optimización de ensayos celulares para la detección de...

34
Optimización de ensayos celulares para la detección de toxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias. Aplicación en extractos lipofílicos de muestras naturales de Mytilus galloprovincialis Elisabet Cañete Ortiz Aquesta tesi doctoral està subjecta a la llicència Reconeixement- CompartirIgual 3.0. Espanya de Creative Commons . Esta tesis doctoral está sujeta a la licencia Reconocimiento - CompartirIgual 3.0. España de Creative Commons. This doctoral thesis is licensed under the Creative Commons Attribution-ShareAlike 3.0. Spain License.

Upload: others

Post on 11-Oct-2020

1 views

Category:

Documents


0 download

TRANSCRIPT

Page 1: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

Optimización de ensayos celulares para la detección de toxinas marinas responsables de intoxicaciones

alimentarias. Aplicación en extractos lipofílicos de muestras naturales de

Mytilus galloprovincialis

Elisabet Cañete Ortiz

Aquesta tesi doctoral està subjecta a la llicència Reconeixement- CompartirIgual 3.0. Espanya de Creative Commons.

Esta tesis doctoral está sujeta a la licencia Reconocimiento - CompartirIgual 3.0. España de Creative Commons.

This doctoral thesis is licensed under the Creative Commons Attribution-ShareAlike 3.0. Spain License.

Page 2: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������

Page 3: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

Page 4: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

� � �������������� �� �

� �����������

����� � ���� ��������� �� � ���� ��� ��� �� ������� � � ��� �������������� � � ���� ���������

� ����� �� � � ��� ! ��� ����� ���� � � �"������ �������#����� ��� ������� ��� ���� � �

�"������ ����� ������ ��� ����� �� � � �� ��� ����� � ��� � � ���� $�

�����!������� ���������������� ������� ��� ����������� ������ ������%��

���������������� ����������& ��� ��� � ���������������������� �����'� ������

�� � ������������������ ������ �����������������������������������$�� !��������

�������� �� #������ � �������� ����������� ��� ��� ���������� ��� �����(� � �������

� �����(������������ �������$�����������# ��� ������� �&������)������%�*%�+ ��

� ����������"������������������������������������������ ������#������ ��������

���� ���������� ���� ���������������# �#�,!����� ������ � ����� � ������������

)������%�*%��

��� � ������ ������� �����"� ��� � ����� )����� �%-*� ���� � ��� ���������� � � �����

��������� � �� � ����� �#������ ������ $� ���� ���� ���� ������ �� � � � #������ $�

��������!����������� ����������� ������ ����� �� � ����$��'� �"������ � �� ��

�������� ��������� ���������������� ���� ����"����%�

.� !���� � (� � � �� � ��� ��� � '� /�� � ����� ���� � ���� ��! � � �� ������� ��

���������(� � ������# ��� $� � ��������� ��� ����� � ��� ��������� � � ���� ���������

� ����� �� � ��,������� �������������������)������%0*�'� ������ ���� ���� � �

��� ������������$�� ���������� � �� ��������%���

� � ������������������������������������������������������������ �����

1 � �������� ������� �� ���� ��� �� !���� � � ��� �����! ����� ������� � � ���

�� �� � !������������ ������ ���$� ��#���� � �����%������������! ����� �(�

# ���� � � ��! �����(� �� � � � ������� ������� )2���!��� ��#��� ������(� 2���*�

���� ��� # ����� � � ������� �� ��������� �� '� � �������� ����������� � �

��#������� ������� ���� ������ �� �� � ���� ��� ���������� ����������� � � ��� � ��

������%� ������ ������(� ����������� ��������� � � ���� � � �������� �� �� �� � �

Page 5: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � -������������� �� �

���!��# ������ $� ������ ��(� � � �������� � ��#������� !�������� �� $� � � "�����

������������� ����!�����! �����������#������� ����� � �� �� �%��������������

��������� �� ��� ����� ��� ������'� ������� ��������� !��� � � � ����� ��

���� ��������������������� ���������%�+��� ������� ��� ���! � � ��! � ���

� �����������'� �� �&�������!������ �!����� ��������������# ��) �&�����*�

$� � � ���� ������� ���������%� ������ ���������� �� ����������� ���� �� ������� � �

���� ���� � � ���# � ������ ���� � �� �� �#�� ����� ��� ������ �3������ $� ����� ����

� ���� �� ������������������%�

����������!�����������"�#����������������������$�����%�����

&%������%�'��������(��&')�

4��� ������� '� � �������� �� � ��� ��� ����� ���� )1����& ���� +& ��!��&�

5�����#(�1+5*������#������ ������ ���������"� � �� ����! �����%�4����������� ��

������� � ������� �� � � ���� ���������� ��

����� ����� ��� ��#" � �� �� � � 6� �� ,�����

�7�������)��*(�������!����������)189*:��$����189:

�� );�� 1���&(� ����<� .�������(� �� ��%(� �=>?*%� ���

��� �� �� ��� � � $� �� � !���� �&������� � �

!��!������� � + ��8&�� � )���� �� �&���&���� �<� 55�*�

)�������� ��� 8�7��(� �=??*%� ���3�� ��������� � �

� ��� 55�� $� ��� 55��%� �� ��� � �� �������� � �

���������� �#���� ���� � �� ����� ���� ��� )�%�%*� �

��� ��$�� ���� )���� � �������$<� @��*(� �� ���

�� � ��������� � ��� ����������� �����������

������ � ���� � �� A�� B� � � ��� �������� )4 �&��� ��� �

!�!�$<� 41A�*� � � �C�:���� D#�7#%� 5���� � �������� ��

��� ����� ������ � � ������ ������� ��� �� ��� ���� ����� �� ��� � � ����� � � ����

��#�� � �� !����� �� � � '����� ���� ������ )8����� '����� �� E������<� 8�E�*� �����

"�� ��"����6����F��(�189:��F��(�189:��F��%C�)�E+�(����?�*%�������������� �����

Page 6: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � 0������������� �� �

� ������������#���� �&������ ���������� ��������/����� ���� ��(��������$�

��������������%�4���� ������� ��� � ��� � ����&���������-���0�� ���� ���"��� �

����# ����� ���������������������%�G��� �&��� ��������� �� ������ �� ������

� � ���������%� 8����"� � � &�� � ������� ��� ���������� ���������� � � ����� ��

)+�#����� ����%(��=??*�$�# �����������)����� ����%(��==�*%��

4��� $ ��������� ).89�*� $� ���� � �� �������� )589�*(� !� ��� ����������� � �

��������� � �� #����� � � ������� 1+5� $�� '� � ��� ���� ���� $� ����!����� ���� �� ������

����� � ������� ��$��� � � ���������(� "����� ���� � �� $� � � ���� �� ����� �� �������

�����"����(� �����"� � � ������ ��� ����! ����� )@������ �� ��%(� �=?>*%� +�� ����#�(�

����� ���� #������ � � ������� � � ��! � ���� � � ���� ������� �����"����� ����� ���� ���

������������������������������������#���%�

*�����������

4��� .89�� $� ���� �,��#��� ��� ����"� � �� � ������(� �� ��� ������� ����� ����(� $� � �

& �&�(� �� &�$� ��� ���� ������ � � '� � �������$��

���� �#������� ��� ��&����������# ���%�5������

���� (��� ���� ������� ��� ����#�����'� ������ �

"��������������������� ����������� �%�5�������(� �

�� ��� �� ��� ������������ ����� �#���� � � &����� ���

�#�7#��������������������� � �����)�� � �� ��*�� �

�� �#�7#� ���� � �(��� �������� ����������� �� ��#���

!� �� �� � ����������� )�� � �� ��%(� ����<� 8������ ��

��%(� ���-*%� G�� ������ (� ����� ����� ��

�� � ����� � ��� ����� �� � �"������ � �� � �����

���������� ������������)�,������������ ������

� ��������������� �*����������������� � ������%��

H �� �������� �������� ������$�������� ����� ��

� � �����������(�&�$������ �����&�����#���������� ���� ��)8������ ����%(�����*(�

��'� � � � &�� � ������� ��� ���������� � � ���� ������� � �� ����� .89� �� ��� � ���� � �

Page 7: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � A������������� �� �

!�������� ������������������ �!��!��� �� ������)51�*(����� ��� � ����51��III(�'� �

�� #������� ���������� � � ��� ���������,������)��!���� ����%(����-*%������ ���

�������� � � ���������� �#���� ���� �$ ���� ����� ���� ��� � ���(� � � ����� � �

������#�� � ��8�E�6�.89�F��(���:&���.89�F��(�0A:&$����$.89�F���$�0A:&$����$:

��:&���.89�F��(A��)�E+�(����?�*%�

'��������������

4��� 589�� ��� ����� ����� ����"� � �� � ������� '� � � �� ���� �� ��� ��� !� ���

�����!������������������������ ���������� � ���� � ������������������������� ��

�����1+5%��������������� ��� � ��� ������������

�� �� �� � � ���!��# ������ '� � �� ��� $� ����

��#" � �� ).�������� �� ��%(� �=?A*�� ����� �

��!������� �� � �����#����� ����� � �� ������� ���

����� ���� � ��������"������$�� �������� ��������

� � ��� � �� ������� ����� ����%� �� �������� � �

���������� �#���� � ���(� � ���� '� � � � ����������

����������� � � ������� ��� � � ������� ��$� ! �������

)@�� �� �� ��%(� ���0*(� � � ��� ���� '� � ���

������������ ����� ���� ��� � � 589:�� ����!������

�� � ��� ��� 41A�� � � ��=� D#�7#(� �� ����� '� � ��� ������������ ����� � � A� ����

D#�7#� �� �������� ! ����� ������� � ���� ���� �%� 4��� 589�� ����!������� ����������

)589:�� $� 589:�� � ��� ,����� )589:���**� �� �������� ����� �� � ���� ����� ��

��� ����%� ��������� ���� � ��� ���������� �#���� � � ��� 589:C� )I��� �� ��%(� ���?*�

� �� ����� '� � ��� ������ � ���� � ���� ���� � �� ����� ���� ��� �� � � A��� D#�7#(�

�� �����'� ������ ���������� ���� ������ ! ������������������������ ���������%�

5������������(����������������� � ����������������� ������� ���������� � �� ��

��$��� ! ���� ������ '� � � ���� )I��� �� ��%(� ���?*%� G�� � � &�� � �������

���������� �� � &�����%� 4��� ������ � ����� �� � � ����� ������� ��� �3�

� ���������(� ��'� � ��� ��� ���� � � ���� �������� � ��������� &����� �� ��� ���

Page 8: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � C������������� �� �

������ �� ��� ���������� � � �� ��� ��� ��� � �� ���� �'� � ��� � �����(�

���� ��� � � ����� #������� ��������� �������� ����������)����#&��� ����%(�

���>*%�5������ � ���������������$���������� ��� � ����� ������� ����589:�� �

�����������#������������������� �� �������� ����� �����589�(�� ��� �'� ����589:��

���� ��� �� ������� ������� � ����$�'� �������589������ ��!������ ����������� �

"���� ���� ���� ���� � � � ����������(� ���� � ����� � ���� ��������� )@�� �� �� ��%(�

���0<�+���7�� ����%(��==><�+���7�� ����%(��==?<�+���7�� ����%(������.�������� ����%(�

�=?=<� *%� �� ��� � �� �������� � � ���������� �#���� ���� �$ ���� ����� ���� ��� �

���(�� � ����� � �����8�E��� ���������������#��6�589:�(�589:�(�589:-(�589:

0(�589:C�$��589:��%�G��� ����#��8�E���������������� ����6�589:>(�589:?(�589:�

=(�589:�����$�>: ��:589����(������� � ������������� ����$�������)�E+�(����=�*%�

����������!�����������"�#�����������������+�����,������

$-+����������'��������(�-.')�

4����J�������#����'� � ����(�����189�(�����.89��$�����589���������� ���������"� ��

'� � !� ��� �� ��!������� ���� ���� ���

� �� � �� �������� ������ � �� ����� 1+5�

)I�����(� �==A*� � �� '� � ���� � �

���������������� �����$�189��$����

� ����������������������������(����

������ ������$���,����������� ����(�'� �

���� ����� � � � � � ����

�������,����:�� )�J�:�*� )+���7 � �� ��%(�

�==?*%� ��� � ��� ��� �������� ����

�� ������� ����"�����(�'� ��� � �����

�� ������� �����,����� ��! � � � ��� � ���� � � � ���� �� � �������(� ���� �� ������� �

K������������ �& ��!��&� ������#L� )�J5*� )�!���� �� ��%(� �===*%� ��� � ����� � �

� ��� ��� � &������ ����$ � ��� ��(� ������(� ����� �(� $� ������ � �

����#���� ���������������������'� �� ��� � ��� ����������� ��� �������1+5%�

Page 9: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � >������������� �� �

+�� ����#�(��������� �� ��� ���������� ������� ���� ����� ���������� � �� ������

� �������(���� � ��� �,��� ������� �� ����� ��������<���!��������� ����������(�

�������(� ���,������ ���#� ����(� �!������� � � ����#�� � & #���(� � ������ �

����/��� ��� � �� ����� $� ����(� � $� �� �� � �� ���� ��:=�� ������� �� ��� ������ � ����

� ����� ��A��D#�7#�)8M� �� ����%(����?*%��4�������������������� �=���D#�7#�

� ���� �� �� � ����� ��#��� �� ����� � � ���������� � ���"�� � � �0� &����(� ���

����#�(� ��� ��������� � � ����� �� ��� �� � ������� ��� �� 0� &����(� � � �����

� ��������� ��#������� ����� ��)I��(��(��==?*%�2����� ����� ���� �&��� �������

-�� �,��#��� � � �������,����� )8M� �� �� ��%(� ���?*(� � � ���� ���� �� ���� �,��

�������� �� � ��� � �� ��� ����� ���� $� �� ��� ���������� ��� �� �������,������(� �� $�-�

)�J�:�(� �J�:�� $� �J�:-*%� +�� ����� ����� ����"� �%� ��� ����� �� E���� +�! �$�

���&����$�)�E+�*������ ������ ����� ��� ������������ �������)8�E�*�� 6��J�:��F�

�(��J�:��F��(?(��J�:-�F��(0(��J�:0�F��(0�$��J�:A�F��(��) ���� ��� �����������

@��� �%�%*%� + � � ����� � �3� ���� ������ ��� ����� �� � � ����� ������(� � ��� ����

�������� ���� � �� � ������� � � ����� � � � ���� � � !����� ������������ � � ��

������� � � � #����� � ��� ���� ����������6� ��� ��� � �� ������� $� �� �@5��

����� ������)��!���� ����%(����A<���!���� ����%(����C<�H��,� ����%(�����<�H��,�

����%(����0*(����� ! ������ �� ��#�������� ������ �'� � ���� �������)H������� ��

��%(� ���><� 8M� �� �� ��%(� ���A<� ;�����/�� �� ��%(� ���C*(� $� ! ����� � ��� ��& ���

����� ������ � ���� � ��� ��������� � �� !��������� ��� � � ���� ��� � � ��& ���

)���������$����& ����*�)2 ��������� (����><�H������� ����%(����>*%�

� �

Page 10: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � ?������������� �� �

����������!�����������"�#������������'�����+�����$'����/����

&%������%�'��������(�'&')�

1 ��������������� �����������$�#��� ����

� � ���� � �����(� "�� � �� ��� � � ����

� ��� ���� �������� ���� �������

���� � � ��� ��������#���'� �&��� ������(�

���� � �(� ��$��� �� ��%� � ���

� ��� ������������ � ��������������

�� #����� � � �,�� � � -�� � ��� � ��

���������� )�E+�(� ���=�*%� +��

#�������� & � ��� ������� ������ �� � �#��%�

�� �� � #����� � � �� ���� ��� ����������

)+89*(�'� � ������,����� � �� ������������

��������� � �� ����� 5+5� $� ���� ��#" � �6�

����������� )G �+89*(�

� �������$����������� )��+89*(�

� �������$� ����������� )��G �+89*(� #�$��������� )N89*(� $� ���� �,��#��6�

� �������$��$� ���� ������� �%�+ �&�� ����� ����� 8�E�� �� � ������#" � �� � � ���

+89�$�����������+89�)�������*������� � �������������������� �������)�E+�(����=�*%�

Page 11: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � =������������� �� �

������ �0� �������/� �1!�#������� �������� $�"2�)� ����� &�3� /� ����4����� �5���� ���� ���� �� ��G8�@� 5� �� � � ����� �� ��� � ����� � � ��! � � �� ���������� ��������� ���� � ��� ���������� � ������� � � ����� ������� )���� � ����� ���� @��(� � ��������"�� �����$ �������� ����*(��������$���� ������'� ��������������'� �� �&��� ��������� �� � � � ����������������� ����� ��,��� �������������$� �# ������������ ����� ����� ������# ����������%��

����������������3������ ����� ��� �������� � �� � �� ������� �)�����# �#�� ��

������� �&� ��<� ;N+��*� �� � � �� � ���� � ������� � ����� �(� $� ��� ��$���

��������� ������ �������� ��"������ ����� �(� �������������� ��� � �����

)���� ����� ����%(��=>=<�O�#����O�#(����-*%�4���+89��$��,��#������3�� ����

����� ����� ������� ����� ������$����'� ������������������ ��������������"��� ��

�����)� ��P� �������� ����(�����*%�4���;N+������� ������� ��� ����# �����

� � ��� ���� �� � � ����� � �3������ �'� �"����(� ���� ��� ������� $� �3������

���� ���%� 4�� ��� ����� � � ��� !���� � � ����� ���� �� �� � � � �� �����

��� �� ���� �������� �� � ������ �� � ��� ������������� � � ��� � �����%� 4���

���������� ���'� ������� � � ���� ���� �� � � �����(� � � � ����� �!�����(� �� � �

������6� ���,�����(� ����� ���� � ������������ $� �� �� %� 5� � � ���� � �� �����"�

� ������#������� ����� �(�� ��� ��� ���!� �� � %��

Page 12: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � ��������������� �� �

����������!�����������"�#������������-��4�����$-�������

&%������%�'��������(�-&')��

4����������'� ������� � � ��� �����"�������� ��,�������������)1�*��$�

���� � �������%� ��� 1�� � �� � � ��� #����� � � ���� ����,������ $� �� �� ��� � �

������������� ��������%�4���� ������'� ������� ���������#������� ����� ��

)����� �(� ��� ��(� ������(� ������� ��

�������� �*� ����� ����#����� )�"������ � �

� �����(� ��!���*� '� � �� � � ������ &�����

��� � ��%� �� ���������� �� � � ���(� � � �� � �

�� #��� ��� �����$� �� ����� �� %� + � ��� �'� � ��

1�� �� �� �#������ � � � � ���� �� #��������%�

�� ��� ���������� ���� 1�� � � ��� � '� � �� � �

&�� ������������� �� � ���� ��#���������� ��

����� G@1�� )G:� ���� �:���������*� $� �:G@1�(�

� � ���� ��� ��������@5��),������:����:-:)-:

&������:A:� ���:0:����������*� ��������*:Q��

)7�����*�)� �������@���$(��==><�+&���� ��

��%(� ���-<� ;�� 1���&� �� ��(� �==>*%� ��� ,�����

���������� ��,���!����������� � ���� ��� ��

����� �:G@1�� )4���� �� ��%(� �==><� R��� �� ��%(� ���A*%� + � � ��� � �����"(� '� � ���

��������� � � � � ���� �� � �� ����� �:G@1�� ���� �� 1�� �� � � � �� � ������ $�

��!��� � ������������� ���� # �����)G�� ���� ����%(��==�*�$�'� � �����'� ��� ��

� � ����� G@1�� �� ���� # � ������ � � � � ��� ���� # ����� ���������� ���� ��

1�� )E �,� �:+,�& �� ��� G�� ���(� �==-<� G�� ���� �� ��%(� �==�*%� +�� ����#�(� ���

���������� �� � ���� ��G@1���������������������� �� � ���� ���:G@1������1��

� � ��� �� ��� � ��� ���� ������ ��$� ��� ����� �� ��� ��� ���� ���� ���� �� 1��

)G�� ���� �� ��%(� �==�*%� 4��� � ���� �� ��� ����� �� � � ��� �������� � � ���� ���� '� �� �

� � ��� �������������������� ��� � ���� ��#��������� ���3��������� � ������%�

Page 13: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � ��������������� �� �

����������!�����������"�#�������������!��� �����

$��!��������&%������%�'��������(��&')�

��� ��������� #����� � � ���������� '� � ������ � �� G+5� ��� ���� �� � �������

)5�8��*%�4���5�8����������� ���������"� � ��� ������(����������� ��$� ����� �� ��2�

,�����'� �� ��#������� �����#��������$��(�� #3���� ����������)4�� ����%(��=?�<�

+&������ ����%(��=?C*%�4����������� ���������� ���������������5�8�:��$�����5�8�:-(�

�� ��� � ��� 5�8�:�� ��� �,��

������ � � � ���� �� � ������(�

�� ����� '� � � �� #����� �� ����

�������� �� ������� ��� ��� 5�8�:��

$� ��� 5�8�:>(� � �� � #����� � �

�� ���� ��� �,�� ��� � (� ���

5�8�:�� )4���� �#(� ����*%� ��� �

#����� � � ������� �� ��������

��� ����������A�� �������������

S�� ��;N+��)��� ��������N��� �(�

�=?A<� � 5���� �� ��%(� �=?>*(� ����

��� �������� �����#���� � ��

�� ���� � � �� ������ � �� ����(� ������� � �� ��� ����� � � ����� �� ����� �� �,��

���������(� �&������ � � ��� ���������� � �� ����� � ������� � � ������� � �

�������������� )T #�����&� �� ��%(� �==?*%� +�� ��� � �� ������� ������������ � �

;N+��%��

4��� �������� �� � ������ ��������� ���� �� � ��� ��� ��������� ����$ �

� ������ #������� ����� �� )��� ��(� ������(� ����� ��*� $� ����#�����

)��� �� ���(�����#��(�������(��"���#�(��������� �*%�����

� �

Page 14: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � ��������������� �� �

����������!���������������!������$2'0���!������2��%�

'��������)�

��� �� ���� ������� � ����� � �� �������������� ��$������������ ��������������

��� ������� � � � ������ ���������� ���� #���� �������(� ������� �����������

��������� � � ���� ��! � � �� �� �� �� � � ��� �������#�� � ����� N���� ��������

)���� � �������� �����*(� '� � � � �������� � � ������ )� �� ��� �� ��!���*%� 4���

�������� ������������������������ ���� �� �� ���������� ���������#��������)�89*(�

#���� ����$������������)@89*%���

4��� �89�(� ����� ������ � ������� �� � � ������� ���� � ������ ������(� � ���

���"������ � � ������ ��� '� ����� $� ���������� ����#���� �������� �� ���� 5�8��%� +��

����� ����� ����"� �� � ������(� ���������� �� '� � ���3�� � ��� ������� A� � � ���

���������S�� ��;N+��)���� ��1 �&������ ����%(��===<�4��� �� ����%(��=?>*��� ��(�

����#����'� ������� � ������(��������������������� �;N+��%��

4��@89� ��������"� ������������� ���! � � ��������� ����� ��� ��������)N�����7$�

��� 1��$(� �==�<� O����7 $� �� ��%(� ���0*%� ��� ��� ��� � � ������ ��$� ������ � �

Page 15: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �-������������� �� �

�#��� $� ��� �����

� � ���� ��

��������� � �

� �����(� ���� ����

�� �� � ��

��� �� �������� �

� �� � ���� �

�����%��

��

��� #���� ���� �� �����"� �� ����"� �� � ������ '� � ���'� �� �� ����� � � ��������

� � �� � � � ������� � );N5�*� )��$� ��� �� ��%(� ���?*%� 5��� ���� ������ � ������(� � �

������� ��� ������������ � � '� � �������� � � �� � ���� � ������ �� �,�� � � � �� ��

��� � ����!3#����)��������� ����%(�����*%�

4��� �������� �� � ������ � � ���

��#��� ��� ��� � ���� ��

#������� ����� �� )����� �(� ��� ��(�

�����*� $� � ����� � � ����� ���

��������������� $� ����#���(� ���

����������# �� �� ����� � � ������� �

�� �����������$� �� �����%�

'����������

4�� ���������� )5�89*� �� ��� � � ���� !�����������,�� ��� � �� '� � ���� %� � ������

���"������ ���A�,������� �������(��������� � �����������)�&�� ����%(��=?�*%�4��

5�89� �! ���� ��� '��������� ����� � �����(� ��� � ����� ��� � �� ��������� � ������ ��

�� ��G�U(�QU��� ���������� �����U%�8���� �������'� �����������(���&�������� ����

�����������:��������)G�U�QU:�85���*(����#������� �� ! ����������� ����5�89� �

�����������)2�� ��������&&��M��(��=?�*(�� �������� ���&��� ����� �'� � �����

������� ������������ ����5�89(����'� ���,������ �!� ���!�����������������#������

Page 16: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �0������������� �� �

� ��� ���#����)2���&����O�(��==><��+�& � �:�����(��==0*%�4��5�89�� ����������

�������)��*��#�������������(�$��'� � �����#�������������������������!�������

� �������� ��'� �!�������������� ��������$� ���� �� ����!���� � � ��!�����

����� �� !����� � �

#���� � � $� ���� ����� �����

�� � ������

��� ������ �� ���3��

����� �� ���#�����(�

�&��� ��� ��� �����

G�U�QU:�85����

)2�� ���(� �=?=*(� � �

!����� �������� �� ���

�������%� +�� ����#�(�

����� � � ! ����������� � ���5�89���� � ���� �� ���������������� ! �������� � ���

G�U�QU:�85���� )E� ��� ��� ;�� H � �#& �(� �==A<� +�& � �:������ �� ��%(� ����*(�

�� ��� �3� � ���������� ���� ������ � ����� �� � � ���� �����%� 4��� �������� ��

� ������� �������� ����������� ������ ���������6���� ��(�������(���������

�� ��� � �,����� �� ����#�(� ������� �� �������� �(� ����� �� � � ��(� ��������

�������� �(� � ����������� � � ��� �� ��� ��� ����(� & ������� $� ������ � ����������%� 4��

�� � ���� � � ����� ������� � � ����� �� &�� ����� � ��������� ��� ���������� ��

� ������������ ��$��� � ������ �������� �� ��6� !� �� (� �������(� ������ ��������(�

���������� ������ ���� ������������$� ���#������������������� �� ������ ��)H���(�

���?*%� 4�� �������� � � ���� � ������ �� �,�����$� �� � � ��������� ����� �� � �� ����

�������������� ���� �������%�

4������������� ����������� ������ �������������������� �� �#������ �����������

��$� ������%�+ �&����!������������� �@���#������ � ���/���==0�)����� ��

��%(��===*(�T��� � ���/�������)8��$���� ����%(����-*�$�� ����� �&��� �������

������ ����,������ � T��� )H���(� ���?*%� + � � ������� �����"� �� ��������� � �

���������� �� � ������������ ��� ��� �� � ���� � � ���� ������ � I������ � ���A�

Page 17: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �A������������� �� �

)����� ���� ����%(����C*�$� ��#������ ����0� ������������������)4���� � �*�����

��� � ����� ��� ������ � � �������#��� ������������ � � ����� ������� � � �

��� ��� ���������%���

��������5�������

��� � #����� � �# � � � �������� �� � ���� '� � � � �� ���� ���� #$��������(�

���������(� ���������� ����� �������� �� � �� � ��� �(� �����"� ��� ���������

K!���� ����#� �����L� �� ������� � � ����� �,����� ���� ��� ����� �� � � ���� ! ����%�

���� � �� #����� ������ $� !���� ����(� '� � ��� � � � �� ��� ������ � � ���

���������� )+� M���� �� ��%(� �==>*%�

4��� ������ � ����� �� � � �����

����� ���������3�� ���������(�

��'� � &�$� &��� ���� '� � ������

&����� � � ���� �� ���� ����(� $�

������ �����)N���� ����%(����-*%�4��

���������� � � ����� ����� ����� �

&������ �3� �� &�� �����

� ��������%� �� @��� �%�%(� � � &��

��� ���� ��������� �� )41A��*� � �

�������>=:��?�D#�7#� � ���������

����!������� � � #$��������

)@���$� �� ��%(� ���0*(� � � &�����

C(=�D#�7#� ���#�����,��#���� � ����������)�����(����?*�$�� �&��������D#�7#�

�����������)V ����(��==A*%����������� ����������� �@����� �����'� ������

��� #$�������� ����� ���������� ������ � ���&�� � ��� ���������� ��� ���

������������ ������� �������)@���$� ����%(����0<�@���$(����?�*%� I&������ ��

� � ��� ���� �� ����(� ���� # � �� ���� ���� �� � � ��� ���������� � � #$��������

����������������� ������� ���� ���)@���$� ����%(����0*%�4������� �������������

��� ��� ������ �� � ��� �� �� � � �� �� � � ���� -�� ������� � ���"�� � � ���

Page 18: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �C������������� �� �

������������$��� � ����&�� ������������ #������ ����,������$������"��� �����������

�#$���������$�� ���#��(�� ������������������$������ ����� ������������ �

����������)@���$(����?�*%��

������������������

���� �������� ������$������������������#����� �����!�������������������������

��$���� ����%���� ��#���� � �� /�����'� ��� �,��� ������������'� �� �� � �

�� ���� #������ �� ����� � � � �������(� ���� � ������ ������� ���� � � �� � �

�������#���� ������� ���'� ������������(�����������������������"� ��)����#����'� �

�� ��� �� ���� 5�8��*� ����� ���� ������ ��������(� ��!���������(� #���������� ��

Page 19: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �>������������� �� �

��!����� ��� �����'� �� ����� ���#��������� ��� �(������ �� �������� ���#����

��!��������� $� #���������� '� � �! ���� �� ���� !���� �� � � ��� ������ $� �������

)@�����#�� ����%(��===*(����� ������ ��� �����!3#�����$�& ��� ������ � �������

� ���#������!����� ��)��&�#�$�� ����%(����A*%��

����� � ����� ��� ���� ������� ����������� ���� �������� ����(� ����� �� �� ����� � �

��#���� & ����������� )������������� $� ���������*� $� ���������� )��������*�

'� ���� � �� ����� ����#��������#�������� ��$�� ��� � � ������� �����"�

��#���������� ��) ���������$���������*%�

����������� �������� ���� �� �������"�����������������������������������#���

$� ��� �������� ������� ����&���� ������ ��������� ������� � ������������

&�� � '� � ��� � �������� $� �����!������ � � �� � ����� � � ������� � � �� �� � �

�����������!�����%����

� 6 �������!�� �������,������

�� ��� !�#���� �0� � � �� ����� ���� ������ # �#�,!����� ��� � � � &�� � � ������

���� ����� � � !������� �� ��#�� �� � � �� �� �� ������ �� � � ���� �������� ��

� ���� ������������� ��� � ����� ������������ ���������(�� ��#����� ���� ��

� �������������������� � �����C�)�����1+5(��J5(�5+5(��+5(�G+5�$��E5����� ���

O�����2�� ��� ��#���&���I���������)O2�I*)&���6��MMM%M&��% �����# %��W���F�

>��C*� $� � � �� ������� ���������� � ���?� )����� .89<� 5��� �� ��%(� ���?*%� �����

�����������# �#�,!���� ��,���$�� ����������������� ������� ������,������'� �� �

� ������ � ����� ���%� ��� � ���(� ��� �������� � � ��� �� � ���� � � !������� �� � �

�������#��� ������� ��,� � �#���� ���� �� �!� ���� �� ������ � ����� ���� ����� ��

�������$��������� �����������%�

� �

Page 20: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �?������������� �� �

� �

Page 21: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �=������������� �� �

� 7 '������,�����������������������������������,����������������������

��� ����� � � ������� � �� � ���� ��#������� ��������� �� )�������#��*� �� ������

��#������� ������� �� ����"�� � � ���� � � �� ��!����(� ������ � #������� � � ���

���������� � � ����� ��#������� ��� ���� �� # �,��� � ���� ! � ��6� ����

��� ���� (� ��� ������ � ���������� � � ������� � � �����(� $� ���� ����(� � ���

����!������� � � ���"������ )� ����"��� � �� ��� �,��� � ��� ��� ����� �����*��

����� ����������� �����������#����������������%�

4�� ���������� � � ������� ���� � � �� � � �������#��� ������� � ���� ���� � �

���# ������(����� ����� ���������(�� ��������"� �� � ��� �������������� ��$�

���:�������� �� )�% %� ��#��� ��*(� ���� ����� �#�� ����� ��� ������ �3������ $� ����� ����

� ���� �� �������� ����������%� ��� �� ��� ��� � � ���� # �� �� ��� ������ �3������ $�

# ������� ���� ����� � � ��������(� � � �������� ���#������ � � � #���� ��� � �

�������#��� ��� ����� � � ������� $� ���� ���� � � ������� � � ��� �� � ���� � �

!���������� � �'� ����� ���� ���� '� � �� � � � �� ���� �������� �� � ���� �� � �

��������%�

� 7 � &�������� ��� ������� �� /� �!���������� �� ��� ��������� � 8�������� ��

#�������

8���������� � (� �� ���� ��� � � � � ���� � � ������� ������� � ���� ���� � �

���# �������� �&��� ��������� ���� ��"������� ���� ��$��'� ������������� ��

�� ������ )��� � ��� !� �� ���*� ����� ������� ��� ���������� � � ��� �� ����%� ������

�"������ �� � ���� � � � �� � �� � !����(� ���� ����� ���� � � !������ � ��������� $� � ��

�"������ � ���� ��� � � �������� �� � ������ ���� �������� "�����(� ��� ���� '� �

&�� ��� ����������!� � ������$����� ��� ����� ����� ������������� ��������

� �������� ���� ��������������� ������������'� ��� � ��� �� �� ��#������������

�3�����%��

1�! � � �� �� � �� &�� ����� ����� � #������ �� � � #������� ���� ������ '� �

���� � #� ��� ����� �� ������� � � ��������� ����������� ���� ������� � � ���# �

!�����������(� � !���� � � � ���� ������� � ���� ������� �� �� � ��#�� ���

Page 22: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � ��������������� �� �

� #������� �� � � ������ �� � �%� �� ��� ����������(� ���� � #������ �� �������� ���� ���

V������� ��$����� ��I� ����� �+& ��!��&�+����������! � � �)I++�*(��������� �

��$��� ����������� $� � #���� ��� ���� �� � ���� � � �� � �� '� � � � �� ��������

����������&����������� #��������������&���� #������� �%�4����� � ���� � �� ��

� #����������� ������������! �����(��������5+5(�G+5����+5(����� ������������ ����%�

�����0�� �� ������� �� ���������������������� �� ����� ������)G��� #�*(����

����� ���� ���� ������$������ ��� ������� � !�������������#�� � ���� #�����

!�������������� ����� ��������� ���E��&�X�E��& �$�5��������)��EE5*6�

o 5����������� ��� ��EE5� � ��� ����� �� �� � !����� ����� � �� ����� �� � �

����� � ���� � ���,������� ��������������� ����� ����� ����# ������%�

o 5�������������� ����� ������"������� ��,����������������#������ �������%�

o 5����������� ��� ����� � �� ������ �� � � !���������� ������ $� ���������

)����$ ����� ��� ��$�� ������# �*%�

o 5������������!����������� ���������������# �#�,!����� �!���������������%�

����� � �������� � �� �� ���� � � ������(� ��� ��� ����������� � � � ��� E���� ���

�#�������� � ��#�������� )E��*(� ��� O����� 2 ���&� ��#�������� )O2�*� $� ��

I� �������� �� ��#���&��� ���������� �!� VG�+��� )I��*� �� H ����� �!� �& � T����

E���I���O2�� ��� &��� ��� ��� ����������� �� ��������� �� ������ � @��������

)E���I���O2�(� ���0*%� �� ��� � �� ����� � ��� ����� �� �� H #��� ��� � ��

5����� �������� ��$�� ����� ��� ����� � ������� �� � !��������� ������"������

� �� � ����)H #�������)��*���>0����A*�$������ ��� ��)H #�������)��*�?A-����0*�

� � ������� ������� ����! �����(� ������� 5+5� $� �+5� � � ���������� ���� �������

���� � � �� � � ��� � ���%� H �� � � � �� � ������� ���� �������� )H #�������

)��*� �A�����*� '� � ����!���� � � � � � ��� ����� �� � !���� ���� � �"������ � �

� � ����)H #������)��*���>0����A*%�

4����"������� �� � ��������� ��������� ��H #��� ���� ��5����� �������� ��$�

� ����� �������� ��� ��"���������������%�4����� � �� ����� ������� ������ ����

��� ������ �,����� � � ��������� ��������� � � ����(� $�� � �� � ������ � ���

����� �����'�� ���� ��������� ������� ������%�

Page 23: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � ��������������� �� �

�� �� ����� � � ���� ������� ��������� �(� �� ��� ���� � ���� ���� �� ��� ����� �� � �

��������� )������ � ��� �� ����'�� �� ���� � � � !����� � ������*(� � #3� ��� �����

� ������(�� � �,�� ��� � ���������� ���"������ ��,����������#����������'�� �������

�"������ ���������� �������� � (��� ��� ���"������ �254��� �������������

� �R� ��������� �������!����� ��) � �����#����#� ��(�����*(����������"������ �

4�M� � (� ��������"������!������ � ��� ������� ����V�������� � ����� �� �#�����

� � ������%� + � ���� ��� �� �,�(� '� � � ����� � ������ � � ������ � �� �"�����

��������������� ��$����������� � ����� �����������$�����'�� ���� ������,��#���

����� ��'� � �������� ��,���(�� ���'� � ������� ������ ������� �� ��������(� ��

�"������ �� ! � ���� �� ���"���������#���%������ �� ����� ���������������������

5+5� ��� �?���D#�� � '����� � ��� �+89�7#%����

�� �������� ��������������"�����(����� � ����� �1�� ����������)������ � ���

������'�� ������ �� � !������ ������*(�� #3���������� ������(�� � �,�� ������� �

� ���� � ���"������ ��������#��! ��� '������ ������� �������)254�*�������'�� ��

����� �"����� � �������(� � ��� � ����� � � ����� ������ �� �"����� � � � ! � ����

� � �,�� �� ���"�����254�%������ �� ����� ����������������������+5� ��� �����#�

� �1��7#%�

�� �� ����� � � ���� ������� ����! �����(� � � ��� ����� ��� � ������ � � � � ����� ���

�� � ����� ���(�189:�(�189:��$�189:-�)����$ �������"�� � �*(�589:��$�589:�<�

.89(�0A��2�.89(�&����.89�$�0A��2�&����.89<��J�:�(��J�:��$��J�:-<�$������ ����

� � �,���������� (� ���!�����(� ���"������ ��������#��! ��� '�����$� �� ����� �� ��

� � ������ )�V:H4� 4�:@+�@+*������ �"����� � � � ! � ���(� ��'� � &����� �� -�� � �

���� ��� � � � ���0� � � �� � � � #���� ��� ���� ���� �"������ ����#����� '� � � �

&�� �� ��� ���� &����� �� ��� ��� )H #������ )�V*� �A�����*%� ��� �� �"�����

�������#�,!���� ����� �"����� � � � ! � ���(� � � ����� � � ��� � ������ � � ���������

��� ���������� ������ ���������� ���� !����� �� � � ���������� '����� � � )8�E�*%� 4���

��! � � ������ ���� ����� ���� ��$�� ����� ��'� ���!� � � � �������� �� �����

���������� ����� &�� �� ��� �������� )& �����,�� ��� �� ������ � ��*� $� � ����

������ � ������������� �����!�� ��� � ��������$�����!�����%����� #��� ��� ��# �

Page 24: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � ��������������� �� �

'� �� �� #�� ��� ��� ���"�����������������!��� �����������#����� ��������'� �

� �� � �� � ����%��4����"����������#������ ������������������ � ����� ��������

����! ��������6�

o 5�������� � ����� ����(�189�(�589��$�.89��� ��� � ������������3���� ��$��

����� ������������ ���� ������������� ����'� ��� � ������ � ���� �

������������ '����:� '���������� ������ � �����$��#������������� ����$��#���

����� ������������� ���� �! � ����%��� ! ������ ��� #��� ��(����� � ����� �

�J��� � ���� � �� � ���� ���� ��� � '�� � � ��� ���������� � �� �� ���� � ���

����� ������ � � ��$�%� �� ����� ��$�� � � � ��������� � �� �� ���� �%� 4��

�� �� � � � ���� � � ���� �� �� ���� �� � �� � � ���� � � �0� &����� ����� ���

��������(� � ����� ��� � � ����(� � � �� �������� '����� � � �� A� #� � �

& �����,�� ������A�#�� ������� � ��%�+ ������ ���,���� �����������������

���� �� ����������� � ����� �������,��� ��������������� ������������ � ��

��� ���� �������� ����� �����%�

o 5�������� � ����� ���(�189�(�589��$��J��(��� � � ��� ��� ������ ��$�� �

���� ����� ���������� ������ #������ �� �������� '����:� '��������"� ��

�� � ����(�� ���������,�� ��������������������� � ����� �.89�(�$��'� ��� � �

� �� �������������� ����!�� �� �� ������%�������� ��$��� � ���������� �

�� ������ �%�4���� �� �� ������ ������� ������ �� ���� � ����� ��0�&�����

����� ��� ��������� � � A� #� � � & �����,�� ��� �� �A� #� � � ������ � ��(� � �

����� ���,���� ��������������������� �� ����������� � ����� �������,��� �

�������������� ������������ � ����� ���� �������� ����� �����%�

o 5�������� � ����� ����(�189��$��J����� � ���������� � ����� ��$�� ������%�

������� ��$��� � ���������� ��� �������%�V��� ���������� ���� �����'�� ���

� � ���� �� �� ������ � � ����� ���,� �� � �������� ��������� � #3� ���� �� � ��

����� ����������� �����������%��

������"������� �� � ������� ��������������� � �����������V:H4�4�:@+�@+(� ��

� #��� ��� � ���� � ��� ���������� � � 254�� ��� � � ���� !������"�����(� ���

�������#��! ��� '�����)4�*(� ��� �� ����� �� ��� ������)@+*(��������� ��$���$�

Page 25: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �-������������� �� �

���� ��$��� !������ �� ����� �� � � ��� �&������ � � !��!������%� 4�� �������

� ������ ����� ��� �������������� � � ����� �"������ �� '� � ���� ������ � ������� � �

� ������� � � � � � � !���� � ���"�� � � � �� ���������� ��!��� � �� �� ����������

��������� �� �� �� �� �������%� �� ����� �"�����(� � � ������ ��� � ������ � �

� � ����� ���(�189��)� ���� ���&�� ��&��������������� � �����189:-*(�589:�(�

589:�(�.89(�0A:�2.89(�2���.89�$�0A:�2:2����.89(��J�:�(��J�:��$��J�:-%�4��

����� �����"� � ������ '� � � �� ����� � � � �� � ����� ����� � ���� �,��#���

�������� �� �� ������������������3�����(�&��� ��'� ����������� � ���,�����%����

�,������� � ��� ����������������� ���������,�� ���� � !����� ��� ���� ������������

��������������� ��������������� �����������%�4����� � �� ����� ����������� �����

������� ��6� ����� ��(� 189�� $� 589�� �����(� �C�� D#� � � ��� '����� � ��7#<� �����

.89�(����#�� �.89� '����� � �7#<�������J��(��C��D#�� ��J�:�� '����� � ��7#%��

������������� ���� ������������������ ����������� �� � !������ ������0(���������

� �������� ��� ���������� � � ����� �� �� � !����� ���� ��� �E+�� � ���� '� � � �

� ���� ���������������� ��� ��� ��� ������� �������� �������������6�0A(����(�

->A�(�-�� $�>A� D#�7#� ����� ���� #������ � ���������� ��� � ��(� 589(�.89(� �J�� $�+89(�

� �� ������ � �)�E+�(����?�(����?�(����=�(����=�(����=�*%��

� 7 6 94������ ���������#��� ��� �������/�� ��� �� ��� ��� ,������ ��� ���

������� �������������������������

1 ������������ ��"�����(���,�������$�� #�� �(� �� � ������ ��� �������� ���� ��

���� � � ����� �� � � �� ��� ����� � ��� � � ���� � � � ���������� ������� �

���������� ���� ������%� 4�� ���������� � � �"������ ����� ��� �������#��! �� � '�����

)4�*(�����������#��! ��� '������ ������� �������)254�*����� � ����!������"������

����� �� ����� �� ��� ������)@+*(�����"������'� �� ���� �������������� ������

��$� !���� �� ���� � ��� �����!������ � � ������� ���� ���� � ������ �� ����� ���(�

���,��� � ���������� ��� ��!�����'� �����%�+�� ����#�(��� ���������� ���� ��� �

��,��� �� $� ��� ����� � � � ! � ���� ����� ����� ��� � � ���� ������� ��������(�

�� �,�� � �� ������� � �������� ��� � � � ���� ���"������ � ������� �� � �

Page 26: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �0������������� �� �

���������������(� �� � ������ ����� ���������� �� ������� ��"���������������

'� � � ������ ������� � ��� ���������� ����#���� � � ���� ����� ����� ����� � � �����

! ������������� ������ ���������� ��%��

8 � ��� ��� �������� ��������� ������� �����!����������� �&�� ���������

�"������ !������ �� '� �� � ����� � ��� ���������� � � ����� �# � �� ����������� ��

���� ���������� � ���� ������'� �� � ������ � �� ���� ���� ����������� ����

���"����� $� � � ��������� ����� ��� � � ����%� ����� ��� � ��#���:� � ����(� �

��#�������� ���� ��������������(�� � ��� ��,������������� �� ����� ��'� �

!�������,� � ��� � ��� ���� ������ ��� ����� � %� 4��� �"������ !������ �� �� � �

������ � � ���� � ����� � ������������ ���! � � �� !�� ��� ������ ���)H�����(�

���A*%��� �� �#������ ��"��������� ������! � ����� �� 6�

o ���$���'� �� ���� �� � ������� ! �������������� ��%�

o ���$���'� �� ���� � ���������! � � �� ! �����������%�

o ���$����������'� �� ���� ���� ���� ���� �� �!����������� ������� ���

� � ������� ! ���� ������ $� '� � �� ��� � �� � ���� � ���� �� ������ # ���� � �

���������� � ������ ��� ��������%�

� : ����+��� ���������;-��������,�����������������������������

1 ����� �� �� ���� �� "������ $� � �����#����� ��� � � ������ ��� ����������� � � ����

�"������'� �������������� ��� � �� ��� ����(� ����������� ���������������� �

�� ��� ���� � � ������� ������� � � ���� ���������� � � ���# � ���� �����(� ����

�"������ ��� �������,�� �� �����%� +�� ����#�(� �� @��� �3� � � ���� � � ��#���

� ������� �����!�����'� ����� � ����� �����"������������#���� !� � ��� ���

�� � ���� � � ������ �� ������� �3� �� � �������� �� � #������%� 5��� �� � ������(� ���

����������� � � �"������ �������#����� !���� �� '� � �� ����#�� ��!������� "������

�������������������$������,������'� ������ ���������� ������� � �� ��������������

�� � ��� ��%� 1 � ���� �� ��(� ��� �� � � � � ���� ����� � �� ���!���� ��������

�� ��� ���� � �� ���� ��� � ��������� � � ����� ����� ������ �� �"������ �������#�����

� ����$���� ���������� � ��������� �����@���%����

Page 27: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �A������������� �� �

�� �� ,������ � � ���� ������� ������� � � &�� ���������� ��� #��� ���� ����

� ������# ��� �������� � ��� ���������� � � ��������� � ����� �� �� ������ )� ��:��� ��

����$�<�����*(� ���������� �� �������� �� ��������� �����������������������

�����& ����� ����������#���� ����� � �������� �������� ���� ���������� �����

������%�

� : � ���������!������!����+������

4�� ���������� � � ���� ������� ������� &�� ����� ��������� � ���� � ��� ���������� � �

�������������������� ��"������$����������� �� ��� ����� �%��

4���������������������(� �# ���(��!� � ������$���� ���������������������������

$����������� � ���� �������4 �5�# �)4 5�# � ����%(����A*�$������� � � ���$���

���� ���� ������� �� ! ����'� �� ��,������������ ������"������� ���#�������

������ ����������%� 4��� � ���� ����� �� � ���������� ����� �� �� � � ��������(� �� ���

���#�� � � ���� �� ������ ����� �(� ��$��� 3� ��� � � ��� ����� �� # "������ '� �

�� � � � �� ����� ��� �� ���� ��� ���� � ����� �� ��#�� �� ������ � � ���� �"������

���#��� �%� +�� ����#�(� ���� ��������� ���������� �!� � � ��$��� ����� ������ � ��

� ���������� �����"����(���$���������������� ����� � ������ ����� ��$���$����� �

����$���3� ���� ������!������ ������ �%���

��� ������������ ��������� ���������������� ������������������(�����������

� ����� ���� � �������$������ ���� ����������������������� �!����� �����

� � ��� � ������������ ����� �����������"����������������� ����� ��� ������ ������

�����%��

�� � ��� � ����� �� ����� �� � � ������� ���&��� � � �� ����������� � � ��! � ������

� �������� ! ������ � !���� � �� ��� ��� ���� ����"��������������� ��� ��������'� �

� �� � (� ��� � ��� � ��#���� ������ ��$��� � ���������� ��� ! ���� ������ � �

��������������)1�7�&�������� ����%(����-*�$�������������� � �������� ������������

� ������������ ����� ����������� ��"��������! � �������)@��#� ����%(��==-*%�

4���������� ����� �� ����� �(���������,������������� ������ ��������� �����������

� ����������������$��'� ����&���� � ��������� ������� ��� �������������������

Page 28: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �C������������� �� �

���� � � ;N+��� )5+5�(� G+5�� $� �89�*(� � � ���� �� #��������� ) �� #����� � �� 1�*%�

I#���� � (� ��#���� � � ����� ��� ���� �&����� � � ����������� � ��� ��������� � �

������ ���� �� ������ �,������ � ��� � #������ ������ )�% �%� ������� � �� �����

#���� ���(�5�89� �������� ������*%�

� : 6 <����������������#��!��� �������������������

�� �� �������� ��� �������� ������$���� ������������ � �����������(�� �&��

���������� ��� �!������ � � �"������ ����� � ��������� � ����� �� ���������� ����� �

� ��� � ����� �� ����� �� )��!���� ��� ��!���(����?<� 1��7 $(����?<� 1��� �� � ���

8��7 �(� ���?<� 4������ �� ��%(� ���?<� @���$(� ���?�(� ���?�<� H$�� �� ��%(� ���?<�

8������ ����%(����?<�;�����/���������/�(����?*%�+�� ����#�(�������#����� � ����

�"������ &�� ����� ����� ����� �� ����������� ����� �"������ � � � � ���� $�

�����!������� ����� ! ������������� � �����������6�

5�� ���� ��! � ����� ���� #��� �� #������ � � �"����������������� � ��� �����������

� � ���� � � ��� � ����� �� ����� �6� �'� ����� '� � � � ����� � � � ������ ���

������������ �������������� ���������������������$��'� �����'� �������� � ���������

! �������������� ���%��

� : 6 � <����������������#��!��� ��������#����������

��� �#������ ��"������� ���� ������� ���� ������ ��� ������������ �� � !���� �

��#������������%���� � ������"�����(������,������������� � �� �,� ��������� ����

� �������� � � ! ����� ������� � � ������� ������� � ���� � ��� ��� ������

���!��#���� � � ���� �"������ )�� � �� ��%(� �==�<� ������ �� ��%(� ����<� 1��#P � �� ��%(�

�==A<�E �����(��==0<�E������7� ����%(��==?<�2����� ����%(��=?A<�7�#�� � ����%(�

�=??<� 5���&��� �� ��%(� �==>*(� ��� �������� � � ��� �� #������ � � ���� � �������

� ����� ������� �� ��$��� ��H����G �����)E ������ ����(��==0*(����������� �;��� ���

)T �� �� �� ��%(�==�*(� E���� �� ������ ����� $� �������� � � ������� )E �,� �� �� ��%(�

�==�<�8& ����� *<���� ����� ��� ������ �'� � ������ ����������� ������ ���������

� ��#������� � � !���� ���� � � ������ )4 ���� �� ��%(� ����<� 4 ���� �� ��%(� ���-*<�

Page 29: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �>������������� �� �

��� ����� �� � ������������� ���,������ ����������� �� ��$��@88�)E��� $� ����%(�

�==><�E���#�� ����%(�����<�Q������ ����%(����><�4 �� ��� ����%(����=<�@�# �� ��

��%(��==-�<�@�# �� ����%(��==A<�@�# �� ����%(��==C<�@�# �(��==-<�8��������

4�7 (� �==C<� 8������ �� ��%(� �==C�<� 8������ �� ��%(� �==C�*(� @8+� )�7������ �� ��%(�

���A*(�O8+:?�)2�$��&�� ����%(����C*(� ��$��� ����������������������� �&����# ����

)� ������� �� ��%(� ���?<� +& ����(� ���A*<� �� �� � � ������ � � ��� ��������� � � � ���

�����������)1��#��M� ����%(����A*%��

� : 6 6 <��������������������������� �������������� �������!���������

��� �#������ ��"������� ���� � ��������!������� ��� ! �����������,������ ���

'� � �� �� � ���'�"� � � ��� ��� ��� �� �� � � �����%� +� � � � �� �"������ �,��

� ���� �%� ��� � ����� �"�����(� ���� �,�� ����������� � ��� �������� � � �������

������� � � � ���� � ���� �������� � �� '��������� ����� � ������ );"� �� �� ��%(��

����*(� � ��� ����!������ � �� �2� ����� �����(� � �������� � �� ��� ����� � �

� ������ � )4�����(� ����<� 4������ �� ��%(� ���0*(� �� �� � ���� ��� � � ���� � � ��

����� �� � !���� � � !��#� ����� � � ���"������ )�:���& ����� ��� �� � ���� � �

.89�)5� ������ ����%(����-�*������� �������������� � ������������%�

� : 7 ����+��� ������������������������������

+ � &�� ���������� ��� ��: �������� ��� �#������� �� ���#������� ����� ��� �� � &�� ��

��� � � �� ! ���� ������ � ��� #����� � �������� �� �� �������� ����� ��� ! ���� $�

� �������������������� ����� �������� �����%���� � ������,�������� �� ��� ��

�� :������� ���� ��"������� � ������������G ���:��������������$�� ��������(�

����! � � ����� ������ �������� ���������������"������!� � ��������'� ����3��

���� ���;N+���)N�����& ��������7� �7(��==�<�Q�#�� � ����%(��=??<�@�# �� ����%(�

�==-�*%�

Page 30: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � �?������������� �� �

4��#����������� ��������������� �;N+��%��5�� ������� ������� �������������"�����

)� ��!�#�����A*(��� �������� ����������������� �����%�

2��!����=0�"�1!�������!��<�& �4��� ������������� ����� �������� ���� ������������� � �� ����� $� ����� ��� �� ���� ��� ������ � � �� �� ������ � �� �� ������ �����%�+ #����� � (� �������� ���������&�����'� �� �&��!��������������� � ����� ������������ � ���� �����(������ ��� !���� � � ���������� ������� � � �����������%� 4�� ��� � � ���"������ ������� �� �� � ����� ��� �� � � � ���� ��������� �����'� ����� �!�������������� � �� � � � ������� ������ �� �����%���

Page 31: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � �=������������� �� �

4�� �!������� �� �� �&������� � � ��� ������ �����:�������%� ������ '� � ��� �"�����

������� �� � �� ! ���� ������ ���������� ���� ��� � ��������� )� �� !�#���� �C*%� +�� ����

����������� ����'� ��� �������,(�!���� � (��� �� �� ������ �G ���:��%��

2��!����>0�"�1!�������!���������������������� �8�������������������� ��� ���� ��������&����� ���� ������ ������$������� ����������&����� �� �� ������ ���������#������ ��85%���

4���� � ����� ��������� ��#������ �����+89�� � �� ��$�(� �&�� ���� ������� �

������ )���� ���'� �� � � ;N+��*� $� �� �� � � � ��� �� ��� �����:� � �� � � ���

� ��� ���� ���������� � ����� ��(� � � ���� �� ��(� ��� �����!������ � � ������� � �

�� �#����%�4���� � ����� ��������� ��#������ �����5�8���)������������� �;N+��*��

� �� ��$�(���������3��,����� ������� �������$�� ������� ����� ��� ����������

�����:� � �� � �'� �� ���� ���������!������� ������������� � �� �#����%��

4�� ���������� � � ������ ������� �����"� � � &�� ������ ���� ��� �� ��������� � �

�� ��!����� �� ! ���� ������ ���� ��� �� !�� � � ���������� ����� '� � �� ��� ��������

�!������� �� � !����� ������ � ����� ��� ! �������������� ��(������ �� �������

� � ��� ���������� � � �������� � ��� ��������� � ���� ! ����� � � ��� 5�89(� )�"�����

����� ���� �4 �� ��� ����%(����=*%��

Page 32: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � -�������������� �� �

� : : ������������������� ��

����� � � ���� ������� �� � �� ���(� ����� � ��������� � ����� �� ���������� ����� �

��������� � ����� �� ����� �(� �� �� �� ���� � � �������%� ��� ! ���� � � ���� �������

������� ����������� ��� ����$�� � �� � �� ���� ����� � ���������� #����

��� ��� ��� � ! ������,������ �������&����(���� ������������ ���� � �� ���� ��

����� � � �����%� ����� ����� # ���(� ���� ��$��� � � �������� � � ! ����� � ���

����������� � ������ � � ���������� �� �0� &����� � � �������%� �� � � � ���� ��

��!��� � � ������$�� ��� �#������� ���������������� �����������������:� ��� ����

� � ���� �(���� � ! �����������,�������� ���� �����A�B�) � �����$�� ��� �� ���

� ����� ��$�� ������# �������������*�)�%� �%6�E������7� ����%(��==?<�4 �� ��� ����%(�

���=<�@�# �� ����%(��==-�<�8������ ����%(��==C��*%�5 ��� ����&�������(�� �&��

������ ��� � ������ � � ����������� �� 0?� �� ������� >�� &����� � � ��������

)� � �� ���� �������� ���������������*��������#�����������)�% �%� � �������� ��

���J��$�.89<�5"� �:N� �� ����%(����C<�8M� �� ����%(����A�*%��

� : = 8��� ;-�� ����� %����������� ������� ����� ��� ������� �� /�

�!���������� ���������������������

+��� �� ���� ������� � ��� � � ���� � � ������� � �� #����� +89�� ���� � �� ! ����

���������� ���� �������������������$�� ��������� ��"������� � ������������

&������������ ��������� ���E+������������� �������� ����������@��%�+�� ����#�(�

�� � � &�� ����� ���� ��� ��������� � �� ���� ���� ��� � ����������� ���� T �� �� �� ��%�

)�==�*��������� ��� ��������������!��������� ��� �������� ����������������#����

���� ��� ����� � I� �������� � �===� )�E+�(� ���=�*%� ��� ������� � � �� �� �� �����

� ���� ��������������� ���7���)T �� �� ����%(��==?*�'� ���� � ��!��������� ������� ����

�"����� � ����'�� �� ������������ � � �,�����%� +�� ����#�(� !� � �� ����� � � ��

��� /�� � �� � !������� �� '� � ���� ��#��� �� ��� ���������� � � ���� �� '� �

��������������"����%��

��� ����� �� � �� � !��� �& � ;��������� �!� ��� ����� � @ �&���� )��;�@*(� � �� AA�

M��7�&������� ����������� ���������� �����������@��� ����C�)2 ��� ����%(����C*(�

Page 33: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

������ ����/ � ������� �

� � -�������������� �� �

����� ��� ��������� � � ��� ���������� � � ����� ����� ��� � � ���� � � ���� �������

� �� �� � �����#������ ����+89�� ���� � ���������������������������T �� ��)T �� ��

����%(��==�*��������4������)4������ ����%(������*�$����#������ �����.89��� ���� �

�� ���������� ����������� ���� 5� ������ )5� ������ �� ��%(� ���-*%� + #���� � (� ���

� � ���� � � ����� �"������ �� � � � ������� ���� ���� ��������� � � ���������

)��� ���� ��� ��,��� �(� ����� �� � �� ������ ������ �� �� ����������(�

�� ������������ �������������$� ��������� ����� ���������"��������� �����*�

'� �&��� �������������!��������(�� ����3�'� ������&���������� �������������� �

������"�����%��

� : = � 8������������ �,�� ����������� ��� ���� ;-�� ����� %������������

������� ���������������� ���

V�� � � ���� ��������� �� �,�� � ��������� � � ���� ����� � � �� ���� � �� ! ����

������� � � ���� ��������� ������� )�� ����!������*� � � � �������� �� ������

) ���������� ���������*�)@���#���� ����%(�����<�G��� �� ����%(����?*%�5�������������

����� �� �! � ����� � � �� � � ������ ���� ��������� �� �������� � � �������(�

�����!������ ��� � ���������� � �� �"����(� �� ����!����� �� ���� � � �� ��������

��� ����� �������� ������� �� ��$�%�G�������� (� � �����"� ��� �����'� � ����

�"������ ��� ������ �� ����� �#���� � � � � �"������ � � ����!������ �� ����� �����

��������� �! � ����%�

����� � � ���� ��������� �� �,�� �������� � �� '� � ��� ������� � � � ���� ���� � ����� ��

��������(���'� �� �����& ����� ����������#���� ���� ��� ��� ������������� ����

���� ������ ��� ! ���������� ���������� �� ! ���� �����#����������� ��%�

��'� ������"� ��� �����'� � ���� �#��� ����! � ��������� � �� ! ����������� �

������������������ �� ���! � � �� �� �� ��� ������ �(������ �� � ������ �����

��! � ����� � � ���������� � � ���� 589�� ���� � �� ����� �� � ������ $� ���� �(� � �������

�� ��"������ ���������� �� �� ������(������ �� � ������ ����� ! ������ ����

$ ������������� �������������� ���� ��� ����%�V��� ����������� ��������� ����

�������������� � ������� ��!������� ������ ! ����������������������������������

Page 34: Optimización de ensayos celulares para la detección de ...diposit.ub.edu/dspace/bitstream/2445/35974/26/02.CAÑETE_2de12.pdftoxinas marinas responsables de intoxicaciones alimentarias

����������� ��������������� � ����� ��������������� ������

��� � -�������������� �� �

��� �� ������ � ������� � � ����� $� # ����� � � ���� !����� �� � � ���� ����

'� � � ����� � ���� ������ � � ���������� � � �� ���� ��� ��� ���������� � ��#�������

����� ���%�