tez 5 - mycology.ru · title: tez_5.p65 author: elena created date: 12/10/2002 1:01:55 pm

ÐÎËÜ ÌÅÆÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈÉ ×ÅÐÅÇ ÏÐÎÍÈÖÀÅÌÛÅ ÊÎÍÒÀÊÒÛÂ ÏÎËßÐÈÇÎÂÀÍÍÎÌ ÂÅÐÕÓØÅ×ÍÎÌ ÐÎÑÒÅ

Àëåêñååâñêèé À. Â., Ïîòàïîâà Ò. Â., Ñìîëÿíèíîâ Â. Â.

ÍÈÈ Ôèçèêî-õèìè÷åñêîé áèîëîãèè èìåíè À. Í. ÁåëîçåðñêîãîÌÃÓ èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà

119899, Ìîñêâà, Âîðîáüåâû ãîðû, ÌÃÓ, Ëàáîðàòîðíûé êîðïóñ «À»

Èíñòèòóò ìàøèíîâåäåíèÿ ÐÀÍ

Ðàçäåë 5

ÁÈÎÕÈÌÈß È ÔÈÇÈÎËÎÃÈß

Ñ èñïîëüçîâàíèåì ìåòîäîâ ìèêðîýëåêòðîäíîé ýëåê-òðîôèçèîëîãèè âûÿâëåíî è êîëè÷åñòâåííî îõàðàêòå-ðèçîâàíî ÿâëåíèå ãåòåðîãåííîñòè ìåìáðàííûõ ïîòåí-öèàëîâ è âõîäíûõ ñîïðîòèâëåíèé ãèô Neurospora crassa

íà ó÷àñòêàõ ïîëÿðèçîâàííîãî âåðõóøå÷íîãî ðîñòà èçàâèñèìîñòü ýòèõ ïàðàìåòðîâ îò âåëè÷èíû êîýôôè-öèåíòîâ ýëåêòðè÷åñêîé ñâÿçè ìåæäó êëåòêàìè. Ðàçðà-áîòàíà ýêñïåðèìåíòàëüíàÿ ìîäåëü ãèôàëüíîãî ìèíè-äåðåâà, ïðåäñòàâëÿþùåãî ñîáîé âåðõóøêó ãèôû, èçî-ëèðîâàííóþ ýëåêòðè÷åñêè è äèôôóçèîííî îò ìèöå-ëèÿ íà ðàññòîÿíèè îò òî÷êè ðîñòà, áëèçêîì ê âåëè÷è-íå ïðîñòðàíñòâåííîé êàáåëüíîé ïîñòîÿííîé ýêâèâà-ëåíòíîãî ýëåêòðè÷åñêîãî êàáåëÿ (500-700 m). Ñ ïîìî-ùüþ ýòîé ìîäåëè èññëåäîâàíà çàâèñèìîñòü îò ñâÿçè ñìèöåëèåì: âåëè÷èíû ãèôàëüíîé åäèíèöû ðîñòà(îòíî-øåíèå ñóììàðíîé äëèíû âñåõ âåòâåé ê ÷èñëó âåðõó-øåê), ñêîðîñòè ðîñòà ëèäèðóþùåé âåðõóøêè, ñêîðî-ñòåé óäëèíåíèÿ áîêîâûõ âåòâåé ìèíè-äåðåâà è ÷àñòî-òû âåòâëåíèé ó ãåíåòè÷åñêè ðàçëè÷íûõ ëèíèé N. crassa

íà ñðåäå íîðìàëüíîãî ñîñòàâà, à òàêæå â óñëîâèÿõ äå-ôèöèòà ïî ãëþêîçå è àçîòó. Ñðàâíèòåëüíûé ýêñïåðè-ìåíòàëüíûé è òåîðåòè÷åñêèé àíàëèç ýëåêòðîôèçèî-ëîãè÷åñêèõ è ìîðôîìåòðè÷åñêèõ äàííûõ ïîçâîëèë îõà-ðàêòåðèçîâàòü ìèíèìàëüíóþ ðîñòîâóþ åäèíèöó ãèôû(ôðàãìåíò âåðõóøêè äëèíîé 350 íì) è âûñêàçàòü ïðåä-ïîëîæåíèå î ôóíêöèîíàëüíîé ðîëè ýëåêòðè÷åñêîéãåòåðîãåííîñòè â îáëàñòè âåðõóøå÷íîãî ðîñòà êàê ìå-õàíèçìå ýíåðãåòè÷åñêîé êîîïåðàöèè ìåæäó êëåòêàìè.

Óñòàíîâëåíà íåçàâèñèìîñòü âåëè÷èíû ãèôàëüíîé åäè-íèöû ðîñòà îò äëèíû èçîëèðîâàííîãî ôðàãìåíòà èïðÿìàÿ êîððåëÿöèÿ ñêîðîñòè óäëèíåíèÿ ëèäèðóþùåéâåðõóøêè ñ äëèíîé ôðàãìåíòà. Îáíàðóæåí ýôôåêòáëîêàäû ðîñòà áîêîâûõ âåòâåé ìèíè-äåðåâà, ðàñïîëî-æåííûõ íà ðàññòîÿíèè ìåíåå 450 m îò ìåñòà èçîëÿ-öèè. Ïîñòðîåíà ìàòåìàòè÷åñêàÿ ìîäåëü, ïîçâîëÿþùàÿèäåíòèôèöèðîâàòü ýëåêòðè÷åñêèå ïàðàìåòðû ãèôû ñó÷åòîì åå äðåâîâèäíîé îðãàíèçàöèè; íà áàçå ýòîé ìî-äåëè. ïîëó÷åí ïðîñòîé êðèòåðèé îöåíêè êðèòè÷åñêîéäëèíû ôðàãìåíòà ãèôû ñ íåîäíîðîäíûì ðàñïðåäåëå-íèåì èñòî÷íèêîâ òîêà, õîðîøî ñîãëàñóþùèéñÿ ñ ýê-ñïåðèìåíòàëüíûìè äàííûìè. Ðàçðàáîòàíà è óñïåøíîàïðîáèðîâàíà ñ ãðóïïîé ñòóäåíòîâ 5 êóðñà êàôåäðûìèêîëîãèè è àëüãîëîãèè Áèîôàêà ÌÃÓ ó÷åáíàÿ ïðî-ãðàììà ñïåöèàëüíîãî ïðàêòèêóìà ïî èñïîëüçîâàíèþìèêðîõèðóðãè÷åñêèõ òåõíîëîãèé äëÿ èçó÷åíèÿ ðîñòàãðèáíîãî ìèöåëèÿ.

Ðàáîòà ïîääåðæèâàëàñü ãðàíòàìè ÐÔÔÈ: 94-04-12324; 96-

04-49567; 99-04-49115.

Ïóáëèêàöèè ïî òåìå:

1. Potapova T. V. et al. // FEBS Lett. 1988. V. 241. P. 173-176.

2. Àñëàíèäè Ê. Á. è äð. // Áèîë. ìåìáð. 1997. Ò. 14 N3. Ñ. 285-298.

3. Àëåêñååâñêèé À. Â. è äð. // Äîêëàäû ÐÀÍ 1999. Ò. 369. ¹6. Ñ.

549-552.

4. Ñìîëÿíèíîâ Â. Â. Ìàòåìàòè÷åñêèå ìîäåëè áèîë. òêàíåé. Ì.,

Íàóêà, 1980, 368 ñ.

ÂÎÇÌÎÆÍÎÑÒÈ ÝËÅÊÒÐÈ×ÅÑÊÎÉ ÐÅÃÓËßÖÈÈ ÐÎÑÒÀ ÃÐÈÁÍÎÉ ÃÈÔÛ

Àñëàíèäè Ê. Á.Èíñòèòóò òåîðåòè÷åñêîé

è ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîôèçèêè ÐÀÍ

142240, Ïóùèíî, Ìîñê. îáë.

Ïî ñîâðåìåííûì ïðåäñòàâëåíèÿì ãðèáíàÿ ãèôàÿâëÿåòñÿ îòêðûòîé íåðàâíîâåñíîé òåðìîäèíàìè÷åñ-êîé ñèñòåìîé, ïðîñòðàíñòâåííàÿ ñòðóêòóðà êîòîðîé

ïîääåðæèâàåòñÿ ïîòîêîì ýíåðãèè èç âíåøíåé ñðåäû.Ìàòåðèàëüíûì ýêâèâàëåíòîì ïîòîêà ýíåðãèè â ãåòå-ðîòðîôíîé êëåòêå ÿâëÿþòñÿ ïîòîêè ìåòàáîëèòîâ ÷å-

141I ÑÚÅÇÄ ÌÈÊÎËÎÃÎÂ ÐÎÑÑÈÈ. Òåçèñû äîêëàäîâ. Ðàçäåë 5

ðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó.Ðîñò ìèöåëèàëüíûõ ãðèáîâ — ñëîæíîå ÿâëåíèå,

âêëþ÷àþùåå ïðîöåññû ñèíòåçà, âåçèêóëÿðíîãî èòðàíñìåìáðàííîãî òðàíñïîðòà èîíîâ è ìåòàáîëèòîâ,à òàêæå ðàçëè÷íûå äâèæåíèÿ êëåòî÷íûõ îðãàíåëë. Ïðè

ýòîì âàæíî, ÷òî êëþ÷åâûå ýòàïû íàêîïëåíèÿ áèî-ìàññû, à èìåííî ïðîöåññû òðàíñìåìáðàííîãî òðàíñ-ïîðòà ñàõàðîâ, àìèíîêèñëîò è íåîðãàíè÷åñêèõ èîíîâ

ðåàëèçóþòñÿ çà ñ÷åò ýëåêòðîõèìè÷åñêîãî ïîòåíöèàëàèîíîâ âîäîðîäà. Îäíàêî èñòîðè÷åñêè ñëîæèëîñü òàê,÷òî èññëåäîâàíèÿ ìåòàáîëè÷åñêèõ ïðåâðàùåíèé âå-

ùåñòâ â êëåòêå ìíîãèå ãîäû ïðàêòè÷åñêè íå ïåðåñå-êàëèñü ñ èññëåäîâàíèÿìè òðàíñïîðòà íåîðãàíè÷åñêèõèîíîâ ÷åðåç ïëàçìàòè÷åñêóþ ìåìáðàíó. Ïî ýòîé ïðè-

÷èíå â íàñòîÿùåå âðåìÿ îòñóòñòâóþò äîñòàòî÷íî îá-ùèå ïðåäñòàâëåíèÿ î ñâÿçè ìåìáðàííîãî ýëåêòðîãå-íåçà ñ ìåòàáîëèçìîì ãèôàëüíîé êëåòêè.

Öåëüþ ðàáîòû ÿâèëñÿ àíàëèç ïðîñòåéøåé ìîäåëèìåòàáîëèçìà ãèôû, âêëþ÷àþùåé, êàê íåîáõîäèìûéêîìïîíåíò, ìåìáðàííûé ýëåêòðîãåíåç.

Â äîêëàäå ðàññìàòðèâàåòñÿ òåîðåòè÷åñêàÿ ìîäåëüðîñòà ãèôû Neurospora crassa â óñëîâèÿõ ïîëíîãî ñî-ïðÿæåíèÿ òðàíñïîðòà ñóáñòðàòîâ è íåîðãàíè÷åñêèõ

èîíîâ. Ïðåäëîæåí ìèíèìàëüíûé êîìïëåêò ìåìáðàí-

íûõ òðàíñïîðòåðîâ, íåîáõîäèìûõ è äîñòàòî÷íûõ äëÿóäîâëåòâîðåíèÿ ïîòðåáíîñòè ìåòàáîëèçìà ãèôû.

Ïðåäïîëàãàåòñÿ, ÷òî îñíîâíûìè ñóáñòðàòàìè, ïî-òðåáëÿåìûìè ãèôîé, ÿâëÿþòñÿ ãëþêîçà, àìèíîêèñ-ëîòû è êèñëîðîä, à ïðîäóêòàìè ìåòàáîëèçìà — áåë-

êè, ëèïèäû, íóêëåèíîâûå êèñëîòû, óãëåêèñëûé ãàçè âîäà. Ìîäåëü ïðåäïîëàãàåò, ÷òî óâåëè÷åíèå áèîìàñ-ñû ãèôû íåèçáåæíî ñîïðîâîæäàåòñÿ íåïðåðûâíûì çà-

ìåùåíèåì è ðåïàðàöèåé ðàçëè÷íûõ ìîëåêóëÿðíûõñòðóêòóð âî âñåõ êëåòêàõ. Äëÿ îïèñàíèÿ ýëåêòðè÷åñ-êèõ ÿâëåíèé, ñîïðîâîæäàþùèõ ðîñò ãèôû, èñïîëü-

çîâàíà ìîäåëü, ñîîòâåòñòâóþùàÿ ýêâèâàëåíòíîìó îä-íîìåðíîìó ýëåêòðè÷åñêîìó êàáåëþ ñ íåîäíîðîäíûìïðîäîëüíûì ðàñïðåäåëåíèåì èñòî÷íèêîâ òîêà, îòðà-

æàþùàÿ àêòèâíîñòü ïðîòîííûõ íàñîñîâ è ïåðåíîñ-÷èêîâ ñóáñòðàòîâ.

Â ðàáîòå îáîñíîâûâàåòñÿ ïðåäïîëîæåíèå î ñâÿçè

âåëè÷èíû ïîòåíöèàëà íà êëåòî÷íîé ìåìáðàíå ñ ïî-òðåáëÿåìûìè èç âíåøíåé ñðåäû ñóáñòðàòàìè è ïðî-äóêòàìè êëåòî÷íîãî ñèíòåçà.

Ïîêàçàíà êîððåëÿöèÿ ýêñïåðèìåíòàëüíî ðåãèñòðè-ðóåìîé ñêîðîñòè óäëèíåíèÿ ðåãåíåðèðóþùèõ ôðàãìåí-òîâ ãèôû ñ ðàñ÷åòíîé âåëè÷èíîé ýëåêòðè÷åñêîãî òîêà,

âòåêàþùåãî â àïèêàëüíûé ó÷àñòîê.

N. crassa ïðåäñòàâëÿåò ñîáîé óäîáíóþ ìîäåëü äëÿ

èññëåäîâàíèÿ äåéñòâèÿ âíåøíèõ àãåíòîâ êàê íà áåñ-ïîëûé, òàê è íà ïîëîâîé öèêë ðàçâèòèÿ ãðèáíîãîîðãàíèçìà. Ðàçíûå ïóòè ðàçâèòèÿ N. crassa çàïóñêàþò-

ñÿ ïðîñòûì èçìåíåíèåì êîíöåíòðàöèè ïèòàòåëüíûõâåùåñòâ â ñðåäå êóëüòèâèðîâàíèÿ. Òàê, óãëåðîäíîå(ãëþêîçà) ãîëîäàíèå â àãàðèçîâàííîé ïîâåðõíîñòíîé

êóëüòóðå ïðèâîäèò ê áåñïîëîìó âîñïðîèçâåäåíèþ èôîðìèðîâàíèþ êîíèäèé íà âåãåòàòèâíîì ìèöåëèè.Îäíàêî â ñëó÷àå ëèìèòèðîâàíèÿ ïî èñòî÷íèêó àçîòà â

òåõ æå óñëîâèÿõ ðàçâèòèå èäåò ïî ïóòè ïîëîâîãî âîñ-ïðîèçâåäåíèÿ è íà ìèöåëèè ôîðìèðóþòñÿ æåíñêèåïîëîâûå îðãàíû — ïðîòîïåðèòåöèè. Ñâåò ñèíå-ôèî-ëåòîâîé îáëàñòè (350-500 íì) ñïåêòðà ÿâëÿåòñÿ ñèëü-

íûì ñòèìóëÿòîðîì ðàçâèòèÿ êàê íà ïóòè ïîëîâîãî,òàê è áåñïîëîãî õàðàêòåðà ðàçâèòèÿ. Â ñòàöèîíàðíîéæèäêîé êóëüòóðå íà ãîëîäíîé ñðåäå ìèöåëèé ôîðìè-

ðóåò âîçäóøíûå ãèôû, îáðàçóþùèå êîíèäèîôîðû èêîíèäèè. Â æèäêîé êóëüòóðå ïðè âñòðÿõèâàíèè, ïðèàçîòíîì èëè óãëåâîäíîì ãîëîäàíèè äèôôåðåíöèðîâ-

êà è ôîðìèðîâàíèå êîíèäèé ïðîèñõîäÿò íåïîñðåä-ñòâåííî íà êîíöàõ ãèô. Êðîìå òîãî, ðàçâèòèå N. crassa

êîíòðîëèðóåòñÿ âíóòðåííèìè öèðêàäíûìè ðèòìàìè.

Ôîðìèðîâàíèå êîíèäèé íà âåãåòàòèâíîì ìèöåëèèãðèáà ïðîèñõîäèò â íåñêîëüêî ýòàïîâ, êàæäûé èç êî-

òîðûõ çàïóñêàåòñÿ ÀÔÊ è ñâÿçàí ñ ýêñïðåññèåé ãåíîâçàùèòíûõ ìåõàíèçìîâ îò îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà. Äåé-ñòâèå ñèãíàëà ãîëîäà è ñâåòà îñóùåñòâëÿåòñÿ ñ ïîìî-

ùüþ ðàçíûõ ôàêòîðîâ òðàíñêðèïöèè, è, ïî-âèäèìî-ìó, ðàçíûìè ïóòÿìè ïåðåäà÷è ñèãíàëà. Ôàêòîðû âíåø-íåé ñðåäû ïåðåäàþò ñèãíàë áåëêîâûì ðåãóëÿòîðàì

ýêñïðåññèè ãåíîâ ïðè ó÷àñòèè âòîðè÷íûõ ïîñðåäíè-êîâ, â ïåðâóþ î÷åðåäü, ñÀÌÐ, à òàêæå Ñà2+ è èíîçè-òîëôîñôàòîâ. Áåëêîâûå ðåãóëÿòîðû òðàíñêðèïöèè ó÷à-

ñòâóþò, ïî-âèäèìîìó, è â ïåðåêðåñòíîé çàùèòå îòñòðåññà, âûçâàííîãî äåéñòâèåì íåáëàãîïðèÿòíûõ ôàê-òîðîâ âíåøíåé ñðåäû. Ñèñòåìû ñèãíàëüíîé òðàíñäóê-

öèè ýâîëþöèîííî êîíñåðâàòèâíû. Íàïðèìåð, ïåðå-äà÷à ñèãíàëà â îòâåò íà âíåøíèå âîçäåéñòâèÿ ïðè ó÷à-ñòèè ñèñòåìû ñÀÌÔ, ñ ïîìîùüþ êîòîðîé çàïóñêà-þòñÿ ïðîöåññû äèôôåðåíöèðîâêè ó æèâîòíûõ êëåòîê,

ôóíêöèîíèðóåò è ó ïðåäñòàâèòåëåé ðàçíûõ êëàññîâãðèáîâ, çàïóñêàÿ ïðîöåññû äèôôåðåíöèðîâêè ó àñêî-ìèöåòîâ è áàçèäèîìèöåòîâ. Òîëüêî ó N. crassa ñèñòåìà

ïåðåäà÷è âíåøíåãî ñèãíàëà, ñâÿçàííàÿ ñ ôóíêöèî-íèðîâàíèåì ñèñòåìû ñÀÌÔ ðåãóëèðóåò ôîðìîîáðà-çîâàòåëüíûå ïðîöåññû â ìèöåëèè, êîíèäèîãåíåç, ïðî-

öåññ ñïàðèâàíèÿ ïðè ïîëîâîì âîñïðîèçâåäåíèè, îò-âåòû íà òåïëîâîé øîê è îêèñëèòåëüíûé ñòðåññ.

Ðàáîòà ïîääåðæàíà ãðàíòîì ÐÔÔÈ 01-04-48567

NEUROSPORA CRASSA ÊÀÊ ÌÎÄÅËÜÍÛÉ ÎÁÚÅÊÒÄËß ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈß ÌÅÕÀÍÈÇÌÀ ÄÅÉÑÒÂÈß ÑÒÐÅÑÑÎÐÎÂ

ÍÀ ÄÈÔÔÅÐÅÍÖÈÐÎÂÊÓ ÌÈÖÅËÈß

Áåëîçåðñêàÿ Ò. À., Ñîêîëîâñêèé Â. Þ.

Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ

117071, Ìîñêâà, Ëåíèíñêèé ïð., ä. 33

142 I ÑÚÅÇÄ ÌÈÊÎËÎÃÎÂ ÐÎÑÑÈÈ. Òåçèñû äîêëàäîâ. Ðàçäåë 5

ÄÂÀ ÏÓÒÈ ÒÐÀÍÑÏÎÐÒÀ ÂÍÅÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÊÈÑËÛÕ ÔÎÑÔÀÒÀÇÓ ÄÐÎÆÆÅÉ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Áëèííèêîâà Å. È., Ìèðþùåíêî Ô. Ë., Åãîðîâ Ñ. Í.

Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâ

119899, Ìîñêâà, Âîðîáü¸âû ãîðû, ÌÃÓ, áèîëîãè÷åñêèé ôàêóëüòåò

Ñ ïîìîùüþ íîâîãî ìåòîäà ïîëó÷åíû äâà òèïà ñåê-

ðåòîðíûõ âåçèêóë èç äðîææåé Saccharomyces cerevisiae,

ðàçëè÷àþùèåñÿ ïî ïëîòíîñòè è ôàêòóðå ïîâåðõíîñòè.

Ìåòîä îñíîâàí íà îñìîòè÷åñêîì ëèçèñå ïðîòîïëàñ-

òîâ ñ ïîñëåäóþùèì ðàçäåëåíèåì âåçèêóë â ãðàäèåíòå

ïëîòíîñòè Óðîãðàôèíà. Â êà÷åñòâå ìàðêåðîâ ñåêðåòîð-

íûõ âåçèêóë èñïîëüçîâàëè êèñëûå ôîñôàòàçû. Äðîæ-

æè Saccharomyces cerevisiae ñèíòåçèðóþò äâå êèñëûå

ôîñôàòàçû — òàê íàçûâàåìóþ êîíñòèòóòèâíóþ, êî-

äèðóåìóþ ãåíîì PHO3 è ðåïðåññèáåëüíóþ, êîäèðóå-

ìóþ òðåìÿ ãåíàìè, PHO5, PHO10 è PHO11. Îáà ôåð-

ìåíòà ñåêðåòèðóþòñÿ â ñðåäó. Ïîêàçàíî, ÷òî êîíñòè-

òóòèâíàÿ êèñëàÿ ôîñôàòàçà äîñòàâëÿåòñÿ ê ïîâåðõíî-

ñòè êëåòêè â ìåíåå ïëîòíûõ âåçèêóëàõ, à ðåïðåññè-

áåëüíàÿ — â áîëåå ïëîòíûõ. Äëÿ âûÿñíåíèÿ, ÷òî ìî-

æåò ñëóæèòü ïðè÷èíîé ñîðòèíãà êèñëûõ ôîñôàòàç,

áûëè ïîëó÷åíû âåçèêóëû èç øòàììîâ, ñèíòåçèðóþ-

ùèõ ãîìîìåðíûå ôîðìû ðåïðåññèáåëüíîé êèñëîé

ôîñôàòàçû — ôîñôàñòàçó À (ãåí PHO5), ôîñôàòàçó Â

(ãåí PHO10) è ôîñôàòàçó Ñ (ãåí PHO11). Ïîêàçàíî,

÷òî ôîñôàñòàçà À äîñòàâëÿåòñÿ ê ïîâåðõíîñòè êëåòêè

â ìåíåå ïëîòíûõ âåçèêóëàõ. Â íàòèâíîì ôåðìåíòå ïî-

ëèïåïòèä, êîäèðóåìûé ãåíîì PHO5, ñîñòàâëÿåò îêî-

ëî 86% ïî ìàññå, à íà ïðîäóêòû äâóõ äðóãèõ ãåíîâ

ïðèõîäèòñÿ íå áîëåå 14%. Òàêèì îáðàçîì, îñíîâíîé

ïîëèïåïòèä ðåïðåññèáåëüíîé êèñëîé ôîñôàòàçû ïå-

ðåìåùàåòñÿ ê ïîâåðõíîñòè â òåõ æå âåçèêóëàõ, ÷òî è

êîíñòèòóòèâíàÿ êèñëàÿ ôîñôàòàçà. Ìîæíî ïðåäïîëî-

æèòü, ÷òî ýòîò ïîëèïåïòèä íå èãðàåò ðîëè â âûáîðå

íàïðàâëåíèÿ äâèæåíèÿ. Ôîñôàòàçû Â è Ñ äîñòàâëÿþò-

ñÿ ê ïîâåðõíîñòè â áîëåå ïëîòíûõ âåçèêóëàõ, òàê æå

êàê íàòèâíàÿ ðåïðåññèáåëüíàÿ êèñëàÿ ôîñôàòàçà. Ìû

ïðåäïîëàãàåì, ÷òî èìåííî ìèíîðíûå ïîëèïåïòèäû

ðåïðåññèáåëüíîé êèñëîé ôîñôàòàçû èãðàþò ãëàâíóþ

ðîëü â âûáîðå àëüòåðíàòèâíîãî ïóòè òðàíñïîðòà ýòîãî

âíåêëåòî÷íîãî ôåðìåíòà.

ÂËÈßÍÈÅ ÕÈÌÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÑÎÑÒÀÂÀ ÌÈÍÅÐÀËÎÂÍÀ ÐÎÑÒ È ÌÎÐÔÎËÎÃÈÞ ËÈÒÎÁÈÎÍÒÍÛÕ ÌÈÊÐÎÌÈÖÅÒÎÂ

Áîãîìîëîâà Å. Â., Îëüõîâàÿ Å. À., Ïàíèíà Ë. Ê.,

Ñóõàðæåâñêèé Ñ. Ì.

Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò

199034, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, Óíèâåðñèòåòñêàÿ íàá., ä. 7/9

Èçó÷åíèå ìèêîáèîòû êàìåíèñòûõ ñóáñòðàòîâ, ïðî-

âîäèìîå ãåîìèêîëîãè÷åñêîé ðàáî÷åé ãðóïïîé ÑÏáÃÓ

ñ 1991 ãîäà, âûÿâèëî îïðåäåëåííûå ðàçëè÷èÿ â âèäî-

âîì ñîñòàâå è ìîðôîëîãèè ãðèáîâ-îáèòàòåëåé êàìíÿ

íà ðàçíûõ ìèíåðàëàõ. Âëèÿíèå õèìè÷åñêîãî ñîñòàâà è

ñòðóêòóðû ñóáñòðàòà ïðåäñòàâëÿåòñÿ íàì áîëåå çíà÷è-

ìûì ïî ñðàâíåíèþ ñ âëèÿíèåì ãåîãðàôè÷åñêîãî ôàê-

òîðà. Â ñâÿçè ñ ýòèì íàáëþäåíèåì áûëî ðåøåíî ïðî-

âåñòè ýêñïåðèìåíòàëüíîå ìîäåëèðîâàíèå ðîñòà ëèòî-

áèîíòíûõ ãðèáîâ íà ðàçëè÷íûõ ìèíåðàëàõ è ãîðíûõ

ïîðîäàõ (ìðàìîð, êâàðö, êàëüöèò, ïëàãèîêëàç (ïîëå-

âîé øïàò), ãðàíèò ðàêàêèâè, ëóãîâèò, ôëîãîíèò, áèî-

òèò, ìèêðîêëèí). Ìèêîëîãè÷åñêàÿ ÷àñòü ðàáîòû âêëþ-

÷àëà îöåíêó ìîðôîëîãè÷åñêèõ èçìåíåíèé, âîçíèêàþ-

ùèõ ïðè ðîñòå ãðèáîâ íà äàííûõ ìèíåðàëàõ, à ãåîëî-

ãè÷åñêàÿ ÷àñòü ðàáîòû çàêëþ÷àëàñü â õèìè÷åñêîì àíà-

ëèçå èññëåäóåìûõ ïîðîä.

Â ýêñïåðèìåíòå áûëè çàäåéñòâîâàíû 3 øòàììà ìèê-

ðîìèöåòîâ, ðàíåå èçîëèðîâàííûõ ñ ïîâåðõíîñòè ìðà-

ìîðà Torula herbarum (øòàìì Ch 34), Phaeococcomyces

exophiallae (øòàìì — Ch 49) è ñ ïîâåðõíîñòè êâàðöà

— Trimmatostroma sp. (øòàìì Bz-1). Ôðàãìåíòû ìèíå-

ðàëîâ èíîêóëèðîâàëèñü âûáðàííûìè øòàììàìè ãðè-

áîâ è êóëüòèâèðîâàëèñü â òå÷åíèå 11 ìåñÿöåâ. Â êà÷å-

ñòâå ìèíèìàëüíîãî èñòî÷íèêà óãëåðîäà èñïîëüçîâàëè

îäíîêðàòíîå îðîøåíèå ïîâåðõíîñòè ìèíåðàëîâ 0. 1%

ðàñòâîðîì ãëþêîçû. Îöåíêà ðîñòà ãðèáîâ è èõ ìîðôî-

ëîãèè âåëàñü ñ ó÷åòîì ñëåäóþùèõ êðèòåðèåâ: ðîñò ïî

îòíîøåíèþ ê ðàçëè÷íûì ãðàíÿì êðèñòàëëîâ, ñâÿçü ñ

ìèêðîòîïîãðàôèåé, èíòåíñèâíîñòü ðîñòà â öåëîì, ñòå-

ïåíü âåòâëåíèÿ, òîëùèíà ãèô è èõ ôîðìà, èíòåíñèâ-

íîñòü ïèãìåíòàöèè, ôîðìà è ðàçìåð îáðàçóþùèõñÿ

êîëîíèé. Äàííûå ïðèçíàêè ñîïîñòàâëÿëèñü ñ òàêîâû-

ìè ïðè ðîñòå íà ïëîòíûõ ïèòàòåëüíûõ ñðåäàõ â êóëü-

òóðå è â ïðèðîäå.

Îáíàðóæåíî, ÷òî àêòèâíîñòü ðîñòà è «áëàãîïîëó-

÷èå» ãðèáà â çíà÷èòåëüíîé ñòåïåíè çàâèñÿò îò õèìè-

÷åñêîé ïðèðîäû ìèíåðàëà è îò ñòðóêòóðû åãî ïîâåð-

õíîñòè. Íàèëó÷øèé ðîñò íàáëþäàëñÿ íà êàëüöèé-ñî-

äåðæàùèõ ìèíåðàëàõ — ñåðîì íåïîëèðîâàííîì ìðà-

ìîðå, ïëàãèîêëàçå (ïîëåâîì øïàòå) — êðèñòàëëè÷åñ-

êàÿ ñòðóêòóðà, êàëüöèòå — êðèñòàëëè÷åñêàÿ ñòðóêòó-

ðà, à òàêæå íà ìîëî÷íî-áåëîì æèëüíîì êâàðöå (ïî-

âåðõíîñòü øåðîõîâàòàÿ). Íà äàííûõ ìèíåðàëàõ ãðèáû

îáíàðóæèâàëè íàèáîëåå àêòèâíûé ðîñò, âåòâëåíèå,

ñèëüíóþ ïèãìåíòàöèþ, à òàêæå ìîðôîëîãèþ, íàè-

áîëåå ñõîäíóþ ñ òàêîâîé, õàðàêòåðíîé äëÿ äàííûõ

ãðèáîâ â ïðèðîäíûõ óñëîâèÿõ. Êàëüöèé-ñîäåðæàùèå

ìèíåðàëû, â êîòîðûõ èìåëèñü ïðèìåñè òîêñè÷íûõ äëÿ

ãðèáîâ èîíîâ (íàïðèìåð, Mn), îêàçàëèñü ñëàáî ïðè-

ãîäíûìè äëÿ ðîñòà ãðèáîâ. Îòìå÷åíî òàêæå, ÷òî ðîñò

ãðèáîâ â îñíîâíîì ïðèóðî÷åí ê íåðîâíîñòÿì ñóáñòðà-


ÔÈÇÈÎËÎÃÎ-ÁÈÎÕÈÌÈ×ÅÑÊÈÅ ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ×ÅÐÍÛÕÄÐÎÆÆÅÏÎÄÎÁÍÛÕ ÃÐÈÁÎÂ-ÝÊÑÒÐÅÌÎÔÈËÎÂ

Âàñèëåâñêàÿ À. È., Øêîëüíûé À. Ò., Çàõàð÷åíêî Â. À.,Êóð÷åíêî È. Í., Àðòûøêîâà Ë. Â.

Èíñòèòóò ìèêðîáèîëîãèè è âèðóñîëîãèè ÍÀÍ Óêðàèíû

Óêðàèíà, 03143, Êèåâ, óë. Çàáîëîòíîãî, ä. 154

×åðíûå äðîææåïîäîáíûå ãðèáû øèðîêî ðàñïðîñ-òðàíåíû â ïðèðîäå, âñòðå÷àþòñÿ íà ðàçíîîáðàçíûõ ñóá-ñòðàòàõ è õàðàêòåðèçóþòñÿ ñëîæíîñòüþ èõ èäåíòèôè-êàöèè. Èç óêàçàííûõ ãðèáîâ íàèáîëåå ÷àñòî èçîëèðó-þòñÿ ïðåäñòàâèòåëè ðîäà Aureobasidium è ñðàâíèòåëü-íî ðåäêî — ðîäîâ Hormonema è Exophiala. Ñðåäè ãðè-áîâ ýòîé ãðóïïû íàèáîëåå ïîëíî èçó÷åí A. pullulans,ÿâëÿþùèéñÿ ïðîäóöåíòîì ðÿäà áèîëîãè÷åñêè àêòèâ-íûõ âåùåñòâ. Ó ýòîãî âèäà äîêàçàíà ìåëàíèíîâàÿ ïðè-ðîäà òåìíîãî ïèãìåíòà. Áèîëîãè÷åñêèå îñîáåííîñòèâèäîâ äðóãèõ ðîäîâ ãðèáîâ ýòîé ãðóïïû èçó÷åíû íå-äîñòàòî÷íî. Îáúåêòàìè íàøåãî èññëåäîâàíèÿ áûëèøòàììû A. pullulans è âïåðâûå îáíàðóæåííûå â ìèêî-áèîòå Óêðàèíû H. dematioides è E. cf. jeanselmei. Ãðèáûáûëè âûäåëåíû ãëàâíûì îáðàçîì èç ýêñòðåìàëüíûõìåñòîîáèòàíèé (ðàäèàöèîííî çàãðÿçíåííûå ïî÷âà,ëåñíàÿ ïîäñòèëêà, ïîâåðõíîñòü ñòåí ïîìåùåíèé 4-ãîáëîêà ×ÀÝÑ, çàñîëåííûå ïî÷âû è äð.). Èäåíòèôèêà-öèÿ ðÿäà øòàììîâ, âûïîëíåííàÿ ïî ìîðôîëîãè÷åñ-êèì ïðèçíàêàì, áûëà ïîäòâåðæäåíà ìîëåêóëÿðíî-ãå-íåòè÷åñêèì ìåòîäîì ñèêâèíèðîâàíèÿ â CBS (Íèäåð-ëàíäû).

Èçó÷åíî âëèÿíèå ðÿäà èñòî÷íèêîâ óãëåðîäà è àçî-òà, ïðèíàäëåæàùèõ ê ðàçëè÷íûì êëàññàì ñîåäèíåíèé(24 è 30 âåùåñòâ ñîîòâåòñòâåííî), íà êîëè÷åñòâî íà-êîïëåííîé â óñëîâèÿõ ãëóáèííîãî êóëüòèâèðîâàíèÿáèîìàññû èññëåäîâàííûõ øòàììîâ ãðèáîâ è åå ïèã-ìåíòàöèþ. Íàèáîëåå àêòèâíûé ðîñò îòìå÷àëè íà ñðå-äàõ ñ ïîëèñàõàðèäàìè (êàðòîôåëüíûì è êóêóðóçíûì)è ïðèðîäíûõ ñðåäàõ (æèäêîå ñóñëî è êàðòîôåëüíî-ãëþ-êîçíàÿ). Áîëüøèíñòâî èçó÷åííûõ øòàììîâ íå ðîñëèíà ñðåäå ñ ãëèöåðèíîì. Îðãàíè÷åñêèå èñòî÷íèêè àçî-òà áûëè áîëåå áëàãîïðèÿòíûìè äëÿ íàêîïëåíèÿ áèî-ìàññû ãðèáàìè ïî ñðàâíåíèþ ñ íåîðãàíè÷åñêèìè èñ-òî÷íèêàìè.

Â óñëîâèÿõ ðîñòà íà ñðåäàõ ñ ðàçëè÷íûìè èñòî÷íè-êàìè àçîòà, è îñîáåííî óãëåðîäà, îòìå÷àëè øèðîêèéäèàïàçîí èçìåíåíèé ïèãìåíòàöèè ãðèáíîé áèîìàññû.

Íàáëþäàþùèåñÿ èçìåíåíèÿ áûëè âûðàæåíû êîëè÷å-ñòâåííî ïóòåì èñïîëüçîâàíèÿ ìåòîäà ÝÏÐ, êîòîðûéïîçâîëÿåò ðåãèñòðèðîâàòü ñîäåðæàíèå ñòàáèëüíûõ ñâî-áîäíûõ ðàäèêàëîâ (ïàðàìàãíèòíûõ öåíòðîâ) ìåëàíè-íîâîãî ïèãìåíòà, îáóñëàâëèâàþùåãî îêðàñêó áèîìàññû.Ïîêàçàíî, ÷òî ïðè ðîñòå íà ñðåäàõ ñ ðàçëè÷íûìè èñ-òî÷íèêàìè óãëåðîäà è àçîòà îáðàçóåòñÿ ìåëàíèíîâûéïèãìåíò, õàðàêòåðèçóþùèéñÿ ðàçíûì êîëè÷åñòâîìïàðàìàãíèòíûõ öåíòðîâ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ìî-ãóò áûòü ïîëåçíûìè ïðè ñîçäàíèè îïòèìàëüíûõ ðå-æèìîâ êóëüòèâèðîâàíèÿ ÷åðíûõ äðîææåïîäîáíûõ ãðè-áîâ — ïðîäóöåíòîâ ìåëàíèíîâîãî ïèãìåíòà.

Èçó÷åíèå ëèíåéíîãî ðîñòà ãðèáîâ â äèàïàçîíå òåì-ïåðàòóð îò 5 äî 37°Ñ ïîêàçàëî, ÷òî áîëüøèíñòâî èçíèõ ïðèíàäëåæàò ê ìåçîôèëàì. Èñêëþ÷åíèåì áûëèíåêîòîðûå øòàììû, èçîëèðîâàííûå èç âûñîêî ðàäèî-àêòèâíûõ ýêîòîïîâ, êîòîðûå ïðîÿâèëè ïñèõðîòîëå-ðàíòíîñòü. Èçìåíåíèÿ ñîäåðæàíèÿ ïàðàìàãíèòíûõ öåí-òðîâ ìåëàíèíà â ìåíüøåé ìåðå çàâèñåëè îò âëèÿíèÿòåìïåðàòóðíîãî ðåæèìà, ÷åì ïðè ðîñòå øòàììîâ íàðàçëè÷íûõ èñòî÷íèêàõ ïèòàíèÿ.

Ïðè ÓÔ-îáëó÷åíèè â òå÷åíèå äëèòåëüíîãî âðåìå-íè âçâåñè êîíèäèé èçó÷åííûõ øòàììîâ ïîêàçàíà íåî-äíîðîäíîñòü, ãåòåðîãåííîñòü èõ ïî óðîâíþ è õàðàêòå-ðó êðèâûõ âûæèâàåìîñòè. Íàèáîëåå óñòîé÷èâûìè êÓÔ-îáëó÷åíèþ áûëè áîëüøèíñòâî øòàììîâ A. pullulansè ìåíåå óñòîé÷èâûìè — âèäû ðîäîâ Hormonema èExophiala.

Â ðåçóëüòàòå êà÷åñòâåííîãî è êîëè÷åñòâåííîãî (èñ-ïîëüçîâàíî 11 ðàçëè÷íûõ ñóáñòðàòîâ) îïðåäåëåíèé òè-ðîçèíàçíîé è ëàêêàçíîé àêòèâíîñòåé ó èçó÷åííûõøòàììîâ óñòàíîâëåíà ýíäîãåííàÿ ïðèðîäà ýòèõ ôåð-ìåíòîâ. Ïîêàçàíî, ÷òî ïèãìåíò èññëåäîâàííûõ øòàì-ìîâ ïðèíàäëåæèò ãëàâíûì îáðàçîì ê ìåëàíèíó êàòå-õîëüíîãî òèïà.

Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ôèíàíñîâîé ïîääåðæêå Ìåæäóíà-

ðîäíûì ôîíäîì INTAS (ãðàíò INTAS 97 — ¹726).

ÁÈÎÕÈÌÈ×ÅÑÊÈÅ ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÀÏÎÏÒÎÇÀ Ó ÄÐÎÆÆÅÂÛÕ ÎÐÃÀÍÈÇÌÎÂ

Ãàëûíêèí Â. À., Ìèíäóêøåâ È. Â., Öûãàí Â. Í., Èëüèíà Þ. Â.Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêàÿ ãîñóäàðñòâåííàÿ õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêàÿ àêàäåìèÿ

Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, óë. ïðîô. Ïîïîâà, ä. 14

Ïðîöåññ ðàçâèòèÿ íèçøèõ ãðèáîâ âêëþ÷àåò â ñåáÿðÿä àëüòåðíàòèâíûõ ïðîãðàìì: ïðîãðàììà ðîñòà (ðàç-âèòèå è îðãàíèçàöèÿ êëåòî÷íîãî öèêëà); ïðîãðàììà

èíäóêöèè de novo ôåðìåíòíûõ ñèñòåì è ïðîãðàììàãèáåëè (àïîïòîç èëè íåêðîç). Èçó÷åíèå âçàèìîñâÿçèïàðàìåòðîâ êëåòî÷íîãî öèêëà ñ ìåõàíèçìàìè àêòèâà-

òà è ñêîïëåíèÿì ìåëêèõ îòêîëîâøèõñÿ ôðàãìåíòîâìèíåðàëîâ, ÷òî ìû ñâÿçûâàåì ñ íàëè÷èåì êîíäåí-ñàöèîííîé âëàãè, íåîáõîäèìîé äëÿ ðîñòà ãðèáîâ.

Ïðåäïîëàãàåòñÿ äàëüíåéøåå èçó÷åíèå ñîäåðæàíèÿìèêðîýëåìåíòîâ â áèîìàññå âûðàùåííûõ íà ìèíåðà-ëàõ ãðèáîâ.


öèè àïîïòîçà ðàñøèðÿåò âîçìîæíîñòè óïðàâëåíèÿïðîöåññîì êóëüòèâèðîâàíèÿ ãðèáîâ.

Îáúåêòîì âíèìàíèÿ èññëåäîâàòåëåé â ïîñëåäíååâðåìÿ ñòàë êëåòî÷íûé öèêë, â ÷àñòíîñòè, ïðîõîæäå-íèÿ êëåòêîé òî÷êè ñòàðòà â G

1-ôàçå (S) èëè ïåðåõîä â

ñîñòîÿíèå ïîêîÿ (G0. ôàçà) ñ ïîñëåäóþùèì âîçâðà-

ùåíèåì â êëåòî÷íûé öèêë, èëè ïåðåõîä â àïîïòîç.G

0-ôàçà èíòåðåñíà òåì, ÷òî êëåòêè â ýòîé ôàçå ñïî-

ñîáíû ñèíòåçèðîâàòü âòîðè÷íûå ìåòàáîëèòû, â òîì÷èñëå ÁÀÂ, ïðè ìåíüøèõ çàòðàòàõ ñóáñòðàòîâ.

Ó÷èòûâàÿ, ÷òî â íàñòîÿùåå âðåìÿ íåò åùå äîñòà-òî÷íûõ äàííûõ, ïîäòâåðæäàþùèõ íàëè÷èå àïîïòîçà óãðèáîâ, ìû èçó÷àëè äàííîå ÿâëåíèå ó äðîææåïîäîá-íûõ ãðèáîâ Rhodotorula rubra BKMY341 âàð. 203-3.

Èçó÷åíèå âîçðàñòíîé ñòðóêòóðû ñèíõðîííîé äðîæ-

ÏÀÐÀÌÅÒÐÛ ÐÎÑÒÀ ÄÐÎÆÆÅÉ Â ÑÎÑÒÎßÍÈÈÎÑÌÎÒÈ×ÅÑÊÎÃÎ ÑÒÐÅÑÑÀ È ÃÈÏÎÊÑÈÈ

Ãåéäåáðåõò Î. Â., Àðçóìàíÿí Â. Ã.

Èíñòèòóò ìèêðîáèîëîãèè ÐÀÍ

117811, Ìîñêâà, ïð. 60-ëåòèÿ Îêòÿáðÿ, ä. 7/2

æåâîé ïîïóëÿöèè ïðîâîäèëè ìîðôîìåòðè÷åñêèì ñïî-ñîáîì è ìåòîäîì ïðîòî÷íîé öèòîôëóîðîìåòðèè. Êðè-âûå ðàñïðåäåëåíèÿ êëåòîê ïî ñîäåðæàíèþ ÄÍÊ èìå-þò ðàçëè÷íûé âèä: ñ îäíèì ìàêñèìóìîì, ñ äâóìÿ ìàê-ñèìóìàìè, ñ îäíèì ìàêñèìóìîì è êîðîòêèì ïëàòî,îðäèíàòà êîòîðîãî ñîîòâåòñòâóåò äâîéíîìó õðîìîñîì-íîìó íàáîðó ÄÍÊ.

Â îòëè÷èå îò ãèñòîãðàìì æèâîòíûõ, ðàñïðåäåëå-íèå äðîææåâûõ êëåòîê õàðàêòåðèçóåòñÿ îòñóòñòâèåìøèðîêîãî ïëàòî ìåæäó ìàêñèìóìàìè. Â ðàáîòå èñ-ñëåäîâàíî èçìåíåíèå ñîäåðæàíèÿ êîëè÷åñòâà äðîæ-æåâûõ êëåòîê â ñîñòîÿíèè àïîïòîçà ïðè êóëüòèâèðî-âàíèè ïîïóëÿöèè, ÷òî ïîäòâåðæäåíî êàê ìîðôîìåò-ðè÷åñêèìè ìåòîäàìè, òàê è àíàëèçîì áèîõèìè÷åñ-êèõ ìàðêåðîâ.

Â óñëîâèÿõ ìíîãèõ ïðèðîäíûõ ýêîñèñòåì ìèêðîîð-ãàíèçìû ñïîñîáíû âûæèâàòü ïðè îäíîâðåìåííîì âîç-äåéñòâèè íåñêîëüêèõ ñòðåññîðíûõ ôàêòîðîâ — ñóïðà-îïòèìàëüíûõ òåìïåðàòóðå è pH ñðåäû, ãîëîäàíèè ïîîñíîâíûì ñóáñòðàòàì, âûñîêîé îñìîëÿðíîñòè, ãèïîê-ñèè è äð. Êðèòåðèÿìè «áëàãîïîëó÷èÿ» ïîïóëÿöèè ñ÷è-òàþò êîëè÷åñòâåííûå ïàðàìåòðû ðîñòà (âðåìÿ ãåíå-ðàöèè, êîëè÷åñòâî êëåòîê, âûõîä áèîìàññû). Öåëüþíàñòîÿùåé ðàáîòû ÿâèëàñü îöåíêà ðîñòîâûõ ïàðàìåò-ðîâ äðîææåé â óñëîâèÿõ ðàçëè÷íîé îñìîëÿðíîñòè èàýðàöèè ñðåäû.

Îáúåêòîì èññëåäîâàíèÿ ÿâèëèñü äðîææè, âûäåëåí-íûå èç ïðèðîäíûõ ýêîñèñòåì ñ âûñîêèì ñîäåðæàíè-åì ñîëåé. Candida lipolytica — èç Áîíäþæñêîãî íåôòÿ-íîãî ìåñòîðîæäåíèÿ (Òàòàðñòàí); Rhodotorula aurantiaca— èç ñîëåíîé âîäû Ñàêñêîãî ëèìàíà (Êðûì);Malassezia spp. — ñ ïîâåðõíîñòè êîæè çäîðîâîãî ÷åëî-âåêà. Âèäîâóþ èäåíòèôèêàöèþ äðîææåé C. lipolytica èR. aurantiaca ïðîâîäèëè êëàññè÷åñêèìè ìåòîäàìè [Áà-áüåâà È. Ï., 1979; Yarrow D., 1998], èñïîëüçóÿ ïðî-ãðàììó Áàðíåòà [Barnett, 1996]. Ðåçóëüòàòû èäåíòèôè-êàöèè áûëè ïîäòâåðæäåíû ìåòîäîì ÏÖÐ ðèáîñîìàëü-íîé ÄÍÊ [Lieckfeldt, 1993]. Âèäîâóþ èäåíòèôèêàöèþëèïîôèëüíûõ äðîææåé Malassezia spp. ïðîâîäèëè ìå-òîäîì Guillot è Gueho [Guillot J., Gueho E, 1996] èïóòåì êàðèîòèïèðîâàíèÿ ÿäåðíîé ÄÍÊ [Johnston,1986; Boekhout, 1993]. Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàí-íûõ ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî ïîëó÷åííûé èçîëÿòïðåäñòàâëÿåò ñîáîé îäèí èç ïîäâèäîâ M. furfur ëèáîíîâûé âèä Malassezia.

Äðîææè C. lipolytica è R. aurantiaca âûðàùèâàëè âæèäêîé ÃÏÄ, Malassezia spp. — â ñðåäå Äèêñîíà[Guillot, Gueho, 1996]. Â àýðîáíûõ âàðèàíòàõ — ôëà-êîíû çàêðûâàëè âàòíûìè ïðîáêàìè; ìèêðîàýðîáíûõ

— ôëàêîíû áûëè óêóïîðåíû ðåçèíîâûìè ïðîáêàìè,ïðîêîëîòûìè øïðèöåâûìè èãëàìè äèàìåòðîì 0,8 ììñ âàòíûìè øàðèêàìè. Ðàçëè÷íûå êîíöåíòðàöèè ñîëè

â ñðåäå êóëüòèâèðîâàíèÿ ñîçäàâàëè äîáàâëåíèåìNaCl.

Îáíàðóæåíî, ÷òî ïðè âûðàùèâàíèè â àýðîáíûõóñëîâèÿõ ó âñåõ èññëåäóåìûõ êóëüòóð ñêîðîñòü ðîñòàáûëà îòíîñèòåëüíî ïîñòîÿííîé â øèðîêîì äèàïàçîíåêîíöåíòðàöèè NaCl: â ôàçå çàìåäëåíèÿ ðîñòà (4 ñóò-êè) äëÿ Malassezia spp. ýòîò äèàïàçîí ñîñòàâëÿë 0-12%, äëÿ C. lipolytica — 0-13 %, äëÿ R. aurantiaca — 0-15%.Äàëüíåéøåå ïîâûøåíèå êîíöåíòðàöèè ñîëè ïðèâî-äèëî ê ñíèæåíèþ îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè íà äâà ïî-ðÿäêà. Òî åñòü âñå òðè èçîëÿòà ïðîÿâëÿëè ñâîéñòâà ãà-ëîòîëåðàíòíûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ ïî êëàññèôèêàöèèÊàøíåðà.

Â ìèêðîàýðîáíûõ óñëîâèÿõ ó âñåõ êóëüòóð íàáëþ-äàëè ñíèæåíèå îïòè÷åñêîé ïëîòíîñòè ïðèìåðíî íàïîðÿäîê ïî ñðàâíåíèþ ñ àýðîáíûìè, íî ïðè ýòîì ðîñòèññëåäóåìûõ êóëüòóð èìåë ðÿä îñîáåííîñòåé. Òàê, óMalassezia spp. îòìå÷åíî óìåíüøåíèå äèàïàçîíà îïòè-ìàëüíûõ êîíöåíòðàöèé NaCl äî 7,5% ïðè ñîõðàíåíèèñêîðîñòè ðîñòà â ýòîì äèàïàçîíå íà ïîñòîÿííîì óðîâíå(óìåíüøåíèå ãàëîòîëåðàíòíîñòè). Ó R. aurantiaca â ýòèõóñëîâèÿõ îòìå÷åíî ïëàâíîå ñíèæåíèå ñêîðîñòè ðîñòàâ äèàïàçîíå 0-15% NaCl (óìåíüøåíèå ãàëîòîëåðàíòíî-

ñòè). Ñàìîé íåîáû÷íîé áûëà çàâèñèìîñòü ñêîðîñòèðîñòà îò êîíöåíòðàöèè ñîëè ó C. lipolytica: ïîìèìîðàñøèðåíèÿ äèàïàçîíà îïòèìàëüíûõ êîíöåíòðàöèé äî14%, îòìå÷åíî ïîÿâëåíèå âûðàæåííîãî ìàêñèìóìàïðè 7,5% NaCl. Èíûìè ñëîâàìè â ìèêðîàýðîáíûõ óñ-ëîâèÿõ C. lipolytica ïðèîáðåòàåò ñâîéñòâà óìåðåííî ãà-ëîôèëüíîãî ìèêðîîðãàíèçìà.

Òàêèì îáðàçîì, ñî÷åòàííîå äåéñòâèå äâóõ ñòðåñ-ñîðíûõ ôàêòîðîâ ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ðîñòîâûõ ïà-ðàìåòðîâ è ñâîéñòâ êóëüòóð ïî ñðàâíåíèþ ñ óñëîâèÿ-ìè äåéñòâèÿ îäíîãî ôàêòîðà. Óñòàíîâëåííûå ðàçëè-÷èÿ â íàïðàâëåííîñòè ýòèõ èçìåíåíèé, âîçìîæíî,îáóñëîâëåíû îñîáåííîñòÿìè ïðèðîäíûõ ýêîñèñòåìèçó÷åííûõ ìèêðîîðãàíèçìîâ.


ÁÈÎÏÎËÈÌÅÐÛ ÊËÅÒÎ×ÍÎÉ ÑÒÅÍÊÈ ÂÛÑØÈÕ ÁÀÇÈÄÈÀËÜÍÛÕ ÃÐÈÁÎÂ

Ãîðîâîé Ë. Ô., Áóðäþêîâà Ë. È.

Èíñòèòóò êëåòî÷íîé áèîëîãèè è ãåíåòè÷åñêîé èíæåíåðèè ÍÀÍ Óêðàèíû


Êëåòî÷íàÿ ñòåíêà ãðèáíûõ ãèô — ýòî ñëîæíàÿ ïîñòðîåíèþ è ðàçâèòèþ ïîëèôóíêöèîíàëüíàÿ îðãàíåë-ëà. Íà äîëþ êëåòî÷íîé ñòåíêè ïðèõîäèòñÿ çíà÷èòåëü-íàÿ, à ó ìíîãèõ âèäîâ è áîëüøàÿ ÷àñòü áèîìàññû ãðè-áà. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ îñíîâíàÿ ìàññà íàêîïëåííûõçíàíèé îòíîñèòñÿ ê êëåòî÷íîé ñòåíêå íèçøèõ ãðèáîâ.Êëåòî÷íàÿ ñòåíêà îáøèðíîé è ðàçíîîáðàçíîé ãðóïïûâûñøèõ áàçèäèîìèöåòîâ èçó÷åíà îòíîñèòåëüíî ñëàáî.

Íàèáîëåå ðàçðàáîòàíà ìîðôîëîãèÿ êëåòî÷íîé ñòåí-êè âûñøèõ áàçèäèîìèöåòîâ, ïîñêîëüêó ýòîò ïðèçíàêäàâíî èñïîëüçóåòñÿ â ñèñòåìàòèêå è òàêñîíîìèè. Îä-íàêî ïî óëüòðàòîíêîé ñòðóêòóðå äî ñèõ ïîð ìíîãî âîï-ðîñîâ. Èñïîëüçîâàíèå ïîñëîéíîãî õèìè÷åñêîãî è ôåð-ìåíòàòèâíîãî ðàçðóøåíèÿ â ñî÷åòàíèè ñ ýëåêòðîííîéìèêðîñêîïèåé è äðóãèìè ìåòîäàìè àíàëèçà íå ïîçâî-ëÿåò ïîëíîñòüþ è äîñòîâåðíî ïðîñëåäèòü çà âçàèìî-ïðîíèêíîâåíèåì êîìïîíåíòîâ ñîñåäíèõ ñëîåâ.

Îñíîâíûì ñòðóêòóðíûì áèîïîëèìåðîì êëåòî÷íîéñòåíêè âûñøèõ áàçèäèîìèöåòîâ ïðèíÿòî ñ÷èòàòü õèòèí.Ïî ðåíòãåíîâñêèì, ÈÊ-ñïåêòðàì è õèìè÷åñêîìó ñî-ñòàâó îí î÷åíü áëèçîê ê õèòèíó ðàêîîáðàçíûõ. Ñîäåð-æàíèå õèòèíà â êëåòî÷íîé ñòåíêå êîëåáëåòñÿ â äîâîëü-íî øèðîêèõ ïðåäåëàõ. Íàèáîëåå âûñîêîå — äî 65% —îíî ó íåêîòîðûõ àôèëëîôîðîâûõ ãðèáîâ. Ãðèáíîé õè-òèí èìååò ôîðìó ìèêðîôèáðèëë, êîòîðûå îáðàçóþò âêëåòî÷íîé ñòåíêå ïðîñòðàíñòâåííóþ ðåøåòêó.

Âòîðûì îñíîâíûì êîìïîíåíòîì êëåòî÷íîé ñòåí-êè âûñøèõ áàçèäèàëüíûõ ãðèáîâ ÿâëÿþòñÿ ãëþêàíû— ðàçíîîáðàçíàÿ ãðóïïà ïîëèñàõàðèäîâ D-ãëþêîçû.

Ðàçëè÷àþò íåñêîëüêî ôðàêöèé ãëþêàíîâ: âîäîðàñòâî-ðèìûå, ùåëî÷åðàñòâîðèìûå è íåðàñòâîðèìûå. Ãðèá-íûå ãëþêàíû ïðèâëåêàþò âíèìàíèå èññëåäîâàòåëåé,ïðåæäå âñåãî, ñâîåé âûñîêîé èììóíîìîäóëèðóþùåéè ïðîòèâîîïóõîëåâîé àêòèâíîñòüþ. Ôèçèîëîãè÷åñêàÿðîëü ãëþêàíîâ â êëåòî÷íûõ ñòåíêàõ âûñøèõ áàçèäèî-ìèöåòîâ èçó÷åíà íåäîñòàòî÷íî. Î÷åâèäíîé ÿâëÿåòñÿ èõðîëü êàê çàïàñíûõ âåùåñòâ, â óäåðæàíèè âîäû âîêðóããèôû, «öåìåíòèðóÿ» ìèêðîôèáðèëëû õèòèíà îíè ôîð-ìèðóþò ñêåëåò êëåòî÷íîé ñòåíêè. Íå âûçûâàåò ñîìíå-íèÿ è ó÷àñòèå èõ â òðàíñïîðòå âåùåñòâ.

Âàæíûì êîìïîíåíòîì êëåòî÷íîé ñòåíêè âûñøèõãðèáîâ ÿâëÿþòñÿ ìåëàíèíû, îáåñïå÷èâàþùèå ãðèáàìóñòîé÷èâîñòü ê íåáëàãîïðèÿòíûì óñëîâèÿì ñðåäû îáè-òàíèÿ. Ñîäåðæàíèå ìåëàíèíîâ ìîæåò ñèëüíî âàðüèðî-âàòü. Îíè òðóäíî ïîääàþòñÿ òî÷íîìó êîëè÷åñòâåííî-ìó è êà÷åñòâåííîìó îïðåäåëåíèþ, ïîñêîëüêó èçâåñò-íûå ìåòîäû íå ïîçâîëÿþò ïðîâåñòè èõ ïîëíóþ êîëè-÷åñòâåííóþ ýêñòðàêöèþ.

Íàìè ðàçðàáîòàííûå ìåòîäû âûäåëåíèÿ ôðàêöèéîòäåëüíûõ áèîïîëèìåðîâ êëåòî÷íîé ñòåíêè âûñøèõáàçèäèîìèöåòîâ è èõ êîìïëåêñîâ. Èçó÷åíèå ñâîéñòâýòèõ áèîïîëèìåðîâ ïîêàçàëî áîëüøèå ïåðñïåêòèâû èõïðàêòè÷åñêîãî èñïîëüçîâàíèÿ â ðàçíûõ îáëàñòÿõ. Íàè-áîëüøèé èíòåðåñ ïðåäñòàâëÿþò àíòèáàêòåðèàëüíûå èàíòèâèðóñíûå ñâîéñòâà ãðèáíûõ êîìïëåêñîâ, êîòîðûåïî ñâîåé ýôôåêòèâíîñòè íå óñòóïàþò ñîâðåìåííûìàíòèáèîòèêàì, íî â îòëè÷èå îò íèõ íå îáëàäàþò òîê-ñè÷íîñòüþ.

ÂËÈßÍÈÅ ÀÃÅÍÒÎÂ, ÄÅÏÎËßÐÈÇÓÞÙÈÕÖÈÒÎÏËÀÇÌÀÒÈ×ÅÑÊÓÞ ÌÅÌÁÐÀÍÓ ÍÀ ÔÎÐÌÎÎÁÐÀÇÎÂÀÍÈÅ

ÌÈÖÅËÈß THIELAVIA TERRESTRIS (APINIS) MALLOCH ET CAIN

Ãðîìîçîâà Å. Í., Âîé÷óê Ñ. È.

Èíñòèòóò ìèêðîáèîëîãèè è âèðóñîëîãèè ÍÀÍ ÓêðàèíûÓêðàèíà, 003143, Êèåâ, óë. Çàáîëîòíîãî, ä. 154

Èñïîëüçîâàíèå ìåìáðàííî-àêòèâíûõ àíòèáèî-òèêîâ (òèïà íèñòàòèíà) è ïðîòîíîôîðîâ (ÄÍÔ,FCCP, CCCP) äëÿ äåïîëÿðèçàöèè ìåìáðàíû ÿâëÿ-åòñÿ óíèâåðñàëüíûì ìåòîäîì èññëåäîâàíèÿ å¸ ó÷àñ-òèÿ â ïðîöåññàõ æèçíåäåÿòåëüíîñòè ìèêðîîðãàíèç-ìîâ ðàçëè÷íûõ ôèëîãåíåòè÷åñêèõ ãðóïï, â òîì ÷èñ-ëå è ãðèáîâ.

Èññëåäîâàíèå ïðîâîäèëîñü íà òåðìîôèëüíîì ìèê-ðîìèöåòå Thielavia terrestris (Apinis) Malloch et Cain,ñïîñîáíûì îáðàçîâûâàòü, â çàâèñèìîñòè îò óñëîâèéãëóáèííîãî êóëüòèâèðîâàíèÿ, ñëåäóþùèå òèïû ìè-öåëèÿ: íèò÷àòûé, ïåëëåòíûé è â âèäå «êðóïû». Ïî-ñêîëüêó âíåñåíèå â ñðåäó èññëåäóåìûõ âåùåñòâ (êðî-ìå õëîðèñòîãî êàëèÿ) ïîëíîñòüþ áëîêèðîâàëî ðàçâè-òèå ãðèáà, ìû îãðàíè÷èëèñü èõ êðàòêîâðåìåííûì âîç-äåéñòâèåì â ðàçëè÷íûå ïåðèîäû ðàçâèòèÿ îðãàíèçìà.

Óñòàíîâëåíî, ÷òî âíåñåíèå íà ðàííèõ ýòàïàõ êóëüòè-âèðîâàíèÿ êîíèäèé (2-4 ÷àñà) õëîðèñòîãî êàëèÿ â âû-ñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ (200-900 ìÌ), íèñòàòèíà (3 ìêã/ìë), 2,4-äèíèòðîôåíîëà (0,3ìêÌ) è FCCP (30 ìêÌ)ïðèâîäèëî ê èçìåíåíèþ ìîðôîëîãèè â íàïðàâëåíèèðàçâèòèÿ íèò÷àòîé ôîðìû ìèöåëèÿ. Âíåñåíèå óêàçàí-íûõ àãåíòîâ íà áîëåå ïîçäíèõ ýòàïàõ êóëüòèâèðîâà-íèÿ (18 ÷àñ) íå îêàçûâàëî ñòîëü âûðàæåííîãî ýôôåê-òà íà ìîðôîëîãèþ ìèöåëèÿ. Ýòî, ïî-âèäèìîìó, ñâè-äåòåëüñòâóåò îá ó÷àñòèè öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðà-íû â âîñïðèÿòèè è ïåðåäà÷å èíôîðìàöèîííîãî ñèã-íàëà ó Thielavia terrestris (Apinis) Malloch et Cain âîïðåäåë¸ííîì âðåìåííîì èíòåðâàëå. Ïðåäëîæåíà ñõåìàó÷àñòèÿ ýíåðãèçàöèè öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíûâ ðåöåïöèè ìîðôîãåííîãî ñèãíàëà è åãî ïðåîáðàçîâà-íèè â ôîðìå óâåëè÷åíèÿ ïóëà öÀÌÔ.


Èçâåñòíî, ÷òî Ñà2+-çàâèñèìàÿ íåñïåöèôè÷åñêàÿìåìáðàííàÿ ïðîíèöàåìîñòü (Ñà2+-çàâèñèìàÿ ïîðà)âîçíèêàåò â ïðèñóòñòâèè èîíîâ Ñà2+ è øèðîêîãî ðÿäàèíäóöèðóþùèõ àãåíòîâ — íåîðãàíè÷åñêîãî ôîñôàòà,ðàçîáùèòåëåé, èíãèáèòîðîâ, àãåíòîâ, âûçûâàþùèõîêèñëåíèå íèêîòèíàìèä- è àäåíèííóêëåîòèäîâ. Âàæ-íåéøèìè ïðèçíàêàìè âîçíèêíîâåíèÿ ýòîãî ôåíîìå-íà ÿâëÿþòñÿ âûñîêîàìïëèòóäíîå íàáóõàíèå ìèòîõîí-äðèé, ñâÿçàííîå ñ ïðîíèêíîâåíèåì â ìèòîõîíäðè-àëüíûé ìàòðèêñ íèçêîìîëåêóëÿðíûõ ñîåäèíåíèé (Ìr£ 1500 Äà) è ïàäåíèå ìèòîõîíäðèàëüíîãî ìåìáðàí-íîãî ïîòåíöèàëà, êîòîðûå â ñîâîêóïíîñòè ñâèäåòåëü-ñòâóþò î ñíèæåíèè ïàðàìåòðîâ ñîïðÿæåíèÿ âñëåäñòâèåíàðóøåíèÿ ìåìáðàííîé èíòàêòíîñòè.

Â ïðåäñòàâëåííîé ðàáîòå èçó÷àëàñü âîçìîæíîñòüÑà2+-çàâèñèìîé ïåðìåàáèëèçàöèè ìèòîõîíäðèé äðîæ-æåé Endomyces magnusii. Ïîêàçàíî, ÷òî èîíû Ñà2+ íåèíäóöèðîâàëè âûñîêîàìïëèòóäíîå íàáóõàíèå ìèòîõîí-äðèé äðîææåé â ïðèñóòñòâèè öåëîãî ðÿäà èíäóêòîðîâïîðû — íåîðãàíè÷åñêîãî ôîñôàòà (2-10 ìÌ), ãèäðî-ïåðåêèñè tert-BOH (500 mÌ), SH-ðåàãåíòà N-ýòèëìà-ëåèìèäà (500 mÌ), îêèñëèòåëÿ ýíäîãåííûõ íèêîòè-íàìèäíóêëåîòèäîâ îêñàëîàöåòàòà (1 ìÌ), èíãèáèòî-ðà òðàíñëîêàçû àäåíèíîâûõ íóêëåîòèäîâ àòðàêòèëî-çèäà (33 mÌ) è ðàçîáùèòåëÿ ClCCP (1 mÌ). Èíäóê-öèÿ íåñïåöèôè÷åñêîé ïðîíèöàåìîñòè íå íàáëþäàëàñü

ÌÈÒÎÕÎÍÄÐÈÈ ÄÐÎÆÆÅÉ ENDOMYCES MAGNUSII ËÈØÅÍÛ ÔÅÍÎÌÅÍÀÑÀ2+- ÇÀÂÈÑÈÌÎÉ ÍÅÑÏÅÖÈÔÈ×ÅÑÊÎÉ ÌÅÌÁÐÀÍÍÎÉ ÏÐÎÍÈÖÀÅÌÎÑÒÈ

Äåðÿáèíà Þ. È., Èñàêîâà Å. Ï., Çâÿãèëüñêàÿ Ð. À.

Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ,


äàæå â ñëó÷àå èñïîëüçîâàíèÿ íàäïîðîãîâûõ êîíöåíò-ðàöèé Ñà2+ (600-1000 íìîëåé íà 1 ìã ìèòîõîíäðèàëü-íîãî áåëêà). Ïîäîáíûì îáðàçîì âåëè ñåáÿ äåýíåðãè-çîâàííûå ïî ìîäåëè Õàëåñòðàïà (êðàòêîâðåìåííàÿïðåèíêóáàöèÿ ìèòîõîíäðèàëüíîé ñóñïåíçèè ñ àíòè-ìèöèíîì À (8 ìêã íà 1 ìã áåëêà) è À23187 (2 mÌ)) èèñòîùåííûå ïî àäåíèííóêëåîòèäàì ìèòîõîíäðèè (âû-äåëåíèå ìèòîõîíäðèé îñóùåñòâëÿëîñü â ïðèñóòñòâèèïèðîôîñôàòà), íàõîäÿùèåñÿ â óñëîâèÿõ, íàèáîëååáëàãîïðèÿòíûõ äëÿ îòêðûòèÿ ïîðû.

Èîíû êàëüöèÿ íå âûçûâàëè êîëëàïñ ìåìáðàííîãîïîòåíöèàëà ìèòîõîíäðèé. Ïîãëîùåíèå Ñà2+ ìèòîõîí-äðèàëüíîé ñóñïåíçèåé ñòèìóëèðîâàëî íåçíà÷èòåëüíîåïàäåíèå ïîòåíöèàëà âñëåäñòâèå ïîãëîùåíèÿ èîíà,êîòîðûé ïîñòåïåííî âîññòàíàâëèâàëñÿ è ïîääåðæè-âàëñÿ íà ïîñòîÿííîì óðîâíå â òå÷åíèå âñåãî âðåìåíèýêñïåðèìåíòà è ïàäàë òîëüêî â ðåçóëüòàòå àíàýðîáèî-çà. Èíòåðåñíî îòìåòèòü, ÷òî ìèòîõîíäðèè ïðîÿâëÿëèíå÷óâñòâèòåëüíîñòü ê öèêëîñïîðèíó À — ñïåöèôè÷åñ-êîìó èíãèáèòîðó Ñà2+-çàâèñèìîé ïîðû.

Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ ñäåëàí âûâîä,÷òî ìèòîõîíäðèè äðîææåé Endomyces magnusii íå îá-ëàäàþò ôåíîìåíîì Ñà2+-çàâèñèìîé ìåìáðàííîé ïðî-íèöàåìîñòè â íàèáîëåå èçâåñòíûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûåìîäåëÿõ.

ÑÎÐÒÈÍÃ ÂÍÅÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÁÅËÊÎÂ ÄÐÎÆÆÅÉ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Åãîðîâ Ñ. Í.

Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà119899, Ìîñêâà, Âîðîáü¸âû ãîðû, ÌÃÓ, áèîëîãè÷åñêèé ôàêóëüòåò

Áîëüøîå êîëè÷åñòâî èíôîðìàöèè íàêîïëåíî çàïîñëåäíèè äåñÿòèëåòèÿ î ìåõàíèçìàõ è ïóòÿõ ýêñêðå-öèè âíåêëåòî÷íûõ áåëêîâ ýóêàðèîò. Òðàíñïîðòíûåïîòîêè âíåêëåòî÷íûõ áåëêîâ ó ðàçíûõ îðãàíèçìîâïîõîæè è îáùàÿ èõ íàïðàâëåííîñòü èäåò îò ýíäîïëàç-ìàòè÷åñêîãî ðåòèêóëóìà ÷åðåç àïïàðàò Ãîëüäæè ê ïî-âåðõíîñòè êëåòêè. Îäíèì èç îáñóæäàåìûõ â ëèòåðàòó-ðå îòëè÷èé â îðãàíèçàöèè ïîòîêà âíåêëåòî÷íûõ áåë-êîâ ó äðîææåâîé êëåòêè è êëåòîê æèâîòíûõ, ÿâëÿåò-ñÿ îòñóòñòâèå ðåãóëèðóåìîãî ïîòîêà òðàíñïîðòíûõ âå-çèêóë ó äðîææåé. Äëÿ êîìïîíåíòîâ êëåòî÷íîé ïîâåð-õíîñòè äðîææåâîé êëåòêè, â òîì ÷èñëå è áåëêîâ, íåáûëè îáíàðóæåíû ñèãíàëû ñîðòèíãà è ñ÷èòàåòñÿ, ÷òîðåãóëÿöèÿ ñîäåðæàíèÿ åäèíîãî ïîòîêà òðàíñïîðòíûõâåçèêóë â ïî÷êó îïðåäåëÿåòñÿ íà óðîâíå òðàíñêðèï-öèè ãåíîâ.

Â êà÷åñòâå ìîäåëüíûõ âíåêëåòî÷íûõ ãëèêîïðîòåè-íîâ íàìè áûëè âûáðàíû êèñëûå ôîñôàòàçû. Ýòè ôåð-ìåíòû ÿâëÿþòñÿ ñòàíäàðòíûìè ìàðêåðàìè âíåêëåòî÷-íîãî òðàíñïîðòíîãî ïóòè, êîäèðóþòñÿ ÷åòûðüìÿ ñòðóê-òóðíûìè ãåíàìè è ðàçäåëåíû íà äâå ãðóïïû ïî ñòåïå-

íè çàâèñèìîñòè áèîñèíòåçà îò êîíöåíòðàöèè âíåêëå-òî÷íîãî ñâîáîäíîãî ôîñôàòà. Íàìè èçó÷åíû çàâèñè-ìîñòè ýêñêðåöèè êèñëûõ ôîñôàòàç ñ ðàçëè÷íûì ïî-ëèïåïòèäíûì íàáîðîì. Ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíî ïî-êàçàíà ñâÿçü ýêñêðåöèè êîíñòèòóòèâíîé êèñëîé ôîñ-ôàòàçû (êÊÔ) ñ ïðîöåññîì ïî÷êîâàíèÿ è îòñóòñòâèåòàêîé çàâèñèìîñòè äëÿ ðåïðåññèáåëüíîé êèñëîé ôîñ-ôàòàçû (ðÊÔ). Âûäåëåíû äâà òèïà òðàíñïîðòíûõ âå-çèêóë, îïðåäåëÿþùèõ ýêñêðåöèþ êÊÔ è ðÊÔ. Ïîêà-çàíî, ÷òî ðàñïðåäåëåíèå ôåðìåíòàòèâíîé àêòèâíîñòèïî äàííûì òèïàì âåçèêóë çàâèñèò îò ïîëèïåïòèäíîãîñîñòàâà êèñëûõ ôîñôàòàç. Ïîëèïåïòèäû pPho10 èpPho11, îïðåäåëÿþò íàïðàâëåíèå òðàíñïîðòà õàðàê-òåðíîå äëÿ íàòèâíîé ðÊÔ. Ïðîâåäåíî ñðàâíèòåëüíîåèçó÷åíèå êèíåòè÷åñêèõ ñâîéñòâ âñåõ ôåðìåíòîâ, âõî-äÿùèõ â ñîñòàâ âíåêëåòî÷íûõ êèñëûõ ôîñôàòàç.

Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû ïîäòâåðæäàþò âûñêàçàí-íóþ íàìè ðàíåå ãèïîòåçó î ðàçëè÷íîé ôóíêöèîíàëü-íîé ðîëè îòäåëüíûõ êèñëûõ ôîñôàòàç äðîææåé, êîòî-ðàÿ íå îãðàíè÷åíà òîëüêî äîáû÷åé ôîñôîðà íåîáõî-äèìîãî äëÿ ìåòàáîëèçìà êëåòêè.


Òðóòîâèê ëàêèðîâàííûé — êñèëîòðîôíûé áàçèäè-îìèöåò, âûçûâàþùèé áåëóþ ãíèëü ëèñòâåííûõ ïîðîä,â íàñòîÿùåå âðåìÿ èíòåíñèâíî èçó÷àåòñÿ â ðÿäå ñòðàí.Ñâÿçàíî ýòî ñ îáíàðóæåííûì ó äàííîãî âèäà øèðî-êèì ñïåêòðîì ôàðìàêîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ. Ýêñòðàêòûáàçèäèîì, ìèöåëèÿ è êóëüòóðàëüíîé æèäêîñòè â ðàç-íîé ñòåïåíè îáëàäàþò àíòèîïóõîëåâûì äåéñòâèåì, ãè-ïîëèïèäåìè÷åñêîé è àíòèáàêòåðèàëüíîé àêòèâíîñòüþ.Êðîìå òîãî, îíè îáëàäàþò ñïîñîáíîñòüþ íîðìàëèçî-âàòü êðîâÿíîå äàâëåíèå è òåðàïåâòè÷åñêèì äåéñòâèåìïðè ñåðäå÷íî- ñîñóäèñòûõ çàáîëåâàíèÿõ, ñïîñîáñòâó-þò ñíèæåíèþ óðîâíÿ ñàõàðà â êðîâè è äð. (Ôåîôèëî-âà, 1996; Êðàñíîïîëüñêàÿ, 1998).

Èññëåäîâàíû ìîðôîëîãî-êóëüòóðàëüíûå è ìèêðî-ñêîïè÷åñêèå îñîáåííîñòè ÷èñòûõ êóëüòóð øòàììîâðàçíîãî ãåîãðàôè÷åñêîãî ïðîèñõîæäåíèÿ ñ ïîìîùüþñâåòîâîãî è ýëåêòðîííîãî ñêàíèðóþùåãî ìèêðîñêî-ïîâ, èõ îòíîøåíèå ê äèàïàçîíó òåìïåðàòóð îò +15°Ñäî +30°Ñ è ñïîñîáíîñòü ê îáðàçîâàíèþ áàçèäèîì invitro.

Îïòèìàëüíàÿ òåìïåðàòóðà äëÿ ðîñòà âñåõ èññëåäî-âàííûõ øòàììîâ íà àãàðèçîâàííîé ñðåäå (ñóñëî 4° ïîÁàëëèíãó) 24-25°Ñ. Ïðè ýòîì øòàììû ïî äèàìåòðóêîëîíèé íà 10-å ñóòêè ðîñòà ðàçäåëèëèñü íà äâå ãðóï-ïû: I — ìåäëåííîðàñòóùèå è II — áûñòðîðàñòóùèå.

ØÒÀÌÌÎÂÛÅ ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ×ÈÑÒÛÕ ÊÓËÜÒÓÐ ÒÐÓÒÎÂÈÊÀ ËÀÊÈÐÎÂÀÍÍÎÃÎGANODERMA LUCIDUM (FR.) KARST

Çàâüÿëîâà Ë.À., Àíòèìîíîâà À.Â., Ãàðèáîâà Ë.Â., Êðàñíîïîëüñêàÿ Ë.Ì.

Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò èì. Ì.Â.Ëîìîíîñîâà,ÍÈÈÍÀ ÐÀÌÈ èìåíè Ã. Ô.Ãàóçå

Áèîëîãè÷åñêèé ôàêóëüòåò ÌÃÓ, êàô. ìèêîëîãèè è àëüãîëîãèè

119899, Ìîñêâà, Âîðîáüåâû ãîðû, ÌÃÓ, äîì 1, êîð. 12

Îòìå÷åíû çíà÷èòåëüíûå ðàçëè÷èÿ ïî ìîðôîëîãî-êóëü-òóðàëüíûì ïðèçíàêàì: I ãðóïïà èìåëà çîíàëüíóþ êî-ëîíèþ ñ ïîðîøèñòûì êðàåì è òÿæèñòûì öåíòðîìæåëòîâàòî-ñåðîãî öâåòà, èíâåðçóì â öåíòðå êîëîíèèñâåòëî-êîðè÷íåâûé; II ãðóïïà îáðàçóåò íåçîíàëüíóþêîëîíèþ â âèäå ïëîòíîé ïëåíêè íà ïîâåðõíîñòè ñóá-ñòðàòà ñ ïîðîøèñòîé ïîâåðõíîñòüþ, èíâåðçóì áåëûé.

Ó áûñòðîðàñòóùèõ øòàììîâ ïðè ìèêðîñêîïèðîâà-íèè îáíàðóæåíû ñòàáèëüíî ïðèñóò-ñòâóþùèå ìíîãî-÷èñëåííûå ñòðóêòóðû â âèäå ëèìîíîâèäíûõ òîëñòî-ñòåííûõ îáðàçîâàíèé, â 1,5-2 ðàçà ïðåâûøàþùèå ïîòîëùèíå ìèöåëèé, ñèäÿùèå íà êîðîòêèõ íîæêàõ. Ïðåä-ïîëîæèòåëüíî, ýòè ñòðóêòóðû ìîãóò áûòü òåðìèíàëü-íûìè õëàìèäîñïîðàìè. Ó øòàììîâ ìåäëåííîðàñòóùèõòàêèå ñòðóêòóðû íàáëþäàëèñü î÷åíü ðåäêî. Â ñòàíäàðò-íûõ óñëîâèÿõ in vitro áûëè ïîëó÷åíû áàçèäèîìû øòàì-ìîâ áûñòðîðàñòóùèõ, ìåäëåííîðàñòóùèå íå ïëîäîíî-ñèëè.

Ìîæíî ïðåäïîëîæèòü, ÷òî îòìå÷åííûå øòàììî-âûå ðàçëè÷èÿ ñâÿçàíû ñ èõ ãåîãðàôè÷åñêèì ïðîèñ-õîæäåíèåì è ìîãóò îêàçàòü âëèÿíèå íà ôàðìàêîëîãè-÷åñêèå õàðàêòåðèñòèêè îòäåëüíûõ êóëüòóð.

Ðàáîòà âûïîëíåíà ïðè ïîääåðæêå Ðîññèéñêîãî ôîíäà ôóí-

äàìåíòàëüíûõ èññëåäîâàíèé è ïðîãðàììû «Óíèâåðñèòåòû

Ðîññèè»

ÊÂÀÍÒÎÂÎ-ÕÈÌÈ×ÅÑÊÎÅ ÌÎÄÅËÈÐÎÂÀÍÈÅ ÂÇÀÈÌÎÄÅÉÑÒÂÈßÏÎËÈÀÌÈÍÎÑÀÕÀÐÈÄÎÂ ÊËÅÒÎ×ÍÎÉ ÑÒÅÍÊÈ ÃÐÈÁÎÂ

Ñ ÊÀÒÈÎÍÀÌÈ ÌÅÒÀËËÎÂ

Èëü÷åíêî Í. Í., Ãîðîâîé Ë. Ô.

Èíñòèòóò êëåòî÷íîé áèîëîãèèè ãåíåòè÷åñêîé èíæåíåðèè ÍÀÍ Óêðàèíû


Ôåíîìåíàëüíàÿ ñïîñîáíîñòü ãðèáîâ íàêàïëèâàòüòÿæåëûå ìåòàëëû è ðàäèîíóêëèäû øèðîêî èçâåñòíà.Ýòó ñïîñîáíîñòü ñâÿçûâàþò ñ íàëè÷èåì â êëåòî÷íîéñòåíêå ãðèáîâ ïîëèàìèíîñàõàðèäîâ, ïðåäñòàâëÿþùèõñîáîé íåðàçâëåòëåííûå öåïè ñâÿçàííûõ îñòàòêîâ N-àöåòèë-D-ãëþêîçàìèíà (õèòèí) èëè D-ãëþêîçàìèíà(õèòîçàí). Îáùåïðèçíàíî, ÷òî îñíîâíîé âêëàä â ñâÿ-çûâàíèå n-âàëåíòíûõ êàòèîíîâ ìåòàëëîâ ýòèìè ïî-ëèìåðàìè âíîñèò îáðàçîâàíèå êîîðäèíàöèîííîé ñâÿçèìåæäó ñâîáîäíîé ýëåêòðîííîé ïàðîé àòîìà àçîòà èâàêàíòíûìè îðáèòàëÿìè êàòèîíà ìåòàëëà ïî äîíîð-íî-àêöåïòîðíîìó ìåõàíèçìó. Îäíàêî, âàæíîå çíà÷å-íèå èìååò âçàèìîäåéñòâèå êàòèîíà ìåòàëëà ñ ÎÍ-ãðóïïàìè èëè àòîìàìè êèñëîðîäà ãëþêîïèðàíîçíûõêîëåö.

Â ðàáîòå ïðåäïðèíÿòà ïîïûòêà ïðèâëå÷åíèÿ àïïà-ðàòà êâàíòîâîé õèìèè äëÿ ïîíèìàíèÿ ïðèðîäû âçàè-ìîäåéñòâèÿ è îïðåäåëåíèÿ ìåñò ëîêàëèçàöèè êàòèî-

íîâ ìåòàëëîâ ïðè èõ ñâÿçè ñ ïîëèàìèíîñàõàðèäàìè. Âêà÷åñòâå ïåðâîãî øàãà ïðîâåäåíî ìîäåëèðîâàíèå âçà-èìîäåéñòâèÿ â ñèñòåìå êàòèîí ìåòàëëà — D-ãëþêîçà-ìèí. Äëÿ ðàñ÷åòîâ èñïîëüçîâàëèñü êàòèîíû Na+, Zn2+

è Cd2+. Òàêîé ðÿä ìåòàëëîâ áûë âûáðàí öåëåíàïðàâ-ëåííî, ïîñêîëüêó èçâåñòíî, ÷òî ùåëî÷íûå ýëåìåíòûïðàêòè÷åñêè íå àäñîðáèðóþòñÿ íà ïîëèàìèíîñàõàðè-äàõ. Ïðè ýòîì ìû òàêæå ïîïûòàëèñü ïîíÿòü ïðèðîäó èîïðåäåëèòü ìåñòà èçáèðàòåëüíîãî ñâÿçûâàíèÿ êàòèî-íîâ òÿæåëûõ ìåòàëëîâ. Ïðîâåäåíî òàêæå èçó÷åíèå âëè-ÿíèÿ ïåðâîé ãèäðàòíîé îáîëî÷êè âîêðóã êàòèîíîâìåòàëëà, êîòîðàÿ ìîäåëèðîâàëàñü äâóìÿ è ÷åòûðüìÿìîëåêóëàìè âîäû, íà îñîáåííîñòè êîìïëåêñîîáðàçî-âàíèÿ â èçó÷àåìîé ñèñòåìå. Íåýìïèðè÷åñêèå HF ðàñ-÷åòû â ïîëíîýëåêòðîííîì 6-31G(d) è ïñåâäîïîòåí-öèàëüíîì SDD áàçèñíûõ íàáîðàõ c èñïîëüçîâàíèåìýíåðãèè êîððåëÿöèè íà MP2 óðîâíå âûïîëíåíû ïîïðîãðàììå GAUSSIAN 98. Âñå ðàñ÷åòû ïðîâåäåíû â


ðåæèìå ïîëíîé îïòèìèçàöèè ãåîìåòðè÷åñêèõ ïàðàìåò-ðîâ èññëåäóåìîé ñèñòåìû. Ñòàðòîâûìè òî÷êàìè äëÿîïòèìèçàöèè ñëóæèëè ñòðóêòóðû, â êîòîðûõ èñïîëü-çîâàëñÿ 4Ñ

1 êîíôîðìåð D-ãëþêîçàìèíà, à êàòèîí ìå-

òàëëà ðàñïîëàãàëñÿ âîçëå àìèíîãðóïïû è ÎÍ-ãðóïïû,êîòîðàÿ ïðèíàäëåæèò àòîìó Ñ

1 (ñòðóêòóðà 1) èëè àòî-

ìà êèñëîðîäà êîëüöà (ñòðóêòóðà 2).Ðàñ÷åòû ïîêàçàëè, ÷òî âî âñåõ ñëó÷àÿõ ýíåðãåòè-

÷åñêè áîëåå âûãîäíûìè ÿâëÿþòñÿ ñòðóêòóðû, â êîòî-ðûõ êàòèîíû ìåòàëëà, íåçàâèñèìî îò ïðèðîäû, çàðÿ-äà è àòîìíîãî ðàäèóñà ðàñïîëàãàþòñÿ âîçëå àòîìà êèñ-

ëîðîäà D-ãëþêîçàìèíà. Îäíàêî, ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òîóâåëè÷åíèå ÷èñëà ìîëåêóë â ãèäðàòíîé îáîëî÷êå êà-òèîíà ïðèâîäèò ê òîìó, ÷òî óìåíüøàåòñÿ ðàçíèöàìåæäó ïîëíûìè ýíåðãèÿìè ñòðóêòóð 1 è 2. Òàê, íà-ïðèìåð, äëÿ «ãîëîãî» êàòèîíà Cd2+, ãèäðàòèðîâàííî-ãî äâóìÿ è ÷åòûðüìÿ ìîëåêóëàìè âîäû, ýòà âåëè÷èíàðàâíÿåòñÿ ñîîòâåòñòâåííî 10. 09, 4. 41, 1. 13 êêàë/ìîëü.Ýòî ñâèäåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî äàëüíåéøåå óâåëè÷å-íèå ðàçìåðà ãèäðàòíîé îáîëî÷êè âîêðóã êàòèîíà ñäå-ëàåò ðàâíîâåðîÿòíûì íàõîæäåíèå åãî â äâóõ ðàçëè÷-íûõ ïîëîæåíèÿõ.

ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÊÀ ÒÐÀÍÑÏÎÐÒÍÎÃÎ ÌÓÒÀÍÒÀ NEUROSPORA CRASSA–NAP

Èñàêîâà Å. Ï., Ãîðïåíêî Ë. Â., Øóðóáîð Å. È., Åðøîâ Þ. Â.,

Ïîòàïîâà Ò. Â.,* Çâÿãèëüñêàÿ Ð. À., Áåëîçåðñêàÿ Ò. À.Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ


*Èíñòèòóò ôèçèêî-õèìè÷åñêîé áèîëîãèè èìåíè À. Í. Áåëîçåðñêîãî

119899, Ìîñêâà, ÌÃÓ, óë. àêàä. Ð. Â. Õîõëîâà, ä. 4.

Òðàíñïîðòíûé ìóòàíò nap áûë âûäåëåí â 1968 ã.[1]. Ïðåäñòàâëåííûé øòàìì îêàçàëñÿ ðåçóëüòàòîì ìó-òàöèè îäíîãî ãåíà, êîòîðûé áûë â äàëüíåéøåì êëî-íèðîâàí è ñåêâåíèðîâàí è åãî áåëêîâûé ïðîäóêò îõà-ðàêòåðèçîâàí êàê ïåðìåàçà àìèíîêèñëîò. Áûëî âûÿâ-ëåíî, ÷òî ó nap íà 30-60% ñíèæåí òðàíñïîðò àìèíî-êèñëîò, óðèäèíà è ãëþêîçû, âäâîå ñíèæåíà àêòèâ-íîñòü Í+-ÀÒÐàçû ïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû è ïîíè-æåí ìåìáðàííûé ïîòåíöèàë. Ïëåéîòðîïíûé õàðàêòåðýòîé ìóòàöèè ñòèìóëèðîâàë ðàçâèòèå èññëåäîâàíèéïî õàðàêòåðèñòèêå ýòîãî øòàììà. Îêàçàëîñü, ÷òî óìóòàíòà ñêîðîñòü ðîñòà áûëà íèæå, ÷åì ó äèêîãîòèïà, nap cèíòåçèðîâàë âäâîå áîëüøå íåéðîñïîðîê-ñàíòèíà, à ïîä âëèÿíèåì ñâåòà, ñòèìóëèðóþùåãî êà-ðîòèíîãåíåç ó ãðèáîâ, êîëè÷åñòâî êàðîòèíîèäîâ êàêó ìóòàíòà, òàê è ó äèêîãî òèïà âîçðàñòàëî âäâîå. Âìèöåëèè nap ñîäåðæàíèå âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÒÐ âïîëòîðà ðàçà ïðåâûøàëî åãî êîëè÷åñòâî â êëåòêàõ äè-êîãî òèïà, ïî-âèäèìîìó, ââèäó ñíèæåíèÿ àêòèâíîñ-òè Í+-ÀÒÐàçû ïëàçìàëåììû, îáû÷íî ðàñõîäóþùåéíà ñâîþ ðàáîòó äî 50% âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÒÐ. Îäíà-êî íåëüçÿ èñêëþ÷àòü âòîðîãî âîçìîæíîãî èñòî÷íèêàýòîãî ïîâûøåíèÿ — äûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé.Â ñâÿçè ñ ýòèì, áûë ðàçðàáîòàí ìåòîä âûäåëåíèÿ

ïðî÷íî-ñîïðÿæåííûõ ìèòîõîíäðèé èç ìèöåëèÿ N.crassa äèêîãî òèïà è ìóòàíòà íà ðàçíûõ ñòàäèÿõ ðîñòà— ëîãàðèôìè÷åñêîé è ñòàöèîíàðíîé. Âûäåëåííûåìèòîõîíäðèàëüíûå ïðåïàðàòû áûëè ôèçèîëîãè÷åñêèèíòàêòíûìè. Â äûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé îáîèõòèïîâ ôóíêöèîíèðîâàëè âñå òðè ïóíêòà ýíåðãåòè÷åñ-êîãî ñîïðÿæåíèÿ. Ñòåïåíü ó÷àñòèÿ àëüòåðíàòèâíîéîêñèäàçû â îêèñëåíèè ñóáñòðàòîâ âîçðàñòàëà ïðè ïå-ðåõîäå êóëüòóð ê ñòàöèîíàðíîé ôàçå ðîñòà. Â ìèòîõîí-äðèÿõ èç ìèöåëèÿ ìóòàíòà êàê óðîâåíü öèàíèäðåçèñ-òåíòíîãî äûõàíèÿ (íå ñîïðÿæåííîãî ñ ôîñôîðèëè-ðîâàíèåì), òàê è óðîâåíü ðîòåíîí-íå÷óâñòâèòåëüíî-ãî äûõàíèÿ îêàçàëèñü íèæå, ÷åì â ìèòîõîíäðèÿõ èçêëåòîê äèêîãî òèïà. Òàêèì îáðàçîì, âêëàä àëüòåðíà-òèâíûõ (íåôîñôîðèëèðóþùèõ) ïóòåé îêèñëåíèÿ âîáùåå äûõàíèå îêàçàëñÿ ìåíüøå â ìèöåëèè ìóòàíòî-ãî øòàììà, ó êîòîðîãî óâåëè÷åí è êîýôôèöèåíò ïî-òðåáëåíèÿ ñóáñòðàòà. Íå èñêëþ÷åíî, ÷òî ýòè ñâîéñòâàäûõàòåëüíîé öåïè ìèòîõîíäðèé, õîòÿ è â ìåíüøåéñòåïåíè, ÷åì îñëàáëåíèå òðàíñïîðòíîé àêòèâíîñòèïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû, ìîãëè ñïîñîáñòâîâàòüóâåëè÷åíèþ âíóòðèêëåòî÷íîãî ÀÒÔ â ìèöåëèè ìóòàí-òíîãî øòàììà.


ÊËÅÒÎ×ÍÀß ÑÒÅÍÊÀ ÄÐÎÆÆÅÉ:ÑÒÐÎÅÍÈÅ, ÁÈÎÑÈÍÒÅÇ ÊÎÌÏÎÍÅÍÒÎÂ È ÑÁÎÐÊÀ

Êàëåáèíà Ò. Ñ., Êóëàåâ È. Ñ.

Ìîñêîâñêèé Ãîñóäàðñòâåííûé Óíèâåðñèòåò èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà

119899, Ìîñêâà, Âîðîáüåâû Ãîðû, ÌÃÓ, Áèîë. ôàêóëüòåò

Êàô. ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè.

Êëåòî÷íàÿ ñòåíêà (ÊÑ) äðîææåé ïðåäñòàâëÿåò ñî-áîé äèíàìè÷íóþ, ïîëèôóíêöèîíàëüíóþ è ôèçèîëî-ãè÷åñêè àêòèâíóþ îðãàíåëëó. ÊÑ âûïîëíÿåò ôóíêöèþíàðóæíîãî ñêåëåòà êëåòêè, â íåé ðàñïîëàãàþòñÿ ðå-

öåïòîðû è çàêðåïëåíî áîëüøîå êîëè÷åñòâî ôåðìåí-òîâ, à òàêæå áåëêîâ ñ èíîé ìåòàáîëè÷åñêîé àêòèâíî-ñòüþ. Îñíîâíûìè ñòðóêòóðíûìè êîìïîíåíòàìè ÊÑäðîææåé ÿâëÿþòñÿ ïîëèñàõàðèäû (õèòèí, ãëþêàíû)


è ìàííîïðîòåèíû. Íàèáîëåå ïðèìå÷àòåëüíîé îñîáåí-íîñòüþ áèîãåíåçà ÊÑ ÿâëÿåòñÿ òîò ôàêò, ÷òî ñèíòåçñîñòàâëÿþùèõ åå êîìïîíåíòîâ ïðîèñõîäèò âíóòðèêëåòêè èëè íà öèòîïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå, â òîâðåìÿ êàê ôîðìèðîâàíèå ìîëåêóëÿðíîãî àíñàìáëÿîñóùåñòâëÿåòñÿ çà ïðåäåëàìè öèòîïëàçìàòè÷åñêîéìåìáðàíû. Â äîêëàäå ïðåäñòàâëåíû ñîâðåìåííûå ñõå-ìû ñòðîåíèÿ ÊÑ äðîææåé è ðàññìàòðèâàþòñÿ îñíîâ-

íûå ýòàïû áèîñèíòåçà è ñáîðêè åå êîìïîíåíòîâ â åäè-íóþ ìîëåêóëÿðíóþ ñòðóêòóðó. Îòäåëüíî îáñóæäàåòñÿðîëü ìàííîïðîòåèíîâ â ôîðìèðîâàíèè ìîëåêóëÿðíî-ãî àíñàìáëÿ ÊÑ äðîææåé. Ïðèâîäÿòñÿ íîâûå ýêñïåðè-ìåíòàëüíûå äàííûå, ñâèäåòåëüñòâóþùèå î âàæíîéñòðóêòóðíîé ðîëè áåëêîâ ÊÑ äðîææåé.

Ðàáîòà ïîääåðæàíà ãðàíòàìè ÐÔÔÈ ¹ 00-04-48356 è 00-

15-97851.

ÑÎÏÐßÆÅÍÈÅ ÏÅÐÅÊÈÑÍÎÃÎ ÎÊÈÑËÅÍÈß ËÈÏÈÄÎÂ Ñ ÄÅÃÐÀÄÀÖÈÅÉ ËÈÃÍÈÍÀÓ ÄÅÐÅÂÎÐÀÇÐÓØÀÞÙÈÕ ÁÀÇÈÄÈÎÌÈÖÅÒÎÂ: ÎÒ ÃÈÏÎÒÅÇÛ Ê ÔÀÊÒÓ

Êàïè÷ À. Í., Øèøêèíà Ë. Í.*

Ìåæäóíàðîäíûé ýêîëîãè÷åñêèé óíèâåðñèòåò èìåíè À. Ä. Ñàõàðîâà,220009, Ìèíñê, óë. Äîëãîáðîäñêàÿ, ä. 23

*Èíñòèòóò áèîõèìè÷åñêîé ôèçèêè èìåíè Í. Ì. Ýìàíóýëÿ ÐÀÍ

*119991, Ìîñêâà, óë. Êîñûãèíà, ä. 4

Â 1990 ã. íà îñíîâàíèè èçó÷åíèÿ ñîñòàâà ëèïèäîâìèöåëèÿ äåðåâîðàçðóøàþùèõ áàçèäèîìèöåòîâ íàìèâïåðâûå áûëî ïðåäëîæåíî (Êàïè÷, 1990; Êàïè÷ è äð.1990), ÷òî ïîëèíåíàñûùåííûå æèðíûå êèñëîòû, âõî-äÿùèå â ñîñòàâ ëèïèäîâ ìèöåëèÿ ýòèõ ãðèáîâ, ìîãóòîêèñëÿòüñÿ ñ ïðîäóêöèåé ïåðåêèñíûõ ðàäèêàëîâ, êî-òîðûå ñïîñîáíû ïðèíèìàòü ó÷àñòèå â àòàêå íà ëèã-íèí, âõîäÿùèé â ñîñòàâ äðåâåñèíû. Âïîñëåäñòâèè ýòîïðåäïîëîæåíèå áûëî ðàçâèòî â ãèïîòåçó ñîïðÿæåíèÿïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ ìèöåëèÿ êñèëîòðîô-íûõ áàçèäèîìèöåòîâ ñ äåãðàäàöèåé ëèãíèíà (Êàïè÷,1993; Êàïè÷ è Øèøêèíà, 1995). Ïðåäëàãàëîñü, ÷òîñâîáîäíî-ðàäèêàëüíîå îêèñëåíèå ëèãíèíà, èíèöèè-ðóåìîå ëèãíèíîëèòè÷åñêèìè ôåðìåíòàìè, ìîæåò çà-ìåòíî óñèëèâàòüñÿ ïåðîêñèëüíûìè ðàäèêàëàìè ëèïè-äîâ, ÷òî è îáåñïå÷èâàåò ñîïðÿæåíèå ïðîöåññîâ ÏÎËñ äåñòðóêöèåé ëèãíèíà. Ïåðâûå ýêñïåðèìåíòàëüíûåäîêàçàòåëüñòâà âîçìîæíîñòè òàêîãî ñîïðÿæåíèÿ áûëèïîëó÷åíû àìåðèêàíñêèìè ó÷åíûìè (Bao et al. 1994).Îêàçàëîñü, ÷òî ìàðãàíåö ïåðîêñèäàçà, ïðîäóöèðóå-ìàÿ ãðèáàìè áåëîé ãíèëè, ñïîñîáíà èíèöèèðîâàòü ïå-ðåêèñíîå îêèñëåíèå íåíàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò,âõîäÿùèõ â ñîñòàâ ñóðôàêòàíòà Òâèí 80. Â òàêîãî ðîäàñèñòåìàõ ïðîèñõîäèëî îêèñëèòåëüíîå ðàçðóøåíèå íàè-áîëåå óñòîé÷èâûõ íåôåíîëüíûõ ìîäåëüíûõ ñîåäèíå-íèé ëèãíèíà, êîòîðûå â íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ ýòèìôåðìåíòîì íå îêèñëÿþòñÿ. Çàìåíà Òâèíà 80 íà Òâèí20, êîòîðûé ñîäåðæèò òîëüêî íàñûùåííûå æèðíûåêèñëîòû, ïðèâîäèëà ê ïîòåðå ýòîãî ñâîéñòâà. Äàëü-íåéøèå èññëåäîâàíèÿ ïîêàçàëè, ÷òî â ñèñòåìàõ ñ èíè-

öèèðîâàííûì ìàðãàíåö ïåðîêñèäàçîé ïåðåêèñíûìîêèñëåíèåì ëèïèäîâ èäåò îêèñëèòåëüíîå ðàçðóøåíèåðàçíîîáðàçíûõ óñòîé÷èâûõ ê îêèñëåíèþ êñåíîáèîòè-êîâ (Moen and Hammel 1994; Bogan et al. 1996) è äàæåìèíåðàëèçàöèÿ ïîëèìåðíûõ ìîäåëüíûõ ñîåäèíåíèéëèãíèíà (Kapich et al. 1999a). Ñóäÿ ïî âñåìó, ìàðãàíåöïåðîêñèäàçà îáëàäàåò ñóáñòðàòíîé ñïåöèôè÷íîñòüþ ïîîòíîøåíèþ ê ëèíîëåâîé êèñëîòå. Òàêèì îáðàçîì, ñïî-ñîáíîñòü ãðèáîâ áåëîé ãíèëè ê ïðåèìóùåñòâåííîìóíàêîïëåíèþ ëèíîëåâîé êèñëîòû â èõ ôîñôîëèïèäàõìîæåò ðàññìàòðèâàòüñÿ êàê ñâîåãî ðîäà áèîõèìè÷åñ-êàÿ àäàïòàöèÿ, îáåñïå÷èâàþùàÿ èì âîçìîæíîñòü áî-ëåå ýôôåêòèâíîãî ðàçðóøåíèÿ ëèãíèíà, à ñàìè ãðèá-íûå ëèïèäû, è â ÷àñòíîñòè ëèíîëåâàÿ êèñëîòà, êàê«ìàñëî», êîòîðîå ïîäëèâàåòñÿ â îãîíü ôåðìåíòàòèâ-íîãî ãîðåíèÿ ëèãíèíà. Ðîëü ïåðîêñèëüíûõ ðàäèêàëîâêàê ïîòåíöèàëüíûõ íèçêî ìîëåêóëÿðíûõ ìåäèàòîðîâ,ñïîñîáíûõ ðàçðóøàòü ëèãíèí, áûëà ïðîäåìîíñòðèðî-âàíà â ýêñïåðèìåíòàõ ñ õèìè÷åñêèìè ñèñòåìàìè, ãå-íåðèðóþùèìè ýòè ðàäèêàëû (Kapich et al., 1999b).Óñòàíîâëåíî òàêæå (Watanabe et al. 2000), ÷òî ãðèáíûåìàðãàíåö ïåðîêñèäàçû ñïîñîáíû îêèñëÿòü ëèíîëåâóþêèñëîòó ñ ïðîäóêöèåé àöèëüíûõ ðàäèêàëîâ, êîòîðûåòàêæå ðàññìàòðèâàþòñÿ â êà÷åñòâå âîçìîæíûõ àãåí-òîâ, ó÷àñòâóþùèõ â àòàêå íà ëèãíèí. Òàêèì îáðàçîì,ýêñïåðèìåíòàëüíûå äàííûå, ïîëó÷åííûå â ðàçíûõëàáîðàòîðèÿõ ìèðà, ïîäòâåðæäàþò ïðåäëîæåííóþ íàìèãèïîòåçó î ñîïðÿæåíèè ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëè-ïèäîâ ñ äåãðàäàöèåé ëèãíèíà ó äåðåâîðàçðóøàþùèõáàçèäèîìèöåòîâ.

ÔÀÐÌÀÊÎËÎÃÈ×ÅÑÊÎÅ ÈÑÑËÅÄÎÂÀÍÈÅ Ó×ÀÑÒÈßÐÈÀÍÎÄÈÍÎÂÎÃÎ ÐÅÖÅÏÒÎÐÀ Â ÀÂÒÎÊÎËÅÁÀÍÈßÕ

ÑÎÊÐÀÒÈÒÅËÜÍÎÉ ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÈ ÏËÀÇÌÎÄÈß PHYSARUM POLYCEPHALUM

Êëþåâà À. À., Ìàòâååâà Í. Á., Òåïëîâ Â. À., Áåéëèíà Ñ. È.Èíñòèòóò òåîðåòè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîôèçèêè ÐÀÍ

142290, Ïóùèíî, Ìîñêîâñêàÿ îáëàñòü

Èññëåäîâàíèÿ, ïðîâåäåííûå íà êëåòêàõ ðàçëè÷íûõîðãàíèçìîâ, ïîêàçàëè íàëè÷èå äâóõ òèïîâ âîçáóäè-ìûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ êàíàëîâ, âûñâîáîæäàþùèõ Ñà2+

èç âíóòðèêëåòî÷íûõ õðàíèëèù. Ïåðâûé àêòèâèðóåòñÿèíîçèòîë-1,3,5-òðèôîñôàòîì è ÿâëÿåòñÿ îñíîâíûìêàíàëîì, îñóùåñòâëÿþùèì âûñâîáîæäåíèå êàëüöèÿ


â îòâåò íà õèìè÷åñêèå ñòèìóëû, ðåöåïòèðóåìûå íàïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíå. Äðóãîé — ðèàíîäèíîâûéðåöåïòîð (RyR), áûë âïåðâûå îáíàðóæåí â ìûøöàõ,ãäå îí ôóíêöèîíèðóåò êàê ýëåìåíò ñèñòåìû ýëåêòðî-ìåõàíè÷åñêîãî ñîïðÿæåíèÿ. Ïîçäíåå êàíàëû ýòîãî òèïàáûëè îòêðûòû âî ìíîãèõ êëåòêàõ æèâîòíûõ è ðàñòå-íèé. Öåëüþ íàøèõ èññëåäîâàíèé áûëî âûÿñíåíèå íà-ëè÷èÿ è îïðåäåëåíèå ðîëè RyR â àâòîêîëåáàíèÿõ ñî-êðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè ïëàçìîäèÿ Physarumpolycephalum.

Physarum polycephalum, øòàìì LU 887xMA 362 âû-ðàùèâàëè â âèäå ñóñïåíçèè ìèêðîïëàçìîäèåâ — îê-ðóãëûõ ìíîãîÿäåðíûõ êëåòîê ðàçìåðàìè 100-200 ìêì.

Êîððåëèðóþùèå ñ èçìåíåíèÿìè âíóòðèêëåòî÷íîéêîíöåíòðàöèè Ñà2+ êîëåáàíèÿ òîëùèíû è ïóëüñèðóþ-ùåå ïåðåìåùåíèå êðàÿ ìèêðîïëàçìîäèÿ ðåãèñòðèðî-âàëè ïî èçìåíåíèþ èíòåíñèâíîñòè ïðîõîäÿùåãî ÷å-ðåç îáúåêò ôèçèîëîãè÷åñêè íåàêòèâíîãî êðàñíîãî ñâåòà.Ðåãèñòðèðóþùèé ýëåìåíò ìîíòèðîâàëñÿ íà îäíîì èçîêóëÿðîâ áèíîêóëÿðíîé ëóïû, ÷òî ïîçâîëÿëî îäíî-âðåìåííî ñ âûâîäîì íà ñàìîïèñåö êîëåáàíèé îñâå-ùåííîñòè â ðåãèñòðèðóåìîì ó÷àñòêå âèçóàëüíî îöå-íèâàòü ïîëå çðåíèÿ.

Ïîêàçàíî, ÷òî àêòèâàòîð RyR êîôåèí â êîíöåíò-ðàöèÿõ 10-30 ìÌ âûçûâàåò âðåìåííîå óâåëè÷åíèå ñêî-ðîñòè âîçâðàòíî-ïîñòóïàòåëüíîãî ïîòîêà ïðîòîïëàç-ìû è âîçðàñòàíèå ÷àñòîòû êîëåáàíèé ñîêðàòèòåëüíîéàêòèâíîñòè. ×àñòî çà ýòîé ðåàêöèåé ñëåäóåò âûõîä èç

êîëåáàòåëüíîãî ðåæèìà äëèòåëüíîñòüþ îò 10 äî 30 ìèí,ñîïðîâîæäàþùèéñÿ ñîêðàùåíèåì è îòêðåïëåíèåììèêðîïëàçìîäèåâ îò ïîäëîæêè. Âîçîáíîâèâøèåñÿ àâ-òîêîëåáàíèÿ èìåþò, êàê ïðàâèëî, áîëüøèé ïåðèîä,÷åì â êîíòðîëå. Â 50 ìÌ êîíöåíòðàöèè êîôåèí âûçû-âàåò áûñòðîå è íåîáðàòèìîå ïðåêðàùåíèå ñîêðàòè-òåëüíîé àêòèâíîñòè.

Èíãèáèòîð RyR ïðîêàèí â êîíöåíòðàöèè 50 ìÌ,äîáàâëåííûé çà 15-20 ìèí äî êîôåèíà èëè îäíîâðå-ìåííî ñ íèì, íå òîëüêî ïðåäîòâðàùàåò îñòàíîâêó êî-ëåáàíèé, âûçûâàåìóþ 50 ìÌ êîôåèíîì, íî è ïîëîñ-òüþ óñòðàíÿåò âñå îïèñàííûå âûøå ýôôåêòû. Ìîäóëÿ-òîð RyR ðèàíîäèí â êîíöåíòðàöèÿõ 50-100 ìêÌ, èí-ãèáèðóþùèõ ðåöåïòîð, òàêæå ïîëíîñòüþ èëè ÷àñòè÷íîóñòðàíÿåò ýôôåêòû êîôåèíà. Ñàìè ïî ñåáå îáà èíãèáè-òîðà íå ïîäàâëÿþò ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè, îäíà-êî, ïðèìåðíî â ïîëîâèíå ïîïóëÿöèè ìèêðîïëàçìîäè-åâ îíè âûçûâàþò èçìåíåíèÿ ðåæèìà àâòîêîëåáàíèé.

Ïðîâåäåííûå ýêñïåðèìåíòû ïîêàçàëè íàëè÷èå âïëàçìîäèè Physarum polycephalum âîçáóäèìûõ âíóòðè-êëåòî÷íûõ êàíàëîâ, ôàðìàêîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà êî-òîðûõ õàðàêòåðíû äëÿ RyR. Òàêèå êàíàëû íå ÿâëÿþòñÿîáÿçàòåëüíûì êîìïîíåíòîì àâòîêîëåáàòåëüíîé ñèñ-òåìû ïëàçìîäèÿ, îäíàêî, ïðè îïðåäåëåííûõ ôèçèî-ëîãè÷åñêèõ óñëîâèÿõ îíè ìîãóò áûòü âîâëå÷åíû â ðå-ãóëÿöèþ àâòîêîëåáàíèé.

Ðàáîòà ïîääåðæàíà Ðîññèéñêèì ôîíäîì ôóíäàìåíòàëüíûõ

èññëåäîâàíèé.

ÂÛÁÎÐ ÏÎËÎÂÎÃÎ ÈËÈ ÁÅÑÏÎËÎÃÎ ÏÓÒÈ ÐÀÇÂÈÒÈß Ó NEUROSPORA CRASSAÇÀÂÈÑÈÒ ÎÒ ÎÑÂÅÙÅÍÈß È ×ÓÂÑÒÂÈÒÅËÅÍ Ê ÈÍÃÈÁÈÒÎÐÓ ÄÍÊ-ÌÅÒÈËÈÐÎÂÀÍÈß

Êðèöêèé Ì. Ñ., Ôèëèïïîâè÷ Ñ. Þ.,

Àôàíàñüåâà Ò. Ï., Áà÷óðèíà Ã. Ï.,Ðóññî Â. Ý. À.*

Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ

119071, Ìîñêâà, Ëåíèíñêèé ïðîñïåêò, ä. 33

*Max-Planck-Institut fur molekulare Genetik

Ãåðìàíèÿ, Berlin D-14195, Ihnestrasse, 73

Èññëåäîâàëè èíòåíñèâíîñòü îáðàçîâàíèÿ ðåïðîäóê-òèâíûõ ñòðóêòóð íà ïîâåðõíîñòíî ðàñòóùåì ìèöåëèèNeurospora crassa ïîñëå èíäóêöèè ôîðìèðîâàíèÿ ýòèõñòðóêòóð ïåðåíîñîì ìèöåëèÿ ñ ïîëíîöåííîé ñðåäû(ìîäèôèöèðîâàííûé àãàð Ôîãåëÿ) íà ñðåäó, ëèøåí-íóþ èñòî÷íèêîâ àçîòà. Êðàòêîâðåìåííîå (2 ìèí.) îñ-âåùåíèå ìèöåëèÿ ñèíèì ñâåòîì (l 350-500 nm, 1 W×m-

2) ïîäàâëÿëî ñïîðîíîøåíèå áåñïîëîãî òèïà (êîíèäè-îãåíåç) è ïðèâîäèëî ê óâåëè÷åíèþ êîëè÷åñòâà îáðà-çîâàâøèõñÿ æåíñêèõ ïîëîâûõ ñòðóêòóð — ïðîòîïåðè-òåöèåâ. Îáðàáîòêà èíãèáèòîðîì ÄÍÊ-ìåòèëèðîâàíèÿ5-àçàöèòèäèíîì (êîíöåíòðàöèÿ â ñðåäå â äèàïàçîíåîò 3 äî 300 mM) âûçûâàëà ýôôåêò ïðîòèâîïîëîæíûéäåéñòâèþ ñâåòà, ò. å. òîðìîçèëà îáðàçîâàíèå ïðîòîïå-ðèòåöèåâ è ñòèìóëèðîâàëà êîíèäèîãåíåç. Èçìåíåíèåêîëè÷åñòâà ðåïðîäóêòèâíûõ ñòðóêòóð ïîä âëèÿíèåìîñâåùåíèÿ è äåéñòâèÿ èíãèáèòîðà ïðîÿâëÿëîñü î÷åíüñèëüíî. Òàê, â ïðèñóòñòâèè 300 mM 5-àçàöèòèäèíàêîëè÷åñòâî ïðîòîïåðèòåöèåâ, îáðàçîâàâøèõñÿ â òåì-íîòå, ñíèæàëîñü íà äâà ïîðÿäêà âåëè÷èí, à êîíèäèî-

ãåíåç â îïûòàõ ñî ñâåòîâîé ýêñïîçèöèåé èíòåíñèôè-öèðîâàëñÿ ïî÷òè íà òðè ïîðÿäêà ïî ñðàâíåíèþ ñ ìè-öåëèåì, íå îáðàáîòàííûì èíãèáèòîðîì. Êàê â òåìíî-âîì, òàê è â ïîäâåðãíóòîì îñâåùåíèþ ìèöåëèè, êî-ëè÷åñòâî êîíèäèé è ïðîòîïåðèòåöèåâ îáðàçîâàâøèõ-ñÿ ïîñëå âîçäåéñòâèÿ ðàçíûõ êîíöåíòðàöèé 5-àçàöè-òèäèíà áûëî ñâÿçàíî îáðàòíîé ëîãàðèôìè÷åñêîé çà-âèñèìîñòüþ. Ïîëó÷åííûå ðåçóëüòàòû äàþò îñíîâàíèåïîëàãàòü, ÷òî âûáîð ãðèáíûì îðãàíèçìîì ðàçâèòèÿïî ïîëîâîìó èëè áåñïîëîìó öèêëó áûë ñâÿçàí ñ ôóí-êöèîíèðîâàíèåì ñâåòîçàâèñèìîãî ÄÍÊ-ìåòèëèðîâà-íèÿ. Ïîñêîëüêó â âåãåòàòèâíîì ìèöåëèè 5-àçàöèòè-äèí ëèøü â ñëàáîé ìåðå (äî 30 %) ñòèìóëèðîâàë ôî-òîêàðîòèíîãåíåç, íàõîäÿùèéñÿ ïîä êîíòðîëåì òîãî æåôîòîðåöåïòîðíîãî áåëêà (WC-1), ÷òî è ôîòîñòèìóëè-ðóåìîå îáðàçîâàíèå ïðîòîïåðèòåöèåâ, ìîæíî äóìàòü,÷òî â âåãåòàòèâíîì ìèöåëèè è ïðè îáðàçîâàíèè ðåï-ðîäóêòèâíûõ ñòðóêòóð ôóíêöèîíèðóþò ðàçíûå ôåð-ìåíòíûå ñèñòåìû ÄÍÊ-ìåòèëèðîâàíèÿ.



Êëåòî÷íàÿ ñòåíêà (ÊÑ) äðîææåé ó÷àñòâóåò â ïîä-äåðæàíèè ôîðìû êëåòêè, çàùèòå åå îò ïîâðåæäåíèéè îñìîòè÷åñêîãî øîêà, à òàêæå, ó ïàòîãåííûõ äðîæ-æåé, ó÷àñòâóåò âî âçàèìîäåéñòâèå ìèêðîîðãàíèçìà ñõîçÿèíîì. Ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî ìîëåêóëÿðíàÿ ñòðóêòóðà ÊÑàñêîìèöåòíûõ äðîææåé âåñüìà êîíñåðâàòèâíà. Â òî æåâðåìÿ ìîëåêóëÿðíàÿ ñòðóêòóðà ÊÑ, ïî âñåé âåðîÿò-íîñòè, èíäèâèäóàëüíà äëÿ äðîææåé ðàçëè÷íûõ ðîäîâè âèäîâ. Ðàçëè÷èÿ â ñòðóêòóðíîé ðîëè áåëêîâ è ïîëè-ñàõàðèäîâ â ìîëåêóëÿðíîì àíñàìáëå ÊÑ äðîææåé —îäèí èç ìàëîèññëåäîâàííûõ àñïåêòîâ óêàçàííîé èí-äèâèäóàëüíîñòè.

Â äàííîé ðàáîòå áûë ïðîâåäåí ñðàâíèòåëüíûé àíà-

Î ÐÀÇËÈ×ÈßÕ Â ÌÎËÅÊÓËßÐÍÎÉ ÎÐÃÀÍÈÇÀÖÈÈ ÊËÅÒÎ×ÍÛÕ ÑÒÅÍÎÊÄÐÎÆÆÅÉ CANDIDA UTILIS È SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Ëàóðèíàâè÷þòå Ä. Ê., Àëåêñååâà Î .Â., Ìîðåíêîâ Î. Ñ.*, Êàëåáèíà Ò. Ñ.

Ìîñêîâñêèé Ãîñóäàðñòâåííûé Óíèâåðñèòåò èì. Ì.Â.Ëîìîíîñîâà,êàôåäðà ìîëåêóëÿðíîé áèîëîãèè, Áèîëîãè÷åñêèé Ôàêóëüòåò,

119899, Ìîñêâà, Âîðîáüåâû Ãîðû

*Èíñòèòóò Áèîôèçèêè Êëåòêè ÐÀÍ

142290, Ïóùèíî

ëèç ÊÑ äðîææåé Candida utilis è S.cerevisiae. Âûäåëåíûè îõàðàêòåðèçîâàíû áåëêè ãëþêàíòðàíñôåðàçà Bgl2pè èíâåðòàçà ÊÑ äðîææåé C.utilis. Ñ ïîìîùüþ àíòèòåëïîêàçàíî, ÷òî áåëîê Bgl2p èç ÊÑ äðîææåé C.utilis ãî-ìîëîãè÷åí îõàðàêòåðèçîâàííîìó ðàíåå áåëêó ÊÑ äðîæ-æåé S.cerevisiae, â òî âðåìÿ êàê èíâåðòàçà â ÊÑ äðîæ-æåé S.cerevisiae íå îáíàðóæèâàåòñÿ. Áèîõèìè÷åñêèé, àòàêæå ýëåêòðîííîìèêðîñêîïè÷åñêèé àíàëèçû ïîêàçà-ëè, ÷òî â ôîðìèðîâàíèè è ôóíêöèîíèðîâàíèè ÊÑC.utilis ìàííîïðîòåèíû ìîãóò áûòü áîëåå âàæíû, ÷åìâ ÊÑ S.cerevisiae.

Ðàáîòà ïîääåðæàíà ãðàíòàìè ÐÔÔÈ ¹ 00-04-48356, 01-

04-06571 è 00-15-97851.

×ÓÂÑÒÂÈÒÅËÜÍÎÑÒÜ ÃÐÈÁÀ PENICILLIUM FUNICULOSUM (THOM)Ê ÍÈÊÅËÞ È ÖÈÍÊÓ ÍÀ ÐÀÇËÈ×ÍÛÕ ÑÒÀÄÈßÕ ÅÃÎ ÐÀÇÂÈÒÈß

Ëåâèíñêàéòå Ë.Èíñòèòóò áîòàíèêè

Ëèòâà, Âèëüíþñ, 2021, Æàëþþ ýæÿðó óë., ä. 4

Ãðèáû ðîäà Penicillium Link ðàñïðîñòðàíåíû â ïî-÷âå è àêòèâíî ó÷àñòâóþò â ìèêðîáèîëîãè÷åñêèõ ïðî-öåññàõ. Çàãðÿçíåíèå ñðåäû òÿæåëûìè ìåòàëëàìè íåãà-òèâíî âëèÿåò íà âèäîâîå ðàçíîîáðàçèå ãðèáîâ è èõôóíêöèîíèðîâàíèå. ×óâñòâèòåëüíîñòü ãðèáîâ ê ðàçíûìòîêñè÷åñêèì âåùåñòâàì ðàçëè÷íà íå òîëüêî ìåæäóðàçíûìè èíäèâèäàìè, íî çàâèñèò è îò ñòàäèè èíäè-âèäóàëüíîãî ðàçâèòèÿ îðãàíèçìà.

Öåëüþ ðàáîòû ÿâëÿëîñü îïðåäåëåíèå âëèÿíèÿ äâóõäâóõâàëåíòíûõ ìåòàëëîâ (íèêåëÿ è öèíêà) íà îíòîãå-íåç ãðèáà Penicillium funiculosum 6AL Thom, êîòîðûéáûë îòîáðàí êàê îäèí èç ìèêðîìèöåòîâ íàèáîëåå óñ-òîé÷èâûõ ê äàííûì ìåòàëëàì. Èçó÷åíî âëèÿíèå ìå-òàëëîâ íà ñëåäóþùèå ñòàäèè ðàçâèòèÿ ãðèáà: ïðîðàñ-òàíèå ñïîð, ðàçâèòèå çà÷àòêîâ ãèô, ðîñò êîëîíèé èñïîðóëÿöèþ. Ïðèìåíÿëè 0,2 — 5 ìÌ êîíöåíòðàöèèíèêåëÿ (NiCl

2×6 H

2O) è 0,2 — 40 ìÌ öèíêà (ZnCl

2).

Â ðåçóëüòàòå ïðîâåäåííûõ èññëåäîâàíèé óñòàíîâ-ëåíî, ÷òî óæå ïðè êîíöåíòðàöèè 0,5 mM íèêåëÿ âæèäêîé ñðåäå ×àïåêà ïðîÿâèëîñü íåçíà÷èòåëüíîå èí-ãèáèðîâàíèå ïðîðàñòàíèÿ ñïîð ãðèáà P. funiculosum 6AL.Ðåçêîå ñíèæåíèå èíäåêñà ïðîðàñòàíèÿ êîíèäèé îò-ìå÷åíî ïðè íàëè÷èè 1 ìÌ íèêåëÿ — ïðîðîñëî òîëüêî30% êîíèäèé ïî ñðàâíåíèþ ñ êîíòðîëåì. Çíà÷èòåëü-íî ìåíüøåå âëèÿíèå íà ïðîðàñòàíèå ñïîð îêàçàë öèíê.Óâåëè÷åíèå êîíöåíòðàöèè öèíêà äî 5 ìÌ ïðîÿâèëîñüâ ñòèìóëèðîâàíèè ïðîðàñòàíèÿ ñïîð. Òîëüêî ïðè áî-ëåå âûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ óñòàíîâëåíî íåãàòèâíîåâëèÿíèå öèíêà íà ïðîðàñòàíèè ñïîð. Ðîñò çà÷àòêîâ

ãèô ïîä âëèÿíèåì 0,2, 2, è 5 ìÌ íèêåëÿ ñíèçèëñÿñîîòâåòñòâåííî äî 77,4, 48,4 è 8,3% ïî ñðàâíåíèþ ñêîíòðîëåì. Öèíê ïðè 0,2 — 1 ìÌ êîíöåíòðàöèè ñòè-ìóëèðîâàë ðàçâèòèå çà÷àòêîâ, òîãäà êàê ïðè áîëååâûñîêèõ êîíöåíòðàöèÿõ óñòàíîâëåíî òîðìîæåíèå ðàç-âèòèÿ çà÷àòêîâ. Îïðåäåëåíèå ñêîðîñòè ðîñòà êîëîíèéãðèáà ïîêàçàëî, ÷òî 2 è 5 ìÌ íèêåëÿ çíà÷èòåëüíîñíèçèëè ðàäèàëüíûé ðîñò ãðèáà — äî 142 è 35 ìêì ×÷-1 (68,3 è 16,3%). Öèíê äî 2 ìÌ ñòèìóëèðîâàë ðîñòêîëîíèé, à íàèáîëåå âûðàæåííîå ïîäàâëåíèå ñêîðî-ñòè ðàäèàëüíîãî ðîñòà äî 61 ìêì × ÷-1 (27,4%) óñòà-íîâëåíî ïðè íàëè÷èè 40 ìÌ öèíêà. Èññëåäîâàíèåñïåöèôè÷íîñòè êîíèäèîãåíåçà ïîêàçàëî, ÷òî â áîëü-øèíñòâå ñëó÷àåâ ïîä âëèÿíèåì ìåòàëëîâ â âîçðàñòàþ-ùèõ êîíöåíòðàöèÿõ ïðîÿâèëîñü çàìåäëåíèå ôîðìèðî-âàíèÿ êîíèäèé, ñïîðóëÿöèÿ áûëà ñêóäíîé, îòìå÷à-ëèñü ðåäóöèðîâàííûå êîíèäèîíîñöû è êîðîòêèå öå-ïî÷êè êîíèäèé.

Ðåçóëüòàòû ïîêàçàëè, ÷òî èññëåäîâàííûå ìåòàëëûâëèÿëè íà âñå ñòàäèè ðàçâèòèÿ P. funiculosum 6AL. Íå-ãàòèâíîå âëèÿíèå öèíêà áûëî çíà÷èòåëüíî ìåíüøå,÷åì íèêåëÿ. Íàèáîëüøàÿ ÷óâñòâèòåëüíîñòü ãðèáà êìåòàëëàì óñòàíîâëåíà â ôàçå ðàçâèòèÿ çà÷àòêîâ ãèô.Çíà÷èòåëüíî ìåíüøåå âëèÿíèå ìåòàëëîâ îòìå÷åíî ïðèïðîðàñòàíèè êîíèäèé. Ïðîðàñòàíèå ñïîð, ïî-âèäèìî-ìó, â áîëüøîé ñòåïåíè çàâèñèëî îò ýíäîãåííûõ ðå-çåðâîâ è áûëè ìåíüøå ïîäâåðæåíû ê ýêçîãåííûìñòðåññ-ôàêòîðàì. Ðîñò áîëåå çðåëûõ ãèô òàêæå ìåíü-øå óãíåòàëñÿ, ÷åì ðàçâèòèå çà÷àòêîâ.


ÏÎÄÀÂËÅÍÈÅ ÀÂÒÎÊÎËÅÁÀÍÈÉ ÑÎÊÐÀÒÈÒÅËÜÍÎÉ ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÈÏËÀÇÌÎÄÈß PHYSARUM POLYCEPHALUM ÈÍÃÈÁÈÒÎÐÀÌÈ ÔÎÑÔÎËÈÏÀÇÛ Ñ

Ìàòâååâà Í. Á., Òåïëîâ Â. À., Áåéëèíà Ñ. È.

Èíñòèòóò òåîðåòè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîôèçèêè ÐÀÍ,


Àâòîêîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè â ïëàç-ìîäèè Physarum polycephalum ìîãóò ïîääåðæèâàòüñÿ êàêâ áåñêàëüöèåâûõ ñðåäàõ, òàê è â ïðèñóòñòâèè èíãèáè-òîðîâ ðèàíîäèíîâîãî ðåöåïòîðà — îäíîãî èç äâóõ âîç-áóäèìûõ âíóòðèêëåòî÷íûõ Ñà2+ êàíàëîâ. Ýòî ïîçâîëÿ-åò ïðåäïîëàãàòü íàëè÷èå â ïëàçìîäèè äðóãîãî êàíàëà,íàèáîëåå âåðîÿòíûì êàíäèäàòîì íà ðîëü êîòîðîãîÿâëÿåòñÿ êàíàë, àêòèâèðóåìûé èíîçèòîë-1,4,5-òðèôîñ-ôàòîì (IP

3 -ðåöåïòîð). Âûñâîáîæäåíèå Ñà2+ èç âíóò-

ðèêëåòî÷íûõ äåïî ÷åðåç IP3 -ðåöåïòîð ñâÿçàíî ñ àê-

òèâíîñòüþ ôîñôîëèïàçû C (PLC) — ôåðìåíòà, ãèä-ðîëèçóþùåãî ôîñôàòèäèëèíîçèòîë-4,5-äèôîñôàò(PIP

2) äî IP

3.

Â íàñòîÿùåé ðàáîòå èññëåäîâàëàñü âîçìîæíîñòüâîâëå÷åíèÿ â öåïè îáðàòíûõ ñâÿçåé, îòâåòñòâåííûõ çààâòîêîëåáàíèÿ, ðåãóëÿòîðíîãî ïóòè, ïðèâîäÿùåãî êàêòèâàöèè IP

3 -ðåöåïòîðà. Ñ ýòîé öåëüþ áûë âûÿñíåí

õàðàêòåð äåéñòâèÿ íà ñîêðàòèòåëüíóþ àêòèâíîñòü ìèê-ðîïëàçìîäèåâ äâóõ èíãèáèòîðîâ PLC, èìåþùèõ ðàç-íûé ìåõàíèçì ïîäàâëåíèÿ àêòèâíîñòè ôåðìåíòà. Èñ-ïîëüçîâàíû ìèêðîïëàçìîäèè øòàììà LU 887xMA 362,ðåãèñòðàöèÿ àâòîêîëåáàíèé ïðîâîäèëàñü îïòè÷åñêèììåòîäîì.

Ïîêàçàíî, ÷òî íåîìèöèí — ïîëîæèòåëüíî çàðÿ-æåííûé àìèíîãëèêîçèä, ôîðìèðóþùèé ñ PIP

2 ýëåêò-

ðîíåéòðàëüíûé êîìïëåêñ è òàêèì îáðàçîì áëîêèðóþ-

ùèé åãî ñâÿçûâàíèå ñ PLC, ïîñòåïåííî ïîäàâëÿåò

àâòîêîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè ìèêðîïëàç-ìîäèåâ. Êîëåáàíèÿ ñòàíîâÿòñÿ íåðåãóëÿðíûìè, èõ àì-ïëèòóäà ñíèæàåòñÿ è, ñ òå÷åíèåì âðåìåíè, ýòè èçìå-íåíèÿ çàõâàòûâàþò âñå áîëüøóþ ÷àñòü êëåòî÷íîé ïî-ïóëÿöèè. Çà ïåðâûå 90 ìèí ïîñëå äîáàâëåíèÿ èíãèáè-òîðà â êîíöåíòðàöèè 0,1 ìÌ êîëåáàíèÿ ïðåêðàùàþò-ñÿ â 67 % ìèêðîïëàçìîäèåâ (n = 27), â êîíöåíòðàöèè

1 ìÌ — â 82 % (n = 11). Ïîñêîëüêó âðåìÿ çàòóõàíèÿêîëåáàíèé íà ðàçíûõ ìèêðîïëàçìîäèÿõ âàðüèðóåò îò 5ìèí äî 2 ÷àñîâ, èõ ïîäàâëåíèå, ïî-âèäèìîìó, çàâè-ñèò íå òîëüêî îò êîíöåíòðàöèè íåîìèöèíà, íî îò âíóò-ðèêëåòî÷íîãî ñîäåðæàíèÿ PIP

2. Ñëåäóåò îòìåòèòü, ÷òî

ïîïóëÿöèÿ ìèêðîïëàçìîäèåâ ñëó÷àéíûì îáðàçîì ðàñ-ïðåäåëåíà ïî ôàçàì êëåòî÷íîãî öèêëà, â õîäå êîòîðî-ãî ñîäåðæàíèå PIP

2 èçìåíÿåòñÿ â íåñêîëüêî ðàç.

Äðóãîé èíãèáèòîð PLC — àìèíîñòåðîèä 1-(6-

((17beta-3-methoxyestra-1,3,5(10)-trien-17yl)amino)-hexyl)-1H-pyrrole-2,5,-dione (U-73122), ÿâëÿþùèéñÿìîùíûì ñóëüôãèäðèëüíûì ðåàãåíòîì, âûçûâàë çíà-÷èòåëüíî áîëåå áûñòðîå ïîäàâëåíèå êîëåáàíèé, ÷åìíåîìèöèí. Ìåæäó 30 è 60 ìèí ïîñëå äîáàâêè U-73122â êîíöåíòðàöèè 1-2 µÌ êîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîéàêòèâíîñòè ïîëíîñòüþ ïðåêðàùàëèñü íà 30% èññëå-äîâàííûõ êëåòîê (n =23), ïðè 5 µÌ — íà 46% (n =13), à ïðè 10 µÌ — íà 95% ìèêðîïëàçìîäèåâ (n = 19).Â ñîîòâåòñòâèè ñ ìåõàíèçìîì èíãèáèðîâàíèÿ PLCäåéñòâèå U-73122 íà ñîêðàòèòåëüíóþ àêòèâíîñòü óñò-ðàíÿëîñü ïðè ïðåäâàðèòåëüíîé äîáàâêå äèòèîòðåéòî-ëà — àãåíòà, âîññòàíàâëèâàþùåãî òèîëîâûå ãðóïïû.Ïîñëå óäàëåíèÿ U-73122 àâòîêîëåáàíèÿ âîçîáíîâëÿ-ëèñü, ÷òî ïîçâîëÿåò èñêëþ÷èòü âîçìîæíîñòü åãî âîç-äåéñòâèÿ íà íåñïåöèôè÷åñêèå ìèøåíè, âàæíûå äëÿæèçíåäåÿòåëüíîñòè ïëàçìîäèÿ.

Ïîëó÷åííûå äàííûå ïîçâîëÿåò ïðåäïîëàãàòü, ÷òîðåãóëÿòîðíûé ïóòü, âêëþ÷àþùèé ãèäðîëèç PIP

2 äî IP

3,

àêòèâàöèþ IP3 ðåöåïòîðà è âûñâîáîæäåíèå

Ñà2+ èç ñî-

îòâåòñòâóþùåãî ïóëà âõîäèò â öåïè îáðàòíûõ ñâÿçåé,îáåñïå÷èâàþùèõ àâòîêîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé àê-òèâíîñòè ïëàçìîäèÿ.

Ðàáîòà ïîääåðæàíà Ðîññèéñêèì ôîíäîì ôóíäàìåíòàëüíûõ

èññëåäîâàíèé.

ÈÇÓ×ÅÍÈÅ ÔÓÍÊÖÈÎÍÀËÜÍÎÉ ÂÇÀÈÌÎÑÂßÇÈ ÑÅÊÐÅÖÈÈ ÝÊÇÎÔÅÐÌÅÍÒÎÂÈ ÏÎ×ÊÎÎÁÐÀÇÎÂÀÍÈß Ó ÄÐÎÆÆÅÉ SACCHAROMYCES CEREVISIAE

Ìèðþùåíêî Ô. Ë., Áëèííèêîâà Å. È., Åãîðîâ Ñ. Í.Ìîñêîâñêèé ãîñóäàðñòâåííûé óíèâåðñèòåò èìåíè Ì. Â. Ëîìîíîñîâà

119899, Ìîñêâà, Âîðîáü¸âû ãîðû, ÌÃÓ, áèîëîãè÷åñêèé ôàêóëüòåò

Ïî÷êóþùèåñÿ äðîææè Saccharomyces cerevisiae ñèí-òåçèðóþò äâà òèïà âíåêëåòî÷íûõ êèñëûõ ôîñôàòàç —òàê íàçûâàåìóþ êîíñòèòóòèâíóþ, êîäèðóåìóþ îäíèìñòðóêòóðíûì ãåíîì Pho 3, è ðåïðåññèáåëüíóþ, êîäè-ðóåìóþ òðåìÿ ñòðóêòóðíûìè ãåíàìè — Pho 5, Pho 10 èPho 11. Ýêñïðåññèÿ PHO3 ãåíà îñóùåñòâëÿåòñÿ ïðèâûñîêîé êîíöåíòðàöèè íåîðãàíè÷åñêîãî ôîñôàòà âñðåäå, â òî âðåìÿ êàê ýêñïðåññèÿ ãåíîâ ðåïðåññèáåëü-íîé êèñëîé ôîñôàòàçû ïðîèñõîäèò òîëüêî ïðè ôîñ-ôàòíîì ãîëîäàíèè. Ðàíåå áûëî ïîêàçàíî, ÷òî ñóùå-ñòâóåò âûñîêàÿ ñòåïåíü êîððåëÿöèè (ñðàâíèâàëèñü

óäåëüíàÿ ôîñôàòàçíàÿ àêòèâíîñòü è äîëÿ ïî÷êóþùèõ-ñÿ êëåòîê) ìåæäó ïî÷êîîáðàçîâàíèåì è ñåêðåöèåéêîíñòèòóòèâíîé êèñëîé ôîñôàòàçû. Âìåñòå ñ òåì êîð-ðåëÿöèè ìåæäó ïî÷êîîáðàçîâàíèåì è ñåêðåöèåé ðåï-ðåññèáåëüíîé êèñëîé ôîñôàòàçû íå íàáëþäàëîñü, ÷òîóêàçûâàåò íà âîçìîæíîñòü òðàíñïîðòà íàòèâíîãî ôåð-ìåíòà íå â ïî÷êó (êîíñòèòóòèâíûé ïóòü ñåêðåöèè), àê êëåòî÷íîé ïîâåðõíîñòè ïî àëüòåðíàòèâíîìó ïóòè.

Îòäåëüíûå ñòðóêòóðíûå ãåíû ðåïðåññèáåëüíîéêèñëîé ôîñôàòàçû áûëè êëîíèðîâàíû è îñóùåñòâëå-íà èõ ýêñïðåññèÿ â êëåòêàõ äðîææåé. Äëÿ âûÿñíåíèÿ


ðîëè îòäåëüíûõ ñóáúåäèíèö ôåðìåíòà â âûáîðå èìòðàíñïîðòíîãî ïóòè áûëà èçó÷åíà âçàèìîñâÿçü ñåêðå-öèè ïîëó÷åííûõ ãîìîìåðíûõ ôîðì êèñëûõ ôîñôàòàçñ ïðîöåññîì ïî÷êîîáðàçîâàíèÿ äðîææåé.

Íàìè áûë ðàçðàáîòàí ìåòîä àíàëèçà êîððåëÿòèâ-íîé çàâèñèìîñòè ýòèõ ïðîöåññîâ, ïîçâîëÿþùèé ïî-ëó÷àòü ñòàòèñòè÷åñêè äîñòîâåðíûå äàííûå, äàæå â ñëó-÷àå îòíîñèòåëüíî íèçêèõ óäåëüíûõ àêòèâíîñòåé êèñ-ëûõ ôîñôàòàç, îñíîâàííûé íà ñðàâíåíèè àáñîëþòíî-ãî ÷èñëà ïî÷åê â äðîææåâîé êóëüòóðå è ïðèðîñòà ýí-çèìàòè÷åñêîé àêòèâíîñòè.

Áûëè ïîëó÷åíû ðåçóëüòàòû, óêàçûâàþùèå íà ðàç-ëè÷íûå ïóòè òðàíñïîðòà ãîìîìåðíûõ ôîðì êèñëûõôîñôàòàç ê êëåòî÷íîé ïîâåðõíîñòè. Ñåêðåöèÿ ãîìî-ìåðíîé ôîðìû êèñëîé ôîñôàòàçû, îáðàçîâàííîé ïðî-

äóêòîì ãåíà Pho 5, èìåëà âûñîêóþ ïîëîæèòåëüíóþêîððåëÿöèþ ñ ïðîöåññîì ïî÷êîîáðàçîâàíèÿ, ÷òî îç-íà÷àåò òðàíñïîðò òàêîãî ôåðìåíòà ïî êîíñòèòóòèâíî-ìó ïóòè ñåêðåöèè â ðàñòóùóþ ïî÷êó. Âìåñòå ñ òåì,ñåêðåöèÿ ïðîäóêòîâ ãåíîâ Pho10 è Pho11 ïðàêòè÷åñêèíå áûëà ñâÿçàíà ñ ïðîöåññîì ïî÷êîîáðàçîâàíèÿ â êëåò-êàõ äðîææåé, ÷òî ïðåäïîëàãàåò èõ òðàíñïîðò ê êëå-òî÷íîé ïîâåðõíîñòè ïóòåì, îòëè÷íûì îò êîíñòèòó-òèâíîãî.

Ìû ïðåäïîëàãàåì, ÷òî ïðîäóêò ãåíà Pho10 îòâå÷à-åò çà âûáîð àëüòåðíàòèâíîãî òðàíñïîðòíîãî ïóòè ðåï-ðåññèáåëüíîé êèñëîé ôîñôàòàçîé. Ïðîäóêò ãåíà Pho

11 âåðîÿòíî óñèëèâàåò ôóíêöèþ ñîðòèíãà íàòèâíîãîôåðìåíòà, îñóùåñòâëÿåìóþ ñóáúåäèíèöåé, êîäèðóå-ìîé ãåíîì Pho 10.

ÄÈÌÎÐÔÈÇÌ È ÑÎÑÒÀÂ ËÈÏÈÄÎÂ ÌÓÊÎÐÎÂÛÕ ÃÐÈÁÎÂ

Ìûñÿêèíà È. Ñ., Ôóíòèêîâà Í. Ñ.

Èíñòèòóò ìèêðîáèîëîãèè ÐÀÍÌîñêâà, ïðîñï. 60-ëåòèÿ Îêòÿáðÿ, ä. 7, êîð. 2

Ñïîñîáíîñòü ê äèìîðôèçìó ñâîéñòâåííà ìíîãèìïðåäñòàâèòåëÿì ðîäà Mucor, íî åñòü âèäû, â ÷èñëîêîòîðûõ âõîäèò M. hiemalis, ó êîòîðûõ òàêîé ñïîñîá-íîñòè îòìå÷åíî íå áûëî. Ðàíåå íàì óäàëîñü âûçâàòüäèìîðôíûé ðîñò ó äâóõ øòàììîâ M. hiemalis ïðè âû-ðàùèâàíèè â æèäêîé ñðåäå ñ 4-õëîðàíèëèíîì è îá-íàðóæèòü ðàçëè÷èÿ â ñîñòàâå ëèïèäîâ äðîææåïîäîá-íûõ è ìèöåëèàëüíûõ êëåòîê. Äàëüíåéøèå èññëåäîâà-íèÿ ïîêàçàëè, ÷òî M. hiemalis ñïîñîáåí â æèäêîé ñðå-äå áåç 4-õëîðàíèëèíà èíòåíñèâíî îáðàçîâûâàòü àðò-ðîñïîðû, êîòîðûå äàâàëè íà÷àëî äðîææåïîäîáíûìêëåòêàì, êîãäà â êà÷åñòâå èíîêóëÿòà èñïîëüçîâàëèñïîðàíãèîñïîðû êóëüòóðû, âûðàùåííîé â òå÷åíèåäëèòåëüíîãî âðåìåíè íà ïøåíè÷íûõ îòðóáÿõ. Ýòî ñâè-äåòåëüñòâóåò î òîì, ÷òî äëÿ íåêîòîðûõ ãðèáîâ ðîäàMucor, ïî ëèòåðàòóðíûì äàííûì ñ÷èòàþùèõñÿ ìîíî-ìîðôíûìè, åùå íå îïðåäåëåíû óñëîâèÿ, â êîòîðûõâîçìîæåí äèìîðôíûé ðîñò.

Èññëåäîâàíèå ñîñòàâà êëàññîâ ëèïèäîâ è æèðíûõêèñëîò àðòðîñïîð, äðîææåïîäîáíûõ è ãèôàëüíûõ êëå-òîê ïîêàçàëî, ÷òî îáùèå ëèïèäû ðàçíûõ òèïîâ êëå-òîê èìåëè îäèíàêîâûé êà÷åñòâåííûé ñîñòàâ, îäíàêîðàçëè÷àëèñü ïî êîëè÷åñòâåííîìó ñîäåðæàíèþ îòäåëü-íûõ ôðàêöèé è æèðíûõ êèñëîò.

Ïðåîáëàäàþùèìè æèðíûìè êèñëîòàìè áûëè ïàëü-ìèòèíîâàÿ, ïàëüìèòîëåèíîâàÿ, ñòåàðèíîâàÿ, îëåèíî-âàÿ, ëèíîëåâàÿ è ã-ëèíîëåíîâàÿ. Ëèïèäû àðòðîñïîðïî ñîñòàâó æèðíûõ êèñëîò íà 3-4 ñóò ðîñòà áûëè ïî-õîæè íà ëèïèäû ìèöåëèÿ, íî íà áîëåå ïîçäíåì ýòàïå(9ñóò) ñîäåðæàíèå íàñûùåííûõ è ìîíîåíîâûõ êèñ-ëîò áûëî âûøå, à ïîëèíåíàñûùåííûõ — íèæå. Ëèïè-äû äðîææåïîäîáíûõ ïî÷êóþùèõñÿ êëåòîê â òå÷åíèåâñåãî ïåðèîäà êóëüòèâèðîâàíèÿ èìåëè áîëåå âûñîêèéóðîâåíü íàñûùåííûõ æèðíûõ êèñëîò è áîëåå íèçêèé— íåíàñûùåííûõ ïî ñðàâíåíèþ ñ ëèïèäàìè ìèöåëèÿ.

Ëèïèäû àðòðîñïîð ïî ñðàâíåíèþ ñ ïî÷êóþùèìèñÿêëåòêàìè ñîäåðæàëè ìåíüøå íàñûùåííûõ è áîëüøåìîíîíåíàñûùåííûõ êèñëîò ïðè îäèíàêîâîì ñîäåðæà-íèè ïîëèåíîâûõ.

Â ñîñòàâå êëàññîâ íåéòðàëüíûõ ëèïèäîâ M. hiemalis

îáíàðóæåíû äèàöèëãëèöåðèíû (ÄÀÃ), ñâîáîäíûå äåñ-ìåòèë- è ìåòèëñòåðèíû, ñâîáîäíûå æèðíûå êèñëîòû(ÑÆÊ), õèíîíû, òðèàöèëãëèöåðèíû (ÒÀÃ) è ýôèðûñòåðèíîâ (ÝÑ). Ïîêàçàíû ðàçëè÷èÿ ìåæäó àðòðîñïî-ðàìè è ïî÷êóþùèìèñÿ êëåòêàìè â ñîäåðæàíèè ÒÀÃ(52% è 30% ñîîòâåòñòâåííî), ýôèðîâ ñòåðèíîâ (18% è7%) è ÄÀÃ (4,6% è 12%) Àðòðîñïîðû îòëè÷àëèñü îòìèöåëèÿ áîëåå âûñîêèì óðîâíåì ÝÑ è ìåòèëèðîâàí-íûõ ñòåðèíîâ.

Â ñîñòàâå ïîëÿðíûõ ëèïèäîâ M. hiemalis îáíàðóæå-íû ôîñôàòèäèëõîëèí (ÔÕ), ôîñôàòèäèëýòàíîëàìèí(ÔÝÀ), êàðäèîëèïèí (ÊË), ãëèêîëèïèäû (ÃË), ôîñ-ôàòèäèëñåðèí (ÔÑ), ôîñôàòèäíàÿ êèñëîòà (ÔÊ). Ïî-ëÿðíûå ëèïèäû àðòðîñïîð è ïî÷êóþùèõñÿ êëåòîêèìåëè áîëåå íèçêîå îòíîñèòåëüíîå ñîäåðæàíèå ÔÑ èáîëåå âûñîêîå — ÊË ïî ñðàâíåíèþ ñ ìèöåëèåì. Â ïî-ëÿðíîé ôðàêöèè ëèïèäîâ àðòðîñïîð ïðåîáëàäàë ÔÕ— äî 41%, ÊË íå ïðåâûøàë 8%, òîãäà êàê â äðîææå-ïîäîáíûõ ïî÷êóþùèõñÿ êëåòêàõ óðîâåíü ÔÕ áûë ìå-íåå 23%, à ÊË –14%.

Íà îñíîâàíèè ïîëó÷åííûõ äàííûõ ìîæíî ñäåëàòüâûâîäû, ÷òî, âî-ïåðâûõ, â îïðåäåëåííûõ óñëîâèÿõ ïîìåíüøåé ìåðå îòäåëüíûå øòàììû M. hiemalis ñïîñîá-íû ê äðîææåïîäîáíîìó ðîñòó; âî-âòîðûõ, ëèïèäûàðòðîñïîð îòëè÷àþòñÿ îò ëèïèäîâ êàê ìèöåëèàëüíûõ,òàê è ïî÷êóþùèõñÿ êëåòîê. Ýòî ïîäòâåðæäàåò, ÷òî àð-òðîñïîðû ôèçèîëîãè÷åñêè è ôóíêöèîíàëüíî îòëè÷-íû îò ïî÷êóþùèõñÿ äðîææåïîäîáíûõ êëåòîê è ÿâëÿ-þòñÿ îòäåëüíîé ñòàäèåé â ìîðôîãåíåçå ãðèáà.


ÐÅÏÀÐÈÐÓÞÙÀß ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÜ ÍÓÊËÅÎÏÐÎÒÅÈÍÎÂÛÕ ÊÎÌÏËÅÊÑÎÂ,ÂÛÄÅËÅÍÍÛÕ ÈÇ ÄÐÎÆÆÅÉ

Ïîòåõèíà Ò. Ñ., Êîðçåíêî Ì. À., Øàòàåâà Ë. Ê.Ñàíêò-Ïåòåðáóðãñêàÿ õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêàÿ àêàäåìèÿ

197376, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, óë. Ïðîô. Ïîïîâà, ä. 14

Ïðîâåäåíà îöåíêà ðåïàðèðóþùåé àêòèâíîñòè íóê-ëåîïðîòåèíîâûõ êîìïëåêñîâ (ÍÏÊ) íà êëåòêàõSaccharomyces cerevisiae, ïîäâåðæåííûõ âîçäåéñòâèþÓÔ-îáëó÷åíèÿ è ðàñòâîðà ïåðåêèñè âîäîðîäà.

Èçâåñòíà áèîðåãóëÿòîðíàÿ ôóíêöèÿ íåãèñòîíîâûõáåëêîâ õðîìàòèíà, êîòîðûå ÿâëÿþòñÿ óíèâåðñàëüíû-ìè äëÿ âñåõ ýóêàðèîòè÷åñêèõ îðãàíèçìîâ. Òðàäèöèîí-íûì ñûðüåì äëÿ ïîëó÷åíèÿ ïðåïàðàòîâ ðåãóëÿòîðíî-ãî è ðàäèîïðîòåêòîðíîãî äåéñòâèÿ ÿâëÿþòñÿ îðãàíûè òêàíè ìëåêîïèòàþùèõ. Â ñâÿçè ñ èçâåñòíûìè ñëîæ-íîñòÿìè ïðè èñïîëüçîâàíèè æèâîòíîãî ñûðüÿ àêòó-àëüíîé ÿâëÿåòñÿ ïîèñê èñòî÷íèêîâ äëÿ âûäåëåíèÿáèîðåãóëÿòîðîâ èç ìèêðîîðãàíèçìîâ.

Îòðàáîòàíà è îïòèìèçèðîâàíà ñõåìà âûäåëåíèÿÍÏÊ èç äðîææåé S. cerevisiae, èçó÷åí êîìïîíåíòíûéñîñòàâ è îïðåäåëåíà èõ àêòèâíîñòü â ïðîöåññàõ âîñ-ñòàíîâëåíèÿ ïîâðåæäåííûõ êëåòîê.

Îöåíêó ðåïàðèðóþùåé àêòèâíîñòè ïðîâîäèëè íàñóñïåíçèè 2-õ ñóòî÷íîé êóëüòóðû ïåêàðñêèõ äðîææåéâ êîíöåíòðàöèè 106 êëåòîê/ìë, ïîäâåðæåííûõ äåé-ñòâèþ ÓÔ-îáëó÷åíèÿ ñ ýíåðãèåé 1300 ýðã/ìèí/ìë âòå÷åíèå 2-õ ìèíóò èëè 0,1-1,0% ïåðåêèñè âîäîðîäà âòå÷åíèå 30 ìèí. Êëåòêè âíîñèëè â æèäêóþ ïèòàòåëü-íóþ ñðåäó, ê ÷àñòè èç êîòîðûõ äîáàâëÿëè ÍÏÊ. Êîí-òðîëåì ñëóæèëà ïîïóëÿöèÿ êëåòîê, ïîäâåðãàâøàÿñÿäåéñòâèþ ñòðåññîâîãî ôàêòîðà, íî áåç âíåñåíèÿ ÍÏÊ.Ðåïàðàöèîííîå äåéñòâèå îöåíèâàëè ïî ñëåäóþùèìïîêàçàòåëÿì: èçìåíåíèå ÷èñëà êëåòîê âî âðåìåíè (êîí-ñòàíòà ñêîðîñòè ðîñòà, âðåìÿ ãåíåðàöèè, ïðîäîëæè-

òåëüíîñòü ëàã-ôàçû), ìîðôîëîãè÷åñêèå ïðèçíàêè (ðàç-ìåð, ôîðìà êëåòîê, ÷èñëî ïî÷êóþùèõñÿ, ÊÎÅ), ïðî-öåíò æèâûõ êëåòîê.

Èçó÷åíî âëèÿíèå ÍÏÊ â êîíöåíòðàöèè 0,7-70 ìêã/ìë. Ïîêàçàíî, ÷òî ÷èñëåííîñòü ïîâðåæäåííûõ êëåòîê,ê êîòîðûì äîáàâëåíû ðàñòâîðû ÍÏÊ âîçðàñòàåò ñîâðåìåíåì, õîòÿ è íå äîñòèãàåò êîëè÷åñòâà èíòàêòíûõ,â òî âðåìÿ êàê â êîíòðîëå ðàçìíîæåíèå îòñóòñòâóåò.Âðåìÿ ãåíåðàöèè ðåïàðèðîâàííûõ è êëåòîê, íå ïîä-âåðãàâøèõñÿ ñòðåññîâûì âîçäåéñòâèÿì ñîïîñòàâèìû,îäíàêî ïðîäîëæèòåëüíîñòü ëàã-ôàçû ó ðåïàðèðîâàí-íîé ïîïóëÿöèè â 2-6,5 ðàç ïðåâûøàåò ýòîò ïîêàçàòåëüäëÿ èíòàêòíûõ êëåòîê è çàâèñèò îò êîíöåíòðàöèè ÍÏÊ.Íàèáîëåå âûðàæåííûì ðåïàðèðóþùèì äåéñòâèåì îá-ëàäàþò ÍÏÊ â êîíöåíòðàöèè 1-7 ìêã/ìë. ×èñëî ïî÷-êóþùèõñÿ è ìåðòâûõ êëåòîê íà 20% áîëüøå äëÿ ïîïó-ëÿöèè, íàõîäÿùåéñÿ â ñðåäå ñ ÍÏÊ, ïî ñðàâíåíèþ ñêîíòðîëüíîé. Â îòäåëüíîì ýêñïåðèìåíòå áûëî ïîêàçà-íî, ÷òî ÍÏÊ íå èñïîëüçóþòñÿ äðîææàìè êàê èñòî÷-íèê ïèòàòåëüíûõ âåùåñòâ.

Èçâåñòíî, ÷òî âûäåëåííûå äðîææåâûå ÍÏÊ â ñâî-åì ñîñòàâå ñîäåðæàò ÐÍÊ, ñâÿçàííóþ ñ áåëêîì. Íàìèáûëî ïðîâåðåíî ðåïàðèðóþùåå äåéñòâèå êîìïîíåí-òîâ êîìïëåêñà. Â êà÷åñòâå ìîäåëè áûëè âûáðàíû ÐÍÊ,óáèêâèòèí, êîòîðûé ÿâëÿåòñÿ ðåãóëÿòîðíûì áåëêîì,à òàêæå èñêóññòâåííî ñîñòàâëåííûé êîìïëåêñ ÐÍÊ+óáèêâèòèí. Óñòàíîâëåíî, ÷òî ìîäåëüíûå âåùåñòâà èèõ êîìïëåêñ ðåïàðèðóþùèì äåéñòâèåì íà ïîâðåæäåí-íûå êëåòêè íå îáëàäàëè.

ÎÑÎÁÅÍÍÎÑÒÈ ÐÎÑÒÀ ÌÈÊÐÎÌÈÖÅÒÎÂ Â ÓÑËÎÂÈßÕ ÑÒÐÅÑÑÀ

Ðåáðèêîâà Í. Ë., Äìèòðèåâà Ì. Á.Ãîñóäàðñòâåííûé íàó÷íî-èññëåäîâàòåëüñêèé èíñòèòóò ðåñòàâðàöèè

107014, Ìîñêâà, óë. Ãàñòåëëî, ä. 44

Íà ïåðåïëåòàõ ñòàðîïå÷àòíûõ êíèã â ìóçåå-çàïî-âåäíèêå «Ðîñòîâñêèé Êðåìëü», íà èêîíàõ, íà ïðåä-ìåòàõ ïðèêëàäíîãî èñêóññòâà â ìóçåå-çàïîâåäíèêå«Öàðèöûíî», íà ýêñïîíàòàõ â ôîíäå äåðåâÿííîéñêóëüïòóðû Ãîñóäàðñòâåííîé Òðåòüÿêîâñêîé ãàëåðåè,íà êàðòèíàõ â ìóçåå-óñàäüáå «Àðõàíãåëüñêîå», íà ýê-ñïîíàòàõ Ðîññèéñêîãî ýòíîãðàôè÷åñêîãî ìóçåÿ áûëèîáíàðóæåíû íåîêðàøåííûå äèàìåòðîì îò ìåíåå îä-íîãî äî äâóõ ìèëëèìåòðîâ êîëîíèè ãðèáîâ. Ãðèáûðàçâèâàëèñü íà ïîâåðõíîñòÿõ ïðåäìåòîâ, ïëîõî âïè-òûâàþùèõ âëàãó. Íà íàõîäÿùèõñÿ â ýòèõ æå óñëîâèÿõãèãðîñêîïè÷íûõ ìàòåðèàëàõ, íàïðèìåð íà áóìàãå,ïðèçíàêîâ ðîñòà ãðèáîâ íå áûëî. Ïàðàìåòðû òåìïå-ðàòóðû è âëàæíîñòè â ôîíäîõðàíèëèùàõ íàõîäèëèñüâ ïðåäåëàõ äîïóñòèìûõ çíà÷åíèé, íî ïîäâèæíîñòüâîçäóõà îêîëî ýêñïîíàòîâ, íà êîòîðûõ íà÷àëîñü ðàç-âèòèå êîëîíèé, áûëà ìèíèìàëüíà. Íèçêàÿ ïîäâèæ-íîñòü âîçäóõà ñïîñîáñòâóåò îáðàçîâàíèþ êîíäåíñàòàíà ïîâåðõíîñòè ïðåäìåòîâ. Óñëîâèÿ äëÿ îáðàçîâàíèÿ

êîíäåíñàöèîííîé âëàãè â ìóçåéíûõ ôîíäàõ íîñÿòíåïîñòîÿííûé õàðàêòåð, êîëè÷åñòâî âëàãè îãðàíè-÷åííî, ïîýòîìó êîëîíèè ãðèáîâ, èñïîëüçóþùèå åå,èìåþò âûðàæåííûå ìîðôîëîãè÷åñêèå è ôèçèîëîãè-÷åñêèå îòëè÷èÿ îò êîëîíèé ãðèáîâ, ðàçâèâàþùèõñÿíà ìóçåéíûõ ïðåäìåòàõ â ñèòóàöèÿõ, áîëåå áëàãîïðè-ÿòíûõ äëÿ èõ ðîñòà.

Ìèêîëîãè÷åñêèå ïîñåâû ïîêàçàëè, ÷òî â áîëüøèí-ñòâå ñëó÷àåâ ãðèáû, îáðàçóþùèå ìèêðîêîëîíèè íàýêñïîíàòàõ íåæèçíåñïîñîáíû. Â òåõ ñëó÷àÿõ, êîãäà ðå-çóëüòàòû ïîñåâîâ áûëè ïîëîæèòåëüíû, ðàçâèâàëèñüêîëîíèè Aspergillus versicolor. Ïðè ìèêðîñêîïèðîâàíèèìàòåðèàëà, îòîáðàííîãî íà ìåñòå ðîñòà ãðèáîâ, â ïðå-ïàðàòàõ áûëî îáíàðóæåíî ìíîãî îäèíàêîâûõ, êðóï-íûõ, ñëåãêà îâàëüíûõ êîíèäèé, ðåæå âñòðå÷àëèñü êî-íèäèåíîñöû, õàðàêòåðíûå äëÿ ðîäà Aspergillus óðîäëè-âîé ôîðìû ñ íåáîëüøèì êîëè÷åñòâîì ôèàëèä (ñòå-ðèãì) íåîáû÷íî áîëüøîãî ðàçìåðà. Èçâåñòíî, ÷òî îá-ðàçîâàíèå ãèïåðòðîôèðîâàííûõ êëåòîê õàðàêòåðíî äëÿ


æèçíåäåÿòåëüíîñòè ìèêðîîðãàíèçìîâ â óñëîâèÿõ ñòðåñ-ñà íà òîì ýòàïå, êîãäà ýêñòðåìàëüíî âîçäåéñòâóþùèéôàêòîð âûçûâàåò òîðìîæåíèå ðàçìíîæåíèÿ êëåòîê,íî íå ðîñòà. Íåîáû÷íûå ðàçìåðû êîíèäèé, îáðàçî-âàâøèõñÿ â óñëîâèÿõ ñòðåññà, ÿâëÿþòñÿ ñâèäåòåëüñòâîìèõ ôèçèîëîãè÷åñêîé íåçðåëîñòè, è, ñëåäîâàòåëüíî,áîëüøåé óÿçâèìîñòè ïðè ñìåíå óñëîâèé îêðóæàþùåéñðåäû (èñ÷åðïàíèÿ íåáîëüøîãî êîëè÷åñòâà êîíäåíñà-

öèîííîé âëàãè), ïîýòîìó, íåñìîòðÿ íà òî, ÷òî ìèê-ðîêîëîíèè îáðàçóþò áîëüøîå ÷èñëî êîíèäèé, áîëü-øàÿ èõ ÷àñòü íåæèçíåñïîñîáíà.

Óñëîâèÿ õðàíåíèÿ, ïðè êîòîðûõ âîçìîæåí îãðà-íè÷åííûé ðîñò ãðèáîâ íà ìóçåéíûõ ïðåäìåòàõ, íåìîãóò áûòü ïðèçíàíû äîïóñòèìûìè, òàê êàê äàæåìèêðîêîëîíèè âûäåëÿþò ìåòàáîëèòû, îêàçûâàþùèåâîçäåéñòâèå íà ñîñòîÿíèå ýêñïîíàòîâ.

ÈÇÌÅÍÅÍÈÅ ÏÓËÀ ÍÅÎÐÃÀÍÈ×ÅÑÊÈÕ ÏÎËÈÔÎÑÔÀÒÎÂÓ ÌÈÊÐÎÎÐÃÀÍÈÇÌÎÂ — ÄÅÑÒÐÓÊÒÎÐÎÂ ÏÐÎÌÛØËÅÍÍÛÕ ÌÀÒÅÐÈÀËÎÂ

— Â ÓÑËÎÂÈßÕ ÒÅÏËÎÂÎÃÎ ØÎÊÀ

Ñìèðíîâ Â. Ô., Ïåðöåâà À. Ä., Àáçàëîâà Þ. Ð.Íèæåãîðîäñêèé ãîñóíèâåðñèòåò èìåíè Í. È. Ëîáà÷åâñêîãî

Íèæíèé Íîâãîðîä, ïð. Ãàãàðèíà, 23, êîðï. 1

Ïîñêîëüêó áèîõèìè÷åñêèå ìåõàíèçìû, îáåñïå÷è-âàþùèå óñòîé÷èâîñòü ê äåéñòâèþ ñòðåññîâûõ ôàêòî-ðîâ, ýíåðãîçàâèñèìû, èññëåäîâàíèå âëèÿíèÿ ýêñòðå-ìàëüíûõ âîçäåéñòâèé íà ýíåðãåòè÷åñêèå ïðîöåññûîðãàíèçìîâ ïðåäñòàâëÿåò èíòåðåñ â ñâÿçè ñ âûÿñíå-íèåì ìåõàíèçìîâ óñòîé÷èâîñòè ê ñòðåññîðíûì ôàê-òîðàì. Èçâåñòíî, ÷òî ó ìèêðîñêîïè÷åñêèõ ãðèáîâ èìååòìåñòî ïðåîáëàäàíèå âûñîêîìîëåêóëÿðíûõ íåîðãàíè-÷åñêèõ ïîëèôîñôàòîâ (ÏÔ) íàä ñèñòåìîé àäåíèëî-âûõ íóêëåîòèäîâ. Òàê êàê îäíîé èç îñíîâíûõ ôóíêöèéíåîðãàíè÷åñêèõ ïîëèôîñôàòîâ ÿâëÿåòñÿ ó÷àñòèå â ïðî-öåññàõ çàïàñàíèÿ è ðàñõîäîâàíèÿ ýíåðãèè, èì îòâî-äèòñÿ ñóùåñòâåííàÿ ðîëü â ýíåðãåòè÷åñêîì îáìåíåìèêðîìèöåòîâ êàê â íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ, òàê è âóñëîâèÿõ ñòðåññà.

Â êà÷åñòâå îáúåêòîâ èññëåäîâàíèÿ áûëè âûáðàíûäâà âèäà ìèêðîñêîïè÷åñêèõ ãðèáîâ — àêòèâíûõ äåñò-ðóêòîðîâ ïðîìûøëåííûõ ìàòåðèàëîâ, ñ ðàçëè÷íîéòåðìîòîëåðàíòíîñòüþ: ôàêóëüòàòèâíûé òåðìîôèëAspergillus niger è ìåçîôèë Penicillium ochro-chloron.

Èññëåäîâàëîñü ñîäåðæàíèå ðàçëè÷íûõ ôðàêöèé ÏÔó îáîèõ âèäîâ ãðèáîâ â íîðìàëüíûõ óñëîâèÿõ è â óñëî-âèÿõ òåïëîâîãî øîêà. Îáíàðóæåíî, ÷òî â íîðìàëüíûõóñëîâèÿõ ó îáîèõ âèäîâ ãðèáîâ îêîëî 50% ÏÔ ïðèõî-äèòñÿ íà ùåëî÷åðàñòâîðèìûå ÏÔ.

Ðåçóëüòàòû ýêñïåðèìåíòîâ ïî âîçäåéñòâèþ òåïëî-âîãî øîêà ïîêàçàëè, ÷òî äåéñòâèå äàííîãî ôàêòîðàíå ïðèâîäèò ê èçìåíåíèþ ïóëà íåîðãàíè÷åñêèõ ÏÔ,à èìååò ìåñòî ïåðåðàñïðåäåëåíèå ÏÔ ïî ôðàêöèÿì.Äåéñòâèå òåïëîâîãî øîêà íà ñîäåðæàíèå ÏÔ ó òåðìî-ôèëà îòëè÷àåòñÿ îò äåéñòâèÿ ýòîãî ôàêòîðà íà ìåçî-ôèëüíûé ãðèá P. ochro-chloron. Â ÷àñòíîñòè, îáíàðóæå-íî, ÷òî â óñëîâèÿõ òåïëîâîãî øîêà êîëè÷åñòâî ÏÔêèñëîòîðàñòâîðèìîé ôðàêöèè ó A. niger óìåíüøàåò-ñÿ, òîãäà êàê ó P. ochro-chloron êîëè÷åñòâî ÏÔ äàííîéôðàêöèè îñòàåòñÿ áåç èçìåíåíèÿ. Íàèáîëüøèå èçìå-íåíèÿ ïðè äåéñòâèè òåïëîâîãî øîêà ïðèõîäÿòñÿ íàùåëî÷åðàñòâîðèìûå ÏÔ ó A. niger, ÷òî ìîæåò áûòüñâÿçàíî ñ èõ îñîáîé ðîëüþ â ïðîöåññå àäàïòàöèè êñòðåññîâîìó âîçäåéñòâèþ.

ÀÊÒÈÂÍÎÑÒÜ ÎÒÄÅËÜÍÛÕ ÊÎÌÏÎÍÅÍÒÎÂ ÑÈÑÒÅÌÛ ÀÍÒÈÎÊÑÈÄÀÍÒÍÎÉ ÇÀÙÈÒÛÓ ÃÐÈÁÎÂ ÏÐÈ ÎÊÈÑËÈÒÅËÜÍÎÌ ÑÒÐÅÑÑÅ

Ñîêîëîâ À. Â., Ãåññëåð Í. Í., Áåëîçåðñêàÿ Ò. À.Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ

117071, Ìîñêâà, Ëåíèíñêèé ïð-ò, ä. 33

Èçìåíåíèå àêòèâíîñòè ñóïåðîêñèääèñìóòàçû(ÑÎÄ) è êàòàëàçû (ÊÀÒ), à òàêæå ñîäåðæàíèÿ êàðî-òèíîèäîâ ïîä äåéñòâèåì ñâåòà è ñîåäèíåíèé, óâåëè-÷èâàþùèõ óðîâåíü àêòèâíûõ ôîðì êèñëîðîäà (ÀÔÊ),èññëåäîâàëè ó ïðåäñòàâèòåëåé äâóõ ðàçíûõ êëàññîâãðèáîâ Blakeslea trispora è Neurospora crassa

Â îòâåò íà óâåëè÷åíèå ÀÔÊ â òåìíîòå ó N. crassa

ïðîèñõîäèëà àêòèâàöèÿ ÑÎÄ, à ïîä äåéñòâèåì ñâåòà,ïîìèìî àêòèâàöèè ÑÎÄ è ÊÀÒ, íàáëþäàëîñü óâåëè-÷åíèå óðîâíÿ êàðîòèíîèäîâ. Àêòèâíîñòü ÑÎÄ ó B.

trispora áûëà íèæå, ÷åì ó N. crassa, è ñíèæàëàñü íàôîíå îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà. Ïðè ñòðåññå ó B. trispora

áûëî îòìå÷åíî òàêæå è ñíèæåíèå ÊÀÒ. Ðàçëè÷èå âèçìåíåíèè àêòèâíîñòè ôåðìåíòîâ àíòèîêñèäàíòíîéçàùèòû ó B. trispora è N. crassa â îòâåò íà äåéñòâèå ñâåòàèëè äðóãèõ ôàêòîðîâ, óâåëè÷èâàþùèõ óðîâåíü ÀÔÊ,âûçâàíî, ïî-âèäèìîìó, íåñòàáèëüíîñòüþ ôåðìåíòîâàíòèîêñèäàíòíîé çàùèòû ó B. trispora. Ïîëó÷åííûåðåçóëüòàòû ñâèäåòåëüñòâóþò, ÷òî â-êàðîòèí ó B. trispora

â óñëîâèÿõ îêèñëèòåëüíîãî ñòðåññà âûïîëíÿåò ôóíê-öèþ îñíîâíîãî ïðîòåêòîðà íà ôîíå äåñòðóêöèè ôåð-ìåíòîâ, äåòîêñèöèðóþùèõ ÀÔÊ, òîãäà êàê ó N. crassa

êàðîòèíîèäû äåéñòâóþò êàê ôîòîïðîòåêòîðû.Ðàáîòà ïîääåðæàíà ãðàíòîì ÐÔÔÈ ¹ 01-04-48567.


Òðåõâàëåíòíûå êàòèîíû Gd3+ è La3+ øèðîêî èñ-ïîëüçóþòñÿ â êà÷åñòâå áëîêàòîðîâ ðÿäà Ñà2+ êàíàëîâïëàçìàòè÷åñêîé ìåìáðàíû âîçáóäèìûõ è íåâîçáóäè-

ìûõ êëåòîê. Â ÷èñëî òàêèõ êàíàëîâ âõîäÿò ìåõàíî÷óâ-ñòâèòåëüíûå Ñà2+ êàíàëû, íàèáîëåå ýôôåêòèâíûì áëî-êàòîðîì êîòîðûõ ñ÷èòàåòñÿ ãàäîëèíèé. Âîçìîæíîñòü

íàëè÷èÿ íà ìåìáðàíå Physarum polycephalum êàëüöèå-âûõ êàíàëîâ, ÷óâñòâèòåëüíûõ ê La3+ è Gd3+, äî íàñòî-ÿùåãî âðåìåíè íå èññëåäîâàëàñü. Âìåñòå ñ òåì, ýòîò

âîïðîñ ïðåäñòàâëÿåò íåñîìíåííûé èíòåðåñ, êàê â ñâÿ-çè ñ ïðèðîäîé àâòîêîëåáàíèé, õàðàêòåðíûõ äëÿ ñî-êðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè ýòîé ãèãàíòñêîé àìåáîèä-

íîé êëåòêè, òàê è â ñâÿçè ñ ÿâíî âûðàæåííîé ìåõà-íî÷óâñòâèòåëüíîñòüþ ñîêðàòèòåëüíîãî àïïàðàòà ïëàç-ìîäèÿ.

Physarum polycephalum, øòàììû ÂÊÌ(F) 3283 è LU887xMA 362 âûðàùèâàëè â âèäå ìàêðî- è ìèêðîïëàç-ìîäèåâ. Ìèêðîïëàçìîäèè èçîëèðîâàëè â ëîãàðèôìè-

÷åñêîé ôàçå ðîñòà, ïåðåíîñèëè â ñîëåâóþ ñðåäó, ñî-äåðæàùóþ 100 µÌ CaCl

2 è 10 ìÌ HEPES (pH 4,5), è

èñïîëüçîâàëè â îïûòàõ â òå÷åíèå 8 ÷àñîâ ïîñëå èçîëÿ-

öèè. Öèêëè÷åñêèå ñîêðàùåíèÿ êëåòîê è ïóëüñèðóþ-ùèå ïåðåìåùåíèÿ èõ ëèäèðóþùåãî êðàÿ ðåãèñòðèðî-âàëè îïòè÷åñêè ïî èçìåíåíèÿì ïðîõîäÿùåãî ÷åðåç

îáúåêò ñâåòà. Àâòîêîëåáàíèÿ ñèëû, ãåíåðèðóåìîé âèçîìåòðè÷åñêîì ðåæèìå ïðîòîïëàçìàòè÷åñêèìè òÿæà-ìè, âûðåçàííûìè èç ìàêðîïëàçìîäèÿ, ðåãèñòðèðîâà-

ëè ñ ïîìîùüþ ÷óâñòâèòåëüíîãî òåíçîäàò÷èêà.Ïîêàçàíî, ÷òî La3+ è Gd3+ ñèëüíî óâåëè÷èâàþò àä-

ãåçèþ, èíãèáèðóþò ìèãðàöèþ è â îïðåäåëåííûõ óñ-

ëîâèÿõ ïîäàâëÿþò êîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâ-íîñòè ìèêðîïëàçìîäèåâ. Íà ñâåæåèçîëèðîâàííûõ èçðîñòîâîé ñðåäû êëåòêàõ Gd3+ è La3+, â êîíöåíòðàöèÿõ

0,1-5 ìÌ è 1-5 ìÌ, ñîîòâåòñòâåííî, âûçûâàþò áûñò-ðîå è ïðàêòè÷åñêè ïîëíîå ïðåêðàùåíèå êîëåáàíèé.

ÄÅÉÑÒÂÈÅ ÃÀÄÎËÈÍÈß È ËÀÍÒÀÍÀ ÍÀ ÀÂÒÎÊÎËÅÁÀÍÈßÈ ÌÅÕÀÍÈ×ÅÑÊÈÅ ÕÀÐÀÊÒÅÐÈÑÒÈÊÈ ÏËÀÇÌÎÄÈß PHYSARUM POLYCEPHALUM

Òåïëîâ Â. À., Ìàòâååâà Í. Á., Áåéëèíà Ñ. È.

Èíñòèòóò òåîðåòè÷åñêîé è ýêñïåðèìåíòàëüíîé áèîôèçèêè ÐÀÍ


×åðåç 40-60 ìèí êîëåáàíèÿ âîçîáíîâëÿþòñÿ, ÷òî âñëó÷àå Gd3+ íå ïðèâîäèò ê âîçîáíîâëåíèþ ìèãðàöèè,

â ïðèñóòñòâèè La3+ ìèãðàöèÿ ÷àñòè÷íî âîññòàíàâëè-âàåòñÿ. Âîññòàíîâèâøèåñÿ êîëåáàíèÿ èìåþò áëèçêóþê êîíòðîëüíîé àìïëèòóäó è ïî÷òè ñèíóñîèäàëüíóþ

ôîðìó, ÷òî ðåäêî íàáëþäàåòñÿ íà ìèãðèðóþùèõ ìèê-ðîïëàçìîäèÿõ.

Íà ìèêðîïëàçìîäèÿõ, èíêóáèðîâàâøèõñÿ äî íà-

÷àëà ýêñïåðèìåíòîâ â òå÷åíèå 5 -7 ÷àñîâ â ñîëåâîéñðåäå, íàáëþäàåòñÿ òîëüêî 10-15 ìèí ñáîé àâòîêîëå-áàíèé. Ïîëíîå ïîäàâëåíèå ìèãðàöèè Gd3+ è åå èíãè-

áèðîâàíèå La3+ íà òàêèõ êëåòêàõ ñîõðàíÿåòñÿ.Â òåíçîìåòðè÷åñêèõ ýêñïåðèìåíòàõ íà ïðîòîïëàç-

ìàòè÷åñêèõ òÿæàõ ïîêàçàíî, ÷òî Gd3+ êîíöåíòðàöèÿõ

0,1 — 5 ìÌ óñòðàíÿåò õàðàêòåðíûé îòâåò ïëàçìîäèÿíà ðàñòÿæåíèå — ðîñò ãåíåðèðóåìîé òÿæàìè ñèëû èàìïëèòóäû åå êîëåáàíèé. Òàêîå èçìåíåíèå äèíàìè-

÷åñêèõ õàðàêòåðèñòèê òÿæåé ñâèäåòåëüñòâóåò â ïîëüçóíàëè÷èÿ íà ìåìáðàíå ïëàçìîäèÿ ìåõàíî÷óâñòâèòåëü-íûõ êàëüöèåâûõ êàíàëîâ. Äàííûå òàêæå ïîçâîëÿþò

ïðåäïîëàãàòü, ÷òî òàêèå êàíàëû ó÷àñòâóþò â ðåãóëÿ-öèè äâèãàòåëüíîãî ïîâåäåíèÿ, îòâå÷àÿ íà ëîêàëüíûåíàòÿæåíèÿ ñîêðàòèòåëüíîãî àïïàðàòà, ðàçâèâàåìûå

ñàìîé êëåòêîé.Èäåíòèôèêàöèÿ äðóãèõ ìåìáðàííûõ ìèøåíåé äåé-

ñòâèÿ Gd3+ è La3+, òàê æå êàê ïðèðîäà ïîêàçàííîé

íàìè ðàçíèöû â èõ ýôôåêòå íà ñâåæåèçîëèðîâàííûåè ãîëîäàâøèå êëåòêè, òðåáóåò äîïîëíèòåëüíûõ èññëå-äîâàíèé, îäíàêî, ïîëó÷åííûå äàííûå ïðåäñòàâëÿþò-

ñÿ âàæíûìè äëÿ âûÿñíåíèÿ îòíîñèòåëüíîãî âêëàäà âàâòîêîëåáàíèÿ ñîêðàòèòåëüíîé àêòèâíîñòè âõîäÿùèõïîòîêîâ Ca2+ è åãî âûñâîáîæäåíèÿ èç âíóòðèêëåòî÷-

íûõ õðàíèëèù.Ðàáîòà ïîääåðæàíà Ðîññèéñêèì ôîíäîì ôóíäàìåíòàëüíûõ

èññëåäîâàíèé. Starkov. 20. doc

ËÈÏÎÊÑÈÃÅÍÀÇÀ NEUROSPORA CRASSA Â ÓÑËÎÂÈßÕ ÒÅÏËÎÂÎÃÎ ÑÒÐÅÑÑÀ

Ôèëèïïîâè÷ Ñ. Þ., Àôàíàñüåâà Ò. Ï., Áà÷óðèíà Ã. Ï., Êðèöêèé Ì. Ñ.

Èíñòèòóò áèîõèìèè èìåíè À. Í. Áàõà ÐÀÍ119071, Ìîñêâà, Ëåíèíñêèé ïðîñïåêò, ä. 33

Ëèïîêñèãåíàçû — ñåìåéñòâî ôåðìåíòîâ, êàòàëè-çèðóþùèõ ñòåðåîñïåöèôè÷åñêîå ïðèñîåäèíåíèå êèñ-ëîðîäà ê íåíàñûùåííûì æèðíûì êèñëîòàì, ñîäåð-æàùèì cis,cis-1,4-ïåíòàäèåíîâûé ó÷àñòîê, è îáðàçó-þùèõ ãèäðîïåðîêñèäû ñ cis,trans-äèåíîâîé êîíúþãè-ðîâàííîé ñâÿçüþ. Ïðîäóêòû ëèïîêñèãåíàçíîé ðåàêöèèìîãóò ôóíêöèîíèðîâàòü êàê ñèãíàëüíûå ìîëåêóëû èëèñïîñîáíû èñïîëüçîâàòüñÿ â çàùèòíûõ îòâåòàõ ðàñòè-òåëüíûõ êëåòîê ïðè âîçäåéñòâèè íà íèõ ðàçëè÷íûõñòðåññîâûõ ôàêòîðîâ.

Òåïëîâóþ îáðàáîòêó ìèöåëèàëüíûõ êëåòîê àñêî-ìèöåòà Neurospora crassa ïðîâîäèëè ïðè 45îÑ äâóìÿ

ñïîñîáàìè: 1) â ïîâåðõíîñòíîé êóëüòóðå, âûðàùåí-íîé íà öåëëîôàíîâîé ïëåíêå íà òâåðäîé ðîñòîâîéñðåäå è ïîìåùåííîé â âîçäóøíûé òåðìîñòàò, èëè 2)â ïîãðóæåííîé øåéêåð-êóëüòóðå â âîäÿíîì òåðìîñòà-òå (ïåðåä èñïîëüçîâàíèåì æèäêóþ ðîñòîâóþ ñðåäóíàãðåâàëè äî íóæíîé òåìïåðàòóðû). Òåðìàëüíîìó âîç-äåéñòâèþ ïîäâåðãàëè ìèöåëèé ãðèáà â êîíöå ëîãà-ðèôìè÷åñêîé ôàçû ðîñòà — ïîñëå 20 (ïîãðóæåííàÿêóëüòóðà) èëè 44 (ïîâåðõíîñòíàÿ êóëüòóðà) ÷àñîâ ðî-ñòà ïðè 28°Ñ.

Óäåëüíàÿ àêòèâíîñòü ëèïîêñèãåíàçû â äèàëèçàòàõýêñòðàêòîâ êëåòîê èçìåíÿëàñü â çàâèñèìîñòè îò óñëî-


âèé êóëüòèâèðîâàíèÿ àñêîìèöåòà. Ïîñëå òåðìîîáðà-áîòêè ïîâåðõíîñòíîé êóëüòóðû íàáëþäàëè óâåëè÷å-íèå ôåðìåíòàòèâíîé àêòèâíîñòè ñ ïîñëåäóþùèìóìåíüøåíèåì åå äî íà÷àëüíîãî óðîâíÿ. Â ïðîòèâîïî-ëîæíîñòü ýòîìó, â ýòèõ æå óñëîâèÿõ â ïîãðóæåííîéêóëüòóðå óäåëüíàÿ àêòèâíîñòü ôåðìåíòà ðåçêî ñíèæà-ëàñü, íî çàòåì òàêæå äîñòèãàëà èñõîäíîãî óðîâíÿ.

Â êëåòêàõ ïîãðóæåííîé êóëüòóðû ôåðìåíòàòèâíûéîòâåò áûë ãîðàçäî áîëåå áûñòðûì (5 ìèí), ÷åì â êëåò-êàõ ïîâåðõíîñòíîé (2-3 ÷àñà).

Òåðìî÷óâñòâèòåëüíîñòü ëèïîêñèãåíàçû N. crassa

î÷åíü âûñîêà, òàê êàê íàáëþäàåòñÿ ëèøü â ÷ðåçâû-÷àéíî óçêîì äèàïàçîíå òåìïåðàòóð: ýôôåêò îòìå÷åíòîëüêî â êëåòêàõ ãðèáà ïîñëå äåéñòâèÿ 45îÑ; âìåñòå ñòåì, ôåðìåíòàòèâíàÿ àêòèâíîñòü àáñîëþòíî íå èçìå-íÿëàñü â êóëüòóðå, ïîäâåðãíóòîé âîçäåéñòâèþ 42îÑ,íî, ñ äðóãîé ñòîðîíû, ôåðìåíò ïîëíîñòüþ èíàêòè-âèðîâàëñÿ â ìèöåëèè ïîñëå îáðàáîòêè ïðè 48îÑ.

Äàííûå ñâèäåòåëüñòâóþò îá ó÷àñòèè ëèïîêñèãåíà-çû â ðåãóëÿöèè òåìïåðàòóðíîé àäàïòàöèè êëåòîê N.crassa.


ÐÅÃÓËßÖÈß ÏÐÎÖÅÑÑÎÂ ÏÅÐÅÊÈÑÍÎÃÎ ÎÊÈÑËÅÍÈß ËÈÏÈÄÎÂÂ ÌÈÖÅËÈÈ ÄÅÐÅÂÎÐÀÇÐÓØÀÞÙÈÕ ÃÐÈÁÎÂ ÁÅËÎÉ È ÁÓÐÎÉ ÃÍÈËÈ

Øèøêèíà Ë. Í., Êàïè÷ À. Í.*

Èíñòèòóò áèîõèìè÷åñêîé ôèçèêè èìåíè Í. Ì. Ýìàíóëÿ ÐÀÍ,

119991, Ìîñêâà, óë. Êîñûãèíà, ä. 4

*Ìåæäóíàðîäíûé ýêîëîãè÷åñêèé óíèâåðñèòåò èìåíè À. Ä. Ñàõàðîâà,

220009, Ìèíñê, óë. Äîëãîáðîäñêàÿ, ä. 23

Öåëüþ ðàáîòû ÿâèëîñü èçó÷åíèå îñîáåííîñòåé ôóí-êöèîíèðîâàíèÿ ôèçèêî-õèìè÷åñêîé ñèñòåìû ðåãóëÿ-öèè ïåðåêèñíîãî îêèñëåíèÿ ëèïèäîâ (ÏÎË) â ìèöå-ëèè êñèëîòðîôíûõ áàçèäèîìèöåòîâ ðàçíûõ ôèçèîëî-ãè÷åñêèõ ãðóïï.

Íà ìåòèëîëåàòíîé îêèñëèòåëüíîé ìîäåëè íàéäå-íî, ÷òî ëèïèäû èçó÷åííûõ 4-õ âèäîâ ãðèáîâ áåëîéãíèëè îáëàäàþò ïðîîêñèäàòíûìè ñâîéñòâàìè ñ äîñ-òàòî÷íî áëèçêèìè âåëè÷èíàìè àíòèîêèñëèòåëüíîéàêòèâíîñòè (ÀÎÀ) ëèïèäîâ, â òî âðåìÿ êàê ëèïèäûìèöåëèÿ 4-õ âèäîâ ãðèáîâ áóðîé ãíèëè ïðîÿâëÿþò êàêàíòèîêñèäàíòíûå, òàê è ïðîîêñèäàíòíûå ñâîéñòâà.Ïîêàçàíî, ÷òî ñïîñîáíîñòü ëèïèäîâ âñåõ èçó÷åííûõâèäîâ ãðèáîâ ïðèíèìàòü ó÷àñòèå â ïðîöåññàõ àâòîîêèñ-ëåíèÿ íà ñòàäèÿõ çàðîæäåíèÿ ðàäèêàëîâ è ïðîäîëæå-íèÿ öåïè îáóñëîâëåíà èõ êèíåòè÷åñêèìè õàðàêòåðèñ-òèêàìè (ÀÎÀ ëèïèäîâ, íà÷àëüíîå êîëè÷åñòâî ïåðîê-ñèäîâ â ëèïèäàõ), ïîýòîìó ëèïèäû ìèöåëèÿ ãðèáîâáåëîé ãíèëè ñèëüíåå èíòåíñèôèöèðóþò îêèñëèòåëü-íûå ïðîöåññû, ÷åì ëèïèäû ìèöåëèÿ ãðèáîâ áóðîéãíèëè. Ìåòîäîì ñëàáîñâÿçàííûõ ïàðàìàãíèòíûõ çîí-äîâ óñòàíîâëåíî íàëè÷èå âçàèìîñâÿçè ìåæäó ñòðóê-òóðíûì ñîñòîÿíèåì è ñîñòàâîì ëèïèäîâ ìèöåëèÿ ãðè-áîâ áåëîé è áóðîé ãíèëè â ôàçå çàìåäëåíèÿ ðîñòà èïîêàçàíà âàæíàÿ ðîëü ôîñôîëèïèäîâ (ÔË) â îáåñïå-÷åíèè òåêó÷åñòè ëèïèäíîãî êîìïîíåíòà ìèöåëèÿ. Ïðèèçó÷åíèè äèíàìèêè ëèïèäíîãî îáìåíà â ïðîöåññåðîñòà P. tigrinus è P. betulinus â ãëóáèííîé êóëüòóðå

îáíàðóæåíî, ÷òî êàê êîëè÷åñòâåííûé ñîñòàâ ÔË, òàêè âåëè÷èíû îòíîøåíèé ôîñôàòèäèëõîëèí/ôîñôàòè-äèëýòàíîëàìèí (ÔÕ/ÔÝ), ñóìì áîëåå ëåãêîîêèñëÿå-ìûõ è áîëåå òðóäíîîêèñëÿåìûõ ÔË (åËÎÔË/åÒÎÔË)è [ñòåðèíû]/[ÔË] ó ãðèáîâ ðàçíûõ ôèçèîëîãè÷åñêèõãðóïï â íà÷àëå ýêñïîíåíöèàëüíîé ôàçû ðîñòà áëèç-êè, îäíàêî äèíàìèêà èõ èçìåíåíèé ñóùåñòâåííî ðàç-ëè÷àåòñÿ. Áîëåå òîãî, åñëè äëÿ ëèïèäîâ ìèöåëèÿ P.tigrinus ìåæäó ÀÎÀ ëèïèäîâ è ñîîòíîøåíèåì åËÎÔË/åÒÎÔË íàéäåíà îáðàòíàÿ êîððåëÿöèîííàÿ çàâèñè-ìîñòü, òî äëÿ ëèïèäîâ ìèöåëèÿ P. betulinus ìåæäó ýòè-ìè ïîêàçàòåëÿìè îáíàðóæåíà ïðÿìàÿ êîððåëÿöèîí-íàÿ çàâèñèìîñòü â ïðîöåññå ðîñòà. Âûÿâëåíû îáðàò-íûå êîððåëÿöèîííûå âçàèìîñâÿçè ñ âûñîêèìè çíà-÷åíèÿìè R ìåæäó îòíîøåíèÿìè åËÎÔË/åÒÎÔË, õà-ðàêòåðèçóþùèìè îêèñëÿåìîñòü ëèïèäîâ, è ÔÕ/ÔÝ,îòðàæàþùèìè ñòðóêòóðíîå ñîñòîÿíèå ëèïèäîâ ìåìá-ðàííîé ñèñòåìû ìèöåëèÿ, ïðè ýòîì âàðèàáåëüíîñòüêîýôôèöèåíòà ëèíåéíîé ðåãðåññèè äàííûõ âçàèìî-ñâÿçåé â ÔË ãðèáîâ áóðîé ãíèëè ñóùåñòâåííî âûøå,÷åì â ÔË ãðèáîâ áåëîé ãíèëè êàê äëÿ ðàçíûõ âèäîâ,òàê è â ïðîöåññå êóëüòèâèðîâàíèÿ.

Ñîâîêóïíîñòü ïîëó÷åííûõ ýêñïåðèìåíòàëüíûõ äàí-íûõ ïîçâîëÿåò ïðåäïîëîæèòü, ÷òî âåäóùèì çâåíîì âôèçèêî-õèìè÷åñêîé ñèñòåìå ðåãóëÿöèè ÏÎË â ìèöå-ëèè êñèëîòðîôíûõ áàçèäèîìèöåòîâ ÿâëÿåòñÿ ñîñòàâëèïèäîâ.

ÌÅËÀÍÈÍÛ ×ÅÐÍÛÕ ÄÐÎÆÆÅÂÛÕ ÃÐÈÁÎÂ ÊÀÊ ÔÎÒÎÏÐÎÒÅÊÒÎÐÛ

Þðëîâà Í. À., Òóðêîâñêèé È. È.

Ãîñóäàðñòâåííàÿ õèìèêî-ôàðìàöåâòè÷åñêàÿ àêàäåìèÿ

197376, Ñàíêò-Ïåòåðáóðã, óë. Ïðîô. Ïîïîâà, ä. 14

×åðíûå äðîææåâûå ãðèáû (×ÄÃ) ñèíòåçèðóþò âêëåòî÷íûõ ñòåíêàõ, à èíîãäà âíåêëåòî÷íî, çíà÷èòåëü-íîå êîëè÷åñòâî ìåëàíèíîâûõ ïèãìåíòîâ, äàþùèõ èì

ïðåèìóùåñòâî, ïî ñðàâíåíèþ ñ äðóãèìè îðãàíèçìà-ìè, ïðè ðàçâèòèè â ýêñòðåìàëüíûõ óñëîâèÿõ, â ÷àñò-íîñòè, ïðè ïîâûøåííîì óðîâíå èîíèçèðóþùåé è


óëüòðàôèîëåòîâîé ðàäèàöèè. Ôèçèêî-õèìè÷åñêèå èáèîëîãè÷åñêèå ñâîéñòâà ìåëàíèíîâ ×ÄÃ èçó÷åíû íå-äîñòàòî÷íî. Íå÷åòêî îïðåäåëåí ïóòü áèîñèíòåçà ýòèõìåëàíèíîâ. Ó ×ÄÃ àñêîìèöåòíîãî àôôèíèòåòà îáíà-ðóæåíû ôåðìåíòû êàê ïåíòàêåòèäíîãî, òàê è îêñè-èíäîëüíîãî ïóòè áèîñèíòåçà (Þðëîâà, 1977; Ëÿõ,1981).

Â ïîñëåäíåå äåñÿòèëåòèå ñóùåñòâåííî âîçðîñ èí-òåðåñ ê áèîëîãè÷åñêîé ðîëè ìåëàíèíîâ. Ïðèìåíåíèåðàçëè÷íûõ ïðåïàðàòîâ ìåëàíèíà ñ öåëüþ çàùèòû îòóëüòðàôèîëåòîâîãî èçëó÷åíèÿ (ôîòîïðîòåêöèè), à òàê-æå îæèäàíèå «îìîëàæèâàþùèõ» ñâîéñòâ ìåëàíèíî-âûõ êðåìîâ, îáóñëîâèëè äîñòàòî÷íî øèðîêîå ðàñïðî-ñòðàíåíèå ýòèõ ïèãìåíòîâ â ñîâðåìåííîé êîñìåòè÷åñ-êîé è äåðìàòîëîãè÷åñêîé ïðàêòèêå.

Íàìè áûëà èçó÷åíà ôîòîïðîòåêòîðíàÿ àêòèâíîñòü

ìåëàíèíîâ ×ÄÃ ïðè ðàçëè÷íûõ óðîâíÿõ îñâåùåííîñ-òè. Â ðåçóëüòàòå áûëè îáíàðóæåíû ñóùåñòâåííûå èç-ìåíåèÿ ôîòîïðîòåêòîðíîé ñïîñîáíîñòè îò ÓÔ-îáëó-÷åíèÿ íåêîòîðûõ ìåëàíèíîâûõ ïðåïàðàòîâ, âûäåëåí-íûõ èç áèîìàññû ×ÄÃ. Óñòàíîâëåíû ðàçëè÷èÿ ìåæäóàáñîðáöèîííûìè ñïåêòðàìè ïðåïàðàòîâ, íàõîäÿùèõ-ñÿ â òåìíîòå è ôîòîìîäèôèöèðîâàííûõ äíåâíûì ñâå-òîì èíòåíñèâíîñòüþ âñåãî 0. 02 mW/ñì2 â òå÷åíèå 3-õìèíóò. Ïîëó÷åííûå äàííûå äîêàçûâàþò âîçìîæíîñòüôîòîèíäóöèðîâàííûõ èçìåíåíèé ìîëåêóëÿðíîé ñòðóê-òóðû è áèîëîãè÷åñêèõ ñâîéñòâ ìåëàíèíîâ ïðè äíåâ-íîì îñâåùåíèè óìåðåííîé è äàæå ñëàáîé èíòåíñèâ-íîñòè. Îáíàðóæåííûå ôîòîîïòè÷åñêèå ñâîéñòâà ìåëà-íèíîâ ×ÄÃ óáåäèòåëüíî ñâèäåòåëüñòâóþò î èõ ñïîñîá-íîñòè ê ôîòîìîäèôèöèêàöèè è ïåðñïåêòèâíîñòè ýòèõïèãìåíòîâ ×ÄÃ êàê ôîòîïðîòåêòîðîâ.

ÈÇÌÅÍÅÍÈß Â ÑÎÑÒÀÂÅ ÑÓÌÌÀÐÍÎÃÎ ÂÎÄÎÐÀÑÒÂÎÐÈÌÎÃÎ ÁÅËÊÀ ÌÈÖÅËÈßÈ ÏËÎÄÎÂÛÕ ÒÅË ÊÑÈËÎÒÐÎÔÍÛÕ ÁÀÇÈÄÈÎÌÈÖÅÒÎÂ ÏÐÈ ÄÅÉÑÒÂÈÈ

ÍÈÇÊÈÕ ÏÎËÎÆÈÒÅËÜÍÛÕ È ÎÒÐÈÖÀÒÅËÜÍÛÕ ÒÅÌÏÅÐÀÒÓÐ

ßêîâëåâ À. Þ., Áîðîâñêèé Ã. Á.Ñèáèðñêèé èíñòèòóò ôèçèîëîãèè è áèîõèìèè ðàñòåíèé ÑÎ ÐÀÍ

664033, Èðêóòñê, óë. Ëåðìîíòîâà, ä. 132, à/ÿ 1243

Äëÿ èçó÷åíèÿ âëèÿíèÿ íèçêèõ ïîëîæèòåëüíûõ èîòðèöàòåëüíûõ òåìïåðàòóð íà èçìåíåíèå ñîñòàâà áåë-êà ìèöåëèÿ è ïëîäîâûõ òåë òðåõ âèäîâ êñèëîòðîôíûõáàçèäèîìèöåòîâ: Flammulina velutipes (Fr.) Karst,Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm. è P. citrinopileatus Sing.èñïîëüçîâàëè îäíîìåðíûé ýëåêòðîôîðåç â ÏÀÀÃå (ïî-ëèàêðèëàìèäíîì ãåëå) â ïðèñóòñòâèè ÄÄÑ-Na, ðà-äèîèçîòîïíûå è ôëþîðîãðàôè÷åñêèå ìåòîäû àíàëèçà.«Êîíòðîëüíàÿ» òåìïåðàòóðà ðîñòà ìèöåëèÿ âî âñåõîïûòàõ ñîñòàâëÿëà 21°Ñ, ïëîäîâûõ òåë — 8°Ñ.

Â ìèöåëèè F. velutipes ïîëèïåïòèäû ñ ìîëåêóëÿð-íîé ìàññîé 72 è 81 êÄà ïîÿâëÿëèñü â îáðàçöàõ, âûäå-ëåííûõ èç ïðîìîðîæåííîãî ïðè –15°Ñ ìèöåëèÿ. Â îá-ðàçöàõ, îõëàæäåííûõ ïðè 4°Ñ è –10°Ñ, îòëè÷èé îò«êîíòðîëüíîãî» ìèöåëèÿ íå íàáëþäàëè. Äåéñòâèå îò-ðèöàòåëüíîé òåìïåðàòóðû íà ìèöåëèé òåïëîëþáèâî-ãî âèäà P. citrinopileatus âûçûâàëî áîëåå çíà÷èòåëüíûåèçìåíåíèÿ â íàáîðå áåëêîâ. Áåëêè ìàññîé 41 è 44 êÄàïîÿâëÿëèñü â îòâåò íà äåéñòâèå õîëîäà, áåëîê 37 êÄàîáíàðóæåí òîëüêî â îáðàçöàõ ïðîìîðîæåííûõ ïðè îò-ðèöàòåëüíîé òåìïåðàòóðå. Áåëîê ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàñ-ñîé 26 êÄà îáíàðóæåí â ìèöåëèè, îõëàæäåííîì ïðè–15°Ñ.

Â õîäå èññëåäîâàíèé áûëî âûÿñíåíî, ÷òî ïîä äåé-ñòâèåì õîëîäà â ñïåêòðàõ áåëêîâ ìèöåëèÿ ïðîèñõîäÿòìåíüøèå èçìåíåíèÿ, ÷åì òå, êîòîðûå áûëè îáíàðó-æåíû â ñîñòàâå ïëîäîâûõ òåë, îáðàçóåìûõ èç ýòèì æåìèöåëèåì. Êîëè÷åñòâî áåëêîâ ñ ìîëåêóëÿðíûìè ìàñ-ñàìè 20, 34 è 45 êÄà èç ïðîìîðîæåííûõ ïðè –10°Ñîáðàçöîâ ìèöåëèÿ P. ostreatus øòàììà äèêîãî òèïàóâåëè÷èâàëîñü ïî ñðàâíåíèþ ñ «êîíòðîëåì» è îáðàç-öàìè ïðîìîðîæåííûìè ñ ïðåäâàðèòåëüíûì îõëàæäå-íèåì ïðè 4°Ñ. Îõëàæäåíèå ïëîäîâûõ òåë ýòîãî æå øòàì-

ìà ïðèâîäèëî ê ïîÿâëåíèþ â áåëêîâûõ ñïåêòðàõ íî-âûõ ïîëèïåïòèäîâ ñ ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè 69, 64,60, 58 è 43 êÄà. Áåëîê 66 êÄà, ïðèñóòñòâîâàâøèé â«êîíòðîëå», ðåäóöèðîâàëñÿ ïîñëå îõëàæäåíèÿ ïëîäî-âûõ òåë, à áåëîê 50 êÄà — ïîñëå íåïîñðåäñòâåííîãîèõ ïðîìîðàæèâàíèÿ. Ðàäèîèçîòîïíûé àíàëèç òàêæå íåïîêàçàë ïîÿâëåíèÿ áîëüøîãî êîëè÷åñòâà íîâûõ áåë-êîâ â ìèöåëèè óñòîé÷èâîãî øòàììà P. ostreatus ïîñëåîõëàæäåíèÿ, â òî âðåìÿ êàê íåóñòîé÷èâûé øòàìì P.

citrinopileatus è ïëîäîâûå òåëà èçó÷åííûõ âèäîâ ãðèáîâáûëè áîëåå ÷óâñòâèòåëüíû, è îòâå÷àëè ñèíòåçîì íî-âûõ ïîëèïåïòèäîâ.

Ñïåêòðû ðàäèîàêòèâíûõ áåëêîâ â «êîíòðîëüíûõ»è îõëàæäåííûõ îáðàçöàõ ìèöåëèÿ P. ostreatus áûëèèäåíòè÷íû. Â ìèöåëèè P. citrinopileatus ïðîìîðàæèâà-íèå ïðèâîäèëî ê ýëèìèíàöèè èç áåëêîâîãî ñïåêòðàïîëèïåïòèäà 73 êÄà, ê óìåíüøåíèþ âêëþ÷åíèÿ ìåò-êè â áåëêè 65 è 34 êÄà è ê èíäóêöèè ñèíòåçà áåëêà38 êÄà. Â ïëîäîâûõ òåëàõ Ð. ostreatus ïîñëå äåéñòâèÿíèçêîé òåìïåðàòóðû íàáëþäàëè ñëàáûå èçìåíåíèÿ âñèíòåçå ñóììàðíûõ áåëêîâ. Îõëàæäåíèå ïðèâîäèëîëèøü ê ïðåêðàùåíèþ ñèíòåçà áåëêîâ 110 è 120 êÄà,ïðèñóòñòâóþùèõ â «êîíòðîëüíûõ» ïëîäîâûõ òåëàõ.Ñèíòåç «íîâûõ» áåëêîâ â ýòèõ óñëîâèÿõ íå ïðîèñ-õîäèë.

Âûñîêàÿ àäàïòàöèîííàÿ ñïîñîáíîñòü ìèöåëèÿ ïî-çâîëÿåò ïðåäïîëàãàòü ñóùåñòâîâàíèå îïðåäåëåííîãîóðîâíÿ «êîíñòèòóòèâíîãî» ñèíòåçà çàùèòíûõ ïîëè-ïåïòèäîâ. Ïðèñóòñòâèå ýòèõ áåëêîâ, íàðÿäó ñ ðàáî-òîé äðóãèõ, íåáåëêîâûõ ñèñòåì çàùèòû, âåðîÿòíî,âíîñèò ñóùåñòâåííûé âêëàä â âûñîêèé óðîâåíüóñòîé÷èâîñòè ìèöåëèÿ ê äåéñòâèþ íèçêîé òåìïå-ðàòóðû.


ÄÅÃÈÄÐÈÍÎÏÎÄÎÁÍÛÅ ÏÎËÈÏÅÏÒÈÄÛ ÌÈÖÅËÈß È ÏËÎÄÎÂÛÕ ÒÅËÊÑÈËÎÒÐÎÔÍÛÕ ÁÀÇÈÄÈÎÌÈÖÅÒÎÂ ÏÐÈ ÃÈÏÎÒÅÐÌÈÈ

ßêîâëåâ À. Þ., Áîðîâñêèé Ã. Á.Ñèáèðñêèé èíñòèòóò ôèçèîëîãèè è áèîõèìèè ðàñòåíèé ÑÎ ÐÀÍ

664033, Èðêóòñê, óë. Ëåðìîíòîâà, ä. 132, à/ÿ 1243

Áåëêè äåãèäðèíû ÿâëÿþòñÿ âàæíîé ÷àñòüþ çàùè-òû ðàñòåíèé îò ïîâðåæäåíèé â ðåçóëüòàòå îáåçâîæè-âàíèÿ ïðè âíåêëåòî÷íîì çàìåðçàíèè âîäû, ñîëåâîìñòðåññå è çàñóõå. Â íàñòîÿùåå âðåìÿ ñ÷èòàåòñÿ, ÷òî äå-ãèäðèíû ôóíêöèîíèðóþò â êëåòêàõ ðàñòåíèé êàê ñòà-áèëèçàòîðû ñòðóêòóðû ìàêðîìîëåêóë ñ äåòåðãåíòíû-ìè è øàïåðîííûìè ñâîéñòâàìè. Èçâåñòíà èõ âûñîêàÿâîäîóäåðæèâàþùàÿ ñïîñîáíîñòü, ÷òî ïîìîãàåò ñîõðà-íèòü îáùóþ îáâîäíåííîñòü öèòîçîëÿ ïðè ñòðåññàõ,ñâÿçàííûõ ñ ïîòåðåé âîäû. Äàííûå î íàëè÷èè äåãèä-ðèíîïîäîáíûõ áåëêîâ â ãðèáàõ íà ñåãîäíÿøíèé äåíüîòñóòñòâóþò.

Ìåòîäàìè îäíîìåðíîãî ýëåêòðîôîðåçà è èììóíî-áëîòòèíãà ïðîâîäèëè ïîèñê áåëêîâ, èììóíîõèìè÷åñ-êè ðîäñòâåííûõ ðàñòèòåëüíûì äåãèäðèíàì, â ñîñòàâåñóììàðíîé âîäîðàñòâîðèìîé ôðàêöèè ïîëèïåïòèäîâìèöåëèÿ è ïëîäîâûõ òåë òðåõ âèäîâ êñèëîòðîôíûõáàçèäèîìèöåòîâ: Flammulina velutipes (Fr.) Karst,Pleurotus ostreatus (Fr.) Kumm. è P. citrinopileatus Sing.Èñïîëüçîâàëè êàê íèçêîòåìïåðàòóðíóþ îáðàáîòêó, òàêè ïîäñóøèâàíèå ìèöåëèÿ è ïëîäîâûõ òåë äëÿ èìèòà-öèè âîäíîãî ñòðåññà.

Â ðåçóëüòàòå èññëåäîâàíèé âûÿñíèëè, ÷òî äåãèä-ðèíîïîäîáíûå ïîëèïåïòèäû ïðèñóòñòâóþò â îáðàçöàõìèöåëèÿ P. ostreatus è P. citrinopileatus êàê â «êîíòðî-ëå», òàê è ïîñëå íèçêîòåìïåðàòóðíîé îáðàáîòêè.

Áåëêè ñ ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè 76, 71, 66, 57,53 è 24 êÄà áûëè îáíàðóæåíû â ìèöåëèè áîðåàëüíûõøòàììîâ P. ostreatus, à ïîëèïåïòèäû 70, 66, 57 è 53êÄà — â ìèöåëèè íåóñòîé÷èâîãî ê îõëàæäåíèþ âèäàP. citrinopileatus. Áåëêè 24, 71 è 76 êÄà îáíàðóæåíûòîëüêî ó P. ostreatus, à ïîëèïåïòèä 70 êÄà ïðèñóòñòâî-âàë òîëüêî ó P. citrinopileatus. Îñòàëüíûå áåëêè ïðèñóò-ñòâîâàëè â êëåòêàõ ìèöåëèÿ îáîèõ øòàììîâ ãðèáîâ.

Â «êîíòðîëüíûõ» è ïðîìîðîæåííûõ ïðè –4îÑ ïëî-äîâûõ òåëàõ P. ostreatus áûëè íàéäåíû äåãèäðèíîïî-

äîáíûå ïîëèïåïòèäû ñ ìîëåêóëÿðíûìè ìàññàìè 24,57, 66 êÄà. Â íàèáîëüøåì êîëè÷åñòâå â ïëîäîâûõ òåëàõïðèñóòñòâîâàë áåëîê ñ ìàññîé 24 êÄà, â ãîðàçäî ìåíü-øåì — áåëêè 57 è 66 êÄà.

Äåãèäðèíîïîäîáíûå ïîëèïåïòèäû áûëè îáíàðóæå-íû òàêæå â ìèöåëèè óñòîé÷èâîãî ê îòðèöàòåëüíûìòåìïåðàòóðàì âèäà F. velutipes. Áåëêè 24, 53, 57, 66, 70è 71 êÄà ïðèñóòñòâîâàëè è â «êîíòðîëå», è â ñòðåññè-ðîâàííûõ îáðàçöàõ ìèöåëèÿ ýòîãî âèäà. Áåëêè 26, 31 è34 êÄà áûëè çàðåãèñòðèðîâàíû òîëüêî ó äàííîãî âèäàâ óêàçàííûõ óñëîâèÿõ òåìïåðàòóðíîé îáðàáîòêè. Íà-êîïëåíèå áåëêîâ 70 è 71 êÄà ïðîèñõîäèëî â çàâèñè-ìîñòè îò ñèëû ñòðåññà. Ìàêñèìàëüíîå êîëè÷åñòâî áûëîïðåäñòàâëåíî â îáðàçöàõ, âûäåëåííûõ èç ìèöåëèÿ,îáðàáîòàííîãî ïðè –15°Ñ.

Íàïðîòèâ, êîëè÷åñòâî áåëêîâ 24 è 31 êÄà çàìåòíîñíèæàëîñü ïðè ïîíèæåíèè òåìïåðàòóðû îáðàáîòêè.Èíòåíñèâíîñòü îêðàñêè ïîëîñ, ñîîòâåòñòâóþùèõ áåë-êàì ñ ìàññîé 34, 53, 57 è 66 êÄà, ñîõðàíÿëàñü ðàâíî-ìåðíîé ñðåäè âñåõ îáðàçöîâ âíå çàâèñèìîñòè îò òåì-ïåðàòóðíîé îáðàáîòêè. Áåëîê 26 êÄà, áûë îáíàðóæåíòîëüêî â îäíîì ñëó÷àå, êîãäà ìèöåëèé îõëàæäàëè ïðè4°C.

Èçâåñòíî, ÷òî äåãèäðèíû, îáíàðóæåííûå ó ðàñòå-íèé, ÿâëÿþòñÿ áåëêàìè ñ âûñîêîé òåðìîñòàáèëüíîñ-òüþ, ÷òî îáóñëîâëèâàåò èõ óñòîé÷èâîñòü â êëåòêå ïðèñòðåññàõ, ñâÿçàííûõ ñ ïîòåðåé âîäû. Äåãèäðèíîïîäîá-íûå áåëêè ãðèáîâ òàêæå ïðîÿâëÿëè âûñîêóþ óñòîé÷è-âîñòü ê òåìïåðàòóðíîé êîàãóëÿöèè.

Ïðèñóòñòâèå âñåõ îòìå÷åííûõ âûøå äåãèäðèíîïî-äîáíûõ ïîëèïåïòèäîâ â «êîíòðîëüíîì» è îõëàæäåí-íîì ìèöåëèè è ïëîäîâûõ òåëàõ äàííûõ âèäîâ ãðèáîâóêàçûâàåò íà êîíñòèòóòèâíûé õàðàêòåð ñèíòåçà ýòèõáåëêîâ. Ïîëó÷åííûå íàìè ðåçóëüòàòû ïðåäïîëàãàþòóíèâåðñàëüíîñòü çàùèòû êëåòîê ðàñòåíèé è ãðèáîâ îòîáåçâîæèâàíèÿ ïðè ó÷àñòèè äåãèäðèíîâ.

ÐÀÇÎÁÙÀÞÙÈÅ ÁÅËÊÈ ÌÈÖÅËÈß FLAMMULINA VELUTIPES (FR.) KARST,PLEUROTUS OSTREATUS (FR.) KUMM È P. CITRINOPILEATUS SING,

ÈÌÌÓÍÎÕÈÌÈ×ÅÑÊÈ ÐÎÄÑÒÂÅÍÍÛÅ PUMP È ÁÕØ 310 ÐÀÑÒÅÍÈÉ

ßêîâëåâ À. Þ., Áîðîâñêèé Ã. Á.

Ñèáèðñêèé èíñòèòóò ôèçèîëîãèè è áèîõèìèè ðàñòåíèé ÑÎ ÐÀÍ664033, Èðêóòñê, óë. Ëåðìîíòîâà, ä. 132, à/ÿ 1243

Äëÿ âûÿñíåíèÿ âîçìîæíîñòè ó÷àñòèÿ íåêîòîðûõðàçîáùàþùèõ áåëêîâ â ïðîöåññàõ çàùèòû êëåòîê ãðè-áîâ îò âîçäåéñòâèÿ íèçêîé òåìïåðàòóðû íàìè áûë ïðî-âåäåí ïîèñê ïîëèïåïòèäîâ, ãîìîëîãè÷íûõ ðàñòèòåëü-íûì ðàçîáùàþùèì áåëêàì. Èñïîëüçóÿ ñûâîðîòêè ïðî-òèâ PUMP (Plant uncoupling mitochondrial protein) èÁÕØ 310 (áåëîê õîëîäîâîãî øîêà ñ ìîëåêóëÿðíîé ìàñ-ñîé 310 êÄà) áûëè ïðîâåäåíû èììóíîáëîòòèíãè ñ îá-ðàçöàìè îáùåãî âîäîðàñòâîðèìîãî áåëêà ìèöåëèÿ èïëîäîâûõ òåë F. velutipes, P. ostreatus è P. citrinopileatus.

Ðàçîáùåíèå îêèñëèòåëüíîãî ôîñôîðèëèðîâàíèÿ âìèòîõîíäðèÿõ ñ ó÷àñòèåì ðàçîáùàþùèõ áåëêîâ ñî-ïðîâîæäàåòñÿ âûäåëåíèåì òåïëà, êîòîðîå îðãàíèçììîæåò èñïîëüçîâàòü äëÿ òåðìîðåãóëÿöèè. Ýòî ÿâëåíèåñîñòàâëÿåò ñóùíîñòü ïðîöåññà òåðìîãåíåçà. Ïðåäïî-ëàãàþò, ÷òî òåðìîãåíåç äàåò âîçìîæíîñòü êëåòêå ÷àñ-òè÷íî èçáåæàòü ïîâðåæäåíèÿ ïðè ãèïîòåðìèè, ñîãðå-âàÿ ñåáÿ â òå÷åíèå íåáîëüøîãî ïåðèîäà âðåìåíè,ïîêà èíèöèèðóþòñÿ ñîîòâåòñòâóþùèå èçìåíåíèÿ âìåòàáîëèçìå êëåòîê. Äðóãîé âàæíîé ôóíêöèåé ðàçîá-


ùàþùèõ áåëêîâ ÿâëÿåòñÿ ïðîòèâîäåéñòâèå îêèñëè-òåëüíîìó ñòðåññó, óñèëèâàþùåìóñÿ ïðè ãèïîòåðìèè.Áóäó÷è ñâÿçàííûì ñ öèêëè÷åñêèì îáîðîòîì æèðíûõêèñëîò, PUMP âûñòóïàåò ôóíêöèîíàëüíûì ãîìîëî-ãîì æèâîòíûõ UCPs (Uncoupling proteins) â êà÷åñòâåìåäèàòîðà öèêëà æèðíûõ êèñëîò è ïåðåíîñ÷èêà èõàíèîííûõ ôîðì ÷åðåç âíóòðåííþþ ìåìáðàíó ìèòî-õîíäðèé. Â îòëè÷èå îò ìåìáðàííîé ëîêàëèçàöèè áîëü-øèíñòâà èçâåñòíûõ ðàçîáùàþùèõ áåëêîâ, ÁÕØ 310,íàéäåííûé â ìèòîõîíäðèÿõ ïøåíèöû âî âðåìÿ õî-ëîäîâîãî ñòðåññà, ÿâëÿåòñÿ öèòîçîëüíûì áåëêîì,ñïîñîáíûì ðàçîáùàòü îêèñëåíèå è ôîñôîðèëèðîâà-íèå ìèòîõîíäðèé âî âðåìÿ äåéñòâèÿ íèçêîòåìïåðà-òóðíîãî ñòðåññà. Äàííûõ î ðàáîòå ðàçîáùàþùèõ áåë-êîâ â ìèòîõîíäðèÿõ ãðèáîâ ïîêà â ëèòåðàòóðå î÷åíüìàëî. Â òîæå âðåìÿ áûëî èíòåðåñíî îïðåäåëèòü êîëè-÷åñòâåííûå èçìåíåíèÿ ýòèõ áåëêîâ â ìèöåëèè è ïëî-äîâûõ òåëàõ âûáðàííûõ âèäîâ êñèëîòðîôíûõ áàçèäèî-ìèöåòîâ.

Â ðåçóëüòàòå èññëåäîâàíèé áûëè îáíàðóæåíû ïî-ëèïåïòèäû èììóíîõèìè÷åñêè ðîäñòâåííûå PUMP ââèäå äèìåðà ìàññîé 64 êÄà ó âñåõ òðåõ âèäîâ ãðèáîâ âìèöåëèè, â òî âðåìÿ êàê äàííûå ïîëèïåïòèäû â áåë-

êå èç ïëîäîâûõ òåë îòñóòñòâîâàëè. Îõëàæäåíèå è ïðî-ìîðàæèâàíèå ìèöåëèÿ ïðèâîäèëî ê íàêîïëåíèþPUMP â êëåòêàõ F. velutipes. Ïðè÷åì íàèáîëüøåå åãîêîëè÷åñòâî íàêàïëèâàëîñü ïðè 2°Ñ.

Èììóíîáëîòòèíã ñ àíòèòåëàìè ïðîòèâ ÁÕØ 310ïîçâîëèë îáíàðóæèòü äâå ñóáúåäèíèöû 56 è 66 êÄà,èììóíîõèìè÷åñêè ðîäñòâåííûå áåëêó õîëîäîâîãî øîêà310 êÄà. Îáå ñóáúåäèíèöû ïðèñóòñòâîâàëè â «êîíò-ðîëüíîì» è îõëàæäåííîì ìèöåëèÿõ âñåõ òðåõ âèäîâãðèáîâ. Êàê â êîíòðîëüíûõ îáðàçöàõ, òàê è â îáðàáî-òàííûõ õîëîäîì êîëè÷åñòâî äàííûõ ïîëèïåïòèäîâ îñ-òàâàëîñü íà îäíîì óðîâíå âíå çàâèñèìîñòè îò òåìïå-ðàòóðíîé îáðàáîòêè.

Ïî íàøåìó ïðåäïîëîæåíèþ, áåëêè, èììóíîõèìè-÷åñêè ðîäñòâåííûå PUMP è ÁÕØ 310, èç «êîíò-ðîëüíîãî» è îáðàáîòàííîãî õîëîäîì ìèöåëèÿ ìîãóòïðèíèìàòü ó÷àñòèå â ðàçîáùåíèè ïðîöåññîâ îêèñëå-íèÿ è ôîñôîðèëèðîâàíèÿ â ìèòîõîíäðèÿõ. Ýòî, ñ îä-íîé ñòîðîíû, ìîæåò ïðèâîäèòü ê ëîêàëüíîìó ïîâû-øåíèþ òåìïåðàòóðû êëåòîê ìèöåëèÿ, äàâàÿ âîçìîæ-íîñòü àêòèâèçèðîâàòü çàùèòíûå ìåõàíèçìû, ñ äðóãîé— ñíèæàòü îòðèöàòåëüíûå ïîñëåäñòâèÿ îêèñëèòåëü-íîãî ñòðåññà.

tez 5 - mycology.ru · title: tez_5.p65 author: elena created date: 12/10/2002 1:01:55 pm

Documents