MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO EN MICROBIOLOGA

MANUAL DE PRCTICAS DE LABORATORIO EN MICROBIOLOGA

INSTITUTO DE EDUCACIN SUPERIOR TECNOLGICO PBLICO RO SANTA

SEMESTRE ACADMICO: III.DOCENTE: Luis Alberto Aznarn Caballero.ESPECIALIDAD: Laboratorio Clnico. ALUMNO: Quiones Acua Cesar TEMA: manual de practicas de microbiologia

SANTA PER2014MISIN:Formamos Profesionales Tcnicos competentes, generadores de nuevos conocimientose involucrados en mejor la calidad de vida.

VISIN:Ser modelo de imnovacin tecnolgica y acadmica.

DEDICATORIA

Este manual est dedicado a mis padres y a mi nico hermano ya que me brindaron la oportunidad de seguir continuando con mis estudios superior por eso dicho

PRESENTACIN:

Este manual ha sido elaborado en forma simple, didctica y eminentemente prctica para que su contenido sea fcil de entender.En este manual nos referimos a las tcnicas bsicas empleadas en el rea de hematologa partiendo de la toma de muestra hasta la realizacin de las pruebas respectivas. Esperamos que este manual constituya una herramienta de consulta y gua para el personal de laboratorio en general.Nos referimos a los medios de cultivos :Agar sangre -.se usa para ver la capacidad hemoltica de los microorganismos patgenos.Muller hinton.-recomendado universalmente para la realizacin de la prueba de sensibilidad a los antimicrobianos.Mac conkey.-especfico para bacterias gram negativas y cepas que fermentan lactosa.

AGRADECIMIENTO:

Agradezco adis por la energa que me brinda cada da para seguir esforzndome en mi carrera profesional, como tambin agradezco al profesor lus aznaran caballero por todas las enseanzas que nos brinda en cada clase.

PRCTICA N 01: AGAR MULLER HINTON1. OBJETIVOS: Esta prctica nuestro principal objetivo es realizar la preparacin del medio de cultivo Agar Muller Hinton. Tambin conocer los insumos y materiales para la preparacin del medio de cultivo.2. INTRODUCCIN:El agar Muller Hinton es un medio para realizar pruebas de susceptibilidad antimicrobiana mediante el mtodo de difusin en disco.La composicin del medio Muller Hinton permite el crecimiento de las bacterias no exigentes (entero bacterias, bacilos Gram-negativos no fermentadores, staphylococos y entero cocos) encontrados en patologa humana, mientras que garantiza mnimas interferencias entre los componentes del medio y el resultado de la prueba de susceptibilidad antimicrobiana.La concentracin de iones divalentes en el medio est ajustada para asegurar una determinacin ms exacta de la sensibilidad de Pseudomonas frente a los aminoglicsidos y a las tetracilinas.La baja concentracin de timina - timidina (inhibidores de sulfonamidas) restringe el crecimiento alrededor de los discos, permitiendo una medida ms exacta de las zonas de inhibicin3. MATERIALES: Bagueta. Probeta. Agar Muller Hinton. Placas Petri. Botellas de vidrio. Papel.

REACTIVOS: Agua destilada.

EQUIPOS: Balanza. Estufa. Cocina. Autoclave.

4. PROCEDIMIENTOS:1. Preparacin: 38 gr. De Agar Muller Hinton 1.000 ml. De agua destilada.2. Pesamos en la balanza 38 gr. De Agar Muller Hinton.3. Mezclamos el Agar Muller Hinton con el agua destilada y disolvemos con ayuda de la bagueta.4. Calentar con agitacin suave hasta su completa disolucin y dejamos hervir durante 1 minuto.5. Vaciamos la solucin en las botellas de vidrio esterilizadas, y las colocamos en la autoclave a 120C por 20 para esterilizar el Agar.6. Dejamos enfriar y transcurrido unos minutos vaciamos el Agar Muller Hinton en las placas Petri estriles.7. Guardamos en la estufa por 24 h. colocamos las placas Petri bocabajo para k la solucin no transpire y obtener un mej or calidad de la muestra.

5. CONCLUSIONES: La realizacin de los pasos para la preparacin del medio de cultivo fue sencilla. Pude reconocer los materiales para la preparacin

6. ANEXOS:

AGAR SANGRE1. OBJETIVOS:

Realizar la prctica siguiendo todos los pasos de forma adecuada para evitar inconvenientes. Preparar el Agar Sangre como medio de cultivo. Saber el uso adecuado de los materiales.

2. INTRODUCCIN:Es un medio enriquecido que se utiliza adems para la investigacin de los diversos tipos de hemlisis (, o gamma). Se utiliza para el crecimiento de estreptococos. Para la preparacin del agar sangre se puede utilizar el agar nutritivo enriquecido con cloruro sdico o un preparado enriquecido con otras sustancias como Columbia o el tripticase de soja. La adicin de sangre a un medio de cultivo no proporciona las sustancias que estn en el interior de los hemates, pero s puede aadir factores inhibidores del crecimiento bacteriano presentes en el suero. Este es un inconveniente que puede solucionarse calentando la sangre para romper los eritrocitos y para que se destruyan las sustancias inhibidoras, que son termolbiles. La sangre utilizada como aditivo a estos medios suele ser sangre de carnero diluida al 5%, pero en algunas ocasiones es necesario utilizar sangre de otras especies (caballo, conejo, humana), pues facilitan las reacciones hemolticas o contienen determinados factores de enriquecimiento o no poseen sustancias inhibidoras del crecimiento de determinados grmenes. Agar chocolate: El agar chocolate se obtiene calentando la sangre antes de adicionarla al medio base. Por esta razn el agar chocolate contiene hemoglobina, que aporta al medio un importante elemento para el crecimiento: el factor X o hemina termoestable. El agar chocolate es un medio destinado principalmente al aislamiento de Neisserias (gonococos y meningococos) y Haemophilus, pero en l pueden crecer muchos otros microorganismos exigentes. El agar chocolate puede convertirse quizs en uno de los medios ms enriquecidos si aadimos una mezcla de factores de crecimiento no contenidas en la sangre.

3. MATERIALES: Bagueta. Medio base (Agar Muller Hinton). Balanza. Placas Petri. Botellas de vidrio esterilizadas. Jeringa. Ligadura. Algodn. Alcohol.

REACTIVOS: Agua destilada.

EQUIPOS: Balanza. Estufa. Cocina. Autoclave.

MATERIAL BIOLGICO: Sangre.

4. PROCEDIMIENTOS:1. Utilizamos como medio base Agar Muller Hinton.2. Obtenemos la muestra biolgica y la mezclamos con el medio base (Agar Muller Hinton).3. Luego vaciamos en las placas Petri estriles y dejamos enfriar por unos minutos.4. Llevamos a la estufa por 24 h. y las colocamos bocabajo para evitar la transpiracin del medio y obtener una mejor calidad de la muestra.

5. CONCLUSIONES: La preparacin de este medio resulto ms fcil ya que tenamos el medio base (Agar Mueller Hinton), para poder preparar el agar sangre. El agar sangre se utiliza para el cultivo de bacterias y tambin para poder reconocer los tipos de hemolisis.

6. ANEXOS:

PRCTICA N02: UROCULTIVO

FUNDAMENTO: El urocultivo se basa en la identificacin del nmero y de los tipos de bacterias presentes en la orina. Es necesario que el mtodo (recogida) sea el adecuado siguiendo unos protocolos de higiene evitando s posibles contaminaciones de la muestra.OBJETIVOS: Realizar el urocultivo para determinarlos diferentes tipos de microorganismos en la muestra de orina. Realizar las diferentes pruebas para el diagnos tico y tratamiento de l posible enfermedad o infeccin urinaria.

MATERIALES: Agar muller hinton. Agar mac conkey. Asa bacteriolgica. Mechero. Placas petri. MUESTRA BIOLGICA: Orina asptica.

EQUIPOS: Estufa.

PROCEDIMIENTO:1. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo con ayuda del mechero, luego enfriamos.2. Tomamos usa asada de orina.3. Con el asa colocamos 4 gotas de orina y sembramos en estras en las placas petri con agar muller hinton.4. En la placa con agar Mac Conkey solo sembramos la orina en la cuarta parte de la placa, para luego identificar si se degrado la lactosa.5. Colocamos en la estufa por 24 hrs. a 37 C temperatura ptima para crecimiento microbiano.CONCLUSIONES: La practica resulto fcil ya que pude realizar el procedimiento de manera sencilla. Se realizo el sembrado con la muestra de orina patolgica en el agar Muller Hinton para la identificacin de las bacterias.ANEXOS:

RECUENTO DE COLONIAS

INTRODUCCIN:El recuento de colonias se realiza para saber la cantidad de colonias que hay en la muestra, ya que puede estar produciendo infeccin.Estudios cuantitativos, indican que los recuentos de unidades formadoras de colonias por mililitro(UFC/ml) a partir de las muestras de orina, son mayores cuando las bacterias estan produciendo ITU (Infeccin del Tracto Urinario) cuando se trata de colonizantes o contaminantes de la zona periuretral arrastrados por la orina.MATERIALES: Placa petri con cultivo de orina . Marcador. Regla.PROCEDIMIENTO:Recuento de colonias:1. Sacamos los urocultivos de la estufa, y con ayuda de una regla dividimos la placa petri en cuatro partes iguales.2. Contamos el numero de colonias, solo de la cuarta parte de la placa petri .3. Luego obtenido el nmero de colonias, mltiplicamos por 4 y luego por 1000.4. El resultdo de dicha operacin si es mayor a 100,000 UFC/ml se trataria de una ITU (infeccin del tracto urinario).Germen aislado:1. Identificamos si las bacterias viraron el indicador rojo de fenol en el Agar Mac Conkey.2. si encontramos en el cultivo de orina colonias rojas o rosadas diriamos que son bacterias degradadoras de lactosa (LACTOSA POSITIVO), y si encontramos colonias incoloras, se tratara de bacterias no degradadoras de lactosa (LACTOSA POSITIVO).

CONCLUSIONES: En la mayora de urocultivos se encontro una mayor cantidad de 100.000 unidades formadoras de colonias, entonces se tratara de una infeccin.

ANEXOS:

RECUENTO DE BACTERIAS.GERMEN AISLADO.

ANTIBIOGRAMAINTRODUCCIN:El antibiograma es una prueba de rutina en clnica para determinar el tratamiento ms efectivo frente a una infeccin bacteriana.Esta prueba consiste en hacer crecer la bacteria de manera homognea sobre un medio de cultivo slido en una placa de Petri y depositar unos discos impregnados con distintos antibiticos. Se incuba la placa. Las bacterias crecern all donde no haya difundido un antibitico que no inhiba su crecimiento; por tanto, alrededor de los discos de antibitico se formar un halo de medio en el que no han crecido las bacterias. El dimetro del halo depende de la capacidad del antibitico de inhibir el crecimiento bacteriano y de la difusin del mismo en el medio de cultivo.El antibitico difunde en el medio desde el disco en todas direcciones; por lo que, cuanto ms cerca del disco, mayor concentracin de antibitico y cuanto ms alejado, la concentracin ser menor. La bacteria crecer en la placa, excepto en los lugares donde sea crtica la concentracin un antibitico al que es sensible.Por tanto, alrededor de los discos de antibitico, se puede observar un halo en el que no hay crecimiento bacteriano, siendo este mayor cuanto ms efectivo sea el antibitico.Segn el tipo de bacteria que se siembre, Gram + o Gram -, los antibiticos a los que se enfrenta el cultivo en el antibiograma son unos u otros.MATERIALES: Tubos. Gradilla. Mechero. Algodn. Hisopos. Pinza. Placas petri con agar Muller Hinton. Regla.

REACTIVOS: Agua destilada.

EQUIPOS: Autoclave. Estufa.PROCEDIMIENTO:1. Con la pipeta medimos 2ml. De H2O destilda y agregamos a los tubos.2. Luego colocamos a cada tubo un tapn de algodn.3. Se lleva a esterilizar al autoclave a 125 C por 20 minutos.4. Prendemos el mechero, flameamos la pinza y luego sacamos un hisopo del frasco con la pinza.5. Con el hisopo sacamos una colonia de la placa.6. Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el hisopo con la colonia.7. Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de agua.8. Sembramos con el hisopo en la placa de agar muller hinton con el mtodo de difusina , teniendo en cuenta que no quede ningn espacio dentro de la placa.9. Esperamos 5minutos para colocar los discos de sensibilidad.10. Transcurridos los 5 minutos colocamos los discos (en este caso 4 discos de sensibilidad) y despues colocamos la placa invertida dentro de la estufa por 24 Hrs. a 37 C.11. Transcurrido el tiempo, procederemos a la lectura.

CUADRO DE SUSCEPTIBILIDAD:

RESISTENTE (R)LIGERAMENTE SENSIBLE(Ls)SENSIBLE (S)

GENTAMICINA12-13

CIPROFLOXACINO1415-1617

ACIDO NALIDIXICO1213-1617

NOROXIN1415-1617

LECTURA DEL ANTIBIOGRAMA:PROCEDIMIENTO DE LA LECTURA:1. Sacamos las placas de la estufa para realizar la lectura.2. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin.3. Comparamos las medidas con el cuadro de susceptibilidad y de acuerdo a los valores emitimos un resultado.

RLsS

GENTAMICINA--17

CIPROFLOXACINO11--

AC. NALIDIXICO---

NOROXIN---

INTERPRETACIN: Con respecto al antibiograma, resulto sensible (17ml), la gentamicina y los demas resultados salieron resistentes por lo tanto el paciente recibira un tratatimiento a base de gentamicina ya que es el unico resultado que salio sensible.

ANEXOS:

PRCTICA N 03: CULTIVO DE SECRECIN FARINGEA

I. INTRODUCCIN:

Es una prueba de laboratorio que se hace paraidentificar microorganismos que pueden causar una infeccin en la garganta. Casi siempre se utiliza para diagnosticar faringitis estreptoccica.Elexudado farngeoes la toma de muestra que se realiza en el fondo de la garganta (en lasamgdalas, generalmente), mediante el uso de unhisopoestril. Sirve como herramienta dediagnsticode padecimientos de origenbacteriano.El hisopo se introduce y se dan vueltas sobre la muestra a fin de que todo ste quede impregnado. Se prosigue a sembrar en medios de cultivo, tomando como los ms nutritivos agar sangreyagar chocolate, se pueden usar tambin elAgar Mac Conkey, entre otros. Despus se procede a incubar a 37C y observar resultados en 48 horas.

II. MATERIALES:

Hisopos estriles. Baja lenguas. Frasco de vidrio (co2). Vela. Algodn. Mechero. Asa bacteriolgica. Caldo de BHI. Placas Petri con agar sangre.

EQUIPOS: Estufa.

MUESTRA BIOLGICA: Secrecin farngea.

III. PROCEDIMIENTO:

1. Recoleccin de la muestra:Le pedimos al paciente que abra la boca, colocamos el baja lenguas, e introducimos el hisopo y sacamos la muestra de secrecin farngea.2. Luego introducimos el hisopo en el tubo con caldo de BHI, frotamos en las paredes del tubo para que la muestra se quede dentro del tubo.3. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, enfriamos. Flameamos el tubo con caldo de BHI.4. Introducimos el asa bacteriolgica y tomamos una asada de caldo de BHI, luego sembramos en estras en la placa Petri con agar sangre.5. Colocamos las placa Petri con agar sangre en forma invertida dentro del frasco de vidrio, con el algodn embebido en agua e introducimos la vela y la prendemos (as creamos un ambiente de co2), tapamos el frasco.6. Incubamos el frasco dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.

AISLAR COLONIAS:1. Prendemos el mechero, calentamos la punta bacteriolgica al rojo vivo y enfriamos.2. Aislamos la colonia que se desea estudiar.3. Sembramos en forma de estras dentro de la placa con agar sangre.4. Colocamos las placa Petri con agar sangre en forma invertida dentro del frasco de vidrio, con el algodn embebido en agua e introducimos la vela y la prendemos (as creamos un ambiente de co2), tapamos el frasco.5. Incubamos el frasco dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.

IV. CONCLUSIONES: El examen de secrecin farngea se utiliza para identificar a los microorganismos que pueden causar una posible infeccin.

V. ANEXOS:

ANTIBIOGRAMA

I. INTRODUCCIN:Elantibiogramaes la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de unabacteriaa un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un aumento en los niveles de resistencia antibitica.

II. MATERIALES: Tubos de vidrio con agua destilada estril. Algodn. Placas Petri con agar Mller Hinton. Hisopos estriles. Mechero. Pinza. Discos de sensibilidad. Pipeta.

EQUIPOS: Estufa.

III. PROCEDIMIENTO:

12. Con la pipeta medimos 2ml. De H2O2 y agregamos a los tubos.13. Luego colocamos a cada tubo un tapn de algodn.14. Se lleva a esterilizar al autoclave a 125 C por 20 minutos.15. Prendemos el mechero, flameamos la pinza y luego sacamos un hisopo del frasco con la pinza.16. Con el hisopo sacamos una colonia de la placa.17. Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el hisopo con la colonia.18. Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de gua.19. Sembramos con el hisopo en la placa de agar muller hinton de manera pareja , teniendo en cuenta que no quede ningn espacio en blanco dentro de la placa.20. Esperamos 5 para colocar los discos de sensibilidad.21. Transcurridos los 5 colocamos los discos (en este caso 4 discos de sensibilidad) y despues colocamos la placa dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.22. Despues realizamos la lectura.

CUADRO DE SUSCEPTIBILIDAD:

RESISTENTE (R)LIGERAMENTE SENSIBLE(Ls)SENSIBLE (S)

PENICILINA1314-1617

AMPICILINA1314-1617

CEFALEXINA1314-1617

AMOXICILINA/AC. CLAVULANICO.1314-1617

LECTURA DEL ANTIBIOGRAMA:PROCEDIMIENTO DE LA LECTURA:4. Sacamos las placas de la estufa para realizar la lectura.5. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin del antibiograma en el cultivo de secrecin faringea.6. Comparamos las medidas con el cuadro de susceptibilidad y de acuerdo a los valores emitimos un resultado.

RESISTENTE (R)LIGERAMENTE SENSIBLE(Ls)SENSIBLE (S)

PENICILINA---

AMPICILINA--22

CEFALEXINA---

AMOXICILINA/AC. CLAVULANICO.--20

INTERPRETACIN: con respecto al antibiograma podemos decir que la paciente deyanira morales recibira tratamiento a dichos medicamentos (ampicilina y amoxicilina), ya que los demas medicamentos salieron resistentes.

IV. CONCLUSIONES: Esta prueba microbiolgica se realiza para ver la susceptibilidad de la bacteria a distintos tipos de antibiticos, y tambin para iniciar un tratamiento al paciente que presenta una infeccin en la garganta.

V. ANEXOS:

PRCTICA N 04:GLUCOSURIAI. INTRODUCCIN:

Se llamaglucosuriaa la presencia deglucosaen la orina a niveles elevados. La glucosa se reabsorbe en su totalidad a nivel de lasnefronas, las unidades funcionales delrin donde se produce la depuracin de lasangre. La glucosuria renal es la consecuencia de un defecto hereditario de reabsorcin de glucosa en el tbulo renal, y viene definida por los siguientes criterios: glucosuria constante, glucemia normal, utilizacin normal de hidratos de carbono y ausencia de otras anomalas tubulares.

FUNDAMENTO: La glucosa es una sustancia reductora y por lo tanto al agregarle el reactivo de Benedict oxida al sulfato cprico a oxido cprico.

II. MATERIALES:

gotero rejilla vaso de precipitacin pipeta. Tubos de vidrio EQUIPOS: Cocina.

MUESTRA BIOLGICO: Orina.

REACTIVOS: Reactivo de Benedict.

III. PROCEDIMIENTO:

1. En un tubo de vidrio agregamos con ayuda de la pipeta medimos 1.25 ml del reactivo de Benedict y 2 gotas de orina.2. Mezclamos completamente.3. Colocamos el tubo de vidrio dentro del vaso de precipitacin y lo llevamos a la cocina.4. Hervimos durante 2 minutos.5. Dejamos enfriar a temperatura ambiente.6. Examinamos la muestra y observamos si hay viraje de color.LECTURA:COLORRESULTADOCONCENTRACIN Mmol/L

AzulNegativo0

VerdeHuellas14

Verde con amarillo+28

Desde amarillo hasta verde oscuro++56

Castao+++83

Rojo++++III o ms

REPORTE:COLORRESULTADOCONCENTRCIN DE Mmol/L

CASTAO+++83

IV. CONCLUSIONES: En el primer tubo no hubo un viraje de color ya que no se encontr glucosa en la muestra de orina. En el segundo tubo viro de color ya que hubo presencia de glucosa en la orina.V. ANEXOS:

PRCTICA N 04:PROTEINURIAI. INTRODUCCIN:Laproteinuriaes la presencia de protenas en la orina en cantidad superior a 300 mg en la orina de 24 horas, esta puede ser transitoria, permanente, ortosttica, monoclonal o de sobrecarga. La proteinuria en pequeas cantidades (30 a 300) suele estar casi siempre a expensas de la albumina denominndose micro albuminuria, dato que adquiere un especial inters en la patologa diabtica.II. MATERIALES:

Tubos de vidrio. Gotero. Gradilla.MUESTRA BIOLGICA: Orina.EQUIPOS: Centrfuga.REACTIVOS: cido sulfosaliclico al 3 %.

III. PROCEDIMIENTO:1. En un tubo agregamos la orina patolgica y colocamos a centrifugar a 3500 RPM durante 5 minutos.2. Luego en un tubo de vidrio agregamos 1 gota del sobrenadante + 3 gotas del cido sulfosaliclico al 3%.3. Y procedemos con la lectura.

LECTURA:TRAZASLIGERAMENTE TURBIO

1 +POCO TURBIO

2 ++TURBIO

3 +++FRAGMENTADO

REPORTE:TURBIDEZ3 +++

IV. CONCLUSIONES:

En el primer tubo no presento cambio de aspecto ya que la orina no contiene protenas.I TUBO

El segundo tubo cambio de aspecto, ya que present turbidez 3 +++ y por lo tanto la orina tiene protenas esto debido a un problema de riones que se localiza en la unidad funcional del rin que es la nefrona.II TUBO

V. ANEXOS:

PRCTICA N 05:EXAMEN DE SECRECIN VAGINAL

I. INTRODUCCIN:Las pruebas diagnsticas de Vaginosis Bacteriana se dividen en dos categoras a saber; criterio clnico (de Amsel) y criterio basado en laboratorio (de Nugent). En ambos casos se requiere de la toma muestra de secrecin vaginal con un hisopo estril.

La VB categorizada por los criterios de Amsel incluye cuatro caractersticas, de las cuales al menos tres parmetros deben estar presentes para poder hacer el diagnstico: 1) Descarga transvaginal lechosa de color grisceo o amarillento. 2) PH vaginal de ms de 4.5. 3) Prueba de aminas positiva (cuando se le agrega una solucin alcalina - KOH al 10% a la secrecin vaginal, esta emite un olor ftido similar al que produce el pescado). 4) Presencia de grupos de clulas de descamacin, llamadas clulas clave.

II. MATERIALES: Tubo de vidrio. Lmina portaobjeto. Laminilla cubreobjetos. Gotero. Hisopos. Gradilla.

REACTIVOS: Cloruro de sodio. KOH al 10 %.

MUESTRA BIOLGICA: Secrecin vaginal.

III. PROCEDIMIENTO: TOMA DE MUESTRA:1. Con la paciente en posicin ginecolgica, procedemos a tomar la muestra de secrecin vaginal con ayuda del hisopo estril.2. Una vez tomada la muestra con el hisopo, lo colocamos dentro del tubo de vidrio con cloruro de sodio para evitar que la muestra se deseque.3. Luego transportamos la muestra de secrecin vaginal de inmediato al laboratorio para su respectivo anlisis.

TEST DE AMINAS:

1. En un extremo de la lmina portaobjeto agregamos una gota de la muestra de secrecin vaginal con cloruro de sodio.2. En el otro extremo de la lmina agregamos una gota de la muestra + 1 gota de KOH al 10 %.3. Y procedemos a identificar si hubo cambio de olor pescado (POSITIVO) en la muestra con KOH al 10 %.4. Luego llevamos al microscopio: primero enfocamos con el objetivo de 10x y para hacer la lectura con el objetivo de 40x.

REPORTE:TEST DE AMINAS: positivo.

LECTURA MICROSCOPICA:

TRICHOMONASLEVADURASCELULAS CLAVEAMINAS

0020 %(+)

xCPUNTAJE

LACTOBACILLUS3 63

GARDNERELLA4 62

MOBILUNCUS2 - 52

PUNTAJE TOTAL7

IV. CONCLUSIONES: En el test de aminas el examen de secrecin dio positivo, ya que al agregarle KOH al 10% hubo liberacin de enzimas: putrecina y cadaverina. Para el diagnstico de Vaginosis Bacteriana se utilizan dos criterios clnicos de Amsel y de Nugent.

V. ANEXOS:

CULTIVO DE SECRECIN VAGINALI. INTRODUCCIN:Lasecrecin vaginales un trmino dado a los lquidos biolgicos contenidos en o fuera de lavagina.S bien algunos tipos de secreciones son normales y reflejan las diferentes etapas del ciclo de una mujer, algunas pueden ser un resultado de infecciones, como las enfermedades de transmisin sexual.La vagina tiene su propio ecosistema con un balance de la flora bacteriana presente, cuando el ecosistema se altera puede aparecer la vaginitis por diferentes causas como uso de antibiticos, hormonas, preparaciones orales o tpicas de contraceptivos, duchas vaginales, medicamentos vaginales, enfermedades de transmisin sexual, cambios de pareja y situaciones de estrs.Los cambios en el pH y la disminucin de los lactobacilos productores de perxido de hidrogeno provocan la proliferacin de microorganismos que normalmente estn reprimidos como G. Vaginalis, Mycoplasma Hominis Y Mobiluncus Spp.Estos microorganismos como productores de su metabolismo, liberan aminas que son responsables del mal olor en la descarga vaginal, incremento del pH y causa exfoliacin de clulas epiteliales.

II. MATERIALES: Hisopos estriles. Mechero. Asa bacteriolgica. Caldo de BHI. Placas Petri con agar sangre. Tubos de vidrio.

EQUIPOS: Estufa.

III. PROCEDIMIENTO:1. Una vez tomada la muestra a la paciente con el hisopo, lo colocamos en el tubo de vidrio con solucin salina.2. Luego introducimos el hisopo en el tubo con caldo de BHI, frotamos en las paredes del tubo para que la muestra se quede dentro del tubo.3. Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, enfriamos. Flameamos el tubo con caldo de BHI.4. Introducimos el asa bacteriolgica y tomamos una asada de caldo de BHI, luego sembramos en estras en la placa Petri con Agar Sangre y Agar Mac Conkey.5. Colocamos la placa de agar sangre dentro de un frasco de vidrio con una vela encendida y con un algodn embebido en agua.6. Incubamos el frasco dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.

IV. CONCLUSIONES: Realizamos el cultivo de secrecin vaginal para el reconocimiento de bacterias que pueden estar causando una infeccin.

V. ANEXOS:

ANTIBIOGRAMAI. INTRODUCCIN:Elantibiogramaes la prueba microbiolgica que se realiza para determinar la susceptibilidad (sensibilidad o resistencia) de unabacteriaa un grupo de antibiticos. Las tcnicas de antibiograma son las utilizadas en el laboratorio de microbiologa para estudiar la actividad de los antimicrobianos frente a los microorganismos responsables de las infecciones.Se considera como antimicrobiana cualquier sustancia con capacidad de matar o al menos de inhibir el crecimiento de los microorganismos y que sea susceptible de utilizacin como tratamiento en los pacientes. Pueden ser naturales, sintticos o semisintticos (modificacin qumica de un compuesto natural). La historia moderna de los antibiticos comienza con el descubrimiento de sustancias presentes en unos microorganismos capaces de matar a otros microorganismos. La utilizacin de antibiticos supuso un avance enorme en la esperanza de vida de las personas que padecan procesos infecciosos, aunque tambin supuso un aumento en los niveles de resistencia antibitica.

II. MATERIALES: Tubos de vidrio con agua destilada estril. Algodn. Placas Petri con agar Mller Hinton. Hisopos estriles. Mechero. Pinza. Discos de sensibilidad. Pipeta.

EQUIPOS: Estufa.MUESTRA BIOLGICA: Secrecin vaginal.III. PROCEDIMIENTO:1. Cogemos un tubo con agua destilada estril flameamos el tubo e introducimos el hisopo con la colonia.2. Frotamos en las paredes del tubo el hisopo para retirar el exceso de gua.3. Sembramos con el hisopo con el metodo de difusin en la placa de agar muller hinton, teniendo en cuenta que no quede ningn espacio en blanco dentro de la placa.4. Esperamos 5 minutos para colocar los discos de sensibilidad.5. Transcurridos los 5 minutos colocamos los discos (en este caso 4 discos de sensibilidad) y despues colocamos la placa dentro de la estufa a 37 C por 24 horas.6. Despues realizamos la lectura.

CUADRO DE SUSCEPTIBILIDAD:

RESISTENTE (R)LIGERAMENTE SENSIBLE(Ls)SENSIBLE (S)

AMOXICILINA/AC. CLAVULANICO1314-1617

AMIKIN1314-1617

GENTAMICINA1314-1617

CIPROFLOXACINO1314-1617

LECTURA DEL ANTIBIOGRAMA:PROCEDIMIENTO DE LA LECTURA:7. Sacamos las placas de la estufa para realizar la lectura.8. Con ayuda de una regla medimos los milimetros del halo de inhibicin del antibiograma en el cultivo de secrecin faringea.9. Comparamos las medidas con el cuadro de susceptibilidad y de acuerdo a los valores emitimos un resultado.

RLsS

GENTAMICINA--24

CIPROFLOXACINO--27

AC. NALIDIXICO10--

NOROXIN--23

INTERPRETACIN: Con respecto al antibiograma podemos decir que la pacienta leslie diaz ramos recibira tratamiento a dichos medicamentos (GENTAMICINA,AMIKINY CIPROFLOXACINA).

IV. CONCLUSIONES: Realizamos el antibiograma del cultivo de secrecin vaginal para ver la resistencia microbiana. Con el antibiograma podemos darle a la paciente su respectivo tratamiento.

V. ANEXOS:

AGAR TSIINTRODUCCION:El Agar-hierro-triple azcar es un medio de cultivo. Gracias a su composicin es uno de los medios de cultivo ms empleados para la diferenciacin de enterobacterias segn:1. Fermenten o no glucosa.2. Fermenten o no lactosa o sacarosa.3. Produzcan o no cido sulfhdrico.4. Produzcan o no gas.En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, aportan los nutrientes adecuados para el desarrollo bacteriano. La lactosa, sacarosa y glucosa son los hidratos de carbono fermentables. El tiosulfato de sodio es el sustrato necesario para la produccin de cido sulfhdrico, el sulfato de hierro y amonio, es la fuente de iones Fe3+ , los cuales se combinan con el cido sulfhdrico y producen sulfuro de hierro, de color negro. El rojo de fenol es el indicador de pH, y el cloruro de sodio mantiene el balance osmtico.Por fermentacin de azcares, se producen cidos, que se detectan por medio del indicador rojo de fenol, el cual vira al color amarillo en medio cido. El tiosulfato de sodio se reduce a sulfuro de hidrgeno el que reacciona luego con una sal de hierro proporcionando el tpico sulfuro de hierro de color negro. MATERIALES: Tubos Mechero Asa bacteriolgica Gradilla Placas Petri ( AGAR MLLER HINTON Y AGAR MAC CONKEY)

Equipos: Estufa

MUESTRA BIOLGICA Orina patolgica

PROCEDIMIENTO: Calentamos el asa bacteriolgica al rojo vivo, y dejamos enfriar por unos segundos. Tomamos una asada de orina y sembramos en forma de estras en (M.C) (.M.H) Luego colocamos en la estufa las placas con agares (M.C) (M.H) a 37| c por 24 horas.CONCLUSIONES: Este agar nos permite el anlisis del control microbiano por lo cual vamos a ver los cambios de oxidacin que se presenta. ANEXOS:

CULTIVO TSI:INTRODUCCION: Si la bacteria problema fermenta la glucosa, acidificar el medio haciendo virar a amarillo el indicador en el fondo del tubo, mientras que si no es fermentadora de glucosa, el medio permanecer de color rojo. Si la bacteria problema fermenta lactosa o sacarosa, acidifica el medio en su superficie volvindolo de color amarillo, mientras que si no lo es, la superficie del medio continuar de color rojo. Si produce cido sulfhdrico (debido a la reduccin de las sales de hierro), se presentar un ennegrecimiento del tubo. La produccin de sulfhdrico y el consiguiente ennegrecimiento pueden impedir ver la fermentacin de la glucosa (fondo amarillo), pero este hecho implica directamente que la bacteria es fermentadora de glucosa. Si aparece rotura o desplazamiento del medio, significa que la bacteria es productora de gas.MATERIALES: Tubos Punta Bacteriolgica Mechero Placas Sembradas Gradillas EQUIPOS: Refrigeradora Autoclave Estufa

REACTIVOS: CITRATO SIMMUNS

PROCEDIMIENTO: Pipeteamos los citratos y vertimos en los tubos y lo taponeamos. Luego lo dejamos secar los citratos en una medida d 45. Luego lo ponemos los citratos a la refrigeradora. Luego aislamos una colonia de la placa AGAR MAC CONKEY. Sembramos con la punta bacteriolgica en el tubo del TSI. Y ya por ultimo lo llevamos los tubos de TSI a la estufa a 37C por 24 horas.Conclusiones: Realizamos este procedimiento con el fin de ver si ha virado los 3 azucares, lactosa glucosa sacarosa.

ANEXOS:

Lectura:

A/A Por qu ha virado los tres azucares Lactosa, sacarosa y glucosa

Citrato (-) Porque no degrado el azul De bromo timol de vade que Azul Prusia.

CATALASA y COAGULOSA Materiales: Hisopo Algodn Tubo de ensayo Placas Petri ( agar sangre ) Asa bacteriolgica Muestra biolgica: Acn Asepsia Procedimiento: Reventamos el acn y extraemos la asepsia con un hisopo. Lo vertimos en tubo de ensayo con caldo de BHI. Lo ponemos en la estufa a 37 c por 24 horas. Al da siguiente sembramos en la placa Petri de agar sangre Colocamos ala estufa a 37 C por 24 horas.Anexos:

PRUEBA DE CATALASA Y COAGULOSA1 CATALASA INTRODUCCIN:La catalasa es una enzima perteneciente a la categora de las oxidorreductasas que cataliza la descomposicin del perxido de hidrgeno (H202) en oxgeno y agua. Esta enzima utiliza como cofactor al grupo hemo y al manganeso.Adems la catalasa se usa en la industria textil para la eliminacin del perxido de hidrgeno, as como en menor medida se emplea en la limpieza de lentes de contacto que se han esterilizado en una solucin de perxido de hidrgeno

MATERIALES: Tubos de EDTA Tubo de ensayo Agua destilada Lamina Punta bacteriolgica

EQUIPO:

Centrifuga

MATERIAL BIOLOGICO:

Acn (Asepsia)

PROCEDIMIENTO: Agregamos una gota de agua destilada a la lmina. Aislamos una colonia de la placa sembrada de agar sangre. Mesclamos la colonia con la gota de agua destilada de la lmina. LECTURA: Si hay presencia de burbujas es por que presenta liberacin de oxgeno. (+)

Anexos:

COAGULASAINTRODUCCIN:La coagulasa es una protena producida por varios microorganismos que permite la conversin del fibringeno en fibrina. En el laboratorio, se usa para distinguir entre diferentes tipos de Staphylococcus.La coagulasa reacciona con la protrombina en la sangre. El complejo resultante se llama estafilotrombina, y permite que la enzima proteasa convierta el fibringeno en fibrina. Esto hace que se coagule la sangre. La coagulasa est estrechamente relacionada con la superficie de la bacteria S. aureus y puede revestir su superficie con fibrina al entrar en contacto con la sangre. Se cree que esta cubierta de fibrina del Staphylococcus es capaz de resistir la fagocitosis haciendo esta bacteria tenga un factor de virulencia mayor. La coagulasa Bound es parte de una familia ms grande de MSCRAMM.

MATERIALES: Tubos de EDTA Tubo de ensayo Agua destilada Punta bacteriolgicaEQUIPO: CentrifugaMATERIAL BIOLOGICO: Sangre Plasma

PROCEDIMIENTO: Agregamos 2 gotas de agua destilada; mas 2 gotas de plasma. Luego aislamos la colonia problema e introducimos al tubo. Luego lo llevamos a la estufa a 37C por 24 horas.Lectura: Coagulasa (-) epidermidis.Anexos:

Bibliografa: http://es.wikipedia.org/wiki/Coagulasa http://es.wikipedia.org/wiki/Catalasa https://www.google.com.pe/search?q=cultivo+tsi&tbm=isch&tbo=u&source=univ&sa=X&ei=QTXIU_iMKoO-sQSP0IGwCw&ved=0CD0QsAQ&biw=1366&bih=601#facrc=_&imgdii=_ http://www.britanialab.com/productos/332_hoja_tecnica_es.pdf https://www.google.com.pe/?gws_rd=cr&ei=dkavUqGsL47SkQe2y4GoBg#q=epidermides

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