aislamiento de staphylococcus aureus

8/18/2019 aislamiento de Staphylococcus aureus

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PROCEDIMIENTO PARA LA

DETERMINACIÓN DEStaphylococcus aureusEN ALIMENTOS



*REFERENCIA

◦NOM-115-SSA1-1994

◦Bienes y Servicios. Método para la determinación de Staphylococcs aalimentos.

*OBJETIO

!ontar con n procedimiento "e descri#a el método micro#ioló$ico par

determinación de la centa de Staphylococcs ares presente en alime

* ALCANCE

%eterminación de alimentos



*&ntrodcción◦'ran importancia por tratarse de n microor$anismo capa! "e pro"uu$a po"erosa e$teroto%#$a "e al in$erirse casa into(icacionesalimentarias.◦)a*ones+◦!on,rmar la presencia de este microor$anismo como a$ente casal denermedad de ori$en alimentario.◦%emostrar la contaminación postproceso la cal es salmente de#idacontacto hmano o con sper,cies inadecadamente saniti*adas.◦os alimentos s/etos a contaminación postproceso con tiposenteroto(i$énicos de Staphylococcs ares representan n ries$o po

asencia de 0ora competitiva "e normalmente restrin$e el crecimienStaphylococcus aureus y la prodcción de enteroto(inas.◦os alimentos perecederos tales como+ carnes crdas y procesadasensaladas prodctos de pasteler2a y prodctos de leche son los m3scomnmente asociados con into(icación esta,locóccica.



6ndamento◦7ste método permite hacer na estimación del conteStaphylococcs ares en alimentos se eecta directamplacas de medio de cltivo selectivo y dierencial con,rmación mediante las pre#as de coa$lasa y termonc

◦7ste método es adecado para el an3lisis de alimentos en lose esperen m3s de 188 céllas de Staphylococcs ares po

◦

Staphylococcs ares microor$anismo "e se desarolla ende cltivo selectivos y dierenciales capa* de dar positiva lade coa$lasa y termoncleasa.

7specie #acteriana cyos miem#ros tienen la orma de cocos "a$rpan ormando racimos inmóviles 'ram positivos aeroacltativos temperatra óptima :;<rodcen n pi$mento amarillo dorado son halotolerantes. <coa$lasa osotasa y deso(irri#oncleasa "e le distin$en de <rodcen e(oto(inas+ hemolisina y enteroto(ina.



<)O!7%&M&7N=OMedio de Baird-<ar>er

Medio #ase

95m

Sol. =elritode potasio

1m

7mlsiónyema de

hevo 5m

Medio #ase a45;! a$re$ar

resto dein$redientes y

me*clar.

!olocar 15-?8m porplaca enriar y de/ar

solidi,car.

as placas de#entili*arse dentro de las

4@h si$ientes a spreparación

avar cona$a y /a#ónhevosrescos

limpiarloscon tintra

de yodosol. Alcoh.

?Cen/a$arcon a$aestéril y

secar con$asa estéril.

A#rir loshevos

condicions

asépticastranseriyemas a

pro#etahasta

volmen dD8 m y

completar98mconsolciónsalina

isotónica



*A&ar Ba#r" Par'er

◦Medio de alta especi,cidad dia$nóstica selectivo y dierencial para el aislamiento yrecento de esta,lococos coa$lasa positiva en alimentos y otros materiales deimportancia sanitaria.

◦os esta,lococos coa$lasa positiva redcen el telrito a telro y ori$inan colonias color $ris3ceo-ne$ro y tienen actividad lecitin3sica por eso actan so#re la yema dhevo prodciendo n halo claro alrededor de la colonia.

Fu$"a(e$to

peptona de case2na y ele(tracto de carne

ente de car#ono y nitró$eno

el e(tracto de levadra aporta vitaminas del comple/oB

la $licina y el pirvato estimlan el crecimiento delos esta,lococos

a$ar a$ente solidi,cante.

telrito de potasio y el clorrode litio

inhi#en el desarrollo de la0ora acompaFante presente

en la mestra selectividadC

yema de hevo permite demostrar laactividad lecitin3sica de los

microor$anismos.



*<rocedimiento %epositar 81 ml so#re lasper,cie de las placas de

a$ar Baird-<ar>er.

%istri#irsper,

varillas es3n$lo re

para

Manteneposición ha

sea a#so

&nvertir las placas e inc#arde 45 a 4@ h a 5G!.

Seleccionar las placas "eten$an entre 15 y 158

colonias t2picas de

StaphylococcsaresH si no es posi#le

seleccionar las placas de lasdilciones m3s altas noo#stante ten$an m3s de

158 colonias.

!ando las placas ten$anmenos de 15 colonias t2picas

tam#ién peden sertili*adas y al inorme se

de#e a$re$ar la nota deIvalor estimadoI.

) S.ares



◦ as colonias t2picas son ne$ras circlares #rillantes conve(as lisas de de 1 a ? mm y mestran na *ona opaca y n halo claro alrededor de la c



*CRITERIO DE ACEPTACIÓN O REC+A,O

<ara testi$o de medios de cltivo+

si en los testi$os procesados NO JAK !)7!&M&7N=O micro#

si JAK !)7!&M&7N=O

<ara C) cepa de reerencia Staphylococcs ares A=!!

!)7!&M&7N=O caracter2stico en los medios de cltivo tili*adosNO !)7!&M&7N=O caracter2stico en los medios de cltivo tili*a

<ara C cepa de reerencia Staphylococcs epidermidids A

!)7!&M&7N=O car3cter2stico en los medios de cltivo tili*ados

NO !)7!&M&7N=O car3cter2stico en los medios de cltivo tili*a



◦Seleccionar las colonias de acerdo con el si$iente cpara reali*ar las pre#as de coa$lasa y termoncleas

N-(ero "e colo$#as N-(esos

Menos de 58

51-188

181-158

Seleccionar y sem#rar cada na en t#os con 85 ml decaldo de insión cere#ro cora*ón.

&nc#ar a 5G! drante ?4 h.

&noclar testi$os positivo y ne$ativo.

%espés del periodo de inc#ación pasar 8 ml de cadacltivo a otro t#o para termoncleasa. 7l resto del cltiv

se sa par la pre#a de coa$lasa.



*<re#as #io"2micas

.

a coa&ulasa es na prote2na ppor varios microor$anismos "e per

,#rinó$eno ,#rin

a coa$lasa reacciona con la protren la san$re. 7l comple/o resltllama esta,lotrom#ina y permite en*ima proteasa convierta el ,#rinó,#rina. 7sto hace "e se coa$le la a coa$lasa est3 estrechrelacionada con la sper,cie #acteria S. aureus y pede revesper,cie con ,#rina al entrar en ccon la san$re. Se cree "e esta c#,#rina del esta,lococo es capa* dela a$ocitosis haciendo esta #actern actor de virlencia mayor.

=ermoncleasa+ 7n*ima termoesta#le



=ermoncleasa+ 7n*ima termoesta#le 3cido deso(irri#oncléico hasta n

7l %NA mani,esta la presencia de la en*idespolimeri*a al %NA. !ando se inco

tolidina al 1 en toda la sper,cie delcolor a*l donde "eda %N

%espés de o#tener n #en desar

cidadosamente la sper,cie de las plclorh2drico 1 N. as colonias ormadohidroli*an a s alrededor al 3cido deso

%NAC contenido en el medAl acidi,car precipita el %NA o#serv3ndo"e las colonias %nasapositivas present

halos deaclaramiento perectamente delimitado

con el medio tr#io. !ando la termonc

%NA el color del a$ar cam#ia de a*l a rone$ativos se o#servan sin ormaci



*C/lculo y e%pres =omar en centa de colonias totales colonias con,rmadas y volm

Si las pre#a con,rmativas resltan ne$ativas en todas las colonias pinormar+

8 P6!Q$ en mestras directas

R18 P6! Q$ en mestras de dilción 1+18

R188 P6!Q$ en mestras de dilción 1+188

E1e(plo 2 E1e(plo 3

Si la ca/a tiene @ colonias en la dilción1+1888.

Se toman 5 colonias para la pre#a deéstas dan 4 positivas el c3lclo es+

@8Q5 ( 4 D4 ( 1888 ( 18 D48888

&normarStaphylococcs ares D48 888P6!Q$

Si la ca/a tiene 14 colonias e1+18.

Se toman colonias para la éstas dan ? positivas el c3lc

14Q ( ? 9. ( 18 ( 1

&normarStaphylococcs ares

aislamiento de staphylococcus aureus

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