TECNICAS DE TRABAJO Y METODOS DE ASEPSIA EN EL LABORATORIO DE MICROBIOLOGIA

Resumen

Los conocimientos previos son fundamentales por eso se recomendó leer un texto de microbiología general sobre los aspectos relacionados con el trabajo en laboratorio. En este lugar se debe tomar ciertas medidas para prevenir y disminuir el riesgo de accidentes que vayan en contra de nuestra salud y la de los demás, para tal motivo antes de comenzar con la práctica la docente procedió a explicar las normas básicas a tener en cuenta en el laboratorio, a modo de ejemplo, el correcto uso de la bata, no ingerir alimentos durante el transcurso de la práctica, la desinfección de nuestro lugar de trabajo (mesón) además de las manos antes y al finalizar, con alcohol para evitar la transmisión de agentes patógenos que pueden ser transferidos a otros ambientes fácilmente, causantes de enfermedades. Se realizo el reconocimiento de los equipos usados en el laboratorio, uso, manejo adecuado, cual es la función de estas herramientas en el proceso de la asepsia entre los que tenemos: la autoclave, la incubadora, cabina de flujo laminar, el baño maría, la nevera, horno de esterilización. Durante la práctica se procedió a utilizar las herramientas para la siembra de cultivos bacterianos, para ello se utilizo: asa bacteriológica, agar nutritivo, tubo de ensayo con tapa, mechero, incubadora. Poniendo en práctica las técnicas de asepsia previamente adquiridas como quemar el asa al rojo vivo para esterilizarla, flamear cerca del mechero los tubos de ensayo, las cajas de petri, se procedió a realizar un ejercicio de siembra en el medio de cultivo el agar nutritivo.

Introducción

El laboratorio de microbiología es un lugar convenientemente habilitado donde con las debidas precauciones se pueden manejar y examinar microorganismos. Cuando se manipula cualquier tipo de muestra debemos tener en cuenta la posibilidad de riesgos, estos pueden ser biológicos o del ambiente.

Todos los microorganismos que se manejen deben ser manipulados con precaución por su potencial patogenicidad. La peligrosidad de un agente está directamente relacionada con el tipo de manejo a la que es sometido, Por ello se debe tener en cuenta: Conocer los agentes, sustancias y productos peligrosos, la metodología de trabajo, el equipamiento, las medidas a tomar en caso de emergencia, las normas relacionadas con la seguridad biológica.

Esta práctica permite aprender el manejo de técnicas asépticas con sus respectivos materiales y equipos, para realizar comparaciones y estudios y así determinar la efectividad de la asepsia en los procedimientos y considerar el impacto causado, por el ambiente externo en las muestras microbianas.

Metodología (Diagrama de flujo)

Técnicas de asepsia

+ + + +

Mechero Asa Tubo + Agar Cultivo bacteriano

Agua destilada

Procedimiento.

1. Calentar el asa bacteriológica al rojo vivo para esterilizarla.2. Al lado del mechero, destape cuidadosamente el tubo de agua destilada estéril

y con el asa tome una gota y raye suavemente la superficie del agar en estría.3. Una vez realice la siembra, vuelva a quemar el asa para desinfectarla.4. Flamee la boca del tubo de ensayo.5. Repetir el procedimiento colocando la gota a partir del tubo que contiene el

cultivo bacteriano6. En todos los caso, evite la manipulación libre del asa bacteriológica y flaméela

hasta lograr la esterilización.7. Ahora apague el mechero, con el asa sin esterilizar tome la gota de agua

destilada estéril y raye suavemente la superficie del agar.8. Rotule y coloque en forma invertida en la incubadora a 35 +/- 2 °C por un

periodo de 24 horas.

DISTRIBUCION DE MICROORGANISMOS EN AMBIENTES NATURALES

MICROORGANISMOS DEL AIRE

Agar

Dejarla expuesta por 15 minutos, después tapar adecuadamente.

MICROORGANISMOS EN SUPERFICIES

+ + Copos de Solución AgarAlgodón salina

Humedecer en solución salina un copo de algodón.

Frotar sobre una superficie del laboratorio (mesa, suelo, pared). Aplicar en el medio de cultivo en forma de estrías.

MICROBIOTA DEL CUERPO HUMANO

+ Manos Agar

Colocar los dedos sobre el medio de cultivo con las manos sin lavar. Enjuagar con agua y repetir el procedimiento en otra caja de petri.

Lavar sus manos con agua, jabón y cepillo y colocar los dedos sobre la superficie en otra caja.MUCOSAS

+ + + Mucosa Copo de Sln salina Agar Algodón

Introducir un copo de algodón humedecido en solución salina estéril en las mucosas y repetir el procedimiento anterior.

Nota: Rotular y sellar debidamente las cajas de petri e incubar a 35 ± 2 ªC durante 24 a 48 horas, teniendo la precaución de colocar la caja invertida tal como se le ha indicado.

Resultados

Imágenes

Eschericia Coli Manos sin lavar

Manos lavadas con agua Manos lavadas con jabón

Superficie Sin asepsia

Mucosa

Observaciones

Conteo de colonias:

Manos sin lavar: 752 Manos lavadas solamente con agua: 624 Lavadas con jabón: 426 Al aire: 33 Superficie: 6 Mucosa: 270 Sin asepsia: 100

En la experimentación de la microbiota del cuerpo humano , se observo un mayor número de colonias en el agar nutritivo de la manos sin lavar debido a la exposición de agentes patógenos como bacterias del medio ambiente, se noto un disminución al utilizar agua, jabón y cepillo lo que confirma que el uso de agentes químicos reducen la probabilidad de contagio de diferente enfermedades transmitidas por el contacto, las manos lavadas con agua solamente dieron como resultado una leve disminución en las colonias.

La exposición al aire no genero un número representativo de colonias. La mucosa dio como resultado un mayor número de colonias de bacterias

puesto que estas prefieren ambientes húmedos que favorezcan su reproducción.

La asepsia en los procedimientos nos da como resultado un número menor de colonias.

Nota: Los resultados pueden verse alterados por diferentes circunstancias como por ejemplo, hablar durante el desarrollo del experimento, dado que se liberan gotas de saliva con contenidos bacterianos.

Conclusiones

El estudio de las bacterias, virus, parásitos, hongos y otros agentes infecciosos que pueden ser patógenos para el hombre, los animales u otras formas de vida conforman riesgos que varían según el agente infeccioso y los procedimientos utilizados.

Las normas de Seguridad Biológica pretenden reducir a un nivel aceptable el riesgo inherente a la manipulación de material peligroso y son muy rigurosas para los agentes más peligrosos y menos exigentes para los que causan problemas de menor entidad.

La asepsia es un conjunto de procedimientos que tienen por procedimientos que tienen por objeto impedir la penetración de agentes patógenos en un determinado sitio( medio de cultivo)

La esterilización es la muerte o eliminación de todo microorganismo, no existe grado de esterilidad un objeto es estéril o no lo es.

Los métodos de asepsia son determinantes para la realización de los cultivos y la pureza ya que de ello se cultive solo el microorganismo de interés y que este no se vea contaminado por otro.

El reconocimiento de equipos de laboratorio y el correcto uso de estos permite al campo de investigación obtener resultados claros y precisos.

Bibliografía

UNIDAD 2. TECNICAS BASICAS DE MICROBIOLOGIA. Practica 4 Esterilización y preparación de medios de cultivo. (en línea) PDF.

UNIVERSIDAD DEL CAUCA. Practicas de laboratorios de microbiología. Técnicas de trabajo y métodos de asepsia en el laboratorio de microbiología. Guía 1-2