HEMOSTASIA

1. RECUENTO DE PLAQUETAS (METODO MANUAL)

Fundamento

El recuento de plaquetas se efectúa en sangre obtenida de punción venosa anticoagulada con EDTA, y sometida a hemólisis por acción de una solución hipotónica de oxalato de amonio en agua destilada.

Materiales y reactivos

Tubos plasticos Capsula de Petri Algodón Anticoagulante EDTA (0.342 mol/L) Diluyente: Oxalato de amonio 1% en agua destilada.

Procedimiento

1. Se obtiene sangre por punción venosa en anticoagulante EDTA (0.342 mol/L), en tubos plásticos.

2. Se homogeiniza bien la muestra y se toman 100 ul que se colocan en otro tubo plastico que contenga 1.9 ml de oxalato de amonio 1%.

3. Incubar 10-15 min. para provocar la hemolisis.4. Cargar la camara de Neubauer con el bemolizado y dejar que sedimenten las plaquetas en

ambiente húmedo: se recomienda colocar la camara dentro de una capsula de Petri conteniendo un trozo de algodón humedecido.

5. Incubar 10-15 min. en atmosfera húmeda.6. Efectuar el recuento en microscopio en el reticulado central de la camara (dividido en 400

cuadrados pequeños comprendidos en 1mm ). El recuento de plaquetas se realiza en el cuadrado central (al igual que el recuento de hematíes), se eligen 5 de los cuadrados que se encuentran subdividos en 16 cuadraditos, como se muestra a continuación Fig. 4.

Figura 4. Recuadro central

La superficie de este cuadrado central es de 1 mm y la camara tiene una profundidad de 0.1mm

7. Contar los 4 cuadrados de los extremos y el cuadrado central (por ende, serán 5 cuadrados con 16 cuadraditos c/u, o sea 80 cuadraditos)

8. Calculo: sumar las plaquetas contadas en los 5 cuadrados y multiplicar por 1000 para obtener el número de plaquetas por mm3. el factor 1000 surge del producto:

Donde 20 es el factor de dilucion, 400 son los cuadraditos totales y 80 los cuadraditos contados. El volumen total del cuadrante es de 0.1 mm .

Observaciones

Actualmente, en muchos laboratorios, los recuentos de plaquetas se realizan en forma automatizada en contadores hematológicos o en contadores específicos, habiéndose logrado un alto nivel de precisión (incluso en trombocitopenia). El recuento manual suele efectuarse para la comprobación de la cifra de plaquetas en trombocitopenia muy graves y en el caso de plaquetas gigantes en las que el recuento automático no es fiable.

2. TIEMPO DE SANGRIA

2.1 METODO DE IVY

Fundamento

Esta prueba valora la capacidad hemostática global in vivo y consiste en medir el tiempo transcurrido desde la realización de una pequeña incisión cutánea hasta que cesa la hemorragia. La prueba mide el tiempo necesario para obtener un tapón hemostatico eficaz y, por ende, representa una valoración global y simultanea de la funcion plaquetaria (numero, adhesión, agregación y degranulacion plaquetaria) y de la funcion vascular. Respecto al factor vascular, la prueba depende de la integridad de la pared vascular y de su capacidad constrictora.El método original del corte en el lobulo de la oreja, introducido por Duke en 1910, es poco sensible y menos reproducible, por lo que no es aconsejable continuar utilizándolo hoy en dia. En 1935, Ivy introdujo la aplicación de un manguito de presion en el brazo y la practica de la incison en la cara anterior del antebrazo. Este metodo, con la modificacion introducida por Borchgrevink, que sustituye la puncion con lanceta por un corte realizado con hoja de bisturí, ha demostrado una alta sensibilidad. Por ultimo, la introducción de plantillas o dispositivos automaticos para la realización de la incisión ha venido a uniformar y aumentar la reproducibilidad.

Materiales y reactivos

Dispositivos automaticos para la realización de la incisión: Simplate y Simplate II (Organ Tecknika) y Surgicutt (Ortho Diagnostics).

Cronometro.

Procedimiento

1. Es aconsejable colocar un esfigmomanómetro en el brazo del paciente y se regula a 40 mm de Hg, manteniéndolo a esta presión a lo largo de toda la prueba.

2. Se extrae el dispositivo automático de su reservorio estéril y se sitúa en la parte superior de la cara anterior del antebrazo (previamente desinfectada), en una zona sin vello y alejada de las venas superficiales, a unos 3 cm por debajo del pliegue del codo y paralelo al mismo.

3. Se presiona el disparador del dispositivo y al mismo tiempo se pone en marcha el cronometro (el corte tendrá un largo y profundidad determinados: 1cm x 1mm).

4. La sangre que brota espontáneamente se va secando cada 30 segundos, sin tocar la incisión, anotandose el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, que sera el resultado de la prueba. Cuando el tiempo se alarga mas de 20 minutos puede detenerse la prueba aplicando una compresa con material hemostatico

Valores de referencia

Hasta 6-8 minutos. Los tiempos superiores a 10 minutos son claramente patologicos.

2.2 METODO DE DUKE

Fundamento

El método original de Duke es, como dijimos antes, poco sensible y menos reproducible, pero se continúa aplicando.

Procedimiento

1. Se practica una incisión de 2 mm de longitud en el lobulo de la oreja utilizando una lanceta con tope, descartable.

2. La sangre que brota espontáneamente se va secando cada 30 segundos, sin tocar la incisión, anotandose el tiempo que tarda en cesar la hemorragia, que sera el resultado de la prueba.

Valores de referencia

Inferior a 5 minutos.

Interpretación de resultados

La prueba se prolonga por reducción del numero de plaquetas o por alteraciones funcionales plaquetarias o plasmáticas (enfermedad de Von Willebrand) relacionadas con los procesos de adhesión, agregación o degranulacion plaquetarias.Esta alterado en trombocitopenia, trombopatias, trombastenias y deficit de fibrogeno. Se observan tiempos prolongados en uremias, mielomas, macroglobulinemia y después de la ingesta de acido acetilsalicílico.En la enfermedad de Von Willebrand generalmente es alargado, pero si es normal no invalida el diagnostico de dicha enfermedad.

3. TIEMPO DE COAGULACION

Fundamento

El tiempo de coagulación de sangre total es una de las pruebas llamadas globales y abarca la activacion intrínseca de la protombina y el fibrinógeno.La sangre, al ser extraída sin mayor contaminación con tromboplastina tisular, es capaz de coagular cuando se la deposita en un tubo de vidrio. El tiempo que tarda este proceso esta en relacion con el sistema de procoagulantes e inhibidores fisiológicos o adquiridos, que influyen en la formación de dicho coagulo.Este tiempo de coagulación in Vitro reflejara mejor la eficacia del sistema in vivo, cuanto menos se modifique esta sangre (contacto con el vidrio, burbujas de aire, detergentes, etc.).

Materiales y reactivos

Tubos de vidrio, perfectamente limpios.Baño a 37º CCronometro Procedimiento

1. Obtener 3 ml de sangre por puncion venosa, de primera intencion y con jeringa plástica.2. Disparar el cronometro en el instante en que la sangre venosa se introduce en la jeringa3. Desconectar la aguja y vaciar ordenadamente 1 ml de sangre en el primero de los tres tubos

de vidrio perfectamente limpios, previamente colocados en gradilla de baño a 37º C4. Inclinar el primer tubo cada 30 seg. por la misma cara hasta que la sangre se coagule (deja de

escurrirse por las paredes del tubo).5. De inmediato, inclinar el segundo tubo hasta que se coagule; luego, proceder de la misma

forma con el tercer tubo.6. Se toma como tiempo de coagulación el valor obtenido en el tercer tubo.

Interpretación de resultados

Valores de referencia a 37º C: 7-15 min.

El rango normal debe establecerse en cada laboratorio, con un grupo suficiente de controles (20 como minimo). Conviene repetir un paciente normal semanalmente, para determinar cualquier variabilidad de los valores previamente obtenidos.Se considera alargado un tiempo de coagulación que difiere en mas de 2 min del limite superior del rango normal, establecido en cada laboratorio (media +2 SD).Se trata de un metodo poco sensible, pues se prolonga solo en aquellos casos de deficit graves. Un tiempo de coagulación normal no descarta la existencia de un trastorno de la coagulación, pero un tiempo prolongado es siempre indice de un defecto severo de la misma, que puede deberse a una deficiencia de cualquiera de los factores que intervienen en la formación del coagulo de fibrina, con excepcion de una deficiencia pura de los factores VII y XIII; pero el metodo es mucho mas sensible a los defectos de los factores que intervienen en la activacion por contacto y en la formación del activador intrinseco de la protombina.

4. RETRACCION DEL COAGULO

Fundamento

La retracción del coagulo depende de la actividad de trombodinámica de las plaquetas, por lo que se requiere un número mínimo de plaquetas normales y adecuados niveles de Ca .

Procedimiento

1. Los tres tubos utilizados para determinar el tiempo de coagulación deben dejarse en baño a 37ºC durante por lo menos 3 Hs. Al cabo de este tiempo, observaremos la mejor retracción de los tres tubos, graduando de acuerdo a la magnitud de la retracción por apreciación visual del tamaño del coagulo retraído y el suero libre en:

a) Normal o completab) Incompleta c) No retraed) Hiperretráctil

Interpretación de resultados

Esta prueba depende del número de plaquetas, su actividad funcional y de la concentración de fibrógeno, aunque no se relacione muy bien con el número de plaquetas (en ciertas condiciones da normal aún con 30.000/mm3). Un aumento importante de fibrógeno reducirá la retracción por efecto de volumen, mientras que lo opuesto ocurre en casos de hipofibrinogenemia. En la trombastenia de Glanzman (alteración funcional) se observan retracciones incompletas o nulas.

CORRECCION DE LEUCOCITOS POR LOS NORMOBLASTOS CONTADOS

Es el valor de leucocitos a regular 100 + # Normoblastos = R x # Leucocitos Este resultado se resta del # de Leucocitos lo que sale # Leucocitos = 25300

Ejemplo: 100 + 576 = 676 = 0.85 x 25300 = 21557 25.300Leucocitos Corregidos = - 21557 El valor de Leucocitos = 3743

ORINA DE 24 HORAS

CALCIO

Diluir la orina con solución salina 1 en 1 Ej. (500 ul + 500 ul)

Lo programamos en el HITACHI como si fuera suero lo que nos sale del equipo lo multiplicamos por el factor de dilución que es 2.

El resultado lo reportamos en mg/dl.

Si es orina de 24 horas, el resultado del equipo lo multiplicamos por el factor de dilución y a su vez el resultado lo multiplicamos por el volumen en decilitros de orina de 24 horas. El resultado se reporta en mg/24h.

Para sacar los decilitros, dividir el volumen total para 100 = decilitros VN = 100 – 300 mg/24h

PROTEINAS EN ORINA DE 24 HORAS

La orina o el LCR. se miden con el reactivo U/CSF del equipo => el resultado lo procesamos directo lo que sale del equipo en mg/dl (en caso de orina ocasional o de liquido cefalorraquídeo). Cuando se trata de orina de 24 horas: * lo que nos sale es en mg/l x volumen total (en litros) = mg/día

VR = ORINA = RANDOM = < 12 mg/dl ORINA DE 24 HORAS = < 150 mg/24h LCR = 150 – 450 mg/l

Si se necesita convertir mg/l a mg/dl, solo se multiplica por 0.1

EJ: 150mg/l 15 mg/dl

ACIDO URICO

Diluir la muestra con solucion salina o agua destilada 1+10 (1000 ul de solucion salina o agua destilada + 100 ul de orina centrifugada; se la procesa en el HITACHI como cualquier muestra y el resultado lo multiplicamos por el factor de dilución que es 11; se reporta directo en mg/dl cuando es orina ocasional; si es orina de 24 horas, el resultado del equipo se multiplica 1 por el factor de dilución y luego se reporta en mg/24h.

VR = ORINA DE LA MAÑANA 37 – 92 mg/dl

ORINA DE 24 HORAS = 200 – 1… mg/24h 13 – 67 mg/dl

UREA EN ORINA DE 24 HORAS

Lo que sale del equipo (dilución 1:10) x 10 x el volumen en decilitros.

VR = 10 – 35 g/24h

900 solucion salina100 orina centrifugada

DEPURACION

DATOS QUE SE TIENEN QUE APUNTAR EN EL CUADERNO

Depuración de creatinina Creatinina en orina 24 horas Creatinina en orina Creatinina en suero Peso Talla Superficie corporal Volumen de muestra

PASOS:

CREATININA EN ORINA

Centrifugar la orina, (hacer dilución 1000 de solución salina + 100 de orina) Leer en el equipo como creatinina en suero el resultado se multiplica por 11.

CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS

El resultado de creatinina en orina ya multiplicado por 11. Se multiplica por el volumen en decilitros (VOL./100= VOL. En decilitros) Se divide para 1000 y listo.

DEPURACION DE CREATININA

El resultado de creatinina en orina ya multiplicado por 11. Se divide para la creatinina en suero el resultado. Se multiplica por el volumen total de muestra el resultado. Se divide para 1440 (constante) el resultado se Multiplica por 1.73 (constante) el resultado Se divide para la superficie corporal y listo.

CALCULO DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS

Creatinina en orina por factor de dilución por volumen (dl) = Creatinina orina

EJ: Creatinina en orina = 3.8 Factor de dilución = siempre es 11 (1ml de solución salina + 100 lambdas de orina centrifugada) Volumen = 2.680 ml ÷ 100 = 26.8 decilitros

3.8 x 11 x 26.80 = 1.120 mg/24h = 1.1 g/24h.

VN: Hombres = 1.040 – 2.350 mg/24h. (1-2.3 g/24h)Mujeres = 740 – 1.570 mg/24h. (0.7-1.5 g/24h)

SE REPORTA EN GRAMOS EN 24 HORAS. ÷ 1000 = g/24h

DEPURACION DE CREATININA EN ORINA DE 24 HORAS

Creatinina en orina x 11 (mg/dl) x Volumen de orinaCreatinina en suero (mg/dl) 1440 minutos

Estos valores deben corregirse con las variaciones de peso y talla de cada paciente (sacar la superficie corporal con la tabla adjunta)

Depuración x 1.73 Superficie corporal = D C E

EJ. Creatinina en suero = 0.6 mg/dl Creatinina en orina = 35.2 mg/dl Volumen de orina en 24h. = 4100 ml Superficie corporal = 1.66 m2

CALCULO

35.2 mg/dl 4100 ml/24h 0.6 mg/dl 1440 min

58.6 x 2.84 = 166.4 ml/min

166.4 ml/min x 1.73 1.66 = 173.4 ml/min

Valores referenciales: de 85 – 125 ml/min

Si esta dentro de los valores referenciales o por encima, decimos que hay una buena depuración, no así si esta por debajo de 85, tiene mala depuración.

EXAMENES DE LIQUIDOS BIOLÓGICOS

LIQUIDOS PLEURALES, PERICARDICOS Y PERITONIALES

COLOR: el color del líquido puede indicar el origen de la efusión: Rojo: sangre Verde: vesícula, ulcera duodenal Lechoso: obstrucción linfáticasASPECTO: puede ser seroso, fibrinoso, purulentos, lechosos sanguinolentos o combinación de ellos.Si el líquido es lechoso se alcaliniza con unas gotas de hidróxido de sodio y se sacude con éter, con lo que la grasa se disuelve.PH: debe medirse anaeróbicamente como la sangre arterial, sin mucha tardanza hacer con tira de orina.DENSIDAD: refleja el contenido de proteínas del líquido. Hacer con tiras de orina. Bioquímicas que se realizan: proteínas glucosa y LDH.CONTAJE CELULAR: si las células son pocas en número se cuenta todos los campos. En este caso el número de celulas contadas es igual número de celulas mm3. Cuando hay muchas células se procede a hacer diluciones de acuerdo al aspecto líquido:

Dilución cant. del líquido cant. sol. salina GR y liq. Glob. blancos1.2 100 ul 100 ul1.4 100 ul 300 ul1.8 100 ul 700 ul1.10 100 ul 900 ul1.20 25 ul 500 ul1.40 25 ul 1000 ul1.80 25 ul 2000 ul1.160 25 ul 4000 ul

SE DEBEN CONTAR HEMATIES Y LEUCOCITOS

FORMULA: NUMERO DE CELULAS CONTADAS X DILUCION X 10 NUMERO DE CUADRADOS CONTADOS

DIFERENCIAL: se centrifuga la muestra durante 15 minutos. Se elimina el sobrenadante dejar 0.5 ml de sobrenadante para suspender el sedimento. Se tiñe con Wright 3 minutos.CARACTERISTICAS NORMALESColor pajizo. Aspecto transparente. Ph. 7.4 densidad: 1016Proteínas: 1 – 2 g/dl Glucosa: 70 – 110 mg/dl.Contaje de células: pocos o ningún diferencial: algunos linfocitos y células mezote líales.LIQUIDO CEFALORAQUIDEO: Si se tiene que compartir un volumen pequeño de LCR, la muestra puede ser centrifugada: el sedimento puede ser usado para cultivo y tinción de Gram y Wright (excepto el Contaje celular) y el sobrenadante puede ser usado para las pruebas bioquímicas.Si se recibe menos de 0.5 ml de muestra entera no concentrada es usada para cultivo y examen microscópico.SE INFORMA: COLOR, ASPECTO, CONTAJE CELULAR (la fórmula igual que los otros líquidos, y debe realizarse lo mas posibles ya que se deterioran rápidamente)Diferencial bioquímicas: glucosa y micro proteínas.El doctor puede solicitar cloro, urea, de rutina no lo hacemos. Solo si lo solicitan y debe facturarse.EL LCR NORMAL: es incoloro (cristal de roca) aspecto: transparente. Glucosa 45 – 60 mg/dl. Proteínas 20 – 40 mg/dl cloro 116 – 127 mEq/l urea 8 – 28 mg/dl.

LIQUIDO SINOVIAL: LA MUESTRA DEBE VENIR HEPARINIZADASE INFORMA COLOR, ASPECTO, CONTAJE CELULAR (la formula igual que los otros líquidos. Diferencial bioquímicas: glucosa proteínas totales y Ac.Úrico.El líquido sinivial normal: es incoloro o de color pajizo. El aspecto es transparente. Glucosa a 70 – 110 mg/dl proteínas 1.07 – 2.13 g/dl.En enfermedades sépticas de las articulaciones puede ser turbio o purulento. En enfermedades inflamatorias permanece claro o solo tiene ligera turbidez.A causa de la carencia de fibrinógeno y de otros factores de coagulación normal no coagulada. Los procesos inflamatorios permiten el paso de factores de coagulación del plasma el líquido articular y por eso se coagula, el coagulo se forma espontáneamente cuando el líquido articular que no se ha tratado, se deja en reposo. Por eso hay que heparinizarlo inmediatamente.

SE DEBE INFORMARSE EN TODOS LOS LIQUIDOS LA CANTIDAD DE HEMATIES Y DE LEUCOCITOS.

OSMOLARIDAD PLASMATICA

Para calcular la osmoralidad plasmática, necesitamos los valores de: sodio – glucosa – urea en sangre toda.

La formula es:

Osm. Plasmat. = (Na x 2) + ( )

Valor referencial = 280 - 295 m Osm/l

OSMOLARIDAD URINARIA

Osm. Urinaria = (1.86 x Na) + ( ) + ( orina urea) + 9

Valor Referencial = 50 - 1.400 m Osm / Kg

CALCULOS Y VALORES REFERENCIALES EN ORINA DE 24 HORAS

GRUPO NUMERO 1: el cálculo se realiza de la siguiente manera: El resultado obtenido (mg/dl) se multiplica por el volumen de orina en dl. (Normalmente el volumen de orina lo medimos en ml, para transformarlo en dl. Se divide para 100) U ÷ 100 R x VO = R ÷ 100Este resultado a su vez se divide para 1000 = g/día. Pues dichas pruebas se reportan en el día.

EJ. UREA EN ORINA DE 24 HORAS: Resultado que da el equipo: 119 mg/l Volumen de orina: 1740 ml

Volumen de orina: 1740 ml dividido para 100 = 17.4 dl119 mg/dl x 17.4 = 2070 mg/día dividido para 1000: resultado: 2.0 g/día

EXAMENES QUE COMPRENDEN:UREA: V.R. 26 – 43 g/díaFOSFORO: V.R. 0.4 – 1.3 g/díaPROTEINAS: el valor que sale se reporta en alt 92, en g/día sin valor referencial <150mh/24hEn orina random V.R. < 12 mg/dl Aquí se reporta lo que sale del equipo mg/l x volumen total (litros) = mg/d se reporta en gramos/d. VR = < 0.15 g/24h.

GRUPO NUMERO 2: el resultado obtenido (mg/dl) se multiplica por el volumen de orina en dl (normalmente el volumen de orina lo medimos en ml, para transformarlo en dl se divide para 100) mg/día = mg/dl x volumen de orina en dl.

EXAMENES QUE COMPRENDEN:CALCIO: V.R. 100 - 300 mg/díaMAGNESIO: 73 - 122 mg/díaCREATININA: 800 - 2800 mg/díaGLUCOSA: <500 mg/día AC. URICO: 250 - 750 mg/día

GRUPO NUMERO3: el resultado obtenido se multiplica por el volumen de orina pero en litros, para esto se divide el volumen que medimos para 1000.EJ. Potasio 30 mEq/L Volumen de orina: 2000 ml2000 dividido para 1000 = 2 L30 x 2 = 60 mEq/día

EXAMENES QUE COMPRENDEN:POTASIO: 25 - 125 ¡mEq/díaSODIO: 40 - 220 mEq/día

V. REFERENCIALES PARA ORINAS RANDOM, SOLO PARA ORINA DE 24 HORAS EXCEPTO PARA PROTEINAS QUE SI HAY

OSMORALIDAD URINARIA:Se hace Glucosa, Sodio y UreaFormula (1.86 x Sodio) + (Glucosa/18) + Urea + 9VR: (50 - 1400 mOsm/Kg.)

DEPURACION DE CREATININA:

Creatinina en orina (mg/dl) volumen de orina ml/24hCreatinina en plasma 1440 min

Los valores asi obtenidos deben corregirse con las variaciones interindividuales de peso y la talla. Buscar en la superficie corporal

Depuración x 1.73 Superficie corporal

Creatinina en sangre: 0.6 mg/dlCreatinina en orina: 38.3 mg/dlVolumen de orina: 4400 mlSuperficie corporal: 1.69 m2

38.3 mg/dl 4400 ml/24hs = 63.83 x 3.05 = 194.68 ml/min0.6 mg/dl 1440 min

Corrección con la superficie corporal:

194.68 ml/min X 1.73 = 199.2 ml/min 1.69

VR.- 85 - 125Si el valor esta debajo de 85 nos habla de que hay una mala depuración. Si dentro del rango o por encima de 125 esta bien.

ELECTROLITOS EN ORINA

(2 partes) + (1 parte)

- 2ml de diluyente + 1 ml de orina centrifugada o 400 ul de diluyente + 200 ul de orina

EN EL EQUIPO= LISTO – NO – NO MUESTRA QC/STD DIALIZADO/ORINA – YES Luego poner NO hasta que salga MUESTRA DE ORINA? YES pasar la muestra preparada anteriormente VN= Na = 40 - 135 mEp/L K = 25 - 135 mEp/L Cl = 46 - 168 mEp/L Calcio = 50 - 300 mg/24h

SI NO SALE EL RESULTADO, DE ESTA DILUCION TOMAMOS:200 ul y mezclamos con 400 ul de agua destilada y lo pasamos en el equipo siguiendo el mismo procedimiento. El resultado se multiplica por el factor de dilucion que es 3.

OJO LES INDICO ESTOS VOLUMENES POR QUE ES MEJOR QUE SOBRE MUESTRA DILUIDA PARA EL EQUIPO Y POR SI ACASO NO LO LEE, SE PUEDE PREPARAR OTROS VOLUMENES PERO SIEMPRE GUARDANDO LA RELACION 2 partes de diluyente + 1 parte de orina = factor de dilucion = 3 Creatinina en orina Random (orina ocasional)

Hombres: 39 - 259 mg/dlMujeres: 28 - 217 mg/dlOrina de 24 h: lo que sale del equipo x el factor de dilución 10 x volumen en decilitros.

VR= 1040 a 2.350 mg/24h1 - 2.3 g/h

LIQUIDOS BIOLOGICOS

Pueden ser:

Líquidos LCRPleuralSinovialAscéticoOváricoPericárdicoAspirado traqueal (no se realiza en bioquímica, solo citología)Lavado gástrico (no se realiza bioquímico, solo citología)

Los líquidos biológicos deben ser procesados en forma inmediata. El líquido sinovial debe ser heparinizado al momento en que se lo recibe para evitar su coagulación.En forma general los líquidos biológicos se procesan de la siguiente manera.

1.- Envasar el líquido en un tubo limpio y seco; cuando solicitan cultivos deben venir de recipientes estériles y por separado para examen físico-químico.

2.- Observar: color: van desde incoloro (líquido cefalorraquídeo) hasta amarillo rojizo.(los líquidos pleural, pericárdico) aspecto transparente – ligeramente turbio- turbio – purulento)Presencia de coágulos de fibrina, restos de tejidos etc. Anotar si se observan sedimentos a simple vista.

De acuerdo al color y aspecto de la muestra se realizará el contaje celular por ejemplo. Si es un líquido transparente, o ligeramente turbio se lo cuenta directo en la cámara de newbawer; en cambio en un líquido turbio, blanquecino, etc. Se necesitara realizar una dilución que puede ser.1:10 1.000 ul de solucion salina 100 ul de muestra1:20 1.000 ul de solución salina 50 ul de muestra1:40 1.000 ul de solución salina 25 ul de muestra1:50 1.000 ul de solución salina 20 ul de muestra1:100 1.000 ul de solución salina 10 ul de muestra

Al realizarla dilución, mezclamos en un vortex y cargamos la cámara de newbawer. Dejamos reposar la cámara por 5 minutos en cámara húmeda “cámara de petricar papel filtro (una hoja) y humedecida con agua destilada- sin exceso de agua” y procedemos al contaje celular tanto de leucocitos como hematíes en cada cuadrado del área reticulada. Aplicamos la fórmula.

Número de células = numero de células contadas x dilución x 10 (el 10 es 1 contraste) número de cuadrados contados.Ejemplo.- en 2 cuadrados se contaron (24 leucocitos – 12 hematíes) - dilución 1:40

Leucocitos = 24 x 40 x 10 = 4.800 2

Hematíes = 12 x 40 x 10 = 2.400 2

Total de células 4.800 2.400

7.200 células mm El contaje en líquidos claros es directo y contando todos los cuadrantes.En el reporte también anotar si se observan levaduras, bacterias, parásitos en fresco.

EXAMEN BIOQUIMICO.- Centrifugar muestra para líquidos en general, se realizaran pruebas de glucosa y proteínas (microproteínas para LCR proteínas totales para el resto de líquidos).Además para líquidos pleural = LDH Ascético = Amilasa Articular = Acido úrico

HEMATOZOARIOS

En una placa porta objeto aplicar 1 gota de 1cm de diámetro de sangre sin anticoagulante, dejar secar.Introducir la placa en un recipiente que contenga azul fosfatada por 3 segundos, a continuación introducir la placa en un recipiente que contenga buffer de hematozoarios por 3 segundos; luego introducir la placa en 1 recipiente donde previamente se preparó 1 ml de buffer de hematozoarios + 1 gota de colorante giemza (1 gota giemza por cada ml de buffer). Dejarlo por 7 minutos y posteriormente sacar la placa y dejar secar para observarla en lente de 100 x con aceite de inmersión. Se reporta positivo o negativo.

EXAMEN COPROLOGICO

La muestra de materia fecal se la realiza de la siguiente manera:1.- Color: amarillo, café, verdosa, blanquecina, rojiza.2.- Consistencia: líquida blanda, semiblanda, dura.3.- Presencia de: moco, sangre, parásitos visibles etc.

COPROPARASITARIO

FRESCO.- En un porta objetos colocamos una pequeña cantidad de heces en 2 lugares diferentes; sobre la primera colocamos una gota de solución salina y en la segunda una gota de lugol, sobre cada mezcla ponemos una laminilla cubreobjetos y observamos al microscopio primero con lente de 10x en busca de parásitos, restos de alimentos.

Luego observamos con lente de 40x observando presencia de hematíes, leucocitos (reportar número de campo).Flora bacteriana (normal o aumentada o disminuida)Presencia de parásitos (tipo de parásitos – si es quiste o trofozoito – se reporta por levaduras, hematíes (por campo).En caso de haber mas de 10 leucocitos por campo, es mandatario realizar el examen de MOCO FECAL que consiste en: realizar 1 frotis con las heces teñirla con colorante wright’s y observar al microscopio con objeto de 100x (mononucleares o polimorfonucleares) y reportarlo en porcentaje:Ejemplo: 80% mononucleares 20% polinucleares

El examen de moco fecal va también reportado el color, consistencia, ph, glucosa (si el médico solicita azúcares reductores).

FISICO QUIMICO DE ORINA.- Envasamos la orina en 1 tubo de ensayo y observamos.FISICO.- Color, amarillo, ámbar, rojo, incoloro, verdoso, medicamentoso.

QUIMICO.- Aplicamos la tirilla reactiva para determinar: Glucosa: Ph: Densidad: Nitritos: Leucocitos: Proteínas: Sangre: Cuerpo cetónico: Bilirrubina: Urbilinógeno:Comparamos el color de cada parámetro con el del envase y marcando en cruces de acuerdo al reactivo.SEDIMENTO.- Luego de 10 minutos de centrifugación a 2.000 rpm eliminamos el sobrenadante y aplicamos 1 gota de sedimento en una placa porta objeto para observar al microscopio con lente de 40x.Observamos lo siguiente:- Células epiteliales: Células transicionales, escasas, moderadas, abundantes.- Filamentos mucosos: Escasos, moderados, abundantes.- Cristales: de oxalate de calcio, acido úrico, fosfatos, uratos amorfos, etc.(cruces)- Hematíes: trazas 5 - 6 xc 6 - 10 10 - 20 25 - 35

Leucocitos: trazas: 5 - 6 xc6 -1010 - 2025 - 30

Bacterias: escasas + moderadas ++ abundantes +++

Otros: cilindros: tricomonas

HEMOSTASIA

PRUEBAS DE COAGULACION

La muestra para hemostasia debe ser en tubo con anticoagulante citrato de sodio (tubo para celeste)

PRUEBA DE TIEMPODE COUGULACION

TIEMPO DE PROTOMBINA.(TP).- en un tubo tomar 200 ml de reactivo de protrombina, encubar 3 minutos en baño María a 37 grados centígrados, luego adicionar 100 ul de muestra (plasma) y ponemos el cronómetro a correr, cuando empieza a formarse el coagulo paramos el tiempo y anotamos los segundos. 12.7”

TIEMPO DE SANGRIAEn el pulpejo del dedo pulgar realizar un pinchazo con lanceta en la pìel previamente limpia, anotar el tiempo en que deja de sangrar. VN: 2 - 5 minutos

TIEMPO DE COAGULACION.Tomar una muestra de sangre sin anticoagulante, tomar el tiempo en que se formó el coagulo. VN: 1 - 6 minutos

TINCION DE BARRTINCION DE ZIEHL NELSEN

1.- Hacer frotis de muestra (esputo) (líquidos biológicos previamente centrifugados a 1500 rpm durante 20 minutos).

2.- Cubrir con papel filtro la región del frotis

3.- Cubrir generosamente con fuccina fénica toda la extensión del papel filtro.

4.- Flanear al calor de la llama del mechero a la distancia de altura que no queme el papel pero que salgan vapores de la superficie del colorante durante 5 minutos. Si la fuccina se esta secando aumentar para que se mantenga húmeda.

5.- Concluido el tiempo eliminar el papel, enjuagar la superficie de la tinción con agua de la llave, luego dejar caer en la superficie del frotis unas gotas de alcohol ácido para que se elimine el colorante.

6.- Cubrir el frotis con azul de metileno durante 1 minuto, enjuagar con agua, dejar secar el frotis y observar con lente de inmersión.

OBSERVACION:El campo microscópico se vera de color azul y los bacilos alcohol ácido resistentes se observaran como bastones de color rojo, ya sea individualizados o agrupados.Antes de reportar negativo, recorrer absolutamente el frotis de la placa (500 campos microscópicos)

LIQUIDOS BIOLOGICOS

CONDUCTA A SEGUIR.-

A todos los líquidos se les deberá realizar contaje bacteriano y tinción directa de gram. la siembra para realizar el contaje bacteriano es la siguiente:

Los líquidos de cavidades cerradas (LCR, liq. Pericárdico, liq. Pleural, liq. Sinovial, liq. Ascético.) deben sembrarse en:

- agar Sangre- Agar Mackonkey aerobios

- En frascos pequeños de tioglicolato (como hemocultivo) Anaerobios (con jeringuilla aspirar 1 a 2 cm aproximadamente de líquido, al momento de sembrar cambiar la aguja todo bajo la llama.

- También es mandatario realizar a todo líquido cefalorraquídeo una prueba de la tinta china, para lo cual depositamos en una placa portaobjetos 50 ul de LCR sobre la cual ponemos una gota de tinta china, colocamos una laminilla cubreobjetos y observamos al microscopio con objetivo de 10x y 40x se reporta como positivo o negativo.