tema3r
TRANSCRIPT
Tema 3
CONCEPTE DE LINEALITAT
Continguts• Corbes de calibratge• Concepte d’absorció selectiva• Concepte de linealitat• Selecció de la longitud d’ona• Càlcul de la concentració d’una substància per
extrapolació• Exemple: determinació de l’àcid úric sèric• Procés de calibratge. Resum• Relació entre els resultats obtinguts i les possibles
patologies associades
Objectius específics
• Definir el concepte de linealitat entre dos paràmetres
• Confeccionar gràfics de calibrat i interpolar resultats
• Descriure com es prepara un “blanc”• Definir la utilitat d’un calibrador, estàndard o
patró• Identificar la relació entre els resultats i les
possibles patologies associades.
Corbes de calibratge• Espectrofotòmetre• Reactiu i mètode de la tècnica a calibrar• Mesurar les ≠ absorbàncies o les ≠ trasmitàncies per a les ≠ • Representació gràfica (A o T en l’eix y o ordenada i en l’eix x o abscissa)
• http://upload.wikimedia.org/wikipedia/commons/2/2c/3D_coordinate_system.svg
Absorció selectiva
• En la zona de màxima absorció (banda A) hi ha una absorbància màxima per a una determinada
• Direm que la substància posseeix absorció selectiva per a la radiació que li correspon a aquella
Concepte de linealitat
• Gràfica amb valors d’absorbàncies (A) en ordenades i valors de concentració (c) en abscisses
• Diluïm progressivament el patró (estàndard o calibrador)
• Mesurem l’absorbància de cada dilució en la dins la banda A
• Obtindrem una recta (línia contínua) que demostra el compliment de la llei de Lambert-Beer
• Per a mostres molt concentrades, ens cal diluir-les..
• Si utilitzem una dins la banda B, obtindríem una corba i no compliríem la llei de L-B
Selecció de la • L’estructura química d’una molècula és la
responsable de que s’absorbeixi una radiació d’una determinada λ
• Hem de seleccionar λ dins la banda A• A vegades utilitzem radiacions diferents, per
exemple: Amàx (pic màxim) i altres equidistants als costats de la màxima (A1 i A2). Aleshores, utilitzarem per a calcular la concentració, l’anomenada Aco(absorbància corregida d’Allen)
Aco(absorbància corregida d’Allen)
Aco = Amàx - [(A1+A2)/2]
Així evitem interferències, però sempre hem de trobar-nos dins la linealitat
Càlcul de la [ ] d’una substància per extrapolació
• Material necessari:• Mostra (sèrum, plasma, orina, LCR,..)• Reactius (solucions i patró) • Mètode o tècnica• Espectrofotòmetre• Corbes: A/λ , A/c o T/c