northern blot
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NORTHERN BLOT
Es una técnica de detección de moléculas de ácido ribonucleico (ARN) de una secuencia dada dentro de una
mezcla compleja .
Procedimiento northern blot
PROCEDIMIENTO
El procedimiento general comienza con la extracción del RNA total de una muestra de tejido
homogenizado.
Las muestras de ARN son entonces separadas por electroforesis en gel.
Dada la fragilidad de los geles y la incapacidad de las sondas para penetrar en la matriz, las muestras de RNA, separadas por tamaño tras la electroforesis, serán transferidas a una membrana de Nailon por medio de capilaridad o un sistema de transferencia al vacío.
Los sistemas de capilaridad iónica se utilizan para transferir el ARN desde un gel de electroforesis a una membrana de Northern blot.
Después del marcaje de la sonda, ésta se hibrida con el RNA en la membrana.
Finalmente, la membrana debe de lavarse para asegurar que la sonda se ha unido de forma específica y para evitar ruido de fondo en las señales emitidas por la misma.
Northern blot : transferencia por capilaridad
APLICACIONES
El northern Blot permite observar un patrón particular de expresión genética entre tejidos, órganos, estadios del desarrollo, niveles de estrés ambiental, infecciones causadas por patógenos y durante el curso del tratamiento de las mismas.
Esta técnica se ha utilizado para mostrar la sobreexpresión de oncogenes y la desregulación de genes supresores tumorales en células cancerosas cuando son comparadas con tejidos normales.
Los patrones de expresión obtenidos nos ayudan a conocer las funciones de los genes. Desde que el RNA se separó por su tamaño, las sondas contra el mismo pueden darnos una idea de su tamaño, sugerir ayuste alternativo, o motivos repetidos en la secuencia.
La variación en el tamaño del producto de un gen puede además indicarnos delecciones o errores en el proceso de transcripción.
Alterando la sonda podemos conocer la secuencia e incluso determinar que región del RNA ha sido deleccionada.
APLICACIONES DE LA TRANSFERENCIA NORTHERN