manual digital de laboratorio de microbiologia
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Manual de práctica de Microbiologíaen formato Digital
Maestra Altagracia Jiménez Díaz
01/08/11 2
Manual de práctica de Microbiología en formato Digital
Índice: Algunos equipos utilizados en microbiología Morfología y disposición de las células bacterianas Distribución de microorganismos en el ambiente Medios de cultivo
Métodos de siembra Las coloraciones Acción de las bacterias sobre los hidratos de carbono
Acción de las bacterias sobre las proteínas Hemólisis Pigmentos Prueba de sensibilidad a los antimicrobianos. Estudio bacteriológico del agua y otros líquidos de consumo
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 3
Manual de práctica de Microbiología Digital
Objetivo: Apropiar al
estudiante que se inicia en el campo
de la microbiología del conocimiento, en
técnicas bacteriológicas.
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Equipos del Laboratorio de Microbiología
Asas y agujas bacteriológicas Placas de Petri. Porta objetos. Incubadora. Autoclave. Microscopio Mechero Nevera Tubo de ensayo
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Frasco de la Vela
Se utiliza para Crear la atmósfera para microorganismos microaerofilicos.
Se obtiene un ambiente de baja tensión de oxigeno y de 10 12 % de Co2
La vela no debe colocarse sobre los medios de cultivo sino al lado, dentro de el frasco.
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Placa de Petri.
Las placas de Petri son: recipientes de vidrio, plástico u otros materiales constituidos por dos piezas; una tapa y una base, la base descansa sobre la tapa y se utilizan para colocar los medios de cultivo sólidos y se logra el desarrollo de cultivos en amplia superficie y facilitar el conteo de las colonias.
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Jarra de Gas Pak
Se utiliza para Crear la atmósfera para microorganismos anaerobios.
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Porta Objetos
Se utiliza para preparar los frotis
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Asas y agujas
Se utilizan para pescar transportar y sembrar el material bacteriológico
Se esterilizan en el mechero al rojo vivo antes y después de las siembras bacteriológicas.
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Tubos de ensayo
El tapón de los tubos se sostiene con el dedo meñique.
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Microscopio
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Autoclave Autoclave: utiliza vapor
de agua a 121 ºC durante 15'o 20'. Esta temperatura se logra si se obtiene una presión de una atmósfera relativa (dos atmósferas absolutas o sea 15 libras de presión por pulgadas al cuadrado), ya que el aumento de la presión provoca aumentos proporcionales en el punto de ebullición del agua.
Es el mecanismo de destrucción microbiana más efectivo, y bien utilizado asegura esterilización.(Destruye la forma de vida vegetativa y esporulada)
AUTOCLAVE
Se utiliza para esterilizar y funciona a 121°c
15 libras de presion por pulgadas cuadradas en un tiempo de 15 a 20 minutos.
Incubadora
Se utiliza para proporcionar la temperatura optima a las bacterias.
Contador de colonias.
Se utiliza para el conteo de colonias.
Mechero de bunsen
Utensilio metálico que permite calentar sustancias. Presentan una base, un tubo, una chimenea, un collarín y un vástago. Con ayuda del collarín se regula la entrada de aire. Para lograr calentamiento adecuados hay que regular la flama del mechero a modo tal que ésta se observe bien oxigenada (flama azul).
Nevera
Se utiliza para conservar a una temperatura adecuada los medios de cultivos y cepas bacterianas.
Nevera: laboratorio de microbiología
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Microscopia Morfología de las bacterias
MORFOLOGIA Y DISPOSICIÓN DE LAS CELULAS BACTERIANAS
Se da una gran variedad de tamaños y forma entre las bacterias.
La mayoría de ellas oscilan entre 0,2 y 2,0 µm de diámetro y presentan una de las tres morfologías básicas siguientes:
La esférica o de coco (que significa «baya»), la de bastoncillo o bacilo y la espiral.
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Cocos
Los cocos suelen ser esféricos, pero pueden ser ovalados, alargados o con un lado aplanado. Cuando los cocos se dividen para reproducirse pueden permanecer unidos uno a otro. Los cocos que permanecen en parejas tras dividirse se llaman Diplococos.
Aquellos que se dividen en dos planos y forman grupos de cuatro se conocen como Tétradas .
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Cocos
Los que se dividen por tres planos regulares y quedan divididos en grupos cúbicos de ocho se llaman Sarcinas
Aquellos que se dividen siguiendo planos al azar y forman células en paquetes irregulares son los: Estafilococos
y si se presentan en cadenas se denominan Estreptococos.
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Disposición de los cocos
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Bacilos
Disposición de los bacilos: Los Diplobacilos aparecen en parejas tras la
división Los Estreptobacilos se presentan en cadenas.
Existen aún otros que son ovalados y se parecen tanto a los cocos que se llaman Cocobacilos
Bacilos en letras chinas Bacilos en palizada Sin embargo, la mayoría de los bacilos se
presentan de forma aislada.
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Disposición de los bacilos
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Bacterias espirales
Las bacterias espirales pueden tener una o más vueltas; nunca aparecen rectas. Los bacilos curvados en forma de coma se denominan vibrios .
Otros, llamados Espirilos, poseen una morfología helicoidal característica, que recuerda un sacacorchos, con un cuerpo celular bastante rígido .
Hay aún otro grupo de bacterias espirales llamadas Espiroquetas.
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Bacterias en Espiral
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Hongos levaduriformeLevaduras
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Hongo filamentoso
Hongo filamentoso
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Colonia Colonia agrupación de microorganismos
de una misma especie. Características macroscópica de las
colonias: Olor: del cultivo puede ser agradable o
desagradable; fetal o frutal, amoniacal, nauseabundo …
Tamaño: Grande mediano, pequeño, pequeñísima.
Aspecto: Opaco, brilloso, transparente, rugoso, algodonoso, aterciopelado.
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Estudio Macroscópico de las colonias
Color: Amarillo, rojizo, blanco, cremas … Forma: Redonda, alargada, irregular … Bordes. Dentados festoneado filiforme, liso … Altura: Plana, elevada, cóncava, convexa … Tipo de cultivo: Puro, mixto y contaminado Puro: Esta formado por un solo tipo de
microorganismo (Para estudiar las propiedades de un organismo dado es necesario manejarlo en un cultivo puro)
Mixto: Es la presencia de dos o mas especies de microorganismo en el cultivo
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Cultivo contaminado
Contaminado: es cuando aparece un germen extraño fuera de la línea de siembra.
Cantidad de crecimiento del cultivo: Abundante, abundantisimo, escaso, y muy escaso
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Esquema de colonias con su: forma,margen y elevación
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Colonias
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Consistencia de la Colonia:para determinar la consistencia debes usar una asa estéril, y tocarla cuidadosamente.
Las colonias pueden ser: duras, viscosas, mucosas, secas, muy
secas, cremosas, etc. En general, al mayor parte de las
bacterias forman colonias de consistencia más o menos cremosa, aunque existen muchas excepciones
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Cultivo mixto
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Medios de cultivo
Los medios de cultivo son una mezcla equilibrada de nutrientes que en concentraciones adecuadas y con condiciones físicas óptimas permiten un buen crecimiento de los microorganismos. Contienen una base mineral; fuente de carbono, nitrógeno y azufre
Formula básica de los medios de cultivos: agua cloruro de sodio, peptona. Extractos de carne o de levadura.
El agar no se utiliza como nutriente solo para darle solidez a los medios de cultivos
Para el crecimiento de las bacterias hay que proporcionarles: los medios de cultivos apropiados la temperatura optima y la atmósfera requerida
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Clasificación
Medios de cultivos vivos o animado y medios de cultivos muertos o inanimado
De acuerdo a su consistencia o estado físico. Liquido: ejemplo caldo simple Semi-solidó: Agar semi sólido Sólido: Agar base El Liquido, Semi-solidó, Sólido depende de la
cantidad del agar que contengan los medios El agar no participa como nutriente (solo le
proporciona solides a los medios de cultivos. De acuerdo a su uso o finalidad: simple,
enriquecidos, selectivos, diferenciales y especiales.
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Medios de cultivos
Medio enriquecido: medio al que se le añaden nutrientes extra y se utiliza para microorganismos que tienen exigencias nutricionales.
Agar sangre, Agar chocolate, agar cerebro-corazón, etc.
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Medios de cultivos
Medio selectivo: medio que sólo permite el crecimiento de un grupo de microorganismos e inhibe el de otros. Permite seleccionar y aislar microorganismos a partir de poblaciones mixtas
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Medio diferencial
• Medio diferencial: medio que permite revelar características fisiológicas de los microorganismos.
• Mac conkey: Cuando el microorganismo utiliza el azúcar lactosa se observan colonias rosadas. cuando las bacterias no utiliza la lactosa se observan colonias claras o transparentes.
• EAM: en este medio la E coli se observa con brillo verde metálico.
Medios de cultivos
Medio sintético: son los medios que contienen una composición química definida cuali y cuantitativamente.
Se utilizan para el estudio de requerimientos nutricionales y para obtener resultados reproducibles.
Medio simple: son los medios que presentan la mínima cantidad de nutrientes capaz de permitir el desarrollo de los microorganismos no exigentes, contienen la formula básica de los medios de cultivo.
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Caldo Lactosado Bilis Verde Brillante: Caldo Lactosado Bilis Verde
Brillante: se utiliza en el tubo de Durham.
Si las bacterias fermentan la lactosa aparece gas en el tubo invertido (gas +)
Esta reacción es producida por el grupo coliforme. O colibacilos.
Si no es fermentada la lactosa presenta
(gas -). Este medio de cultivo es
selectivo para bacterias gram. negativas.
El verde brillante y la bilis inhiben el crecimiento de bacterias Gram. positivas.
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Agar sangre: contiene sangre de carnero desfibrinada al 5 %
Es un medio enriquecido.
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Medio de Mac Conkey:
Contiene el azúcar lactosa y un indicador que es el rojo neutro, este medio es selectivo para microorganismos Gram. negativos.
Si la lactosa es fermentada las colonias se observaran de color rosado
Si no las colonias se observaran transparentes.
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Eosina Azul de metileno
Es un medio selectivo y diferencial
Es selectivo para bacterias Gram. Negativas
La E. coli crece con brillo verde metálico
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Manitol salado: Es un medio utilizado
para los Estafilococos. El indicador de PH es
rojo fenol. Si el microorganismo
fermenta el manitol se tornará el medio amarillo.
Si no lo fermenta, se tornará color rojo cereza.
Es fermentado por el S. aureus.
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Métodos de Siembra
Sembrar una bacteria es el acto de colocarla en un medio de cultivo apropiado para promover su crecimiento y desarrollo
Para desarrollar una bacteria invitro hay que proporcionarle :
1-Nutrientes con los medios de cultivos que requieran.
2-La atmósfera apropiada3- La temperatura optima, entre otros.El resultado de la siembra es el cultivo
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Métodos de Siembra
Medio: Líquidos o caldos
Instrumento: AsaMétodo: Dilución
Finalidad: poner la bacteria en suspensión
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Métodos de SiembraMedio: SemisólidoInstrumento: Aguja
Método: Punción oPicadura
Finalidad: observar la Movilidad.
Si crece en la línea de siembra es inmóvil.
Si crece fuera de la línea de siembra es móvil
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en tuboInclinado.
Instrumento: Asa o aguja
Método: Estría en superficie
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Métodos de Siembra
Medio de cultivo: TSI
Método: Punción yestrías en superficie.Instrumento:
AgujaFinalidad: Observar los reacciones (cambios) que ocurren en la superficie y laProfundidad.
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Interpretación: Lectura de TSI
Amarillo (A): ácido (fermentó el azúcar)
*Rojo (K): alcalino (no fermentó el azúcar)
*Negro: presencia de H2S (H2S+)
*Burbujas o vacíos, con levantamiento del medio:
presencia de H2 + CO2 H2 + CO2+ Precipitado negro = H2S
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en placa
de PetriMétodo: Estrías porAgotamiento.Instrumento: Asa
Finalidad: Aislarcolonias
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Métodos de Siembra
Medio: Sólido en placade PetriMétodo:
Embadurnamiento
Instrumento: Hisopo
Finalidad: Obtener colonias confluentes.
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Pasos previos a toda coloración Hacer un frotis dejar secar y fijar. Frotis: Dispersar el material
bacteriológico en un porta objetos Secar: Dejar expuesto al aire Fijar: pasar tres veces por el calor
del la llama del mechero ( para evitar que se desprenda durante los lavados).
También se puede utilizar licor de Hoffman.
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Frotis: Dispersar el material bacteriológico en un porta
objetos
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Preparación de un frotis
Sobre un portaobjetos de vidrio, limpio y seco, se coloca una gota del material bacteriológico que se va a teñir (si es líquido) y se extiende o dispersa sobre el porta objetos.
Si es de un medio de cultivo sólido, se coloca una gota de diluyente y el material bacteriológico se homogeniza y se dispersa en el porta objeto.
Si es directo de la muestra se hace rodar el hisopo con que se tomó la muestra en el porta objeto.
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Preparación de un frotis
El material se frota directamente sobre el portaobjetos, donde puede visualizarse con facilidad ( de los cultivos en los medios líquidos)
El material colocado en el portaobjetos se deja secar al aire.
Y se fija al calor del mechero.
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Las coloraciones
Los colorantes son sustancias capaces de ceder o transmitir su color a otras.
Los colorantes pueden ser según su estructura química :
1-Ácidos, básicos y neutros Colorantes ácidos son los que la propiedad colorante
radica en el ion con carga negativa, por lo que se llaman aniónicos
En los básicos ,por el contrario , el Ion coloreado es el positivo , siendo llamado cationico.
Los colorantes neutros son una sales complejas de un colorante ácido y un básico
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Los colorantes
De acuerdo con la estructura molecular, existen en cada colorante dos grupos químicamente activos: el grupo auxocromico, que le da a la molécula su habilidad para reaccionar con el sustrato correspondiente, y el grupo cromóforo
( ion coloreado) que es el lugar donde se verifica la absorción o no de las distintas longitudes de ondas luminosa en la producción del color.
El proceso de coloración de las bacterias es un intercambio iónico entre estas y el colorante
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Las células bacteriana se pueden observar con el microscopio óptico.
La principal dificultad es la falta de contraste entre la célula y el medio que la rodea, y el medio más simple de aumentar el contraste, es la utilización de colorantes.
Estos pueden emplearse para distinguir entre tipos diferentes de células o para revelar la presencia de determinados constituyentes celulares, tales como flagelos esporas, cápsulas, paredes celulares, centros de actividad respiratoria, etc.
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Las células generalmente son tratadas para coagular el protoplasma antes de teñirlas, proceso llamado fijación.
Para bacterias, la fijación por el calor es lo más corriente, aunque también puede fijarse con sustancias químicas como formaldehído, ácidos y alcoholes.
Después de la fijación, si se añade el colorante, no se producen ulteriores cambios estructurales en el protoplasma.
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La fijación se realiza habitualmente en células que han sido fijadas sobre un portaobjetos, tratando después éste con el agente fijador, y siguiendo inmediatamente el proceso de tinción.
La fijación produce habitualmente el encogimiento de las células; la tinción, por el contrario, hace que las células aparezcan mas grande que como son realmente, de manera que las medidas de las células que han sido fijadas o teñidas no pueden realizarse con mucha precisión.
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Los colorantes
La mayoría de los colorantes son compuestos orgánicos que tienen alguna afinidad específica por los materiales celulares.
Muchos colorantes utilizados con frecuencia son moléculas cargadas positivamente (cationes) y se combinan con intensidad con los constituyentes celulares cargados negativamente, tales como los ácidos nucleicos y los polisacáridos ácidos.
Ejemplos de colorantes catiónicos son el azul de metileno, el cristal violeta y la safranina. Otros colorantes son moléculas cargadas negativamente (aniones) y se combinan con los constituyentes celulares cargados positivamente, tales como muchas proteínas. Esos colorantes incluyen la eosina, la fucsina ácida y el rojo Congo
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Los colorantes
Algunos colorantes teñirán mejor sólo después de que la célula haya sido tratada con otra sustancia química, que no es un colorante por sí mismo.
Esta sustancia se denomina mordiente; un mordiente habitual es el ácido tánico, el lugol.
El mordiente se combina con un constituyente celular y lo altera de tal modo que ahora sí podrá reaccionar con el colorante.
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La tinción negativa
Es el reverso del procedimiento de tinción usual: la cápsula se dejan sin teñir, pero se colorea en cambio el medio que las rodea.
Lo que se ve, por tanto, es el perfil de las células. La sustancia utilizada para la tinción negativa es un material opaco que no tiene afinidad por los constituyentes celulares y que simplemente rodea las células, tal como la tinta china (que es una suspensión de partículas de carbono coloidal) o la nigrosina (un colorante negro insoluble en agua).
La tinción negativa es un modo satisfactorio de aumentar el contraste de las células en la microscopia óptica, pero su máxima utilidad está en revelar la presencia de cápsulas alrededor de las células bacterianas.
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Coloración de Gram Ideada en 1884 por Hans Christian Joachim Gram (1853-1938), un médico danés con estudios en bacteriología y farmacología.
La coloración de Gram. tiene interés taxonómico ya que divide las bacterias en dos grandes grupos, bacterias Gram positivas que se tiñen de morado y bacterias gram negativas que se tiñen de rojo
La coloración de Gram es positiva compuesta y diferencial.
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Coloración de Gram
La técnica revela diferencias constitutivas de la pared celular entre bacterias Gram positivas y Gram negativas.
La pared celular de las bacterias Gram positivas posee una gruesa capa de peptidoglicano, la cuál impide que escape el complejo cristal violeta-lugol.
Por el contrario, la capa de peptidoglicano de las Gram negativas es delgada y se encuentra unida a una membrana externa lipídica, susceptible a la decoloración con el alcohol-acetona, el que actúa como un solvente orgánico.
Los lípidos se disgregan con el alcohol acetona y el decolorante penetra a la célula bacteriana decolorándola.
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Pared celular de las bacterias Gram positivas:
El peptidoglicano se dispone en varias capas lo que le otorga grosor a la pared.
Atraviesan el peptidoglicano polisacáridos ácidos, denominados ácidos teicoicos.
Los ácidos teicoicos son de dos clases: poliglicerol fosfato y poliribitol fosfato.
Las funciones primarias de estos polímeros son la estabilización del peptidoglicano y la captura de Mg++.
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Pared celular en bacterias Gram negativas
Su pared celular es más delgada, pero más compleja que la de los Gram positivas.
El peptidoglicano se dispone en una sola capa, pero por fuera de ella se encuentra una segunda membrana denominada membrana externa.
La membrana externa es una membrana asimétrica, porque si bien la monocapa interna está formada por fosfolípidos, la monocapa exterior está formada por un tipo especial de lípido, denominado lipopolisacárido (LPS).
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Pared celular en bacterias Gram negativas
El LPS es una molécula que contiene tres regiones diferentes: el lípido A, el core y el antígeno O.
El LPS constituye una endotoxina, que se libera cuando la bacteria se divide o muere.
Es un potente estimulador de los macrófagos, lo que causa la activa liberación de citoquinas, responsables de las manifestaciones clínicas de las infecciones por bacterias Gram negativas y que varían desde una fiebre hasta el shock séptico.
En esta membrana externa se encuentran las porinas.
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Entre la membrana externa y la membrana celular se crea un compartimiento virtual, llamado espacio periplásmico.
El espacio periplásmico es una matriz que incluye al peptidoglicano, enzimas, proteínas captadoras de nutrientes y sustancias de secreción.
La membrana externa contiene numerosas proteínas, siendo las porinas las más abundantes.
Se denominan así, porque forman poros que comunican el exterior con el espacio periplásmico.
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Pared celular en bacterias Gram negativas
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Pared celular en bacterias Gram negativas
La membrana externa de las bacterias Gram negativas poseen porinas que son canales cargados de agua y que permiten la entrada y salida de sustancias de la célula al exterior y del interior de la célula.
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Coloración de Gram.
Protocolo Hacer un frotis Dejar secar al aire Fijar la muestra con calor a la
llama de una lámpara de alcohol o con el licor de Hoffman.
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Coloración de Gram.
Cristal violeta El lugol entra en las células y forma un
complejo insoluble con el cristal violeta. La mezcla de alcohol-acetona sirve para
realizar la decoloración. Las bacterias Gram. positivas no se decoloran, mientras que los Gram. negativas sí lo hacen.
Para poner de manifiesto las bacterias Gram. negativas se utiliza una coloración de contraste de color rojo; safranina.
Después de la coloración de contraste las células Gram. negativas se observan de color rojo, mientras que las Gram. positivas se observan de color Morado.
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InterpretaciónGram negativas Gram positivas
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Tinción Bacteriológica de Gram.
El equipo para realizar la tinción de Gram. consta de: Colorantes y reactivos :
Cristal Violeta, Yodo-Lugol y Safranina. Solvente: Alcohol-Cetona. Bandeja de tinción. Asa bacteriológica o hisopo. Frasco lavador. Muestra bacteriana sólida (agar), líquida (caldo) o espécimen clínico.
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Coloración de Gram. Paso 1.-
Paso 1.- Cubrir la preparación con Cristal Violeta por 60 seg.
y lavar suavemente con agua.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 82
Coloración de Gram.
Paso 2.- Cubrir la preparación con Yodo-Lugol por 60 seg y lavar suavemente con agua.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 83
Coloración de Gram.
Paso 3.- Cubrir la preparación con Alcohol-Cetona durante algunos segundos (5-10) y lavar suavemente con agua.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 84
Coloración de Gram.
Paso 4.- Cubrir la preparación con Safranina por 60 seg y lavar suavemente con agua.
Secar y Observar con lente de 100x (inmersión).
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Coloración de Gram. preparándonos para la observación al microscopio
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Resultados de la coloración de Gram.Bacterias teñidas de morado: Gram positivas Teñidas de rojo: Gram negativasPodemos observarle la forma, la disposición y la propiedad tintorial.
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Coloración de Ziehl Neelsen
La coloración de Ziehl Neelsen al igual que la de Gram es positiva, compuesta y diferencial.
Reactivos: fucsina básica fenicada - solución de alcohol-ácido (3% de HCl en etanol de 95°) - azul de metileno
Esta tinción permite diferenciar a los microorganismos que son ácido alcohol resistentes, de color rojocolor rojo, de los que no lo son, de color azulde color azul. Se utiliza en la identificación de mycobacterias.
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Ziehl Neelsen
La coloración ácido-resistente es otra coloración muy usada para el examen microscópico de las mycobacterias, y las nocardias.
Debido al crecimiento lento de la mayoría de las mycobacterias, los extendidos para identificar bacilos alcohol-ácido resistente juegan un papel importante en el diagnóstico temprano de la infección por mycobacterias.
El método clásico de coloración ácido-resistente es el descubierto por Ziehl y Neelsen en el año 1882 y ampliamente usado hasta la fecha para
el diagnóstico de Mycobacterium Tuberculosis y Mycobacterium leprae.
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Es una coloración específica para colorear bacterias cuyas paredes celulares contienen largas cadenas de ácidos grasos.
Por su alto contenido de acido micolico (cera no saponificable) tienen la capacidad de unir el colorante fucsina a su pared de manera que hacen a la célula resistente a la decoloración con alcohol ácido.
Son bacilos ácido-alcohol resistente (BAAR), las mycobacterias, y las nocardias.
01/08/11 90
Coloración de Ziehl Neelsen REALIZACIÓN
Preparar un frotis bacteriano. Se deja secar al aire y se fija al calor. Cubrir la preparación con carbofucsina. Calentar la preparación con una lámpara de alcohol durante 5
min. No debe hervir. Si se evapora, se añade más carbofucsina para que no se seque
en ningún momento. Lavar con agua el resto de colorante. Decolorar con la mezcla alcohol-ácido por tres minutos Lavar con agua . Teñir con azul de metileno 1 min. Lavar con agua el resto de colorante. Secar la preparación. Examinar al microscopio.
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Resultados de la coloración de Ziehl Neelsen
BAAR
Resultados de la coloración de Ziehl Neelsen
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 92
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Coloración de Cápsula
La tinta china o la nigrosina dan un fondo
oscuro sobre el cual la cápsula de terminados microorganismos como el Cryptococcus neoformans se observará como un halo claro alrededor del microorganismo.
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Coloración de Cápsula
Método con tinta china (Método de Gin) Técnica Colocar unas gota de la sol. De dextrosa en un tubo. Tomar una pequeña cantidad del material
bacteriológico del cultivo y mezclar con las gotas de dextrosa.
Colocar una gota de tinta china en un porta objetos y añadir una gota de la mezclar anterior y con el extremo de un portaobjetos , hacer un frotis delgado y secar al aire, fijar con alcohol metílico por un minuto.
Teñir por 2 minutos con Cristal violeta. Lavar con abundante agua, secar y observar al
microscopio.
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Coloración de CápsulaResultado
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LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS
(Respiración – Fermentación)
El termino respiración se refiere a todas las reacciones que ocurren dentro de las células de liberación de energía (oxidaciones)
Es posible hacer una distinción entre las oxidaciones que utilizan oxigeno molecular y aquella que no lo hacen como sigue:
Respiración es la oxidación que utiliza oxigeno molecular como aceptor primario de hidrogeno AEROBIA y la oxidación que tiene lugar en ausencia de oxigeno molecular ANAEROBIA.
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LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS
La respiración y la fermentación son los dos mecanismos de que dispone la célula viva para proveerse de energía; ambos llevan a cabo la oxidación del sustrato.
La condición de aerobio o anaerobio puede ser estricta. Es decir ser una necesidad especifica, en tal caso recibe el nombre de anaerobio obligatorioas o aerobios obligatorios, posiblemente este ultimo grupo posee enzimas esenciales, las cuales funcionan únicamente en el estado reducido y son particularmente sensibles a la inactivación del oxigeno.
01/08/11 98
LAS EXIGENCIAS RESPIRATORIAS
Otras son facultativas y son capaces de vivir aeróbica o anaerobicamente.
Microaerofilicos : han sido llamados aquellos organismos que requieren oxigeno libre en menor concentración que la existente en la atmósfera.
Medio de cultivo para el estudio de la respiración bacteriana es el Caldo de Thioglicolato
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Tipos de respiración bacteriana
Aerobia: crece en la superficie del tubo Anaerobia: crece en la profundidad del tubo de caldo de thioglicolato de sodio
Microaerofilica:crece debajo de la zona oxigenada del tubo de caldo de thioglicolato de sodio
Facultativa: crece en todo el tubo de caldo de thioglicolato de sodio
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La respiración bacteriana Medio de cultivo Caldo de thioglicolato de sodio
y el indicador de oxigeno resazurina, azul metileno y otros
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ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO
Durante el proceso del metabolismo algunas bacterias son capaces de reducir a los carbohidratos a compuestos menos complejos que pueden penetrar en el interior de las células.
Para que se den estas reacciones es preciso que los microorganismos sean capaces de elaborar
enzimas.
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO
La mayoría de las bacterias heterótrofas metabolizan la glucosa, pero la degradación sigue distintas direcciones, según la constitución enzimática de las diversas especies de bacterias.
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ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LOS HIDRATOS DE CARBONO
Para realizar esta práctica se requiere de medios de cultivo que contengan azucares
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 103
TSI
contiene tres azúcares que son: glucosa, lactosa y sacarosa contiene también sulfato amínico ferroso, que reacciona con el acido sulfhídrico, con el cual se determina la formación de H2S (sulfuro de hidrogeno)un precipitado de color negro.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 104
01/08/11 105
Interpretación: Se verifican varias reacciones, Ninguna reacción, alcalino superficie/alcalino fondo (K/
K). El medio se queda inerte, no cambia de color por tanto es un “No Fermentador” y se descarta Enterobacteriaceae.
Alcalino superficie/Acido fondo (K/A), significa solo fermentación de la glucosa, por tanto, es un “No fermentador de lactosa” (o sacarosa ).
Acido superficie/Acido fondo (A/A), significa que se trata de un fermentador de lactosa (o sacarosa en TSI).
Alcalino superficie/Acido fondo con precipitado negro, se reporta como H2S positivo.
Además de las características anteriores se pueden observar burbujas o rompimiento del medio debido a la producción de gas en el medio.
Interpretación:TSI
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 106
01/08/11 107
MAC-CONKEY:
Es un medio de cultivo selectivo y diferencial Es un medio de cultivo selectivo para bacterias
Gram. negativas Este medio contiene el azúcar lactosa y un
indicador de PH( rojo neutro), entre otros componentes.
Si la bacteria fermenta el azúcar las colonias se tornan rosadas. Si no la fermenta las colonias se observan
transparentes.
01/08/11 108
Mac Conkey se observan Colonias Rosadas. Resultado: Lactosa Positivo
*
01/08/11 109
Mac Conkey: Colonias Claras o TransparentesResultado: Lactosa Negativo
01/08/11 110
Interpretación:
Se verifican dos reacciones Colonias rosadas la bacteria
fermento la lactosa Colonias transparentes la bacteria
no fermento la lactosa
01/08/11 111
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE
(CLBVB):
Es un medio de cultivo selectivo para Gram. negativos. En tubos de Durham cuando hay gas en el tubito invertido nos indica que hay presencia de gas por tanto ha ocurrido la fermentación de la lactosa
Esta reacción es producida por los coliformes .
01/08/11 112
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE (CLBVB):
Interpretación: Si se observa un desplazamiento en
el tubito invertido se reporta: gas + Si el tubito invertido permanece
lleno del liquido se reporta: gas -
CALDO LACTOSADO BILIS VERDE BRILLANTE.
GAS NEGATIVOGAS POSITIVO
01/08/11 114
Prueba de la Coagulasa
cepa de Staphylococcus La coagulasa actúa como una enzima
termoestable que permite diferenciar el Staphylococcus aureus del resto de los Estafilococos coagulasa negativos.
Se producen dos tipos de coagulasa, la unida a la pared celular y la liberada por la célula como coagulasa libre y es la detectada por la técnica en tubo.
La coagulasa actúa sobre la protrombina para producir trombina que actúa sobre el fibrinógeno para formar el coagulo.
01/08/11 115
Interpretación:
Si se forma un coagulo la prueba es: positiva
Si no se forma el coagulo la prueba es: negativa.
Staphylococcus aureus forma un coagulo, es coagulasa +
Staphylococcus que no forman coagulo son: coagulasa –
01/08/11 116
Interpretación:
Coagulasa + Coagulasa -
01/08/11 117
Prueba de oxidasa
Fundamento: La Prueba de la Oxidasa hace una diferenciación
inicial de las bacterias Gram. negativas.
Se basa en que determinadas bacterias poseen las enzimas citocromo oxidasacitocromo oxidasa o indofenol oxidasa, que catalizan el transporte de electrones.
En esta prueba, un tinte incoloro, como el dihidrocloruro de p-fenilendiamina sirve como un aceptor artificial de electrones para la enzima oxidasa.
El tinte es oxidado y forma el compuesto coloreado, azul de indofenol.
01/08/11 118
Prueba de oxidasa
01/08/11 119
La prueba de la Catalasa
Esta prueba permite diferenciar los microorganismos aerobias y facultativas Catalasa POSITIVA de las anaeróbicas y de las Microaerofilicas las cuales son Catalasa negativa
La catalasa es una enzima respiratoria, es una La catalasa es una enzima respiratoria, es una porfirina de hierro cuya funcion es desdoblar porfirina de hierro cuya funcion es desdoblar los peroxidos en Hlos peroxidos en H22O y OO y O22
Se utiliza en el laboratorio para diferenciar el Estafilococos de Estreptococos
01/08/11 120
Prueba de la Catalasa+
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LAS PROTEINAS
Proteólisis
La proteólisis es la degradación de las proteínas.
El resultado final de la acción proteolítica es la producción de aminoácidos.
01/08/11 121
Durante su metabolismo las bacterias que poseen enzimas proteolíticas son capaces de desdoblar las proteínas que son moléculas demasiado grandes para poder penetrar en las células bacterianas razón por la cual tienen que ser desarticuladas en compuestos más sencillos para que las células puedan utilizarla como elemento nutritivo.
01/08/11 122
INDOL
El Indol es uno de los productos de degradación metabólica del aminoácido triptofano.
Las bacterias que poseen la triptofanasa son capaces de hidrolizar el triptofano con producción de indol.
La producción de indol es una característica importante para la identificación de muchas especies de microorganismos.
La prueba de indol está basada en la formación de un anillo rojo cuando el indol reacciona con el grupo aldehído del p-dimetilaminobenzaldehído.
(reactivo de Kovacs ) Este es el principio activo de los
reactivos de Kovacs y Ehrlich. El medio de cultivo utilizado debe ser rico en triptofano.
Anillo rojo+
Anillo amarillo
-
01/08/11 123
UREA
Es una prueba que se realiza para determinar si la bacteria posee la enzima ureasa (esta enzima descompone la urea en amoniaco).
El medio de cultivo es un caldo rico en urea el cual posee un indicador de PH el cual se torna (fucsia) en medios alcalinos.
Resultados: el desarrollo de un color fucsia indica que la prueba es positiva.
Si no hay el desarrollo de un
color fucsia indica que la prueba es negativa
01/08/11 124
Gelatina
Es una prueba que se realiza para determinar si la bacteria es capaz de licuar la gelatina por la presencia de la enzima Gelatinasa.
El medio de cultivo es gelatina.
El fundamento de la prueba es la licuación irreversible de la gelatina
Esta prueba hay que llevarla a la nevera por una o dos horas después de sacarla de la incubadora.
Resultados:NEGATIVA Al sacar la prueba de
gelatina de la nevera está gelificada
POSITIVA Al sacar la prueba de
gelatina de la nevera está liquida (licuación
irreversible)
01/08/11 125
ACCIÓN DE LAS BACTERIAS SOBRE LAS PROTEINASprueba Sustrato Enzima Producto final
Interpretación
urea Caldo de Urea
ureasa Amoniaco Fucsia+Limoncillo-
indol Caldo triptonado o peptonado
Triptofanasa Indol Añadir KovacsAnillo rojo+Anillo amarillo-
Gelatina Gelatina gelatinasa LicuaciónIrreversible
Refrigerar Liquida +Gelifica -
Lisina Lisina Iron Agar (LIA)
Descarboxilasa
Desaminasa
Cadaverina
Ácido alfa ceto carbónico
Fondo morado+ Fondo amarillo-
Superficie rojo con fondo amarillo+ Sin cambio-Precipitado negro H2S
HEMOLISIS
01/08/11 126
Es la destrucción de los glóbulos rojos. Muchos organismos producen sustancias que disuelven los glóbulos rojos, estas sustancias se denominan Hemolisinas.
La Hemólisis se puede observar en medio de cultivo de agar sangre.
Cuando las bacterias producen hemolisinas solubles que dan por resultado la aparición de una zona clara transparente alrededor del crecimiento de la colonia, se ha producido una Hemólisis tipo Beta.
01/08/11 127
HEMOLISIS Otros microorganismos producen otro tipo
de hemolisinas que originan cambios en la hemoglobina de los glóbulos rojos (transformación a meta hemoglobina) la cual se hace visible por una coloración verde alrededor de las colonias. Entonces se dicen que han producido una Hemólisis tipo Alfa.
Cuando no se produce ningún cambio se le denomina Hemólisis tipo Gamma.
01/08/11 128
HEMOLISIS: Alfa, Beta y Gamma
No Hemolitica Beta
Alfa
01/08/11 129
Pigmentos
LOS PIGMENTOS Son sustancias coloreadas metabolizadas por
microbios. Uno de los caracteres más llamativos de los
cultivos es la pigmentación o cromo génesis. Se denomina endopigmento cuando el pigmento
no se segrega al exterior sino que queda en el interior de la célula bacteriana
Se denomina exopigmento (Pseudomonas) cuando el pigmento se segrega además de las colonias al medio exterior.
01/08/11 130
Exopigmento
Exopigmento (Pseudomonas) cuando el pigmento se segrega además de las colonias al medio exterior.
Es de color verde
01/08/11 131
Endopigmento
Se denomina endopigmento cuando el pigmento no se segrega al exterior si no que queda en el interior de la célula bacteriana
Staphylococcus aureus Endo pigmento de
color amarillo dorado
01/08/11 132
Endopigmento
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 133
PRUEBA DE SENSIBILIDAD A LOS QUIMIOTERAPEUTICOS.
Antibiograma
La determinación de la sensibilidad antimicrobiana a los aislamientos bacterianos que tienen significado clínico es una de las principales funciones del laboratorio de microbiología.
El objetivo principal de las pruebas de sensibilidad es predecir el éxito del tratamiento con los antimicrobianos ensayados.
Esto significa que un resultado “sensible” implica una alta probabilidad de que el paciente va a responder al tratamiento con ese determinado antimicrobiano. Y un resultado dado como “resistente” es casi seguro que falle con ese tratamiento.
La prueba de sensibilidad mas usada es el método Estandarizado de Disco-Difusión (Kirby-Bauer)
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 134
Antibiograma
Método de la prueba: Difusión –Kirby Bauer Método de la siembra: Embadurnamiento Medio de cultivo: MH Instrumento de siembra : Hisopo Resultados: Sensible, resistente e intermedio Sensible: si al rededor del disco de sensibilidad el
microorganismo no crece y se forma un halo claro de inhibición.
Resistente: si al rededor del disco de sensibilidad el microorganismo crece y NO se forma un halo claro de inhibición.
Intermedio :si alrededor del disco de sensibilidad se forma un pequeño halo o si el halo es grande pero aparecen colonias de bacterias mutantes
01/08/11 135
AntibiogramaResistente
Sensible
01/08/11 136
Antibiograma
SENSIBLE: Si alrededor del disco se forma un halo de inhibición que corresponda a los puntos de corte establecidos (CLSI) para cada combinación de microorganismo/antimicrobiano
Esta categoría implica que una infección dada por la cepa en estudio puede ser tratada apropiadamente con dosis de antibiótico recomendada para el tipo de infección y la especie infectante a menos que hubieran contraindicaciones.
01/08/11 137
Antibiograma
RESISTENTE: No se forma un halo claro alrededor del disco de sensibilidad.
La bacteria crece alrededor del disco.
Producción de ß-Producción de ß-lactamasas.lactamasas.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 139
Las enzimas son codificadas por:
Genes de los cromosomas. Plásmidos extracromosomales.
01/08/11 140
Su producción puede ser :
Constitutiva (cuando se hace de manera constante).
Inducible, es decir, luego de la exposición de la bacteria al antibiótico.
01/08/11 141
Las ß-lactamasas rompen el anillo lactámico de penicilinas.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 142
01/08/11 143
Sustancias más estables frente a la acción de las ß-lactamasas.
Las cefalosporinas de espectro extendido (ceftazidima, cefotaxima y ceftriaxona).
Los antibióticos monobactámicos como aztreonam.
01/08/11 144
Estadísticas
En 1994, fue reportado que 1.3% a 8.6% de los aislados clínicos de E. coli y Klebsiella pneumoniae eran resistentes parcial o totalmente a ceftazidima y hasta en 50% de los casos, tal propiedad estaba relacionada con la síntesis de ß-lactamasas de espectro extendido.
RESISTENCIA A ANTIBIÓTICOS ß-LACTÁMICOS.
01/08/11 146
Compuestos B- Lactamicos.
• Penicilinas. • Cefalosporinas.• Monobactámicos. • Carbapenems.
01/08/11 147
Principales mecanismos de resistencia a los ß-lactámicos
Cambios en las proteínas fijadoras de penicilina.
Alteraciones en las porinas de la membrana externa.
Producción de ß-lactamasa que inactivan al antimicrobiano.
01/08/11 148
Modificación de las proteínas fijadoras de penicilina.
Mutación de los genes que codifican para estos péptido.
Adquisición de genes extraños que codifican para nuevas proteínas fijadoras de penicilina.
01/08/11 149
Composición de la envoltura de las bacterias Gram. positivas (A) y Gram. negativas (B).
01/08/11 150
Impermeabilidad de la pared.
01/08/11 151
Bacterias que modifican las porinas de su cápsula externa .
E. coli. Pseudomonas aeruginosa . Serratia marcescens.
IMPORTANCIA CLÍNICA DE LA RESISTENCIA BACTERIANA.
01/08/11 153
MEDIDAS PARA MODIFICAR LA VELOCIDAD CON QUE SE DESARROLLA LA RESISTENCIA.
El uso racional de estos medicamentos.
La educación de los pacientes. La selección adecuada del
régimen antibiótico.
01/08/11 154
BACTERIAS QUE SON RESISTENTES POR LA ACTIVIDAD DE ß-LACTAMASAS
DEL GRUPO 2.
Escherichia coli. Klebsiella spp. Proteus spp.
01/08/11 155
El enterococo es un microorganismo patógeno que actualmente presenta insensibilidad intrínseca a varios antibacterianos comunes y a ciertos compuestos como vancomicina y otros antibióticos glicopéptidos de reciente desarrollo.
01/08/11 156
De acuerdo con los reportes más recientes, emitidos por los Centros para el Control de Enfermedades de Atlanta, en Estados Unidos la prevalecía de cepas nosocomiales de neumococo resistente a vancomicina es de 10% a 12% y dicha cifra va en aumento.
01/08/11 157
La resistencia a vancomicina es, en estos momentos, un motivo de creciente preocupación para la comunidad médica, ya que tal antibiótico era considerado como la última herramienta para combatir las infecciones causadas por gérmenes multirresistentes, en particular estafilococo coagulasa negativo y S. aureus resistente a meticilina.
01/08/11 158
ACCIÓN DE LOS AGENTES QUÍMICOS: ANTISÉPTICOS Y
DESINFECTANTES SOBRE LOS MICROORGANISMOS
Determinar la acción de los agentes químicos: antisépticos y desinfectantes sobre los microorganismos e interpretar los resultados tiene importancia para el área de salud
01/08/11 159
El antiséptico o el desinfectante en el disco difunde a través del agar.
En la medida que aumenta la distancia al disco, disminuye logarítmicamente la concentración del antiséptico o el desinfectante, produciéndose en el agar un gradiente de concentración del antiséptico o el desinfectante alrededor de cada disco.
Continua-----
Concomitantemente con la difusión del antiséptico o el desinfectante, la bacteria que fue inoculada en la superficie y que no es inhibida por el antiséptico o el desinfectante continúa su multiplicación hasta tener un crecimiento visible.
En las áreas donde el antiséptico o el desinfectante inhibió la bacteria, se produce una zona de inhibición del crecimiento alrededor de cada disco.
01/08/11 160
01/08/11 161
Antiséptico / Desinfectante
01/08/11 162
Resultados
Eficaz : Si el microorganismo no crece alrededor del disco impregnado de antiséptico o desinfectante
Ligero Eficaz : Si el microorganismo crece ligeramente alrededor del disco impregnado de antiséptico o desinfectante
No Eficaz : Si el microorganismo crece alrededor del disco impregnado de antiséptico o desinfectante
01/08/11 163
ESTUDIO BACTERIOLOGICO DEL AGUA Y OTROS LIQUIDOS DE
CONSUMO
01/08/11 164
Estudio bacteriológico del agua y otros líquidos de consumo
Para determinar la presencia de coliformes y contaminación fecal se realizan dos pruebas:
La prueba preliminar _estadística y la prueba confirmatoria.
01/08/11 165
Prueba Preliminar
Para hacer la prueba preliminar se utilizan 5 tubos de caldo lactosado Bilis Verde Brillante a los cuales se les añade 5 ml. De la muestra en estudio.
Se lleva a la incubadora. a las 24 horas se lee
cuantos tubos hay positivos y cuantos tubos negativos, utilizando una tabla ESTÁNDAR.
Se obtiene el numero mas probable de coliformes presentes en la muestra.
01/08/11 166
Tabla para obtener el No. Mas probable de coliformes en el liquido estudiado
Tubos de C.L.B.V.B.
NEGATIVOS POSITIVOS No. Mas probable de coliformes en el liquido estudiado
5 0 0
4 1 200
3 2 510
2 3 920
1 4 1,610
0 5 Mas 1610
01/08/11 167
IMViC
El IMVIC esta conformado por 4 pruebas: Indol, Rojo de metilo, Vogues-proskawer y
Citrato.
01/08/11 168
IMViC
Resultados:
++-- E. coli
01/08/11 169
IMViC
Resultados:
- - + +
Klebsiella
o Enterobacter
La prueba del IMViC puede ser sustituida por una prueba de movilidad en semisolido y una prueba de indol
La E. coli: indol positivo
Es una bacteria móvil
Brillo metálico en EAM
Klebsiella es inmóvil
Indol negativo
o Enterobacter Indol negativo Es móvil
01/08/11 170
01/08/11 171
sembrando en Eosina azul de metileno(EAM).
La E. coli crece con brillo verde metálico.
La E. coli es la bacteria que se toma como índice de contaminación fecal
01/08/11 172
Eosina Azul de MetilenoEAM con brillo
01/08/11 173
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN EN EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
Cándida albicans Tubo
germinativo positivo
01/08/11 174
Test de Camp
Para diferenciar a los estreptococos grupo B
01/08/11 175
Sensibilidad a la optoquina / Streptococcus pneumoniae
(en agar sangre
01/08/11 176
Bacilos gram. Negativos Fermentadores de Glucosa
Haemophilus influenzae
Coloración de Gram. Forma: Coco Bacilos Propiedad tintorial.
Gram. Negativo
01/08/11 177
01/08/11 178
01/08/11 179
PRUEBAS DE IDENTIFICACIÓN EN EL LABORATORIO DE BACTERIOLOGÍA
Diplococos gram. Negativos
Neisseria gonorroheae
Coloración de Gram. Forma. Cocos Disposición:
diplococos arriñonados intracelulares
Propiedad tintorial. Gram. negativo
( Cocos teñidos de rojo de rojo)
01/08/11 180
Prueba de oxidasa
Prueba de oxidasa + en la N. gonorroheae
igual que N. meningitidis
Control de Microorganismos
1.- De qué métodos se vale el hombre para el control de los microorganismos?
De agentes físicos, químicos y quimioterapeuticos. 2.- Define los siguientes términos: Esterilización: Es el proceso de destruir todas
las formas de vida microbiana. Estéril: Libre de vida de cualquier clase. Desinfectante: Es un agente que tiene la
propiedad de matar las formas de desarrollo, pero no necesariamente las esporas resistentes de microorganismos patógenos.
Se aplica en superficies inanimadas (pisos, mesas, paredes).
01/08/11 181
Desinfección : Es la operación de destruir agentes infecciosos.
Antiséptico: Sustancia que impide el desarrollo de microorganismos por destrucción o inhibición de su crecimiento o actividad. Contrario al desinfectante se aplica sobre el cuerpo.
Séptico: Caracterizado por la presencia de microorganismos perjudiciales en el tejido vivo.
Bactericida: Agente que mata a las bacterias (Acción irreversible).
Bacteriostático: Agente que inhibe la multiplicación bacteriana (Acción reversible).
Germicida: Agente que mata microbios. Desgerminación: Procedimiento encaminado a
disminuir el numero de gérmenes en un área, tal es el caso de aseos de pisos y descontaminación de paredes y techos.
01/08/11 182
Agentes antimicrobianos
Agentes antimicrobianos: son los que interfieren en el crecimiento y la actividad de los microbios y se denominan terapéutico (se utilizan en el tratamiento de las infecciones).
3.- Cuáles son los factores que influyen sobre la esterilización y la desinfección? La hidratación, el tiempo, la temperatura, concentración, materia orgánica extraña, pH.
4.- Cuál es el modo de acción de los agentes antimicrobianos?
Daños a la pared celular. Alteración de la permeabilidad celular. Alteración o coagulación de las moléculas de proteínas y
de los ácidos nucleicos. Inhibición de la acción enzimática. Mecanismos genéticos.
01/08/11 183
5.- Control por agentes físicos. Cuáles son los agentes físicos más usados? La temperatura. Radiaciones. Filtración. Gases. Presión osmótica. 6.- Por qué mata el calor seco a las bacterias?
Porque les coagula las proteínas y las deshidrata. Por qué mata el calor húmedo a las bacterias? Por hidrólisis y coagulación de las proteínas
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 184
7.- Mencione los medios mas usados para matar bacterias por calor húmedo: el autoclave, la ebullición, la tindalización, Pasteurización.
8.- Entre los agentes químicos capaces de matar bacterias, cuáles son los más usados? Alcoholes, fenol y compuestos fenolicos, metales pesados y sus compuestos, agentes oxidantes, colorantes, detergentes, gases.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 185
10.- Cuál es el mecanismo de acción de los antibióticos?
Inhibición de la formación de la pared celular. Ej.: Penicilina, cesfalosporina, vancomicina.
Efecto sobre la membrana celular. Ej.:Polimicina, nistatina, anfotericina, etc.
Inhibición de la síntesis proteica. Ej.: tetraciclina, cloranfenicol, gentamicina, neomicina.
Acción sobre los ácidos nucleicos. Ej.: griceofulcina, antinomicina.
inhibición de metabolitos esenciales, los sulfas que compiten con el paba.
01/08/11 186
1.- En qué consiste cultivar una bacteria? Es el procedimiento por el cual promovemos el crecimiento de los microorganismos in vitro y el medio por el cual estudiamos su fisiología.
2.- Cuál es la formula básica de los medios de cultivo?
Agua Na Cl Peptona Extracto(levadura o carne) 3.- Cómo se clasifican los cultivos según su estado
físico? Líquidos Semi-solidó solidó
01/08/11 187
4.- Cómo se clasifican los cultivos según su uso y finalidad? Enriquecidos Diferenciales Selectivos Especiales Simples 5.-Define: Medio de cultivo simple: crecen en ellos microorganismos no
exigentes. Medio de cultivo enriquecido: contienen nutrientes extra
como el agar sangre y agar chocolate Medio de cultivo selectivo: medios en los que se favorece el
desarrollo de determinado microorganismo, al contener sustancias inhibidoras para los demás gérmenes. MC, EAM etc
Medio de cultivo diferencial: medios generalmente sólidos, que le imparten algunas características especiales a las colonias de determinado microorganismo, por medio de cual podemos fácilmente identificarlo. MC y EAM
01/08/11 188
6.- Cómo se le llama a la sustancia que proporciona solidez a los medios de cultivo? agar
7.- Qué son los pigmentos bacterianos y como se clasifican? son sustancias coloreadas elaboradas por las bacterias
Exopigmento Endopigmento.
01/08/11 189
Bioseguridad
La Bioseguridad no solo esta limitada a un mero listado de
normas de trabajo sino que requiere de participación. Es el conjunto de medidas preventivas destinadas a
proteger la salud de los trabajadores, los usuarios del servicio y la preservación del medio ambiente frente a riesgos de agentes biológicos, físicos o químicos.
agentes físicos, químicos y biológicos en sus áreas de trabajo, a los usuarios del servicio y preservar el ambiente.
La Bioseguridad se concibe hoy como: Un derecho de la población (que exige la protección de las
personas y del ambiente) Derecho de los pacientes Derecho de quienes trabajan en ellos. Se relaciona así con
la higiene hospitalaria y el control de las infecciones nosocomiales y con la higiene y la seguridad en el trabajo
01/08/11 190
Objetivos de las normas de Bioseguridad
Reducir el riesgo de accidentes en el personal que labora en los laboratorios de microbiología provocado por las acciones que estos realizan.
Reducir la contaminación ambiental producto de los desechos emanados de los laboratorios
Asegurar la integridad de las muestras bacteriológicas contra la degradación o contaminación de las mismas que pueda poner en peligro la validez de los resultados.
Proteger la salud del personal que labora en laboratorios frente a riesgos asociados con
01/08/11 191
Bioseguridad
Normas generales de bioseguridad Colocar la señal de Riesgo Biológico. Utilizará bata de trabajo. Evitar su uso fuera de los
ambientes del laboratorio. Utilizar guantes, mascarillas, lentes y/o cubreboca
para todos los trabajos, que obliguen el contacto de material infeccioso del nivel 4
Evitar entrada del personal ajeno al laboratorio durante la jornada de trabajo
Durante el trabajo deberá mantenerse las puertas cerradas
No comer, beber, fumar, aplicarse cosméticos dentro del ambiente de laboratorio
Lavarse las manos antes y después de manipular el material biológico con jabón líquido.
Usar toallas desechables para el secado de las manos.
No utilizar las neveras para almacenar alimentos. 01/08/11 192
Bioseguridad
No conservar alimentos en el área de trabajo del No manipular material infeccioso en el área de papelería.
No reencapuchar las agujas, pues es una fuente importante de accidentes corto punzantes.
En caso de ruptura de material de vidrio, no recoger vidrios rotos con los dedos.
01/08/11 193
Bioseguridad
Descartar agujas u otros materiales punzocortante en recipientes de paredes gruesas, NUNCA EN LA BASURA COMÚN
Descontaminación de los desechos contaminados antes de su eliminación según tipo
Disponer de manual de procedimientos para toma de muestras variadas
01/08/11 194
Bioseguridad
Todo el personal del laboratorio deberá ser sometido a un examen médico completo, que debe comprender una historia clínica detallada al momento de su incorporación a la institución, este debe ser repetido una vez al año
Todo el personal del laboratorio recibirá inmunización protectora según área específica en que labore, bajo supervisión médica y según criterio epidemiológico
01/08/11 195
Bioseguridad
Las personas que usan pelo por debajo de los hombros deben protegerse con gorro o mantener amarrado el cabello hacia atrás.
No usar durante la jornada de trabajo brazaletes o collares largos.
Usar zapatos que cubran completamente los pies
01/08/11 196
Bioseguridad
Normas de Bioseguridad para evitar riesgos físicos
Tener totalmente libres las zonas de circulación.
Mantener orden en el laboratorio. Tener estantes seguros. Evitar sobrecarga en las conexiones
eléctricas Utilice, siempre que sea posible, ayudas
mecánicas para manipular cargas
pesadas. 01/08/11 197
01/08/11 198
Señal de Riesgo Biológico.
01/08/11 199
Debes recordar:
1-Cuales son las formas fundamentales de las bacterias? cocos, bacilos y helicoidal
2-Cuales son las formas fundamentales de los hongos?
Levaduriforme y filamentosa
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 200
Hongos filamentosos
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 201
Levaduras
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 202
5.- Esquematice una célula bacteriana y póngale sus nombres a las diferentes partes.
Diagrama de un Corte Axial de una Bacteria Fimbrias Membrana Citoplasmática Sustancias Nuclear Gránulos Flagelos Cápsulas Pared celular
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 203
Célula bacteriana
6.- Mencione las partes fundamentales de las bacterias.
Partes fundamentales: Membrana citoplásmica. Pared celular Citoplasma material nuclear. Mesosoma. Ribosomas. Partes especiales. Fimbrias Flagelos Espora Cápsula
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 204
7.- Esquematice y póngale sus nombres a los diferentes tipos de flagelos.
Los flagelos son apéndices muy delgados que sobresalen a través de la pared celular y se originan en el citoplasma.
8.- De qué sustancia están químicamente compuestos los flagelos de la bacterias? Por una proteína llamada flagelina.
9.- Los flagelos les proporcionan a las bacterias: movilidad.
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 205
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 206
Flagelos
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 207
Bacteria con flagelos
01/08/11 Altagracia Jimenez Diaz MA 208
Fimbrias o Pilis:
Fimbrias o Pilis: Son apédices filamentosos que no son flagelos.
Son más pequeños y no tienen función en la movilidad. Hay varios tipos como la F que funciona en la cópula sexual de transmisión de material genético que se llama conjugación.
Las fimbrias facilitan la adherencia a las células epiteliales, como ocurre en pacientes con fibrosis quística, en los cuales la infección por pseudomonas esta relacionada con la presencia de fimbrias y otros factores.
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Esporas
10.- Defina espora bacteriana : se denomina también endoesporas, pues se produce intracelularmente, y son formas resistentes que adquieren los microorganismos en determinadas condiciones.
Contienen acido dipicolinico + calcio
11.- De qué sustancia están químicamente compuestas las esporas bacterianas? De ácido dipicolinico y calcio.
12.- Qué le proporcionan las esporas a las bacterias? Resistencia
13.- Define cápsula bacteriana: cubierta mucilaginosa que cubre toda la célula.
Aumenta la capacidad infecciosa de la bacteria.
Son las causantes de algunas molestias en procesos industriales porque producen material viscoso.viscoso.
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14.-Que le proporcionan las cápsulas a las bacterias? Una cubierta protectora.
15.- De qué sustancia están químicamente compuestas las cápsulas bacterianas? De polisacáridos como : dextran, dextrin, levan y celulosa.
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Cápsulas
La capsula es un Factor de virulencia
Esta es una coloración negativa porque no se tiño la cápsula se
observa REFRINGENTE
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Es un recurso didáctico fácil de elaborar, económico se puede enviar por correo electrónico , lo puedes colocar en una pagina Web y permite a los usuarios aprender, a su medida según el tiempo disponible en su hogar cómodamente y compartirlo con sus compañeros, estudiar a distancia y se ha comprobado que el aprendizaje con su uso es eficaz, eficiente y efectivo.
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Se le debe hacer revisiones permanentes y actualizarlo
Se entregará a la cátedra de microbiología a la cual pertenezco para que le hagan las revisiones y correcciones pertinentes.
Agradezco las sugerencias a la siguiente Dirección electrónica A Jiménez 16@ hot mail. com
Manual de práctica de Microbiología
Digital
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