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EVALUACIÓN DEL EFECTO ANTAGÓNICO DE CUATRO CEPAS DE Trichoderma sp.

SOBRE HONGOS CONTAMINANTES DE

SEMILLAS DE PALMA HIBRIDA INTERESPECÍFICA OxG (Elaeis oleífera x Elaeis guineensis).

GABRIEL CHAVES BETANCOURT

OSCAR EDUARDO LADINO REY

CHRISTIAN CHASIN ZAMBRANO

CONTENIDO

ANTECEDENTES

OBJETIVOS

METODOLOGÍA

RESULTADOS

CONCLUSIONES

1

2

3

4

5

En trabajos anteriores evaluaron diferentes

fungicidas y Trichodermasp.

Encontraron hongos como

Rhizopus sp.Aspergillus sp.Penicillium sp.Fusarium sp.

FungicidasMaxim XL

VitavaxFolicur

Mancozeb

Fuente: Autor Fuente: anavl.blogspot.com

ANTECEDENTES

http://anavl.blogspot.com/2015/02/antibiograma-cmc1b-bach.html

Trichoderma sp

Micoparasitismo

CompetenciaEspacio

Nutrientes

Antibiosis

Metabolitos secundarios

Antibióticos

Inducción de resistencia en plantas superioresDeuteromycota

Hyphomycetes

Hifales

Moniliales

Trichoderma sp.

Phylum

Clase

Orden

Familia

Género

(Chavez M. , 2006) (Martinez, Infante, & Reyes, 2013) (Agrios, 2004) (Vinale, et al., 2008)

ANTECEDENTES

ANTECEDENTES

TRATAMIENTO QUIMICO73 días de germinada

TRATAMIENTO BIOLOGICO73 días de germinada

ENDOSPERMO CONSERVADO

ANTECEDENTES



ANTECEDENTES

2,226

4,39

2,402

3,386

0

0,5

1

1,5

2

2,5

3

3,5

4

4,5

5

Plumula Radicula

Cre

cim

ien

to (

cms)

Variables evaluadas

Efecto de tratamientos sobre el crecimiento de Plúmula y Radícula

Trichoderma

Quimico

0,00%

0,20%

0,40%

0,60%

0,80%

1,00%

1,20%

1,40%

1,60%

1 2 3 4 5 6 7 8

% C

ON

TAM

INA

CIÓ

N

Saques

% Contaminación por Hongos

Químico

Trichoderma sp

ANTECEDENTES

ANTECEDENTES

1er 2do 3er 4to 5to 6to 7mo 8vo 9no

%Germinación Acumulada

Químico

15%

Antecedentes

Objetivos

Metodología

Resultados

Conclusiones

1

2

3

4

5

CONTENIDO

Objetivo general

• Evaluar el efecto antagónico de cuatro cepas de Trichoderma spsobre hongos contaminantes de semillas de palma hibrida OxGIndupalma® (E. oleífera x E. guineensis).

Objetivos específicos

• Identificar hongos contaminantes prevalentes en semillas de palmahibrida interespecífica OxG Indupalma® (E. oleífera x E. guineensis).

• Determinar el efecto antagónico de Trichoderma sp. mediante platodual sobre los hongos contaminantes aislados.

OBJETIVOS

Hipótesis Nula

Hipótesis Alterna

No se observa diferencias significativasentre los efectos de las cuatro cepas deTrichoderma sp sobre los hongoscontaminantes de semillas

Existen diferencias significativas entre losefectos de las cuatro cepas deTrichoderma sp sobre los hongoscontaminantes de semillas

HIPOTESIS

METODOLOGÍAPlantación Indupalma Ltda.

Altura de 120 msnm

Temperatura de 28°C (oscilando entre 22°C y 34°C)

Precipitación anual promediode 2497 mm

Humedad relativa del 72,3%

Brillo solar de 2130

horas al año

Evaporación de 1208 mm/año

Identificación de hongos contaminantes

MUESTRA

3 MuestrasIntervalos 20-30 díasDiferentes

lotes

200 semillasGerminación

100 SemillasEmbriones

50 SemillasCalefacción

1050Semillas

METODOLOGÍA

AISLAMIENTO E IDENTIFICACIÓN Y CLASIFICACIÓN DE HONGOS

IDENTIFICACIÓN:• Claves taxonómicas de Carrillo (2003)• Corena, Zambrano y Gualdrón, 2011

PDA x325°C 7 días

>5% por muestra>2% de muestra

global

METODOLOGÍA

Cepas Antagónicas

• T. harzianum

• T. viride

Cepas Comerciales

• T. harzianumSuelo de E. oleifera

• T. virideEspigas de inflorescencia masculina E. guineensis

Cepas Nativas

TharC

TvirC

TharN

TvirN

METODOLOGÍA

Efecto Antagónico mediante Plato Dual

60 mm

60 mm 60 mm

Testigo Patógeno Testigo Trichoderma spAntagonista

Unidad ExperimentalEnfrentamiento

Se marca el crecimiento diariamente8 días, 27°C, Cinco veces.Medio de cultivo PDA.

METODOLOGÍA

(Fernandez & Suarez, 2009).

Inhibición del crecimiento radial Micoparasitismo

Comparación con patógeno testigo Crecimiento de Trichoderma spsobre el micelio del hongo patógeno (línea punteada)


METODOLOGÍA

Comparar el Radio deCrecimiento Antagonista (RCA)con elRadio de Crecimiento Patógeno(RCP).

Ezziyyani et al. (2004)R1 es el radio del patógeno testigoR2 es el radio del patógeno enenfrentamiento

Competencia por espacio y nutrientes

Porcentaje de Inhibición de

crecimiento radial (PICR)


METODOLOGÍA

Elías y Arcos (1984) y citada por Ezziyyani et al. (2004)

Micoparasitismo

(MICMO)

Se midió la invasión de la superficiey esporulación de Trichoderma spsobre los hongos donde se presentecrecimiento sobre el micelio delpatógeno.

Grado Capacidad antagónica

0 Ninguna invasión de la superficie de la colonia del hongo patógeno

1 Invasión de ¼ de la superficie de la colonia del hongo patógeno

2 Invasión de ½ de la superficie de la colonia del hongo patógeno

3 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno

4 Invasión total de la superficie de la colonia del hongo patógeno y

esporulación sobre ella.

METODOLOGÍA


Análisis de Datos

Análisis de datos

Los cuatro antagonistas se analizaránmediante un ANOVA de los resultadosobtenidos de PICR para cada uno de loshongos. Además, se realizará la prueba deTukey (P=0,05) para comparar las mediasentre ellas.

Para analizar el MICMO se hizo mediantela prueba de Kruskal-Wallis para variablesno paramétricas ordinales.

METODOLOGÍA

Antecedentes

Objetivos

Metodología

Resultados

Conclusiones

1

2

3

4

5

CONTENIDO

Microorganismos presentes en las etapas del proceso

54,02%

11,62%

10,17%

8,33%

5,70%

4,40%2,63%

2,52%0,63%

Calefacción

Mucor sp Syncephalastrum sp

A. niger A. terreus

Penicillium sp F Schizhophyllum sp

Levaduras Bacterias

Penicillium sp V

26,03%

18,41%

16,66%

10,00%

4,95%

4,83%

3,86%

3,75%

2,20%2,07%

1,90%

1,35% 1,16%

0,99%0,79% 0,70%

0,19%

0,17%

Germinación

Schizophyllum spSyncephalastrum spMucor spAspergillus terreusRhizopus spT virideLevadurasAspergillus nigerAspergillus fumigatusPenicillium sp VFusarium spAspergillus flavusPenicillium sp FFusarium sp 2

50,37%

11,71%

10,35%

10,29%

4,21%

3,03%2,82%

1,96%

1,90%0,73% 0,63%

0,63%

0,63%0,41%

0,32%

Embriones

Schizophyllum sp Levaduras

Mucor sp Fusarium sp 1

Syncephalastrum sp A. fumigatus

A. terreus No identificado

Fusarium sp 3 T. viride

Basipetospora sp Penicillium sp G

Penicillium sp NB Bacterias

Penicillium sp F

RESULTADOS

HONGOCódigo

ETAPA DEL PROCESO

Calefacción Germinación Embriones

Aspergillus fumigatus IPS01X X

Aspergillus niger IPS02X X

Aspergillus terreus IPS03X X X

Fusarium sp IPS04X X

Fusarium sp IPS05X

Mucor sp IPS06X X X

Penicillium sp IPS07X

Penicillium sp IPS08X

Rhizopus sp IPS09X

Schizophyllum sp IPS10X X X

Syncephalastrum sp IPS11X X X

RESULTADOS

Identificación de hongos contaminantes

Mayor contaminante de semillas en germinación.Disminuye tasa de germinación(Zubir, et al., 1995, citado por Dikin, et al., 2003)

Microorganismos no reportados anteriormente

Chrysosporium sp.

Schizophyllum sp

Syncephalastrum sp.

Microorganismos reportados no encontrados

Sclerotinia sp.

A. clavatus

A. ochraceus

RESULTADOS

RESULTADOS

Fuente GL SC MC F P

Tratamiento 3 0,2395 0,0798 105,8 0,000

Error 16 0,0120 0,0007

Total 19 0,2515

R-cuad 95,2% Desv. Estand. 0,02747

ANOVA multifactorial

56,5%

43,7%

61,4% 61,0%

0,0%

10,0%

20,0%

30,0%

40,0%

50,0%

60,0%

70,0%

TharC TharN TvirC TvirN

PIC

R

Antagonistas

PICR de A. terreus (IPS03)

H GL P

16,07 3 0,001

19,00 3 0,000

Prueba de Kruskal-Wallis

0 0 0

2

0

1

2

3

4


Esca

la M

ICM

O

Antagonistas

MICMO de A. terreus (IPS03)

Aspergillus terreus IPS03

Mucor sp. IPS06

Fuente GL SC MC F P

Tratamiento 3 0,0362 0,0134 26,15 0,000

Error 15 0,0069 0,0005

Total 18 0,0431



H GL P

16,89 3 0,001

17,83 3 0,000


RESULTADOS

RESULTADOS

Fuente GL SC MC F P

Tratamiento 3 0,0686 0,0228 74,83 0,000

Error 15 0,0045 0,0003

Total 18 0,0732


ANOVA multifactorialH GL P

16,07 3 0,001

19,00 3 0,000


0 0

4 4

0

1

2

3

4


Esca

la M

ICM

O

Antagonistas

MICMO de Syncephalastrum sp. (IPS11)

Syncephalastrum sp. IPS11

RESULTADOS

Fuente GL SC MC F P

Tratamiento 3 0,2395 0,0798 89,4 0,000

Error 15 0,0134 0,0008

Total 18 0,2529



H GL P

10,71 3 0,013

18,75 3 0,000


0 0

1

00

1

2

3

4


Esca

la M

ICM

O

Antagonistas

MICMO de Schizophyllum sp. (IPS10)

Schizophyllum sp. IPS10

RESULTADOS

9876543210

80

70

60

50

40

30

20

10

0

Día

Da

tos Y

P3

T3

TestigoP

TestigoT3

Variable

Efecto de Trichoderma viride Comercial sobre Schizophyllum sp

(•) Crecimiento del patógeno en plato dual(■) Crecimiento de Trichoderma sp en plato dual a 60 mm de distancia (▲) Crecimiento de Trichoderma sp testigo(♦) Crecimiento de patógeno testigo

Dis

tan

cia

(mm

s)

RESULTADOS

0,0%

10,0%

20,0%

30,0%

40,0%

50,0%

60,0%

70,0%

80,0%

90,0%

IPS01 IPS02 IPS03 IPS04 IPS05 IPS06 IPS07 IPS08 IPS09 IPS10 IPS11

% P

ICR

Hongos contaminantes

PICR de las cuatro cepas de Trichoderma sp. sobre hongos contaminantes de semillas


Noveriza y Quimio (2004)los antagonistas promisorios deben tener más del 60% de inhibición del crecimiento radial

CONTENIDO

Antecedentes

Objetivos

Metodología

Resultados

Conclusiones

1

2

3

4

5

Se aislaron e identificaron once cepas de hongos prevalentes enel proceso de germinación de semilla de palma híbridainterespecífica OxG Indupalma® (E. oleífera x E. guineensis) delos géneros Aspergillus sp., Fusarium sp., Mucor sp., Penicilliumsp., Rhizopus sp., Schizophyllum sp. y Syncephalastrum sp.

Las cuatro cepas de Trichoderma sp. inhibieron el crecimiento delos hongos contaminantes de semillas de palma híbridainterespecífica OxG Indupalma® y se presentaron diferenciassignificativas entre los efectos de inhibición del crecimiento detodos los antagonistas usados.

CONCLUSIONES

La cepa de T. viride comercial es la más promisoria para el usocomo antagonista, debido a que inhibe en gran medida (>60%PICR) a seis de los once hongos estudiados, y de los cuales, notodos son inhibidos a su vez por los demás antagonistas.

La cepa de T. viride comercial presentó parasitismo en diez de losonce hongos aislados y en siete de ellos colonizó y esporuló lamitad o más del micelio del patógeno.

Se hace promisorio el uso de moléculas biológicas para el controlde hongos patógenos en proceso de producción de semillashibridas de palma de aceite.

CONCLUSIONES

GRACIAS

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