UNIVERSIDAD AUTÓNOMA DE CHIAPAS. CENTRO DE BIOCIENCIAS.

LICENCIATURA EN INGENIERO BIOTECNOLOGO.

Presentan:Ingrid Guadalupe Carboney Mejía.Carlos Mario Castillejos Esquinca .Jesús Fernando García Crisóstomo.

REACCIÓN EN CADENA DE LA POLIMERASA (PCR)

La reacción en cadena de la polimerasa es una reacción enzimática in vitro que amplifica millones de veces una secuencia específica de ADN durante varios ciclos repetidos en los que la secuencia blanco es copiada fielmente.

¿Qué es la PCR?

† Inventada en 1985 por KaryB.Mullis

† Premio Nobel de Química, 1993

La idea básica de la técnica es sintetizar muchas veces un fragmento de ADN utilizando una polimerasa que puede trabajar a temperaturas muy elevadas, ya que proviene de la bacteria Thermus aquaticus que vive a altas temperaturas (79°C a 85°C), de ahí su nombre comercial mas conocido: taq polimerasa.

¿Qué necesitamos para hacer una PCR?† DNA molde o templado:contiene la región que queremos amplificar.

† Primers: Secuencias cortas de DNA (oligonucleótidos) que delimitan la zona que queremos amplificar. Deben ser complementarios a cada uno de los extremos de la región a amplificar. Se sintetizan in vitro de un modo preciso para que a partir de su región 3‟, la polimerasa inicie la síntesis en dirección correcta

† Mezcla de los 4 deoxirribonucleótidos trifosfato que componen el DNA.

† DNA Polimerasa: polimerasa capaz de resistir elevadas temperaturas (TaqPol)

† Termocicladora: Una máquina que haga ciclos controlados de temperatura (Máquina de PCR, PCRra)

1° Desnaturalización

2° Anillamiento

3° Extención

95° C 1 minuto

54° C 45 segundos

72° C 2 minutos

Pasos de la PCR

¿Cómo se analiza el producto de amplificación?

Al final de la PCR, para saber si la reacción transcurrió eficientemente, los ampliaciones son visualizados a través de una electroforesis en geles de agarosa.

PCR anidadaEn esta variante de PCR, el producto de una amplificación es utilizado como molde

para realizar una segunda amplificación con iniciadores que se ubican dentro de la primera secuencia amplificada. Este tipo de PCR es altamente específica

Tipos de PCR.

PCR múltiple.

Se lleva a cabo la reacción de PCR tradicional, pero con mas de 2 primers, para amplificar varias regiones al mismo tiempo.

PCR in situ

Es una PCR que se realiza en preparaciones fijadas sobre un portaobjeto. Consiste en una reacción de PCR en secciones histológicas o células, donde los productos generados pueden visualizarse en el sitio de amplificación. Se realiza para ello una primera amplificación del ADN blanco y luego detección mediante hibridación in situ convencional con sondas de ADN/ARN. De esta manera puede detectarse cantidades pequeñísimas del material genético

PCR con transcriptasa inversa (RT-PCR).

Este tipo de PCR utiliza como molde inicial el ARN y se requiere de una transcriptasa inversa, para realizar la conversión del ARN a un tipo de ADN llamado ADNc.

1.er paso: retrotranscripción a partir del ARN. 2º paso: amplificación a partir de la primera hebra de ADNc. 3.er paso: PCR estándar.

La PCR cuantitativa o PCR en tiempo real es una variante de la reacción en cadena de la polimerasa utilizada para amplificar y simultáneamente cuantificar de forma absoluta el producto de la amplificación de ácido desoxirribonucleico

PCR en tiempo real.

Usos de la PCR

† Huella digital genética

† Test de paternidad

† Detección de enfermedades hereditarias

† Comparación de la expresión génica

† Clonamiento de genes

† Análisis de ADN antiguo