FACULTAD DE INGENIERIA, ARQUITECTURA, ARTES Y DISEOPROGRAMA DE INGENIERA QUMICA

Reporte de laboratorio:

CULTIVO MICROBIANOS

Maria Camila Del Campo Victor Iguaran Pedro Villar Aura Mara Zuleta Morales

Estudiantes de la asignatura de laboratorio de biotecnologa

Docente: Lersy Lopez

Cartagena, 05 de marzo de 2015

INTRODUCCION.Uno de los sistemas ms importantes para la identificacin de microorganismos es observar su crecimiento en sustancias alimenticias artificiales preparadas en el laboratorio. El material alimenticio en el que crecen los microorganismos es elMedio de Cultivoy el crecimiento de los microorganismos es elCultivo. Para determinar las caractersticas de una especie es de mucha importancia el aislamiento.Para que las bacterias crezcan adecuadamente en un medio de cultivo artificial debe reunir una serie de condiciones como son: temperatura, grado de humedad y presin de oxgeno adecuadas, as como un grado correcto de acidez o alcalinidad. Un medio de cultivo debe contener los nutrientes y factores de crecimiento necesarios y debe estar exento de todo microorganismo contaminante; Un cultivo puro representa las condiciones artificiales para el desarrollo de las bacterias y otros microorganismos.La mayora de las bacterias patgenas requieren nutrientes complejos similares en composicin a los lquidos orgnicos del cuerpo humano. Por eso, la base de muchos medios de cultivo es una infusin de extractos de carne y Peptona a la que se aadirn otros ingredientes.La velocidad de crecimiento de las bacterias es directamente proporcional a la nutricin.El agar es un elemento solidificante muy empleado para la preparacin de medios de cultivo. Se lica completamente a la temperatura del agua hirviendo y se solidifica al enfriarse a 40 grados. Con mnimas excepciones no tiene efecto sobre el crecimiento de las bacterias y no es atacado por aquellas que crecen en l.los diferentes medios de cultivo se encuentran numerosos materiales de enriquecimiento como hidratos de carbono, suero, sangre completa, bilis, etc. Los hidratos de Carbono se adicionan por dos motivos fundamentales: para incrementar el valor nutritivo del medio y para detectar reacciones de fermentacin de los microorganismos que ayuden a identificarlos. El suero y la sangre completa se aaden para promover el crecimiento de los microorganismos menos resistentes.Tambin se aaden colorantes que actan como indicadores para detectar, por ejemplo, la formacin de cido o como inhibidores del crecimiento de unas bacterias y no de otras (el Rojo Fenol se usa como indicador ya que es rojo en pH bsico y amarillo en pH cido. La Violeta de Genciana se usa como inhibidor ya que impide el crecimiento de la mayoria de las bacterias Gram-positivas).A continuacin ponemos en prctica el mtodo de cultivo por siembra en superficie el cual consiste en la siembra de un volumen conocido de la dilucin de la muestra sobre la superficie de un medio de cultivo en placa Petri. En este mtodo todas las colonias crecen sobre la superficie del medio. Generalmente se utiliza esta tcnica para el recuento de bacterias aerobias.

OBJETIVO GENERALConocer las tcnicas de cultivo microbiano y las caractersticas macroscpicas de las colonias que nos permiten adquirir habilidad para realizar cultivos microbianos con todas.

OBJETIVOS ESPECIFICOSRealizar de manera experimental el mtodo de siembra en superficie.Observar los distintos comportamientos del cultivo microbianos en diferentes condiciones.Adquirir los conocimientos necesarios para el debido aprendizaje en la asignatura Biotecnologa.

DESARROLLOCULTIVO MICROBIANOSMATERIALES: Muestra de alimentos. Caja de Petri. Tubos de ensayos. Asas bacteriolgicas. Cultivos microbianos. Pipeta automtica.EQUIPO: Incubadora.PROCEDIMIENTO:METODO DE RECUENTO EN PLACA1. Siembra en profundidad Realizar diluciones seriadas (10^-1, 10^-2, 10^-3) una muestra de alimento. Adicionar 1ml de cada una de las diluciones preparadas y adicionar en cajas de Petri estriles. Adicionar el medio de cultivo especifico de 15-20 ml de cada caja de Petri, mezclar en sentido contrario a las manecillas del reloj, hasta que quede completamente homogenizada la muestra. Dejar solidificar e incubar a la temperatura adecuada de acuerdo al microorganismo de inters. 2. Siembre en superficie Realizar diluciones seriadas (10^-1, 10^-2, 10^-3) una muestra de alimento. Adicionar 0,1ml de cada dilucin y adicionar en la superficie del agar especifico para el tipo de microorganismo a identificar o cuantificar. Extender el inoculo con asa bacteriolgica en diferentes direcciones hasta agotar la muestra en la superficie del agar. Incubar en la temperatura adecuada de acuerdo al tipo de microorganismo.I. Siembra por agotamiento Seleccionar los medios de cultivo de acuerdo al tipo de microorganismo. Tomar una pequea cantidad de inoculo con el asa redonda y sembrar por agotamiento en el agar especifico, pasando por el mechero el asa para obtener colonias aisladas.

II. Crecimiento de microorganismo en medios diferentes Describir las caractersticas del crecimiento de los microorganismos en medios especficos. Identificar gneros de bacterias a travs de interpretacin de pruebas bioqumicas.

RESULTADOS/CONCLUSION.

Podemos ver claramente es crecimiento microbianos en las distintas muestra y como es capaz de ir evolucionando en masa en un tiempo corto en sus condiciones ptimas, observamos que la muestra de 10^-2 tiene un mayor crecimiento aunque la diferencia no es notoria con las dems muestra.Se puede concluir de manera experimental que los microorganismos son capaces a reproducirse en gran cantidad sin inconveniente alguno y son capaces de brindarnos grandes ayuda en la parte industrial por ejemplo: los lcteos. A la vez son muy econmico su obtencin.

INVESTIGACION.1. FUNDAMENTO DEL RECUENTO EN PLACA.Consiste en el plaqueo de una muestra de volumen conocido del alimento que se analiza. El resultado es funcin de una serie de factores como son el mtodo de muestreo, el tipo de microorganismo, el tipo de alimento y las caractersticas del medio de cultivo. Los cultivos pueden hacerse tanto en masa como en superficie, aunque hay que considerar que los cultivos en masa son letales para la flora psicotrofa. Cada bacteria viable formar una colonia, el plaqueo puede hacerse en una placa normal o por medio de un plaqueador en espiral que va depositando concentraciones progresivamente ms diluidas de la muestra.Medio de cultivo recomendado para el recuento de bacterias aerbicas en aguas, aguas residuales, productos lcteos y otros alimentos. Tambin es recomendado como medio general para determinar poblaciones microbianas.La productividad de este medio, est basada en el alto contenido nutricional de sus componentes, que permite el desarrollo de las bacterias presentes en la muestra. Cuando se analiza leche y productos lcteos algunos autores recomiendan suplementarla con leche descremada estril de uso bacteriolgico en una proporcin de 1 g por litro.

2. EJEMPLO DE MEDIOS DE CULTIVO MODERADAMENTE Y ALTAMENTE SELECTIVOS.

Los Medios Selectivos generalmente el microorganismo patgeno causante del cuadro infeccioso que se desea aislar a partir de la muestra, no se encuentra puro sino que convive con otras especies sin inters diagnstico. As por ejemplo es frecuente que las fecas, orina, exudados, alimentos, agua, etc. estn altamente contaminadas con bacterias saprfitas que por su desarrollo exuberante en los medios de cultivo corrientes, inhiben el crecimiento o enmascaran la presencia del agente patgeno buscado.Los medios selectivos se caracterizan por estimular el desarrollo de ciertas especies bacterianas y a la vez inhibir el desarrollo de otras especies, lo que permite es aislamiento y diagnstico de las bacterias con facilidad y rapidez. Estas caractersticas se obtienen por la adicin de sustancias tales como colorantes de anilinas, sales biliares, antibiticos, etc. Ejemplo: Agar Brucella, Caldo Selenito Cistina, etc.Los antibiticos, el cloruro sdico en altas concentraciones, colorantes y algunas sustancias qumicas son ejemplos de agentes selectivos que se aaden a los medios para inhibir el crecimiento de otros microorganismos diferentes al de inters.El agar SPS (denominado de esta forma porque contiene sulfadiacina y sulfato de polimixina) se utiliza para identificarClostridium botulinum, agente causal de una grave intoxicacin alimentaria. El medio SPS permite el crecimiento de esta bacteria, pero inhibe el de otras especies deClostridium.Por ejemplo, los colorantes, que se aaden al Agar, inhiben selectivamente determinados microorganismos, es el caso del verde brillante (Agar verde brillante) utilizado para determinar la presencia deSalmonellaen heces fecales ya que inhibe las bacterias Gram positivas, y la mayora de las bacterias intestinales.Para el caso de factores ambientales se manipula la temperatura, el grado de humedad, el pH, la concentracin de oxgeno o la intensidad de la luz. As el Agar glucosado de Sabouraud ajustado a pH 5,6, se usa para el aislamiento de hongos, que a ese pH crecen mejor que las bacterias. Son ejemplo de este tipo de medios: Agar Tiosulfato, Citrato, Sales de bilis, Sacarosa (TCBS) para cultivo de Vibrio y Agar Cetrimida para cultivo dePseudomonas.

Un ejemplo de medio altamente selectivo debido a su alta concentracin salina serian los estafilococos coagulasa positiva que hidrolizan el manitol acidificando el medio; las colonias aparecen rodeadas de una zona amarilla brillante. Los estafilococos coagulasa negativos, presentan colonias rodeadas de una zona roja o prpura. Las colonias sospechosas, se repicarn en un medio sin exceso de cloruro de sodio para efectuarles, posteriormente, la prueba de la coagulasa. En el medio de cultivo, el extracto de carne y la pluripeptona, constituyen la fuente de carbono, nitrgeno, vitaminas y minerales, el manitol es el hidrato de carbono fermentable, el cloruro de sodio (que se encuentra en alta concentracin) es el agente selectivo que inhibe el desarrollo de la flora acompaante, y el rojo fenol es el indicador de pH.

BIBLIOGRAFIA.http://www.microinmuno.qb.fcen.uba.ar/SeminarioMedios.htmhttp://datateca.unad.edu.co/contenidos/201504/micro/3_4medios.htmhttp://es.slideshare.net/roberchavez/medios-de-cultivo-y-pruebas-bioquimica-presentation