INMUNOHISTOQUIMICA

INTRODUCCION GENERAL

Dr. José Luis Molina Osorio

INMUNOHISTOQUIMICA

LOCALIZACION DE ANTIGENOS EN LOS

TEJIDOS USANDO LOS ANTICUERPOS

COMO REACTIVOS ESPECIFICOS

[ VISUALIZACION DE LA REACCION ANTIGENO – ANTICUERPO]

Histo

Cito

LA VISUALIZACION Y LOCALIZACION

DE UNA REACCION POSITIVA

IMPLICA EL MARCAJE (SEŇALIZACION)

DEL ANTICUERPO REACTIVO

CON UNA SEŇAL DETECTABLE

Como la Inmunocitoquímica implica una reacción Ag – Ac, con posibilidades de identificar y discriminar entre muchos

antígenos, tiene gran ventaja sobre las técnicas tradicionales de tinción con

base química - enzimática.Cubre un espectro mucho mayor de

elementos celulares y tisulares que pueden ser evidenciados a nivel

celular y tisular.

El arte de la inmunohistoquimica

comenzó en la década 40 - 50

cuando Coons y col. marcaron

anticuerpos específicos con

Fluoresceína para detectar

antígenos en los tejidos

MODALIDADES

EN LAS

REACCIONES

INMUNOCITOQUIMICAS

SEGUN EL TRAZADOR UTILIZADO:

Sustancias FluorescentesREACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA

Enzima –> Sustrato:

REACCIONES INMUNOENZIMATICAS

Partículas Electrondensas:

REACCIONES DE

INMUNOMICROSCOPIAELECTRONICA

Isotópos RadiactivosREACCIONES RADIOINMUNOQUIMICAS

REACCIONES DE INMUNOFLUORESCENCIA

MARCADOR UTILIZADO

Sustancias Fluorescentes --- Fluorocromos

EQUIPO DE VISUALIZACION

Microscopio para Fluorescencia

Patologia Renal

Glomerulo conDeposito de IgA

PancreasAc. Anti Celulas beta

REACCIONES INMUNOHISTOQUIMICASREACCIONES INMUNOENZIMATICAS

MARCADOR UTILIZADO

Enzima Sustrato Precipitado coloreado

EQUIPO DE VISUALIZACION

Microscopio Optico

Linf. Citotoxicos ( T CD8 )En tejido cardiaco con reaccion de rechazo

Enzima: PeroxidasaSustrato: Diaminobencidina

LOCALIZACION DEL ANTIGENO

REACCIONES DE INMUNOMICROSCOPIA ELECTRONICA

MARCADOR UTILIZADO

Sustancias Electrondensas

EQUIPO DE VISUALIZACION

Microscopio Electrónico

SEGUN PASOS DE REACCION

DIRECTOS

INTERACCION DEL ANTICUERPO “PRIMARIO MARCADO

CON EL SUSTRATO ANTIGENICO

INDIRECTOS

ANTICUERPOS “SECUNDARIOS” MARCADOS SON

AGREGADOS DESPUES DE LA REACCION INICIAL

DEL ANTICUERPO PRIMARIO NO MARCADO

DOS PASOS TRES PASOS

A ESTOS DOS TIPOS DE REACCIONES BASICAS

SE AGREGA UN NUMERO CRECIENTE DE

MODALIDADES TECNOLOGICAS EN LAS CUALES

SE UTILIZAN OTRAS SUSTANCIAS ADEMAS DE LOS

ANTICUERPOS QUE PERMITEN CON AYUDA DE LA

SEÑAL MARCADORA IDENTIFICAR LA REACCION

ESPECIFICA DEL ANTICUERPO PRIMARIO CON EL Ag.

COMPLEJOS SOLUBLES ENZIMA-ANTIENZIMA

EL ELEMENTO ENZIMATICO DE LA REACCION ESTA

COMO UN COMPLEJO MOLECULAR [ Enz. (Ag.) ~ Ac ]

AŇADIDO DESPUES DEL Ac. SECUNDARIO

CON BASE EN LA REACCION AG – AC

EL PROPOSITO FUNDAMENTAL DE LA METODOLOGIA INMUNOHISTOQUIMICA

1. Crear condiciones optimas para la union Especifica

2. Detectar certeramente la unión de los reactivos y su localización

UN OBJETIVO BASICO A CUMPLIR CONLAS DIFERENTES TECNICAS USADASES LOGRAR LA MAYOR SENSIBILIDADPOSIBLE DEL ANTICUERPO ELEGIDO

SIN DISMINUIR SU ESPECIFICIDAD

• SELECCION Y PREPARACION ADECUADA DEL ANTICUERPO

• PREPARACION Y TRATAMIENTO DEL SUSTRATO TISULAR Ó CITOLÓGICO

Especificidad ANTICUERPO

de la Reacción

Especificidad del Método: Ausencia de señal, por otro mecanismo que no

sea la reacción Ag. -- Ac. Investigada

Especificidad de Anticuerpo:

El Ac. específico (primario) sólo debe tener

reactividad con el Ag. a ser localizado

Factores del Sustrato Antigénico

LA METODOLOGÍA DEBE GARANTIZAR

* inmunoreactividad = antigenicidad

* morfología (localización) relevante

Factores: > Selección del Tejido

> Proceso de Fijación

> Inclusión / Corte

> Bloqueo de Autoseñal

LOS DIFERENTES PASOS TÉCNICOS PUEDEN

LLEVAR AL “ ENMASCARAMIENTO “ Y / Ó

DISMINUCIÓN DE LA ANTIGENICIDAD

RECUPERACION ANTIGÉNICA