REPÚBLICA BOLIVARIANA DE VENEZUELAUNIVERSIDAD DEL ZULIAESCUELA DE BIOANÁLISIS

CÁTEDRA: MICOLOGÍAVI SEMESTRE

MARACAIBO, 17 DE FEBRERO DE 2010

ESQUEMA

1. ¿Qué técnicas se aplican para realizar microcultivos?2. ¿Cómo se diferencia un Rhizopus de una Absidia?3. Diferencie el género Sincephalastrum del género Mucor4. Diferencie Acostroma de Peritecio5. ¿Cómo se da la reproducción asexual de los Ascomycetes?6. Diferencie un Espermogonio de un Teliosporo7. ¿Cómo está constituido el Basidiocarpo?8. Dibuje una conidia de origen Tálico y una de origen Blástico.9. Diferencie el Coremio del Esporodoquio10. Dibuje la filamentización Micotórula con Clamidoconias11. Mencione las pruebas a realizar para llegar a identificar una levadura12. ¿Qué observa en un examen directo de una Piritiasis Versicolor?13. Diferencie un ataque Ectothrix de un ataque Endothrix14. Diferencie Microsporum canis de Epidermophyton floccosum15. Diferencie Cladophyalophora carrionii de Phialophora verrucosa16. ¿Qué observa en un directo de una Esporotricosis?17. Dibuje la forma parasitaria de una Hitoplasmosis18. Dibuje el cultivo a 28ºC de una Coccidioidomicosis y la forma parasitaria de

Paracoccidioidomicosis19. Dibuje la forma parasitaria de una Candidiasis, Zigomicosis y una Criptococcosis20. Diferencia Aspergillus flavus de Aspergilus fumigatus

1. ¿Qué técnicas se aplican para realizar microcultivos?

Cuando el examen directo no es suficiente para conocer la identidad del hongo, se necesitan de otras técnicas adicionales, como el cultivo en lámina o Microcultivo, ya que permite determinar el modo de desarrollo de las conidias o esporos con respecto a las estructuras que los originaron.

Existen dos métodos: El de Riddel y el de Rivalier y Seydel (modificado por Borolli)

Método de Riddel (1950)

El equipo estéril está conformado por:

Con la ayuda de un bisturí haga cuadritos de 1 cm aproximadamente en una placa de petri conteniendo Saboraud Dextrosa Agar, para ello coloque previamente un papel cuadriculado debajo de la placa.

Coloque con el bisturí, un cuadrito del medio de cultivo, sobre la lámina portabobjetos del equipo estéril.

Inocule en los cuatro lados del cuadradito del medio de cultivo, el hongo en estudio.

Tome con la ayuda de una pinza una laminilla, previamente esterilizada con alcohol y flameada, y colóquela sobre el bloque sembrado.

Abra cuidadosamente la tapa de la placa y agregue 8 cc de agua estéril aproximadamente.

Incube a 28ºC hasta que ocurra la esporulación (1 semana aproximadamente)

Retire la laminilla que cubre el cuadradito y monte con lactofenol sobre una lámina portaobjetos.

Retire el bloque del medio de cultivo y descarte. Coloque una gota de lactofenol sobre la lámina en el sitio donde estaba el bloque y cubra con una laminilla.

Saque el exceso del líquido de montaje de las dos preparaciones. Observe al microscopio y anote las características de las estructuras (forma

y color de las conidias, tipo de micelio, etc.)

Placa de Petri

Lámina portaobjetosLaminilla

Varilla de vidrio en forma de U

Muestra

Método de Rivalier y Seydel (modificado por Borolli)

En un equipo estéril (igual al descrito en el método de Riddel) coloque, con la ayuda de una pipeta serológica o asa de platino una capa delgada del medio de cultivo, previamente licuado, sobre la lámina portaobjeto; deje solidificar.

Sembrar un pequeño fragmento de la colonia, cuando solidifique la capa del medio de cultivo. Invierta la lámina. Colocar agua estéril.

Incube a 28ºC hasta que ocurra la esporulación (una semana aproximadamente)

Coloque la lámina en la estufa para secar. Retire cuidadosamente la parte levantada del centro de la preparación y agregue una gota de lactofenol. Cubra con una laminilla.

Observe al microscopio y anote las características de las estructuras.

2. ¿Cómo se diferencia un Rhyzopus de una Absidia ?

En el género Rhyzopus, los esporangióforos parten de unas hifas diferenciadas en forma de raíz llamadas rizoides. En cambio, en el género Absidia, los esporangióforos parten de unas hifas especializadas que conectan dos grupos de rizoides llamadas estolones.

3. Diferencie el género Sincephalastrum del género Mucor

La diferencia recae en el tipo de esporangio. En el género Sincephalastrum, el esporangio está conformado por esporangiolos de forma elongada o cilíndrica que contiene de 10 a 15 esporangiosporos arreglado en hilera (merosporangio); en cambio, en el género Mucor, el esporangio es globoso y contiene millones de esporangiosporos en su interior.

4. Diferencie Ascotroma de Peritecio

Ambos son tipos de ascocarpos. El Peritecio tiene forma de botella, presenta una boca u ostiolo para la salida de las ascosporas, además, presenta unos pelitos (perífisis) que ayudan a salir a las ascosporas y son elementos de protección, y al exterior presenta unas hifas estériles (paráfisis). Los ascos se encuentran en una capa basal llamada himenio.

El Ascotroma tiene forma de masa o plectoprosenquimatoso, presentando una capa externa dura (preténquima) y una capa interna laxa (prosénquima) en donde los ascos se producen dentro de lóculos o cavernas, sin que se desarrolle una pared que delimite cada lóculo.

5. ¿Cómo se da la reproducción asexual de los Ascomycetes ?

La reproducción asexual se da a través de la formación de conidias (término generales que se aplica para todas las esporas asexuales). Su origen es de tipo blástico, es decir, que la

espora deriva de una célula madre conidiógena, la cual después de un proceso de división celular da origen a las conidias, quienes pueden estar libres, en racimo o en cadenas.

6. Diferencie un Espermogonio de un Teliosporo

El Espermogonio corresponde al estadío 0 del ciclo de la vida del orden Uredinales (royas), en el que se forman los espermatóforos, que producen los espermacios (masculinos), e hifas receptoras y flexuosas (femenino)

Por otro lado, el Teliosporo de los Uredinales, corresponde al estadío III del ciclo de la vida, y corresponden a esporas sexuales binucleadas que se producen en los telios.

7. ¿Cómo está constituido el Basidiocarpo?

Es un cuerpo fructificante que está constituido por una zona interna o himenio, dentro de ella se encuentran los basidios (conteniendo los basidiosporos), los cistidios (estructuras estériles de mayor tamaño) y paráfisis (estructuras estériles de igual tamaño). También presenta un subhimenio y trama.

8. Dibuje una conidia de origen Tálico y una de origen Blástico

9. Diferencie el Coremio del Esporodoquio

De los cuerpos fructificantes, el Coremio es un grupo de conidióforos que se unen en la base y en parte de su recorrido a modo de cuerda; a menudo el extremo del coremio es

Origen TálicoClamidoconidia

Género Fusarium

Conidias producidas por la transformación de un célula vegetativa intercalar o terminal con engrosamiento y redondeamiento de la pared.

Origen BlásticoFialoconidias

Género Penicillum

Conidias de origen enteroblástico que se forman en cadenas basipètas en el interior de una célula conidiógena llamada fiálide. Son unicelulares, globosas, elipsoidales

muy ramificado. Las conidias son unicelulares, subglobosas u ovales y se forman en los extremos de los conidióforos.

El Esporodoquio, en cambio, es una masa compacta de conidióforos que constituyen un estroma prosenquimatoso en forma de cohete; en los extremos de los conidióforos se forman las conidias.

10. Dibuje la filamentización Micotórula con Clamidoconias

11. Mencione las pruebas a realizar para llegar a identificar una levadura

EXAMEN DIRECTO: Blastoconidias o pseudomicelios. CULTIVO: En Sabouraud con Antibiótico, Extracto de Malta, Malta agar. Las cepas

aisladas deben ser sometidas a lo siguiente: Estudio macroscópico: color, consistencia y aspectos. Características de cultivo:

Malta Agar a 28ºC y 37ºC Agua de Malta a 28ºC: Se evidencian características macroscópicas

(velo o película, anillo y tapón o depósito) y microscópicas que caracterizan a los diferentes géneros.

Características Morfológicas: Diferencia los géneros. Prueba de los tubos terminales: presuntiva para C. albicans. Filamentización o técnica de Darmouth: Tipo cándica, micocándida,

blastodendrium, artroconidias, micotórula con clamidoconidias y negativa.

Características Fisiológicas: Diferencia las especies. Auxonograma: Prueba de Asimilación de azúcares.

FilamentizaciónPrueba Diagnóstica Cándida albicans

Acúmulos de blastoconidias en las uniones de la pseudohifa (micotórula) y clamidoconidias terminales.

Zimograma: Prueba de fermentación de azúcares. Utilización de compuestos nitrogenados. Crecimiento de medios libres de vitaminas. Producción de compuesto amiloides extracelulares. Otras pruebas:

Producción de Ureasa. Crecimiento a elevadas temperaturas. Resistencia al cicloheximide. Producción de esporos sexuales. Inoculación en animales.

12. ¿Qué observa en un examen directo de una Piritiasis Versicolor?

Blastoconidias redondas e hifas cortas, septadas, ocasionalmente ramificadas.

13. Diferencie un ataque Ectothrix de un ataque Endothrix

En el ataque Ectothrix las artroconidias están dispuestas alrededor del tallo piloso, en cambio en el ataque Endothrix, las artroconidias están en el interior del tallo piloso.

14. Diferencie Microsporum canis de Epidermophyton floccosum

La diferencia radica en las formas de las macroconidias y la presencia o ausencia de microconidias.

Microsporum canis es un hongo compuesto de hifas septadas, hialinas, abundantes macroconidias de pared gruesa, espinosa, fusiforme, de extremo puntiaguados y que tienen de 7 a 15 septos. También pueden observarse microconidias en forma de pera, hifas en raqueta, cuerpos nodulares y clamidoconidias.

Por otro lado, Epidermophyton floccosum está compuestos de hifas septadas, hialinas; las macroconidias son en forma de masa, a menudo en grupos como los dedos de una mano, tiene la pared delgada y lisa con 2 a 4 septos. No presentan microconidias, abundantes clamidoconidias. Pueden estar presentes hifas en raqueta, en espiral y cuerpos nodulares.

15. Diferencie Cladophyalophora carrionii de Phialophora verrucosa

En Cladophyalophora carrionii se observan hifas septadas pardas, encima de ellas se forman elongados conidióforos macronematosos, que producen largas, flexuosas cadenas de blastoconidias.

El hongo de la especie Phialophora verrucosa está formado por hifas septadas, fiálides en forma de botella, dilatadas en la base y afinadas en la cima, terminadas en collarete donde las fialoconidias permanecen unidas en masa.

16. ¿Qué observa en un directo de una Esporotricosis?

Células de levadura ovalada, alargada, globosa monogemantes y cuerpos asteroides.

17. Dibuje la forma parasitaria de una Hitoplasmosis

18. Dibuje el cultivo a 28ºC de una Coccidioidomicosis y la forma parasitaria de Paracoccidioidomicosis

Forma parasitariaHistoplasmosis

Histoplasma capsulatum

Células ovales o de levadura de 2 a 4 µ de diámetro, monogemantes.

Cultivo a 28ºCCoccidioidomicosis

Coccidioides immitis

Hifas hialinas, sepatadas que se transforman en artroconidias (partícula infectante)

Forma parasitariaParacoccidioidomicosis

Paracoccidioides brasilensis

Células esféricas u ovales, de pared gruesa de 10 a 60 µ de diámetro, que presentan una o múltiples gemaciones o brotaciones anisométricas (de diferente

19. Dibuje la forma parasitaria de una Candidiasis, Zigomicosis y una Criptococcosis

20. Diferencia Aspergillus flavus de Aspergilus fumigatus

Aspergillus fumigatus produce conidióforos cortos, lisos que se expanden para formar la vesícula (uniseriado), la cual produce únicamente en la mitad superior fiálides (sólo es la mitad fértil), de donde emergen en cadena basipeta fialoconidias globosas en masa. En cambio, Aspergillus flavus produce conidióforos largos, de pared gruesa, que se expanden para formar la vesícula globosa, fértil en casi toda su área, puede producir las fiálides directamente (uniseriada) o a través de la métula (biseriada). Las fialoconidias son elípticas al principio y luego mayormente globosas.

Forma parasitariaCandidiasis

Género Cándida

Blastoconidias y pseudohifas, puede observarse también pseudomicelios.

Forma parasitariaZigomicosis

Mucorales y Entomophorales

Hifas anchas de 10 a 15 µ de diámetro, cenocíticas de pared gruesa, ramificadas; puede también observarse pseudomicelio

Forma parasitariaCriptococcosis

Cryptococcus neoformans

Células redondas u ovales, de pared gruesa gemantes, de 5 a 20 µ de diámetro rodeadas de una cápsula refringente que duplica o triplica el tamaño de la célula.