INTRODUCCIÓN A LA MICROBIOLOGÍA

M. Paz

UMG-2013

¿Qué es la microbiología?

Estudio de los organismos microscópicos3 palabras griegas: mikros (pequeño), bios (vida) y logos (ciencia)

estudio de la vida microscópica

Surgió como ciencia tras el descubrimiento y perfeccionamiento del microscopio.

¿Qué son los microorganismos?

Organismos que no pueden ser observados a simple vista, al menos en parte de su ciclo.

Organismos que viven como células aisladas o entidades que contienen ácidos nucleicos capaces de replicarse, por lo menos en parte de su ciclo.

Incluidos: algas, hongos, protozoarios y bacterias

Ramas de la Microbiología

¿Cómo afectan nuestra vida?

Diversos tipos de microorganismos son causantes de enfermedades y abundan casi en cualquier lugar por lo que permanentemente estamos expuestos a un contagio.

Pueden afectarnos en el aspecto económico ya que le producen enfermedades a los animales y a las plantas dañando las cosechas y las clases de ganados y otros animales domésticos que sirven como fuente de alimento.

¿Cómo afectan nuestra vida?

M.O. de utilidad industrial: más de cien especies microbianas son usadas en la producción de sustancias que no pueden ser obtenidas de forma más fácil o más barata por otros medios.

Ventajas: tamaño, alta tasa metabólica, posibilidad de cultivarse a gran escala, estabilidad genética, etc.

¿Cómo afectan nuestra vida?M.o. en la producción de alimentos: lácteosBiotecnología – alcohol producido por levaduras– ácido oxálico utilizado en tintes y colorantes.– ácido acrílico utilizado como intermediario en la

producción de plásticos.– ácido láctico empleado para acidificar alimentos y

como anticongelante.– ácido acético– Enzimas para aplicaciones tan diversas– conversión de harina de maíz en miel utilizada como

endulcorante– Industria farmacéutica: antibióticos, hormonas

(insulina y GH), factores de crecimiento, interferón, eritropoyetina, etc.

Epidemias

Descritas a lo largo de toda la historia de la humanidad.

Atribuidas en la antigüedad a hechizos o magia.

SIN EXPLICACIÓN HASTA EL SIGLO XVII.

Anton van Leeuwenhoek (1632-1723)

Sus primeros dibujos fueron publicados en 1684

Robert Hooke (1635-1702)

Lazzaro Spallanzani (1729-1799)

Robert Koch (1843-1910) Iniciador de la bacteriología médica moderna. Estudió botánica, física y matemáticas y MEDICINA.Otros intereses: arqueología, antropología, las enfermedades ocupacionales, como el envenenamiento por plomo, y la bacteriología.

Postulados de Koch

Louis Pasteur (1822-1895)

Químico y biólogo francés fundador de la microbiología.Comenzó investigando los procesos de fermentación del vino y la cerveza y descubrió la existencia de las bacterias que interferían en este proceso. En 1861 introdujo los términos de aeróbico y anaeróbico.Introdujo el término “virus” sin hacer distinción y “vacuna” en honor a JennerDesarrolló vacunas que consiguieron salvar miles de vidas: cólera aviar, antrax y rabia

Ferdinand Julius Cohn (1828-1898)

Considerado fundador de la microbiología moderna y padre de la bacteriología.

En 1872 propuso la clasificación de las bacterias: género, especie y variedades.

Describió otros microorganismos patógenos transmitidos por agua contaminada, distintos al V. cholerae

Otros eventos importantes del siglo XIX

1878: Joseph Lister publica sus estudios sobre la fermentación de la leche Bacterium lactis1879: Albert Neisser identifica al agente causal de la gonorrea 1880: Alphonse Laverin encuentra al parásito de la malaria en glóbulos rojos.1881: Paul Erlich utiliza el azul de metileno

Siglo XXAerobiosis y anaerobiosisEn 1938: invención del microscopio electrónico: virusTécnicas moleculares: secuenciación del ácido desoxirribonucleico (ADN). Descubrimiento de los priones por Stanley Prusiner y su equipo en 1982 ha abierto una vía de estudio dentro de la microbiología (simples proteínas desprovistas de material genético)En 1988 Kary Mullis utiliza la enzima de Thermus aquaticus para estabilizar la PCR (premio Nobel en 1993)

Alexander Fleming (1881-1955)

Descubrió que algunas colonias crecidas de S. aureus eran destruidas por el crecimiento del hongo Penicillium

Realizó la extracción del compuesto activo: penicilina

Karl Woese (1928-

Por análisis de rARN 16S

Stanley B. Prusiner 1997

California, EEUU

Descubrimiento de los “priones”

Enfermedad de las “vacas locas” y enf. Creutzfeldt-Jakob.

Prion = proteína + infección

Barry J. Marshall & J. Robin Warren (2005)

La úlcera péptica: proceso infeccioso

Helicobacter pylori

Autoinoculación (1984)

Demostraron el tratamiento exitoso con antimicrobianos.

Harald zur Hausen (2008)

Descubrimiento en la causa de cáncer cervical por el Virus del Papiloma Humano

Francoise Barré-Sinnousi & Luc Montagnier(2008)

Descubrimiento del Virus de Inmunodeficiencia Humana (VIH)

Cultivo de VLA en 1983 en el Instituto Pasteur después llamado VIH.

1987

Microscopios

Ojo humano 0.2 mm.

Microscopio óptico, resolución máxima 0.2 micras (1 micra).

Microscopio electrónico, resolución máxima 0.5nm

Microscopios

Microscopios

Ejemplo: Staphylococcus aureus

Datos de Guatemala

Tasa de mortalidad: 4,8 por 1.000 hab.

Causas principales de mortalidad (ambos sexos): neumonía y diarrea.

Seis grandes grupos de causas:• enfermedades transmisibles 13%• tumores 7%• enfermedades del aparato circulatorio 12%• afecciones perinatales 8%• causas externas 13% • otras 47%. Datos INE

Guatemala

Mortalidad en Guatemala

Mortalidad en Guatemala

Causas bacterianas importantes de mortalidad

Tuberculosis

Tétanos

Cólera

Tos ferina

Siglo XIX

Reino Plantae: – algas (inmóviles y fotosintéticas) – hongos (inmóviles y no fotosintéticos),

Reino Animalia– Infusorios (microorganismos móviles)

organismos perfectos: dotados de todos los sistemas orgánicos presentes en seres superiores.

Divididos en metazoos, protozoos y bacterias

Cambios históricos

Haeckel (1866): introdujo reino Protista– Seres vivos sencillos, fotosintéticos y/o móviles– Protozoos, algas, hongos y bacterias.

Copeland (1938): introdujo reino Monera– Separa a las bacterias.

Margulis (1969): introdujo reino Fungi y reino Protoctista (m.o. eucariotas y parientes macroscópicos: mohos mucosos no hongos).Woese (1977): ARQUEOBACTERIAS Y EUBACTERIAS

Taxonomía molecular

Las bacterias forman el conjunto de los procariotas: ADN libre en el citoplasma y no incluido en un núcleo. Reino Monera.

Los restantes organismos unicelulares se clasifican como eucariotas: genoma en el núcleo:

Reino Protista: protozoos y algas unicelulares

Reino Hongos: microscópicos y macromicetos

Los virus constituyen un mundo aparte, ya que no pueden reproducirse por sí mismos, sino que necesitan parasitar una célula viva para completar su ciclo vital.

procariotas

Procariotasorganización celular material genético (cromosoma circular de ADN de doble hebra) inmerso en el citoplasmaReplicación: fisión binariacarecen de orgánulos rodeados de membrana Ribosomas: coeficiente de sedimentación de 70SCitoplasma envuelto por una membrana celularPared celular de peptidoglicano, excepto las arqueas.

TAMAÑO: célula eucariota vrs célula procariota

Tamaños

cocos bacilos espiroquetas

FORMAS DE LAS BACTERIAS

Formas1. Cocos: (células más o menos esféricas);2. Bacilos: (en forma de bastón, alargados), que a su vez pueden tener

varios aspectos: cilíndricos fusiformes en forma de mazo, etc. Según los tipos de extremos, éstos pueden ser:

redondeados (lo más frecuente), cuadrados, biselados, afilados. 3. Espirilos: al igual que los bacilos, tienen un eje más largo que otro,

pero dicho eje no es recto, sino que sigue una forma de espiral, con una o más de una vuelta de hélice.

4. Vibrios: proyectada su imagen sobre el plano tienen forma de coma, pero en el espacio suelen corresponder a una forma espiral con menos de una vuelta de hélice.

Otros tipos de formas: filamentos, ramificados o no anillos casi cerrados formas con

prolongaciones (con prostecas)

Formas

cocos

espiroquetas

bacilos

vibrios

filamentosas

Superficie vs. volumen• En una célula esférica: cuanto menor sea el radio (r)

mayor será la razón S/V lo que significa que el pequeño tamaño de las bacterias permite mayor contacto directo con el medio ambiente inmediato que las rodea

• reciben las influencias ambientales de forma inmediata.

• condiciona una alta tasa de crecimiento.

• La velocidad de entrada de nutrientes y la de salida de productos de desecho es inversamente proporcional al tamaño de la célula, y a su vez, estas tasas de transporte afectan directamente a la tasa metabólica.

• Por lo tanto, en general, las bacterias crecen (se multiplican) de forma rápida.

Superficie vs. volumen

Tamaño pequeño intercambio más eficiente, permite mayor velocidad metabólica

Agrupaciones

Las bacterias normalmente se multiplican por fisión transversal binaria. En muchas especies, las células hijas resultantes de un evento de división por fisión tienden a dispersarse por separado al medio, debido a la actuación de fuerzas físicas (movimiento browniano). Esto hace que al observar al microscopio una población de estas bacterias veamos mayoritariamente células aisladas. Diplococos y diplobacilos: agrupaciones pares

AgrupacionesSi la tendencia a permanecer unidas es mayor y por más tiempo, nos encontramos con varias posibilidades, dependiendo del número de planos de división y de la relación entre ellos: – Estreptococos o estreptobacilos

Si existe más de un plano de división, en el caso de cocos podemos encontrar tres posibilidades: – dos planos perpendiculares: tétradas o múltiplos – tres planos ortogonales: sarcinas (paquetes cúbicos) – muchos planos de división: estafilococos (racimos

irregulares).

Bacilos: en empalizada, en V o L, “letras chinas”.

Estructura celular

Pared celular

Bacteria: – Gram positivo– Gram negativo– Sin pared

Archaea: – Diversas estructuras– Sin pared

Funciones de la pared

Rigidez (mantener la forma, evitar la lisis).Comunicación con el medio exterior.Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS)Barrera para algunas moléculas. Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)

Formación de protoplastos

Mediante procedimientos de laboratorio se puede lograr eliminar total o parcialmente la pared celular bacteriana.

Se denominan protoplastos las células bacterianas a las que se ha desprovisto totalmente de pared celular, mientras que esferoplastos son aquellas células bacterianas que poseen restos de pared.

Formación de Protoplastos

Alta concentración de solutos

Lisozima -- proteína que rompe el enlace glicosídico 1-4 en el peptidoglicano

Baja concentración de solutos

Gram + Gram-Bacteria

Estructura del Peptidoglicano

Pared Celular Gram Positivo

Otros compuestos químicos característicos de la pared de Gram+

Ácidos Teicoicos– Polímero de alcohol (ribitol

o glicerol)

Ácidos Teicurónicos

Ácidos Lipoteicoicos– Polímero de 16 a 40

unidades de glicerol unido a un glicolípido

Ácidos Micólicos

Membrana Externa de Gram Negativos

Porinas - proteínas que permiten el pasaje de moléculas pequeñas a través de la membrana

- específicas e inespecíficas

Lipopolisacárido (LPS)

• Lípido A (NAG-P + grupos acilos) • Núcleo del polisacárido

– contiene KDO (cetodesoxioctonato) y otros carbohidratos (ramnosa, ácido galacturónico)

– usualmente específico de especies • O-antígeno

– número de repeticiones variables – también contiene carbohidratos – específico de cepa

• A menudo tóxico para animales - endotoxina• Crea superficies densamente hidrofílicas

Funciones del Periplasma (E. coli)

• Proteínas de periplasma de E. coli• Proteínas de unión para aminoácidos • histidina, arginina

• Enzimas de biosíntesis • Ensamblado de mureína• Enzimas de degradación de polímeros• proteasas

• Enzimas detoxificantes • Beta-lactamasas: penicilinasa

Algunas bacterias no poseen pared

• Mycoplasma

• Membrana celular más gruesa• pueden tener esteroles y

lipoglicanos.• Pleomórficos

Pared celular de Archaea

No contiene peptidoglicanoPuede ser de– pseudopeptidoglicano (pseudomureína) tiñe

G+– pseudomureína cubierta de proteína, tiñe G+– monocapa superficial de proteína o

glicoproteína, sin pseudomureína (halófilos, metanogénicos y termoacidófilos) tiñe G -

Existen Archaea sin pared

Pseudopeptidoglicano de Archaea

Funciones de la pared

Rigidez y resistencia osmótica (mantener la forma, evitar la lisis).Comunicación con el medio exterior.Puede estar involucrada en patogenicidad (LPS)Barrera para algunas moléculas (porinas en gram negativos). Espacio periplásmico (enzimas de transporte, hidrolíticas, etc.)

Estructura: Bicapa fosfolipídica con proteínas

embebidas; puede contener también hopanoides de estructura similar al colesterol.

En Archaea, éteres de alcohol isoprenoide, algunas forman monocapas.

La membrana celular

Estructura de la Membrana Citoplasmática

Membrana citoplásmica

Los lípidos en Bacteria y Archaea tienen diferentes enlaces químicos

Ester - Bacteria Eter - Archaea

Isopreno

Funciones de Membrana Citoplasmática

Barrera de Permeabilidad– sólo moléculas pequeñas, sin carga, hidrofóbicas,

pueden atravesar la membrana por difusión.Ancla de Proteínas – transporte, generación de energía, quimiotaxis

Generación de fuerza proton motriz En fotótrofas: Estructuras intracitoplasmáticas, soportan

el aparato fotosintético(Vesículas y túbulos)Síntesis de pared y estructuras extracelulares.

Membrana citoplasmática de E. coli

Estructura celular procariota - ADN

No tiene núcleo. El ADN está en el citoplasma– “nucleoide”: zona que ocupa el ADN

Es haploide. – Genoma es una única molécula de ADN de doble cadena,

circular.

El genoma contiene 1 - 6 x 106 pares de bases (bp) – procariotas de vida libre: 1000-5000 genes

No contiene histonas (proteínas para empaquetamiento de ADN).

Puede contener otros elementos genéticos no genómicos: plásmidos y genomas fágicos.

Procariotas

No tienen membrana nuclear

ADN Cromosómico

–No hay procesamiento del ARNm

–La transcripción está ligada a la traducción.

–ADN circular cerrado

–Superenrrollado.

Citoplasma

Proteínas (enzimas, complejos enzimáticos, estructurales)Ribosomas (70S: 55 proteínas, rARN 5S, 16S, 23S)- polisomasmARN, tARNOtras macromoléculas, solutosSin estructura visible al microscopioNo tienen citoesqueleto.

Estructuras características

Estructuras con funciones específicas.

No todos los microorganismos las tienen.

Son características de género y especie (taxonomía)

Ejemplos: – fimbrias, flagelo, pili, endospora, cápsula, inclusiones

citoplasmáticas

Fimbrias – Pili-Pelos-Flecos L

Fimbria - filamento proteico corto, involucrado en funciones de adhesión a superficies.

Pelos ordinarios: adhesión

Pelo sexual - unión a célula receptora durante la conjugación.

Flagelos

Más de 40 genes involucradosLa energía la proporciona la fuerza protomotriz

Sólo detectados por técnicas de tinción específicas

Flagelos

Barra 0,5 micras

Anaerobaculum mobile sp. Flagelo insertado lateralmente

Endosporas

Resistencia al calor, radiación, desecación.

Producidas principalmente por los géneros Bacillus y Clostridium

Permite la supervivencia en ambientes desfavorables

ADN protegido por ácido dipicolínico y proteínas.

Luego de la activación por stress, la disponibilidad de nutrientes dispara la germinación y el crecimiento

La localización de la espora en la célula puede ser usada para su identificación

Estructura de la espora

Formación de esporas

A- ADN se duplica y enrolla alrededor del eje central (filamento axial)

B- Uno de los cromosomas se rodea de membrana plasmática.C- el protoplasto es rodeado por la célula madreD- se sintetizan las cubiertas de la espora.E- se elimina agua, se forma estructura resistente al calor.F- se libera la espora por lisis de la célula madre.

DIPICOLINATO DE CALCIO EN EL CENTRO DE LA ESPORA

Inclusiones citoplasmáticas

Algunas bacterias tienen estructuras internas–gránulos de almacenamiento -

polifosfato,azufre, polihidroxibutirato (PHBs)

–vesículas de gas – flotación–Carboxisomas, clorosomas.

Gránulos de polihidroxibutirato (PHBs)

vesículas de gas

flotación

Cubiertas extracelularesGlicocáliz: Material externo a la pared celular: polímero de carbohidratos o péptidos– HOMO Y HETEROPOLÍMEROS – Cápsulas – Capas mucilaginosas – Capa S: Subunidades proteicas o glicoproteicas.

G+, G- y Archaea

Funciones– Protección– Adhesión

Glicocálix

Tinción negativa

Microscopía electrónica

El árbol filogenético universal

Diferencia entre la estructura celular de Bacteria, Archaea y Eucarya

Propiedad Bacteria Eucarya Archaea

Membrana nuclear

NO SI NO

Organelos NO SI NO

Tamaño ribosoma

70S 80S 70S

Peptidoglicano en la pared

SI NO NO

Esteroles en membrana

NO (hopanoides)

SI SI

Lípidos de membrana

Ester unidos a glicerol

Ester unido a glicerol

Eter, ramificados