aislamiento de staphylococcus aureus
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PROCEDIMIENTO PARA LA
DETERMINACIÓN DEStaphylococcus aureusEN ALIMENTOS
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*REFERENCIA
◦NOM-115-SSA1-1994
◦Bienes y Servicios. Método para la determinación de Staphylococcs aalimentos.
*OBJETIO
!ontar con n procedimiento "e descri#a el método micro#ioló$ico par
determinación de la centa de Staphylococcs ares presente en alime
* ALCANCE
%eterminación de alimentos
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*&ntrodcción◦'ran importancia por tratarse de n microor$anismo capa! "e pro"uu$a po"erosa e$teroto%#$a "e al in$erirse casa into(icacionesalimentarias.◦)a*ones+◦!on,rmar la presencia de este microor$anismo como a$ente casal denermedad de ori$en alimentario.◦%emostrar la contaminación postproceso la cal es salmente de#idacontacto hmano o con sper,cies inadecadamente saniti*adas.◦os alimentos s/etos a contaminación postproceso con tiposenteroto(i$énicos de Staphylococcs ares representan n ries$o po
asencia de 0ora competitiva "e normalmente restrin$e el crecimienStaphylococcus aureus y la prodcción de enteroto(inas.◦os alimentos perecederos tales como+ carnes crdas y procesadasensaladas prodctos de pasteler2a y prodctos de leche son los m3scomnmente asociados con into(icación esta,locóccica.
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6ndamento◦7ste método permite hacer na estimación del conteStaphylococcs ares en alimentos se eecta directamplacas de medio de cltivo selectivo y dierencial con,rmación mediante las pre#as de coa$lasa y termonc
◦7ste método es adecado para el an3lisis de alimentos en lose esperen m3s de 188 céllas de Staphylococcs ares po
◦
Staphylococcs ares microor$anismo "e se desarolla ende cltivo selectivos y dierenciales capa* de dar positiva lade coa$lasa y termoncleasa.
7specie #acteriana cyos miem#ros tienen la orma de cocos "a$rpan ormando racimos inmóviles 'ram positivos aeroacltativos temperatra óptima :;<rodcen n pi$mento amarillo dorado son halotolerantes. <coa$lasa osotasa y deso(irri#oncleasa "e le distin$en de <rodcen e(oto(inas+ hemolisina y enteroto(ina.
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<)O!7%&M&7N=OMedio de Baird-<ar>er
Medio #ase
95m
Sol. =elritode potasio
1m
7mlsiónyema de
hevo 5m
Medio #ase a45;! a$re$ar
resto dein$redientes y
me*clar.
!olocar 15-?8m porplaca enriar y de/ar
solidi,car.
as placas de#entili*arse dentro de las
4@h si$ientes a spreparación
avar cona$a y /a#ónhevosrescos
limpiarloscon tintra
de yodosol. Alcoh.
?Cen/a$arcon a$aestéril y
secar con$asa estéril.
A#rir loshevos
condicions
asépticastranseriyemas a
pro#etahasta
volmen dD8 m y
completar98mconsolciónsalina
isotónica
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*A&ar Ba#r" Par'er
◦Medio de alta especi,cidad dia$nóstica selectivo y dierencial para el aislamiento yrecento de esta,lococos coa$lasa positiva en alimentos y otros materiales deimportancia sanitaria.
◦os esta,lococos coa$lasa positiva redcen el telrito a telro y ori$inan colonias color $ris3ceo-ne$ro y tienen actividad lecitin3sica por eso actan so#re la yema dhevo prodciendo n halo claro alrededor de la colonia.
Fu$"a(e$to
peptona de case2na y ele(tracto de carne
ente de car#ono y nitró$eno
el e(tracto de levadra aporta vitaminas del comple/oB
la $licina y el pirvato estimlan el crecimiento delos esta,lococos
a$ar a$ente solidi,cante.
telrito de potasio y el clorrode litio
inhi#en el desarrollo de la0ora acompaFante presente
en la mestra selectividadC
yema de hevo permite demostrar laactividad lecitin3sica de los
microor$anismos.
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*<rocedimiento %epositar 81 ml so#re lasper,cie de las placas de
a$ar Baird-<ar>er.
%istri#irsper,
varillas es3n$lo re
para
Manteneposición ha
sea a#so
&nvertir las placas e inc#arde 45 a 4@ h a 5G!.
Seleccionar las placas "eten$an entre 15 y 158
colonias t2picas de
StaphylococcsaresH si no es posi#le
seleccionar las placas de lasdilciones m3s altas noo#stante ten$an m3s de
158 colonias.
!ando las placas ten$anmenos de 15 colonias t2picas
tam#ién peden sertili*adas y al inorme se
de#e a$re$ar la nota deIvalor estimadoI.
) S.ares
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◦ as colonias t2picas son ne$ras circlares #rillantes conve(as lisas de de 1 a ? mm y mestran na *ona opaca y n halo claro alrededor de la c
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*CRITERIO DE ACEPTACIÓN O REC+A,O
<ara testi$o de medios de cltivo+
si en los testi$os procesados NO JAK !)7!&M&7N=O micro#
si JAK !)7!&M&7N=O
<ara C) cepa de reerencia Staphylococcs ares A=!!
!)7!&M&7N=O caracter2stico en los medios de cltivo tili*adosNO !)7!&M&7N=O caracter2stico en los medios de cltivo tili*a
<ara C cepa de reerencia Staphylococcs epidermidids A
!)7!&M&7N=O car3cter2stico en los medios de cltivo tili*ados
NO !)7!&M&7N=O car3cter2stico en los medios de cltivo tili*a
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◦Seleccionar las colonias de acerdo con el si$iente cpara reali*ar las pre#as de coa$lasa y termoncleas
N-(ero "e colo$#as N-(esos
Menos de 58
51-188
181-158
Seleccionar y sem#rar cada na en t#os con 85 ml decaldo de insión cere#ro cora*ón.
&nc#ar a 5G! drante ?4 h.
&noclar testi$os positivo y ne$ativo.
%espés del periodo de inc#ación pasar 8 ml de cadacltivo a otro t#o para termoncleasa. 7l resto del cltiv
se sa par la pre#a de coa$lasa.
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*<re#as #io"2micas
.
a coa&ulasa es na prote2na ppor varios microor$anismos "e per
,#rinó$eno ,#rin
a coa$lasa reacciona con la protren la san$re. 7l comple/o resltllama esta,lotrom#ina y permite en*ima proteasa convierta el ,#rinó,#rina. 7sto hace "e se coa$le la a coa$lasa est3 estrechrelacionada con la sper,cie #acteria S. aureus y pede revesper,cie con ,#rina al entrar en ccon la san$re. Se cree "e esta c#,#rina del esta,lococo es capa* dela a$ocitosis haciendo esta #actern actor de virlencia mayor.
=ermoncleasa+ 7n*ima termoesta#le
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=ermoncleasa+ 7n*ima termoesta#le 3cido deso(irri#oncléico hasta n
7l %NA mani,esta la presencia de la en*idespolimeri*a al %NA. !ando se inco
tolidina al 1 en toda la sper,cie delcolor a*l donde "eda %N
%espés de o#tener n #en desar
cidadosamente la sper,cie de las plclorh2drico 1 N. as colonias ormadohidroli*an a s alrededor al 3cido deso
%NAC contenido en el medAl acidi,car precipita el %NA o#serv3ndo"e las colonias %nasapositivas present
halos deaclaramiento perectamente delimitado
con el medio tr#io. !ando la termonc
%NA el color del a$ar cam#ia de a*l a rone$ativos se o#servan sin ormaci
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*C/lculo y e%pres =omar en centa de colonias totales colonias con,rmadas y volm
Si las pre#a con,rmativas resltan ne$ativas en todas las colonias pinormar+
8 P6!Q$ en mestras directas
R18 P6! Q$ en mestras de dilción 1+18
R188 P6!Q$ en mestras de dilción 1+188
E1e(plo 2 E1e(plo 3
Si la ca/a tiene @ colonias en la dilción1+1888.
Se toman 5 colonias para la pre#a deéstas dan 4 positivas el c3lclo es+
@8Q5 ( 4 D4 ( 1888 ( 18 D48888
&normarStaphylococcs ares D48 888P6!Q$
Si la ca/a tiene 14 colonias e1+18.
Se toman colonias para la éstas dan ? positivas el c3lc
14Q ( ? 9. ( 18 ( 1
&normarStaphylococcs ares
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