proteina total

Protena Total Pgina 1 de 4

PROTEINA TOTAL Nmeros de catlogo: 200-55 Presentaciones: 4 x 125 mL 200-70 1 x 1000 mL USO Para la determinacin cuantitativa in vitro de protena en suero. PRECAUCION Evitar la ingestin y el contacto con la piel y ojos. Almacenar a 18-26C. REACTIVOS

Solucin que contiene 31.8 mmol/L de tartrato de sodio-potasio, 12.0 mmol/L de sulfato de cobre pentahidratado, 30.1 mmol/L de yoduro de potasio y 0.20 mol/L de hidrxido de sodio.

ANTECEDENTES El uso de la reaccin de Biuret como mtodo para la estimacin de protenas en el plasma la introdujo por primera vez Reigler (1). Gornall y colaboradores modificaron el procedimiento al agregar tartrato de sodio-potasio en ciual acta con un agente que forma un complejo para producir un complejo de protena-cobre estable. este mtodo utiliza la reaccin de Biuret donde la protena reacciona con el reactivo a pH alcalino para formar un complejo colorido azul-violeta. Las determinaciones de protena total son tiles en el diagnstico y tratamiento de una diversidad de enfermedades que afectan el hgado, riones, mdula sea as como otros trastornos metablicos o nutricionales. PRINCIPIO

Protena + Cu++ complejo azul-violeta A pH alcalino, la protena reacciona con el cobre del reactivo de Biuret causando un aumento en la absorbancia. El incremento en la absorbancia a 540 nm debido a la formacin del complejo azul-violeta es directamente proporcional a la concentracin de protena en la reaccin. PREPARACION DEL REACTIVO El reactivo se proporciona listo para usarse. ESTABILIDAD Y ALMACENAMIENTO DEL REACTIVO El reactivo proporcionado se mantiene estable hasta la fecha de caducidad especificada en la etiqueta del vial mientras se mantenga almacenado a una temperatura de 18 a 26C. El periodo de estabilidad mencionado se basa en estudios de tiempo real efectuados en los laboratorios de Diagnostic Chemicals Limited.


DETERIORO DEL REACTIVO La solucin del reactivo debe ser clara. La turbidez indica deterioro. INSTRUMENTOS Puede usarse cualquier analizador con control de temperatura de 0.5C que sea capaz de leer la absorbancia con exactitud, con una sensibilidad de 0.001 de absorbancia a 540 nm. El ancho de la banda deber ser de 10 nm o menos, la desviacin de la luz de 0.5% o menos y la exactitud de longitud de onda dentro de 2 nm. RECOLECCION Y PREPARACION DE LA MUESTRA La muestra de eleccin es un suero fresco, claro y no hemolizado. INTERFERENCIAS No deben utilizarse muestras hemolizadas, ya que la hemoglobina elevar falsamente los valores de protena total. Se puede encontrar un resumen sobre la influencia de drogas en pruebas de laboratorio clnico consultando a Young, D.S. (3). PROCEDIMIENTO

Materiales Proporcionados Se incluye el reactivo necesario para la determinacin de protena total.

Materiales Requeridos 1. Un analizador que rena los requisitos mencionados en la seccin de Instrumentos. 2. Cubetas de 1 cm o una celda de flujo que transmita la luz a 540 nm. 3. Tubos de ensayo del tamao adecuado. 4. Pipetas del tamao adecuado. 5. Agua desionizada. 6. Un cronmetro adecuado. 7. Un calibrador de protena para calibrar el procedimeinto.

Condiciones

Genricas Analizador Automtico

Longitud de onda ......................................... 540 nm 540 nm Temperatura ................................................ 18-26C 37C Paso de luz .................................................. 1 cm Tipo de reaccin .......................................... Punto final Punto final Tiempo de reaccin ..................................... 10 minutos 3 minutos Volumen de la muestra ................................ 50 L 5 L Volumen de reactivo .................................... 2.5 mL 250 L Volumen total ............................................... 2.55 mL 255 L Relacin muestra/reactivo ........................... 1:50 1:50

Procedimiento

1. En tubos de ensayo por separado pipetee 50 L de agua desionizada, del calibrador para protena o del suero que quiera analizarse.

2. Agregue 2.05 mL de reactivo de Biuret para protena total y mezcle. 3. Incube la mezcla a 18-26C por 10 minutos. 4. Determine la absorbancia del calibrador (Ac) y de cada muestra desconocida (A) a 540 nm utilizando la

muestra de agua desionizada como el blanco del reactivo.


ESTABILIDAD DE LA MEZCLA DE LA REACCION FINAL La coloracin de la mezcla de la reaccin final se mantiene estable por una hora. CALIBRACION No se incluye un calibrador para protena en el equipo. Sin embargo, debe utilizarse un calibrador para protena, siguiendo las instrucciones especificadas para calibrar el procedimiento. CONTROL DE CALIDAD Se debe analizar un suero control de nivel normal y otro de nivel anormal con cada corrida de muestras y los resultados debern caer dentro de 2 desviaciones estndar del valor establecido. CALCULO Y RESULTADOS

Resultados La concentracin de la protena total se expresa en g/L (g/dL).

Clculo A Protena Total g/L (g/dL) = x concentracin del calibrador Ac A = absorbancia de la muestra desconocida Ac = absorbancia del calibrador Ejemplo 0.375 Protena Total g/L (g/dL) = x 80 0.440

= 68 g/L (6.8 g/dL)

0.375 = absorbancia de la muestra desconocida 0.440 = absorbancia del calibrador 80 g/L = concentracin del calibrador Limitaciones Una muestra con una concentracin de protena total que exceda el lmite de linealidad deber diluirse con solucin salina a 0.9% y volver a analizar incorporando el factor de dilucin en el clculo del resultado. Las muestras muy lipmicas o ictricas requieren el uso de un blanco de muestra, el cual puede prepararse uagregando 50 L de muestra a 2.5 mL de agua desionizada. VALORES ESPERADOS (4) 60-82 g/L (6.0-8.2 g/dL) Se sugieren estos valores como referencia. Se recomienda que cada laboratorio establezca su propio rango normal para el rea donde est localizado. CARACTERISTICAS DE RENDIMIENTO Estas caractersticas de rendimiento se obtuvieron en los laboratorios de DCL usando procedimientos automatizados, a menos que se indique lo contrario. Estudio de Recuperacin Se agreg protena a tres grupos de sueros para aumentar la concentracin de protena total en 25, 35 y 45 g/L. La recuperacin de la protena agregada tuvo un promedio de 96%.


Rango Lineal (NCCLS EP6-P) La linealidad del procedimiento descrito es de 100 g/L. Estudios de Precisin (NCCLS EP5-T2) Se recopilaron datos de dos sueros control, utilizando un solo lote de reactivo en dos corridas de muestras durante 10 das.

Protena Total Media g/L

Desviacin Estndar g/L

Coeficiente de Variacin %

Suero 1 48 0.8 1.7 Suero 2 63 1.0 1.6

La precisin diaria se estableci ensayando dos sueros control, 24 veces.

Protena Total Media g/L

Desviacin Estndar g/L

Coeficiente de Variacin %

Suero 1 48 0.3 0.6 Suero 2 63 0.8 1.3

Exactitud (NCCLS EP9-P) El rendimiento de este mtodo (y) se compar con el de un mtodo similar de Biuret (x). El anlisis de regresin lineal dio la siguiente ecuacin:

Este mtodo = 1.037 (mtodo de referencia) 3.6 g/L. REFERENCIAS

1. Riegler, E., A Colorimetric Method for the Determination of Plasma Albumin, Z. Anal. Chem. 53, 242 (1914).

2. Gornall, A.G., Bardawill, C.J., David, M.M., Determination of Serum Proteins by Means of the Biuret Reaction, J. Biol. Chem. 177, 751 (1949).

3. Young, D.S., Effects of Drugs on Clinical Laboratory Tests, AACC Press, Washington, Third Edition (1990).

4. Kaplan, A., Szabo, L.L., Clinical Chemistry: Interpretation and Techniques, 2nd Ed., (1983) Lea and Febiger, Philadelphia, p. 405.

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