aumenta puede aumentar la solubilidad de fuentes de carbonatos, como piedras calizas, con lo que la dureza temporal aumenta. Todo esto est en relacin con el pH de equilibrio de la calcita y con la alcalinidad de los carbonatos. Este proceso de disolucin y precipitacin es el que provoca las formaciones de estalagmitas y estalactitas. Dureza permanente Esta dureza no puede ser eliminada al hervir el agua, es usualmente causada por la presencia del sulfato de calcio y magnesio y/o cloruros en el agua, que son ms solubles mientras sube la temperatura hasta cierta temperatura luego la solubilidad disminuye conforme aumenta la temperatura. Puede ser eliminada utilizando el mtodo SODA (carbonato de sodio) Potasio. 1. Dureza permanente hidrxido de amonio PH: 10.1 Se le adiciona eriocromo T y pasa de morado a azul oscuro. 2. Dureza temporal hidrxido de sodio PH: 12.7 Se le adiciona murexida y pasa de color rosado a morado

PROCEDIMIENTO: 1. Realizar dos calibraciones 2. EDTA: le adicionamos a la bureta hasta la primera graduacin. 3. Cogemos el erlemeyer y le agregamos 50 ml de agua luego le agregamos 1ml de hidrxido de amonio con un pH de 9.9 SOLUCIN: 1. PH: 9.9 despus se le aplican 2 gotas de eriocromoy 8.5 ml de EDTA negro y paso de color morado a . Azul 50 ML __________________50 ppm Volumen final: 50 ml Concentracin final: 2mg/l Concentracin inicial: 50 mg/l

_______50 ml. 2 mg/l_______:2 ml 50 mg/l

BIOINDICADORES FITOPLANCTONICOS 26 de octubre 2011 ndice de palmer Observamos cuidadosamente las muestras y distinguimos los tipos de microorganismos, tamao aproximado, morfologa, movimiento e identificamos el gnero al cual pertenecen. Luego establecemos las diferencias encontradas en dichas muestras (caractersticas cualitativas olor, textura, color, etc.) Para la caracterizacin cuantitativa de la muestra tomamos un mililitro de agua contaminada y se realizaron montajes para el respectivo conteo de los gneros fitoplanctnicos encontrados para posteriormente hacer uso del indicador de calidad de agua de Palmer. En el anlisis de la muestra de agua se registran algunos gneros o especies de algas contenidos en la lista del ndice de palmer (OPI). Para tal efecto un alga se considera presente si hay cincuenta o ms individuos de la misma por mililitro. Posteriormente se suman uno a uno los ndices de polucin de las algas presentes; si el resultado es mayor o igual a veinte existe alta polucin orgnica en la muestra, mientras que un resultado de 15 a 19 se toma como indicador de polucin orgnica intermedia y, finalmente un valor menor que quince corresponde a una baja contaminacin orgnica, a una muestra no representativa o algn factor o sustancia presente en el ambiente est interfiriendo en el crecimiento del alga. A continuacin se muestran algunos microorganismos fitoplanctonicos observados por medio del microscopio ocular:

GENERO Botryococcus braunii

ABUNDANCIA IIIIIII

CANTIDAD () 7

Melo sira

IIII

4

Oscillatoria

II

2

Pedrestium Ankistrodesmos faleatos

IIIIIIIIIII I

11 1