lab micro 8

FACULTAD DE INGENIERÍA MARÍTIMA Y

CIENCIAS DEL MAR

FICHA DE LA PRÁCTICA PARA LABORATORIO

Hoja 1 de 13

CÓDIGO

MATERIA Microbiología FMAR03749

NOMBRE David Quiñonez Acosta

Julio Nivelo

PARALELO 1

TEMA DE LA PRÁCTICA Cinética de crecimiento microbiano

OBJETIVOS GENERALES:

Determinar el crecimiento microbiano mediante conteo de células y turbidimetría para obtener la

curva de crecimiento.

INTRODUCCIÓN:

Cinética de Crecimiento Microbiano

El crecimiento microbiano hace referencia al aumento del número de microorganismos a lo largo del t iempo

y no al aumento de tamaño de un microorganismo. El aumento del número de microorganismos permite la

formación de colonias o de poblaciones. Es por eso que en microbiología el crecimiento se estudia por

poblaciones y no en microorganismos individuales. Las bacterias se reproducen generalmente por fisión

binaria. El resultado de la fisión binaria son dos células hijas por cada célula madre, así, una célula se divide en

dos, dos en cuatro y cuatro en ocho y así sucesivamente. (Magallanes, Castillo, & Rodríguez, 2010)

El intervalo de tiempo que transcurre para la formación de dos células a partir de la célula madre se llama

tiempo de generación o tiempo generacional y al igual que la tasa de crecimiento o cambio en el número de

células por unidad de tiempo, varía en dependencia de las condiciones genéticas de las bacterias y de los

factores nutricionales. (Magallanes, Castillo, & Rodríguez, 2010)

La curva de crecimiento de la población tiene cuatro fases:

1) Fase lag o fase de latencia: es el periodo de adaptación de los microorganismos a un nuevo ambiente, en

este periodo el número de células no se incrementa, sino que se mantiene constante por un largo período que

puede durar desde 1 hora hasta varios días. En esta fase las células presentan gran actividad metabólica. Al

final de la fase la mayoría de las células aumentan su tamaño. (Cruz, 2007)


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2) Fase log. o logarítmica o de crecimiento exponencial: durante este periodo las células se empiezan a dividir

en forma constante, la actividad metabólica: respiración celular, la síntesis de proteínas es máxima. El número

de células vivas en reproducción es mucho mayor que las células vivas de la población que comienzan a morir.

El tiempo generacional es mínimo y constante. Las células muestran su morfología: color agrupación forma

entre otras. En el momento final de esta fase y como resultado de la alta tasa de reproducción, comienzan a

escasear los nutrientes y el ambiente se torna tóxico por el exceso de productos de desecho. Es el momento

en el cual las células son más sensibles a los antimicrobianos o a las radiaciones que pueden intervenir

negativamente en su crecimiento. Esta fase se representa por una línea recta ascendente. (Cruz, 2007)

3) Fase estacionaria: en este periodo se genera un factor limitante del crecimiento, razón por la cual se

detiene el crecimiento de los microorganismos, generando una tasa reproductiva igual a la tasa de mortalidad.

Si la población no se reproduce ni muere, el número de células permanece constante y la longitud de la fase

varía y depende del balance que logren las células con el medio ambiente. Es un periodo de equilibrio. (Cruz,

2007)

4) Fase de muerte, o de declive logarítmico: en esta fase las células no se reproducen, solo mueren y son

destruidas por lisis en forma exponencial a causa del incremento en las cantidades de ácido y otros desechos

dañinos en el ambiente. (Cruz, 2007)

Fig1.- Cultivo monofásico


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Turbidimetría

En una suspensión microbiana, la cantidad de microorganismos está directamente relacionada con la

turbiedad o densidad óptica. La metodología es útil con suspensiones de densidad microbiana baja y con

cultivos en donde los microorganismos son unicelulares y con un tamaño de unos cuantos micrómetros,

características que les permiten mantenerse suspendidos y homogéneamente distribuidos; en tanto que con

microorganismos de mayor tamaño y con aquellos productores de polisacáridos esta metodología no es

adecuada. (Cruz, 2007)

EQUIPOS Y MATERIALES:

Agua destilada Tubos Eppendorf Mechero Pipeta Probiótico Cámara de Neubauer Microscopio Caldo de cultivo

PROCEDIMIENTO:

Procedimiento para preparar preparación de probiótico: 1.-Pesar 5gr de probiótico. 2.-Colocar los 5 gr de probiótico previamente pesados en 400 mL de caldo de cultivo Lb Broth. 3.-Homogenizar la dilución. Procedimiento para Diluciones Seriadas: 1.-Colocar 900 micro-litros de agua destilada en 3 diferentes tubos de Eppendorf. 2.-Colocar 100 micro-litros de dilución en el primer tubo de Eppendorf. 3.-Homogenizar dicho tubo 4.-Colocar 100 micro-litros de muestra del tubo Eppendorf #1 al tubo de Eppendorf #2. 5.-Homogenizar el tubo de Eppendorf #2. 6.-Colocar 100 micro-litros de muestra del tubo Eppendorf #2 al tubo de Eppendorf #3. 7.-Homogenizar el tubo de Eppendorf #3. Conteo Directo: Por medio de la cámara de Neubauer 1.-Se cuentan los bacilos en los cuadrantes extremos; y en sus cuadrantes centrales se cuentan los cocos. 2.-Calcular el resultado promedio tanto de las celdas superior e inferiores para las tres. 3.-Anotar los resultados finales tanto para los cocos y bacilos.


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Hoja 4 de 13

RESULTADOS:

Probiótico

1000 uL------ 1 ml probiótico

X -----------0.1ml Agua destilada

X= 100 uL probiótico, entonces, 900 uL agua destilada

Conteo de bacterias

Día 22/07/15 Hora=3:30

Muestra 10^-1 1.- Cuadrante = 1 bacilo 1x1x107

0.0625x 1= 16x107ufc

2.-Cuadrante = 0 bacilos 3.-Cuadrante = 1 bacilo 1x 1x107

0.0625x 1= 16x107 Ufc

4.-Cuadrante = 0 bacilos Cuadrante central = 5 cocos 5x250.000= 1.25x106 ufc Promedio Bacilos: 8x107 ufc Promedio Cocos: 1.25x106ufc


0.0625x 1= 16x107ufc

2.-Cuadrante = 1 bacilo 1x1x107

0.0625x 1= 16x107ufc

3.-Cuadrante = 1 bacilo 1x 1x107

0.0625x 1= 16x107 Ufc



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Hoja 5 de 13

Muestra 10^-3 1.- Cuadrante = 0 bacilos

2.-Cuadrante = 0 bacilos 3.-Cuadrante = 0 bacilos 4.-Cuadrante = 0 bacilos Cuadrante central = 0 cocos Promedio Bacilos: 0 ufc Promedio Cocos: 0ufc Día 23/07/15 Hora=9:30

Muestra 10^-1 1.- Cuadrante = 2 bacilos 2x1x107

0.0625x 2= 16x107ufc

2.-Cuadrante = 0 bacilos 3.-Cuadrante = 2 bacilos 2x 1x107

0.0625x 1= 32x107 Ufc



0.0625x 1= 16x107ufc


0.0625x 1= 16x107ufc

3.-Cuadrante = 0 bacilos


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Hoja 6 de 13

4.-Cuadrante = 3 bacilos 3x1x107

0.0625x 2= 24x107 Ufc

Cuadrante central = 6 cocos 6x250.000= 1.5x106 ufc Promedio Bacilos: 14x107 ufc Promedio Cocos: 1.5x106ufc Muestra 10^-3 1.- Cuadrante = 1 bacilo 1x1x107

0.0625x 1= 16x107ufc


0.0625x 1= 16x107ufc

3.-Cuadrante = 0 bacilos 4.-Cuadrante = 0 bacilos Cuadrante central = 0 cocos Promedio Bacilos: 8x107 ufc Promedio Cocos: 0ufc Día 23/07/15 Hora=10:45

Muestra 10^-1 1.- Cuadrante = 4 bacilos 4x1x107

0.0625x 4= 16x107ufc

2.-Cuadrante = 1 bacilo 1x 1x107

0.0625x 1= 16x107 Ufc

3.-Cuadrante = 2 bacilos 2x 1x107

0.0625x 1= 32x107 Ufc


0.0625x 2= 40x107 Ufc

Cuadrante central = 7 cocos


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Hoja 7 de 13

7x250.000= 1.75x106 ufc Promedio Bacilos: 12x107 ufc Promedio Cocos: 1.75x106ufc

Muestra 10^-2 1.- Cuadrante = 0 bacilos


0.0625x 1= 16x107ufc


0.0625x 1= 48x107ufc


0.0625x 2= 24x107 Ufc

Cuadrante central = 5 cocos 5x250.000= 1.25x106 ufc Promedio Bacilos: 22x107 ufc Promedio Cocos: 1.25x106ufc Muestra 10^-3 1.- Cuadrante = 3 bacilos 3x1x107

0.0625x 3= 16x107ufc


0.0625x 1= 16x107ufc

3.-Cuadrante = 0 bacilos 4.-Cuadrante = 0 bacilos Cuadrante central = 2 cocos 2x250.000= 0.5x106 ufc Promedio Bacilos: 8x107 ufc Promedio Cocos: 0.5x106 ufc

Tabla de resultados

Bacilos. (Expresado en [𝑼𝑭𝑪

𝒎𝒍])


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Hoja 8 de 13

Hora/Diluciones 10^-1 10^-2 10^-3

Miercoles 15:30:00 8x10^7 12x10^7 0

Jueves 9:30:00 12x10^7 14x10^7 8x10^7

Jueves 10:45:00 14x10^7 12x10^7 8x10^7

Grafica1.- #bacilos vs Tiempo

10^-1

Miercoles 3:30 pm , 8

Jueves 9:30 am, 12

Jueves 10:45 am, 14

0

2

4

6

8

10

12

14

16

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-1

10^-1


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Hoja 9 de 13

Grafica2.- #bacilos vs Tiempo

10^-2

Grafic3.- #bacilos vs Tiempo

10^-3

Tabla de resultados


Jueves 9:30 am, 14

Jueves 10:45 am, 22

0

5

10

15

20

25

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-2

10^-2


Jueves 9:30 am, 12

Jueves 10:45 am, 14

0

2

4

6

8

10

12

14

16

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-3

10^-3


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Hoja 10 de 13

Cocos. (Expresado en [𝑼𝑭𝑪

𝒎𝒍])

Hora/Diluciones 10^-1 10^-2 10^-3

Miercoles 15:30:00 1.25x10^6 0.75x10^6 0

Jueves 9:30:00 0.25x10^6 1.5x10^6 0

Jueves 10:45:00 1.75x10^6 1.25x10^7 0.5x10^6

Grafic4.- #cocos vs Tiempo 10^-1

Miercoles 3:30 pm , 0 Jueves 9:30 am, 0 Jueves 10:45 am, 00

0.1

0.2

0.3

0.4

0.5

0.6

0.7

0.8

0.9

1

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-1

10^-1


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Hoja 11 de 13

Grafic5.- #cocos vs Tiempo

10^-2

Grafic6.- #cocos vs Tiempo 10^-3


0.2

0.4

0.6

0.8

1

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-2

10^-2


0.2

0.4

0.6

0.8

1

0 0.5 1 1.5 2 2.5 3 3.5

10^-3

10^-3


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Hoja 12 de 13

Observaciones:

Los tubos eppendorf tiene una capacidad máxima de 1.5 ml, tener en cuenta eso y no sobrepasar la medida ya que se haría muy difícil la agitación.

Tener en cuenta que el probiótico no es muy efectivo por lo cual la carga bacteriana no será tan grande.

Al momento de hacer el conteo fijarse bien en la placa; los bacilos son alargados y los cocos en forma redondeada.

Conclusión:

La grafica muestra las diferentes fases en que se encuentran los bacilos y cocos.

Los bacilos se encuentran en una fase log. Lo cocos se encuentran en una fase estacionaria

Bibliografía

Cruz, D. V. (2007). CINETICA DE CRECIMIENTO MICROBIANO. Lima. Kiara Matias, J. L. (21 de 06 de 2015). Andara tuberculosa. Andara tuberculosa. Guayaquil. Magallanes, P., Castillo, M., & Rodríguez, S. (2010). Cinética microbiana de Lactobacilos Acidophillus en un

medio de avena malteada con y sin sacarosa. Mexico. Q, D. (21 de 06 de 2015). http://www.micromadrid.org. Obtenido de http://www.micromadrid.org:

http://www.micromadrid.org/pdf/tomo1_tema25.pdf Valera, D. F. (2015). http://egg.umh.es/. Obtenido de http://egg.umh.es/:

http://egg.umh.es/frvalera/manualDePracticas.pdf

Anexo:

Fig2.- diferencia entre probióticos, el más turbio contiene más bacilos y cocos.


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Hoja 13 de 13

Fig3.-Camara de neubauer, conteo de cocos.

Fig4.-Camara de neubauer, conteo de bacilos.

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